Techniques de dénombrement en microbiologie alimentaire en milieu solide (les pages indiquées font référence au livre « Activités technologiques en microbiologie – Terminale BGB » CRDP Bordeaux.

Milieu Type de micro-organisme dénombré Nom Principaux composants

Technique d'ensemencement Conditions d'incubation Dilutions dénombrées Tests complémentaires ou poursuite d'analyse.

Moisissures (p25) Milieu au malt et saccharose

Malt Saccharose Chloramphénicol

Etalement de 0,1 mL de dilution en surface.

25°C, 2 à 3 jours entre 5 et 50 thalles (moisissures) et entre 30 et 300 colonies de levures.

Aucun

Flore totale (p86) = micro-organismes aérobies totaux à 30°C

PCA (plate count agar)

Glucose extraits de levures + 1 % de lait écrémé pour analyse du lait cru)

1 mL de dilution dans la masse + double couche (sauf pour eau et lait).

24 heures à 30°C Autres possibles : 45°C micro-organismes totaux thermophiles 20°C micro-organismes totaux cryophiles

entre 30 et 300 colonies. Aucun

Désoxycholate 0,1 % Lactose Rouge neutre Désoxycholate de Na

1 mL de dilution dans la masse + double couche

24 heures à : 30°C pour les coliformes totaux 44°C pour coliformes

thermotolérants (ou fécaux)

entre 15 et 150 colonies. On dénombre les colonies rouges d'au moins 0,5 mm de diamètre.

Aucun Coliformes (p101)

Gélose lactosée au TTC et Tergitol 7

Lactose BBT Tergitol 7 TTC (chlorure de 2-3-5 triphényl tétrazolium)

Filtration sur membrane d'eau : déposé le filtre sur le milieu (face septique vers le haut)

24 heures à : 37°C pour les coliformes totaux 44°C pour les coliformes

thermotolérants

Entre 15 et 150 colonies. Colonies lactose+ : colonie rouge ou rose (réduction TTC) halo jaune (virage du BBT)

identification de chaque colonie suspecte par test IMVIC (p100) ou galerie classique.

Staphylococcus aureus (p94)

Baird Parker Jaune d'œuf Tellurite de potassium

Etalement de 0,1 mL de dilution en surface.

24 à 48 heures à 37°C Entre 1 et 100 colonies. On dénombre les colonies noires avec liseré blanc et entourées d'un halo d'éclaircissement

Identifier : toutes les colonies suspectes s'il y

en a moins de 10. Racine carré du nombre de

colonies, s'il y en a moins de 100, mais tester au moins 5 colonies.

S'il y a plus de 100 colonies, proposer un nouveau dénombrement avec de nouvelles dilutions.

Streptocoques fécaux - Enterococcus (p113)

Slanetz Glucose Azide de sodium TTC

Filtration sur membrane d'eau : déposé le filtre sur le milieu (face septique vers le haut)

24 à 37°C Entre 15 et 150 colonies. On dénombre les colonies roses ou rouges (réduction du TTC)

Identification des colonies suspectes par repiquage sur gélose BEA (on doit obtenir des colonies noires.

Anaérobies sulfito réducteurs à 46°C (p103)

Milieu TSC Milieu TSN

Tryptone-sulfite-cyclosérine Tryptone sulfite néomycine

En tube : 1 mL de dilution dans la masse pour aliments frais ou surgelés. 10 mL pour semi-conserves (Cf p105) En boîte : 1 mL de dilution dans la masse + double couche

24 à 48 h à 46°C 20 h à 46°C en anaérobiose.

On dénombre les colonies noires (réduction des sulfites)

Identification possible de Clostridium perfringens

Spores de Clostridium sulfito réducteurs (p103)

Milieu TSC Milieu Wilson-Blair

Tryptone-sulfite-cyclosérine Milieu VF + sulfite et alun de fer

En tube : analyse de 20 mL d'eau réparties en 4 tubes (ensemencement de 5 mL dans la masse) (Cf p105)

24 à 48 h à 37°C On dénombre les colonies noires (réduction des sulfites)

Identification possible de Clostridium perfringens

Pour les coliformes on dénombre entre 15 et 150 colonies car au delà on risque d'avoir des colonies faussement négatives par ré-alcalinisation du milieu. Dans tous les cas si le dénombrement est supérieur ou inférieur aux fourchettes fixées (ex : moins de 15 colonies ou plus de 150 sur TTC) on réalise le dénombrement et l'interprétation en précisant que le résultat est soumis à caution car les conditions de dénombrement ne sont pas optimale. Composition des milieux de culture : Baird Parker page 96 BEA page 114 BLBVB page 102 Désoxycholate 0,1 % (Gélose au) page 102

EMB (Gélose) page 102 Gélose à l'ADN + bleu de toluidine page 96 Slanetz page 114 TSC page 105 TSN page 105

TTC (Gélose) page 102 VRBL (Gélose) page 102 Wilson Blair page 105