Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées...

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fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. MASTER 2 GBC – 29-30 JUIN 2009 UCBL VIRPATH CNRS FRE 3011 DR MANUEL ROSA-CALATRAVA PR BRUNO LINA AN-CHRISTOPHE LE BAYON ED 341 – E2M2

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Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et

HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza

humains et animaux.

MASTER 2 GBC – 29-30 JUIN 2009UCBL

VIRPATHCNRS FRE 3011

DR MANUEL ROSA-CALATRAVAPR BRUNO LINA

JEAN-CHRISTOPHE LE BAYON

ED 341 – E2M2

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2

•Virus Parainfluenza de type 2

•Entrée du virus

•État de l’art

État de l’art

•Caractérisation des mutations

Projet

•Encadrement

•Projet professionnel

Adéquation

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hPIV2 ET NDVFamille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus

Avulavirus

Terr

ier e

t al.

(200

8)

•Maladies respiratoires•Pas de vaccins/antiviraux•Virus enveloppé Ø 200nm •ARN négatif, simple brin

L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN

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MEMBRANE FUSION

F HN

Viral envelope

Cellular membrane

F1

HN

S

S

F2

C N

NC

Fusion peptide

Cytoplasmic tail

Extracellular domain

Transmembrane region

HR1

HR2

F

Taki

mot

o et

al.

(200

2)

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OBJECTIVES•hPIV-2 variants with increased cell-cell fusion:T96A mutation (Terrier et al., 2008)

•PIV-5 “HN-independent” F :L22P, K132E and V290A (Ito et al., 1998, 2009)

•PIV5 / hPIV2 F sequences: 51% identity

Functional characterization of F GP hPIV2 mutants :T96A and mutations transposed from PIV-5

Role in fusion and HN-F activation mechanisms ?

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T96A: favorise l’activation par HN

I24P: F “indépendante” de HN

K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion

I294A: favorise l’activation par HN

CONCLUSIONT

ête

Tig

e

I24PI294A

T96A

K133E

2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN

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PROJET DE THÈSE

Expression de glycoprotéines (WB, FACS)Interactions entre F et HN(CoIP)Comportement des mutants dans un contexte viral ou pseudo-viral (VLP and Reverse Genetics)Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-mix assay)Caractérisation de nouveaux mutants grâce à des variants (sequencing, fusion assay)

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Page 9: Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza.
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Comprendre le mécanisme d’entrée du virus dans la cellule

→ Design de nouvelles molécules anti-virales

CONTRIBUTION SCIENTIFIQUE DU PROJET

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ACKNOWLEDGMENTS

Dr Olivier TerrierDr Manuel Rosa-CalatravaPr Bruno LinaChristelle Godard and Gaëlle Cartet for their technical support

All VirPath team for their support


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