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FICHE TECHNIQUE

RHAPSODY AGAR DENOMBREMENT DE PSEUDOMONAS SPP.

1 DOMAINE DUTILISATION RHAPSODY Agar est un milieu slectif destin au dnombrement de Pseudomonas spp. dans les produits alimentaires et les chantillons de lenvironnement.

La mthode est certifie NF VALIDATION pour le dnombrement de Pseudomonas spp prsomptifs dans les

produits carns, par comparaison la mthode de rfrence NF EN ISO 13720 : 2010, sous Attestation N BKR 23/09-05/15 A, dont le terme de validit est fix au 5 juin 2019.

BKR 23/09/-05/15 A, METHODES ALTERNATIVES DANALYSE POUR LAGROALIMENTAIRE Certifi par AFNOR Certification http://nf-validation.afnor.org

La mthode

est certifie NF VALIDATION pour le dnombrement de Pseudomonas spp dans les produits laitiers,

par comparaison la mthode de rfrence XP ISO/TS 11059 :2009, sous Attestation N BKR 23/09-05/15 B, dont le terme de validit est fix au 5 juin 2019.

BKR 23/09/-05/15 B, METHODES ALTERNATIVES DANALYSE POUR LAGROALIMENTAIRE Certifi par AFNOR Certification http://nf-validation.afnor.org

La mthode valide selon le protocole NF EN ISO 16140 permet dobtenir un dnombrement en 48 3 heures dincubation et ne ncessite pas de confirmations, ni pour les produits laitiers, ni pour les produits carns.

2 PRINCIPES Les peptones constituent les substrats nutritifs ncessaires la multiplication rapide des Pseudomonas.

Le substrat chromognique inclus dans le milieu de culture est hydrolys par tous les Pseudomonas. Les colonies prsentent alors une coloration bleue ple bleu-vert.

Le systme slectif retenu et la cphalosporine permettent linhibition de la majorit de la flore annexe.

3 FORMULE-TYPE La composition peut tre ajuste/supplmente de faon obtenir des performances optimales. Pour 1010 mL de milieu complet:

- Polypeptone .............................................................................................................. 28,9 g - Systme tampon ......................................................................................................... 7,0 g - Chlorure de sodium..................................................................................................... 5,0 g - Systme slectif .......................................................................................................... 5,5 g - Systme chromogne ................................................................................................. 0,2 g - Agar agar bactriologique......................................................................................... 15,0 g

pH du milieu prt--lemploi 25C : 7,0 0,2.

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Ensemencement : En surface Incubation : 48 3 h 30 1 C

Reconstitution : 61,6 g/L Strilisation : 15 min 110 C

4 PREPARATION Prparation du milieu dshydrat : Mettre en suspension 61,6 g de milieu dshydrat (BK214) dans 1 litre deau

distille ou dminralise. Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir

durant le temps ncessaire sa dissolution. Rpartir en flacons de 100 mL. Striliser lautoclave 110 C pendant 15 minutes. Refroidir et maintenir le milieu 44-47 C. Rhydratation du supplment lyophilis : Reprendre le lyophilisat (BS089) en y ajoutant aseptiquement 5 mL deau distille strile. Agiter le flacon plusieurs fois de faon assurer une complte dissolution, tout en vitant la formation de

mousse. Prparation du milieu complet : Ajouter 1 mL de supplment slectif RHAPSODY (BS08908) reconstitu dans chaque flacon de 100 mL de

milieu de base. Homogniser parfaitement. Couler en botes de Petri striles et laisser solidifier sur une surface froide.

5 MODE DEMPLOI Respecter les bonnes pratiques de laboratoire (se rfrer la norme NF EN ISO 7218). A la surface du milieu prpar en botes ou du milieu pr-coul (BM167),

transfrer 0,1 mL de lchantillon analyser et de ses dilutions dcimales. Etaler linoculum en surface laide dun taleur strile. Incuber 30 1 C pendant 48 heures 3 heures.

Notes - La mthode est valide galement avec la technologie densemencement Spiral. - La limite de dnombrement peut tre diminue d'un facteur de 10 en ensemenant 1,0 ml de l'chantillon ou de la suspension mre sur la surface de trois petites botes de glose (90 mm). Pour des raisons dorganisation des laboratoires, la dure dincubation est valide entre 45 et 72 heures.

6 LECTURE Les colonies caractristiques prsentent une coloration bleue ple bleu vert. La taille des colonies et lintensit de la coloration peuvent varier selon les espces de Pseudomonas rencontres. Lexpression des rsultats se fera conformment aux recommandations tablies dans la norme NF EN ISO 7218.

Note Si linterprtation est sujette doute aprs 48 heures (colonies trop ples), lincubation doit tre prolonge jusque 72 heures. Voir ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO.

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7 CONTROLE QUALITE Milieu dshydrat : poudre beige, fluide et homogne. Milieu complet : glose ambre.

Rponse culturale typique sur milieu complet aprs 48 heures d'incubation 30 C :

Microorganismes Croissance (Rapport de productivit : PR) Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026 Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025 Pseudomonas putida WDCM 00117 Pseudomonas fluorescens WDCM 00115 Escherichia coli WDCM 00013 Staphylococcus aureus WDCM 00034

PR 50% PR 50% PR 50% PR 50%

Inhibe, score 0 Inhibe, score 0

8 CONSERVATION Milieu dshydrat : 2-30 C. Supplment lyophilis : 2-8 C. Milieu pr-coul : 2-8 C, labri de la lumire. Les dates de premption sont mentionnes sur les tiquettes. Milieu prpar en botes (*) : 30 jours 2-8C, labri de la lumire. (*) : Valeur indicative dtermine dans les conditions standards de prparation, suivant les instructions du fabricant.

9 PRESENTATION Milieu pr-coul en botes de Petri ( 90 mm) : 20 botes ............................................................................................................................................................. BM16708

Milieu dshydrat Flacon de 500 g .................................................................................................................................................. BK214HA

Supplment slectif RHAPSODY 10 flacons qsp 500 mL ........................................................................................................................................ BS08908

10 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES XP ISO/TS 11059 (V 04-025). Octobre 2009. Lait et produits laitiers. Mthode de dnombrement des Pseudomonas spp.

NF EN ISO 13720 (V08-504). Novembre 2010. Viandes et produits base de viandes. Dnombrement des Pseudomonas spp. prsomptifs.

11 AUTRES INFORMATIONS RHAPSODY Agar est une marque de SOLABIA S.A.S.. Code document : RHAPSODY/FR/5. Date cration : 01-2013 Date de rvision : 09-2015 Motif de rvision : Rvision gnrale.

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ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO RHAPSODY Agar Dtection et dnombrement des Pseudomonas spp. Lecture : Croissance obtenue aprs 48 heures dincubation 30 C. La taille des colonies et lintensit de la coloration bleue bleu-vert peuvent varier selon les espces de Pseudomonas rencontres.

Pseudomonas spp.

Colonie caractristique : Bleue ple bleu-vert