GENERALITES EN CYTOPATHOLOGIE

DR/ A. LOUCIF

I. Définition :

La cytologie est l’examen microscopique de cellules isolées ou en petits amas, étalées sur une lame en couche mince et colorées. Les cellules peuvent provenir de matériels variés :

liquide : sang, épanchement des séreuses, urines, LCR...

semi liquide : sécrétions vaginales, sperme, aspiration de moelle osseuse...

solide : tumeurs, ganglions

II. Les différents prélèvements cytologiques reçus au laboratoire

Prélèvements gynécologiques

Prélèvements de ponction mammaire .

Prélèvements d’ origine bronchique : aspiration et lavages bronchiolo-alvéolaire

Liquides d’épanchements des séreuses et de kystes des différents organes et urines

Les LCR

Les prélèvements de ponction thyroïdienne

Les cyto-ponctions ganglionnaires.

Les ponctions d’organe profond : Ces ponctions concernent tous les types d’organes accessibles par un aiguille biopsique sous contrôle d’un appareil d’imagerie médicale (échographe ou scanner ) Les principaux organes ponctionnés sont le foie le rien

III Modes d’étalement :

Ils sont essentiellement de trois types :

1. L’étalement de matériel centrifugé : pour les liquides très fluides [urines, épanchements séreux, kystes, LCR, produits de lavage bronchiolo-alvéolaire (L.B.A.) ou de séreuses...].

Les cellules sont étalées sur un disque de 0,5 cm de diamètre (« spin »).

l’ensemble tournant selon une vitesse (10 min. 800 à 1200 tours / min.).

2 Le frottis est la méthode de choix pour les semi-liquides, les liquides très cellulaires , pour le sang, les grumeaux de moelle ou de tumeur.

• C’est un étalement manuel sur une lame qui se fait:

soit directement à partir du dispositif de prélèvement (spatules cervicales, écouvillons, brosses etc.),

soit à l’aide d’une deuxième lame. Le frottis avec deux lames est applicable à tous les types de matériel.

3 Les empreintes :

A partir de biopsies chirurgicales ou de pièces d’exérèse de tumeur, de ganglions,

en posant le fragment biopsié ou la tranche de section d’une pièce ouverte sur la lame, après l’avoir préalablement un peu « séchée » avec un papier filtre,

en faisant plusieurs empreintes sur différentes lames, les dernières, les plus fines, étant celles à utiliser.

IV.Séchage et fixation :

Le séchage à l’air par agitation manuelle ou

avec un séchoir à cheveux (air froid) doit être

rapide pour que les cellules soient collées par

la sérosité ainsi desséchée.

La Fixation peut se faire de plusieurs façons :

a) L’alcool éther : par immersion c’est un fixateur historique de la cytologie il n’est quasiment plus utilisé si ce n’est dans un cas : la cytologie broncho pulmonaire.

En effet l’épaisseur des étalements et leur aspect souvent hémorragique et mucoide ne permettent pas d’utiliser le Labofix qui ne donne pas la qualité de fixation adéquat.

Mode de fabrication : Alcool éthylique à 95° : 1 vol, Ether sulfurique : 1 vol

Temps de fixation : 10 minutes

b)Fixateur hydrosoluble en bombe aérosol : (« spray ») en bombe de 200ml .

Il est utilisé pour fixer : les frottis gynécologiques, les cyto-ponctions mammaires, ganglionnaires,

Temps de fixation : 3 minutes

c)La laque à cheveux: constitue un excellent spray,

peu coûteux.

C’est la méthode utilisée pour les frottis

gynécologiques.

Coloration des lames:

Les colorations les plus utilisées en cytologie

sont : la coloration de Papanicolaou et le

M.G.G.

Coloration de Papanicolaou :

C’est une coloration universellement connue et

utilisée, surtout pour les frottis du vagin, du col

de l’utérus et de l’endomètre.

Technique :

Alcool 80°………………………………..30s

Alcool 70°………………………………...30s

Alcool 50° ………………………………..30s

Eau distillée……………………………….30s. Tous les rinçage doivent se faire doucement pour éviter de décoller les étalements des lames.

Hématoxyline de Harris …………………..3 à 6 min

Eau distillée ………………………………30s

Solution d’acide chlorhydrique à 0,25 %.......plonger 6 fois

Rincer soigneusement à l’eau courante

Eau distillée………………………….30s

Alcool 50°..…………………………..30s

Alcool 70°……………………………30s

Alcool 80°……………………………30s

Alcool 95°……………………………30s

Orange G6……………………………90s

Alcool 95°……………………………30s deux bains successifs et séparés

EA50°……………………………….90s

Alcool 95°…………………………...30 trois bains successifs et séparés

Alcool absolu (100°)………………..30s

Xylène-alcool (1/1)………………….30s

Xylène

Remarque :

Pour les frottis autres que cervico-vaginaux, on

utilise la même méthode avec remplacement,

dan s l’étape 16, EA50 par EA36.

Coloration de Giemsa :

Le colorant dilué de giemsa est l’un des meilleurs colorants de nombreux micro-organismes pathogènes Il colore très bien les parasites de paludismes, de leishmaniose, les rickettsia, les éléments hématopoïétiques, bactéries…

Résultats :

Les bactéries et les spirochètes vont du bleu au pourpre.

Les rickettsies se colorant en violer.

La chromatine des parasites devient rouge.

Le cytoplasme est bleu.

Les globules rouges en rouge brique.

Avantages de la cytologie :

Il s’agit d’une technique très peu invasive, idéale pour le dépistage, mais également beaucoup utilisée à visée diagnostique.

les cytoponctions d’organes solides ou de tumeurs profondes sont très fines

et peuvent même être utilisées en cas de troubles de la coagulation.

La technique est simple et le résultat peut être rendu, au besoin, quelques heures après l’arrivée du prélèvement.

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