Post on 13-Sep-2018
TR | Technicien biologiste profil n° : TR07-GAP-4
emploi-type n°: A4B03
Angers concours : TRA04
Lieu du concours : Nantes
::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: FICHE DE PROFIL || CONCOURS EXTERNES INRA 2007 :::::::
Le technicien biologiste, dans le cadre d’un protocole établi, applique les techniques de la biologie pour l’obtention et l’étude d’échantillons.
.......................................................................................................................................................................................................
n°BAP : A | Sciences du Vivant
Département : Génétique et Amélioration des plantes
unité n° 1259 | Unité Mixte de Recherche GenHort (INRA/INH/Université d'Angers)
Lieu de travail (si différent) :
.......................................................................................................................................................................................................
personne(s) à contacter : Mme LORIDON 02.41.22.57.52
Mme CHEVREAU 02.41.22.57.77
Environnement :
Le technicien exercera son activité au sein de l'équipe "transgenèse-fruits" de l'Unité Mixte de Recherche (UMR) Génétique et Horticulture, qui comprend un autre technicien et un adjoint technique. Il/elle travaillera sous la responsabilité de Mme Loridon (Ingénieur d'Etudes) et de Mme Chevreau (Directeur de Recherche) dans le cadre de programmes de transgenèse sur arbres fruitiers destinés d'une part à mieux comprendre les interactions plantes/pathogènes et d'autre part à améliorer les méthodes de transfert de gènes. Il/elle s'impliquera principalement dans l'analyse moléculaire des transgènes et la préparation de nouvelles constuctions génétiques. Il/elle contribuera également aux expériences de transformation génétique et à l'entretien du matériel végétal in vitro, ainsi qu'aux observations sur plantes en serre. De plus, dans le cadre de la démarche Assurance Qualité en Recherche, il/elle prendra part aux activités collectives du groupe de travail "biologie moléculaire".
Activités :
Réaliser, à partir de protocoles définis, des expériences de collecte, de préparation et d'analyse utilisant les techniques de biologie moléculaire et de biologie cellulaire. Tenir un cahier d'expériences, rassembler les résultats, les mettre en forme et en rendre compte. Se former à la mise en œuvre des nouvelles techniques dans l'équipe et initier les utilisateurs. Actualiser le dossier de protocoles techniques. Consulter et exploiter une documentation technique. Appliquer, en situation de travail, les règles d'hygiène et sécurité, et celles spécifiques au travail sur les organismes génétiquement modifiés (OGM).
Compétences :
Connaître les bases de la biologie, en particulier la biologie moléculaire et cellulaire et la génétique. Maîtriser dans le cadre d'une utilisation de routine les techniques de biologie moléculaire employées pour l'analyse de l'expression de transgènes (clonage, extraction d'acides nucléiques, PCR, RT-PCR, Q-PCR, Western…) Avoir une connaissance opérationnelle de l'appareillage utilisé et des techniques qu'il requiert (thermocycleurs, incubateurs, Q-PCR…). Savoir utiliser les logiciels liés aux techniques expérimentales (analyses de séquences, définition d'amorces) et à la présentation des résultats. Connaître les risques chimiques et biologiques liés aux produits, matériels et techniques utilisés ainsi que la réglementation concernant les OGM ; les transposer en situation de travail. Savoir situer son intervention dans une procédure plus large et collaborer avec les autres intervenants.
Page 1 of 2INRA-DRH | Concours externes 2007
2007 | conception et réalisation : DRH & PSI
Capacités personnelles :
Diplôme réglementaire minimum exigé : baccalauréat. Expérience souhaitée dans le domaine de la biologie moléculaire et des autres activités de laboratoire. Capacités d'initiative et d'organisation. Capacité d'apprendre des méthodes et techniques nouvelles. Goût pour le travail en équipe. Connaître l'anglais technique du domaine.
Page 2 of 2INRA-DRH | Concours externes 2007
TR | Technicien biologiste profil n° : TR07-SA-4
emploi-type n°: A4B03
Nantes concours : TRA04
Lieu du concours : Nantes
::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: FICHE DE PROFIL || CONCOURS EXTERNES INRA 2007 :::::::
Le technicien biologiste, dans le cadre d’un protocole établi, applique les techniques de la biologie pour l’obtention et l’étude d’échantillons.
.......................................................................................................................................................................................................
n°BAP : A | Sciences du Vivant
Département : Santé Animale
unité n° 1034 | Unité Mixte de Recherches INTERACTIONS HOTE-PARASITE-MILIEU
Lieu de travail (si différent) :
.......................................................................................................................................................................................................
personne(s) à contacter : M. CHAUVIN 02 40 68 76 98/77 71
Environnement :
L'activité s'exercera au sein de l'Unité Mixte de Recherche Ecole Nationale Vétérinaire de Nantes-INRA 1034, sous l'autorité directe du Directeur d'unité en relation avec les différents chercheurs (3), enseignants-chercheurs (4) et Ingénieurs et Techniciens Administratifs (4) de l'unité pour les différents protocoles faisant appel aux élevages de tiques. A certaines périodes, les protocoles expérimentaux nécessitent une présence le week-end. Une partie du travail nécessite la manipulation de vertébrés vivants (gerbilles, lapins, moutons) ou d'acariens (tiques). L'agent sera amené à caractériser la diversité génétique des tiques à l'aide de marqueurs moléculaires (microsatellites, AFLP, séquence nucléotidiques …). Il(elle) gérera un élevage de tiques au laboratoire (mise en place et entretien de lignées). Il(elle) devra réaliser et suivre des infections expérimentales de tiques par des protozoaires ou des bactéries, quantifier et localiser les agents pathogènes à l'aide d'outils moléculaires (PCR quantitative, hybridation in situ...).
Activités :
Réaliser, à partir de protocoles définis des expériences de préparation et d'analyse utilisant un ensemble de techniques d'un domaine : cultures, dosages biologiques et/ou biochimiques... Tenir les cahiers d'expérimentation, enregistrer les données, rassembler, mettre en forme les résultats. Actualiser et rédiger des fiches de protocoles techniques. Contrôler les conditions environnementales. Consulter les données bibliographiques dans le domaine. Assurer la gestion des commandes et le bon fonctionnement des appareils. Appliquer les règles d'hygiène et sécurité liées à la manipulation d'agents pathogènes potentiellement tranmissibles à l'Homme.
Compétences :
Avoir des connaissances générales en biologie Maîtriser les techniques de base en biologie moléculaire, les appareils utilisés (extraction d'ADN, PCR, PCR-RLFP, PCR quantitative …) et les outils informatiques associés (traitement de données, analyse de séquences …). Connaître les risques chimiques et biologiques et la réglementation liés à la manipulation d'agents pathogènes potentiellement zoonotiques.
Capacités personnelles :
Page 1 of 2INRA-DRH | Concours externes 2007
2007 | conception et réalisation : DRH & PSI
Diplôme réglementaire minimum exigé : baccalauréat. Formation recommandée : biologie, biologie moléculaire. Expérience sur les élevages d'invertébrés serait appréciée. Niveau de base en anglais et en informatique (Word, Excel) souhaitée. Formation en expérimentation animale (pouvant être acquise après recrutement) appréciée. Excellentes aptitudes au travail en équipe et à se former à de nouvelles techniques et méthodologies. Respect des règles de fonctionnement d'hygiène, sécurité et qualité. Connaissance des bases de l'anglais scientifique.
Page 2 of 2INRA-DRH | Concours externes 2007
1
CONCOURS EXTERNES ITA 2007
TECHNICIEN DE LA RECHERCHE
TR A04
TECHNICIEN BIOLOGISTE
EPREUVE ECRITE
Date : 1er
juin 2007
Durée de l’épreuve : 3 heures
Coefficient 3
Seul l’usage d’une calculatrice non programmable et d’un dictionnaire
d’anglais/français est autorisé.
Ce document est conçu pour que vous répondiez dans les espaces disponibles
après chaque question.
Ne rajoutez pas de feuille supplémentaire.
Ne pas porter de signe de reconnaissance sur les documents.
Merci de veiller à éteindre vos téléphones portables.
Composition de l’épreuve :
Barème
1. QCM 40 points
2. Questions à réponses brèves 40 points
3. Exercice d’organisation 40 points
4. Compréhension 30 points
5. Problème au choix 50 points
2
1. QCM (noté sur 40 points)
1 point par question si et seulement si toutes les réponses exactes sont données.
Temps conseillé : 30 minutes
Cochez la ou les cases correspondant aux bonnes réponses ou, le cas échéant, affectez-leur un
numéro d’ordre.
1. l’INRA est un :
� Etablissement Public à Caractère Administratif
� Etablissement Public à Caractère Industriel et Commercial
� Institut Technique Agricole
� Etablissement Public à Caractère Scientifique et Technologique
2. l’INRA a été fondé en :
� 1980
� 1946
� 1919
� 1958
3. quel(s) outil(s) informatique(s) sert (servent) à rechercher des homologies de séquence ?
� BLAST
� WEBCUTTER
� CARTHAGENE
4. l’écart type est :
� la racine carrée de la moyenne
� la racine carrée de la variance
� la somme des carrés des écarts à la moyenne
� le carré de la somme des écarts à la moyenne
5. le code génétique est dit dégénéré car :
� toute l’information ne se transmet pas à la descendance
� plusieurs codons correspondent à un acide aminé
� plusieurs acides aminés correspondent à un codon
6. une nanomole correspond à :
� 10-3
mole
� 10-9
mole
� 10-6
mole
� 10-12
mole
3
7. parmi ces produits, lequel est (lesquels sont) utilisé(s) en PCR quantitative ?
� SYBR Green
� DAPI
� TaqMan
� SYBR Safe
8. un gel d’acrylamide en conditions dénaturantes permet de séparer les protéines suivant
leur :
� charge
� masse moléculaire
� masse moléculaire et leur charge
9. quel est le matériel qui vous donne la meilleure précision pour mesurer 39 µl ?
� une micro pipette P1000
� une micro pipette P100
� deux pipetages avec une micro pipette P20
10. mettez dans l’ordre, de 1 à 6, les principales étapes d’une analyse RFLP :
� digestion enzymatique
� autoradiographie
� hybridation
� électrophorèse
� extraction d’ADN
� transfert
11. une puce à ADN est un :
� composant électronique d’un séquenceur automatique
� insecte transgénique vecteur d’un virus à ADN
� support miniaturisé pour ADN
� transposon
12. parmi les activités suivantes, quelles sont celles qui sont strictement interdites dans les
zones de manipulation de laboratoire :
� rentrer des données dans un ordinateur
� manger
� écouter la radio
� utiliser des produits cosmétiques
� boire
� fumer
� rédiger le cahier de laboratoire
� établir un protocole
13. pour quelle(s) manipulation(s) un agrément (autorisation) officiel est-il requis ?
� culture de protoplastes
� culture d’OGM
� immunisation de souris
� inoculation avec un organisme de quarantaine
4
14. quel est, environ, le nombre d’agents fonctionnaires à l’INRA
� 540
� 2940
� 8940
� 17040
15. on prélève 100 mL d’une solution mère à 1 g/L de glucose à laquelle on ajoute 400 mL
d’eau distillée ; on obtient une solution à :
� 100 ml/L
� 200 mg/L
� 300 mg/L
� 400 mg/L
16. pour stériliser une solution par filtration vous choisissez un filtre de porosité
� 1,22 µm
� 0,45 µm
� 0,22 µm
17. un antibiotique agit principalement sur les :
� cellules animales
� virus
� bactéries
� bactériophages
18. comment appelle-t-on la partie d’un antigène reconnue par un anticorps ?
� épiphyse
� radical
� épitope
� noyau
19. parmi les espèces suivantes, cocher celle (s) qui est (sont) une (des) rosacée (s) :
� amandier
� poirier
� églantier
� noyer
20. on doit préparer 1 L d’une solution de NaCl à 0,5 M (PM = 58,44 g/mole) ; quelle quantité
de NaCl doit-on peser ?
� 29,22 g
� 2,922 g
� 5,844 g
� 58,44 g
5
21. on réalise un clonage dans un plasmide de type pUC. Après transformation d’une souche
bactérienne d’Escherichia coli, les colonies portant le plasmide recombinant, cultivées en
présence d’IPTG et de X-Gal sont :
� noires
� translucides
� bleues
� blanches
22. une mutation dans l’ADN d’un gène se traduit toujours par un changement d’acide aminé
dans la protéine correspondante :
� vrai
� faux
23. les phases de la division cellulaire (mitose) sont, dans l'ordre :
� anaphase, métaphase, télophase, prophase
� prophase, métaphase, anaphase, télophase
� métaphase, anaphase, télophase, prophase
24. un cycle parasitaire représente :
� les différentes étapes de la vie du parasite
� la périodicité d'infection d'un hôte par le parasite
� les différentes maladies occasionnées par le même parasite
25. après une migration de protéines sur un gel de polyacrylamide, vous avez réalisé un
transfert sur nitrocellulose ; vous avez réalisé un :
� southern-blot
� northern-blot
� eastern-blot
� western-blot
26. le bromure d’éthidium permet :
� de dénaturer l’ADN
� d’extraire les ARN des tissus
� de visualiser les acides nucléiques
� de dégrader spécifiquement l’ADN
27. qui ne produit pas de protéines de manière autonome ?:
� les bactéries
� les plantes
� les algues
� les virus
� les champignons
28. les chromosomes sont constitués :
� d’ADN seulement
� de protéines
� d’ADN et de protéines
� d’ADN et de lipides
6
29. une tique est un :
� arthropode
� insecte
� diptère
� arachnide
� acarien
30. lequel (laquelle) n'est pas dans une cellule :
� le réticulum endoplasmique
� la mitochondrie
� le stomate
� l'appareil de Golgi
� le ribosome
31. une zoonose est :
� une maladie qui sévit dans une zone géographique définie et limitée
� une maladie qui se transmet de l'animal à l'homme et vice versa
� une partie d'un parasite qui provoque des réactions immunitaires
� une maladie qui ne se transmet qu'entre les animaux d'une même espèce
32. quelle est la molécule qui contient les gènes :
� l'ARN
� l'ADN
� les protéines
� les anticorps
33. la conservation à long terme d’une souche bactérienne s’effectue dans :
� un milieu de culture additionné d’antibiotique à 4°C
� un milieu de culture à –20°C
� un milieu de culture à –80°C
� un milieu de culture additionné de glycérol à –80°C
34. un allèle est :
� un gène exprimé
� une des formes d'un gène
� un gène réprimé
� un gène sur exprimé
35. un « crossing-over » est :
� un échange de chromosomes
� un échange de segments de chromatides entre chromosomes
� une technique de biologie moléculaire
36. le sigle PAC signifie :
� Programme Agricole Commun
� Politique d’Aide aux Communes
� Programme d’Aide Communautaire
� Politique Agricole Commune
7
37. le mur de Berlin a été démoli en :
� Mai 1968
� Décembre 1989
� Juin 1961
� Février 1993
38. pour transformer une plante avec un gène, on peut :
� l'infecter par un micro-organisme qui transmet le gène
� utiliser une amorce du gène transférée sous vide dans les cellules
� utiliser un pistolet envoyant des billes recouvertes par le gène sur des cellules
végétales
39. une culture d’E. coli en phase exponentielle a un temps de génération de 20 minutes. La
culture est à 5.105 cfu/mL. Quelle sera la densité de la culture dans 1 heure ?
� 8.105 cfu/mL
� 2.106 cfu/mL
� 4.106 cfu/mL
� 5.108 cfu/mL
40. quand a-t-on découvert l'ADN ?
� au XIXème
siècle
� au XVIIIème
siècle
� au XXème
siècle
8
2. Questions à réponses brèves (noté sur 40 points)
Temps conseillé 50 minutes
1. Citez 2 modes de transformation de bactéries compétentes : (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
2. Au choix : (4 points)
Donnez la définition, les principales caractéristiques et, en quelques mots-clés les étapes :
- de la technique d’AFLP
OU
- de l’obtention de marqueurs microsatellites
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………….……
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………….
………………………………………………………………………………………………….
…………………………………………………………………………………...………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………..
3. Quelles sont les 3 étapes d’une PCR ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
4. Quels sont les différents types d’ARN ? A partir de quel(s) type(s) peut-on obtenir un ADN
complémentaire ? Par quelle enzyme ? (2 points)
*…………………………………………………………………………………………………
*…………………………………………………………………………………………………
*…………………………………………………………………………………………………
9
5. Vous disposez d’une centrifugeuse avec un rotor à angle fixe de 6 places. Vous avez 3
tubes de même poids à centrifuger. Comment équilibrez-vous le rotor ?
Répondez sous forme de schéma. (1 point)
6. Quel est le poids sec d’une graine, sachant que son poids frais est de 2 g et sa teneur en eau
de 23,5% ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
7. Définir les termes de biologie cellulaire suivants : (2 points)
Transcription :
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
Traduction :
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
8. Qu’est-ce que le phénotype d’un individu ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
9. Qu’est-ce que le génotype d’un individu ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
10. La masse molaire du TRIS est égale à 121,1 g. Quelle masse de ce composé doit-on peser
pour préparer 0,1 litre de solution à 0,1 M ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
10
11. Convertir : (3 points)
En gramme : 800 cm3 d’eau
En mg/mL : 150 ng/µL
2,7 mg en µg :
100 µg en mg
5 mL en µL
0,1 g/L en mg/mL
12. Vous devez préparer le plus précisément possible 100 mL de solution. Quelle verrerie de
laboratoire devez vous utiliser ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
13. Qu’est-ce qu’une gamme étalon ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
14. Proposez un mode de stérilisation pour chaque élément suivant : (2 points)
- un Erlen en verre : -
- 2 litres de milieu de culture : -
- 5 mL d’une solution de vitamines : -
- des outils de chirurgie : -
15. Quels sont les grands axes des recherches menées à l’INRA de Nantes OU Angers ?
(3 points)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
16. Pour faire une PCR, vous recevez un oligonucléotide sous forme de lyophilisat. La
quantité synthétisée est de 180,6 µg ou 30,3 nanomole. Quelle quantité d’eau ultra-pure (en
µl) devez-vous ajouter pour obtenir une solution de cet oligonucléotide à 100 µM ? (1 point)
- µl
11
17. Que faut-il faire avant de manipuler un produit que l’on n’a jamais utilisé auparavant ?
(2 points)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
18. Vous préparez un milieu de culture. Indiquez précisément comment prendre le pH de ce
milieu (pH initial attendu aux environs de 7,0 ) puis comment le corriger pour obtenir un pH
de 5,7 : (2 points)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
19. Indiquez pour chaque pictogramme la signification du danger encouru : (3 points)
12
20. Quelles sont les différences entre une cellule animale et une cellule végétale ? (1 point)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
21. Citer deux maladies des plantes que vous connaissez et le pathogène correspondant.
OU
Citer deux maladies animales ou humaines transmises par un vecteur arthropode. (2 points)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
22. Vous devez manipuler les produits indiqués dans le tableau ci-dessous. Indiquez, en
cochant les cases correspondantes, ce qu’il convient d’utiliser pour vous protéger et/ou
travailler dans les conditions rigoureuses de manipulation. (4 points)
Masque Poste de Sécurité
microbiologique
Sorbonne ou
hotte
aspirante
Gants
(appropriés au
produit)
Lunettes de
protection
Culture bactérienne
β-mercaptoéthanol Dodécyl sulfate de
sodium (SDS)
Cristaux de soude Chloroforme BET Azote liquide Tampon Tris-HCl
13
3. Exercice d’organisation (noté sur 40 points) Temps conseillé 40 minutes
Planification du travail pour une semaine-type.
Votre responsable scientifique vous a donné une série de tâches à réaliser sur la semaine et
vous devez par ailleurs effectuer un certain nombre de tâches de façon récurrente et à
intervalle régulier. En cas d’absence, un collègue effectuera à votre place les tâches
quotidiennes obligatoires.
Liste des tâches à effectuer :
� Effectuer cette semaine une demande de devis pour un matériel tombé en panne (1 h
30)
� Gaver les souris chaque jour (30 min)
� Effectuer chaque jour à la même heure une série de mesures de poids et de fécondité
dans l’élevage juste avant de les gaver (30 min)
� Réaliser cette semaine l’inventaire des produits à commander (produits chimiques et
de culture cellulaire) pour l’expérience de la semaine 50 : vérification des stocks et des
dates de péremption, faire un tableau sous Excel (2 h 30)
� Euthanasier 20 souris et récupérer les œufs fécondés le lundi matin (1 h 30)
� Micro-injecter les œufs (100-200) le lundi après-midi (2 h)
� Réimplanter les œufs le mardi matin (2 h)
� Rédiger, lorsque le planning le permet, des fiches techniques simplifiées pour des
appareils utilisés au laboratoire (1 h par fiche)
� Participer à une réunion hebdomadaire le mercredi matin à 10 h (1 h)
� Absence le jeudi
� Préparer de la verrerie pour stériliser (30 min)
� Changer les cages des souris le vendredi des semaines paires (2 h 30)
� Réaliser les injections d’hormones le vendredi des semaines impaires (1 h)
� Extraction d’ADN (1 h 30)
� Formation d’un stagiaire sur les techniques que vous maîtrisez (3 h 30)
� Lancer une culture de cellules en fin de semaine (3 h)
� Chaque jour, remplir le cahier de laboratoire (15 min)
� Rédiger les consignes pour Adèle (30 min)
1. A partir de la liste de tâches qui vous est fournie, remplissez votre planning
hebdomadaire ci-joint. Les tâches ne peuvent pas être morcelées. (Reportez
uniquement les mots en caractères gras pour chaque tâche mentionnée).
2. Pendant votre absence, quelles consignes laisserez-vous (sous forme de tableau) à
votre collègue Adèle, chargée de vous remplacer ?
14
Votre planning hebdomadaire Semaine 42
LUNDI MARDI MERCREDI JEUDI VENDREDI
9h
9h30
10h
10h30
11h
11h30
12h
12h30
13h45
14h15
14h45
15h15
15h45
16h15
16h45
17h15
17h30
Consignes à Adèle
Tâche Durée Heure
15
4. Compréhension (noté sur 30 points)
Temps conseillé 20 minutes
The procedure is as follows: Grow a 1.5 mL culture overnight under selective conditions and
harvest the cells in a microfuge (5000 g, 5 min).
After re-suspending the pellet in 100 µL of STET (8% sucrose, 50 mM Tris pH 8.0, 50 mM
EDTA, 5% Triton X-100), add 0.2 g of 0.45 mm glass beads, and vortex the tube vigorously
for 5 min. Following addition of another 100 µL of STET, vortex the tube briefly and place it
in a boiling water bath for 3 min. Cool briefly on ice and spin in a microfuge for 10 min at
4°C.
Transfer 100 µL of the supernatant to a fresh tube containing 50 µL of 7.5 M ammonium
acetate, incubate at –20°C for 1 h, and centrifuge for 10 min at 4°C. (At this stage, residual
chromosomal DNA, large RNA species, and the putative impurities which inhibit E. coli
transformation are precipitated). Add 100µL of the supernatant to 200 µL of ice-cold ethanol,
and recover the DNA by centrifugation. Wash with 70% ethanol, and re-suspend pellet in 20
µL of water. Use 10 µL of this solution to transform competent bacteria.
1. établir la liste complète des produits et des appareils nécessaires à la réalisation du
protocole décrit ci-dessus.
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
2. établir une fiche résumé du protocole (il ne s’agit pas d’une traduction du texte mais
d’une note de travail)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
16
5. Problème (noté sur 50 points)
En fonction du profil auquel vous postulez, vous répondrez au
problème correspondant. Pour les candidats se présentant sur plusieurs profils, le choix du sujet
n'influera pas sur la décision finale du jury.
Temps conseillé 40 minutes
Problème 5A
Questions de culture générale
1) Quels sont, selon vous, les risques potentiels liés à la dissémination de plantes
génétiquement modifiées (PGM) ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
2) Quels sont, selon vous, les risques potentiels liés à la dissémination de bactéries
porteuses de gènes de résistance aux antibiotiques ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
17
3) Connaissez-vous des alternatives à la sélection des plantes transgéniques par les
antibiotiques ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
4) Parmi ces méthodes, quelles sont celles qui NE vous semblent PAS applicables à des
plantes à multiplication végétative ? Expliquez pourquoi
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
5) Indiquez le principe et l’application du RNAi (ARN interférence)
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
18
Exercice
Vous avez réalisé une expérience de transformation d’explants de pommier via une souche
d’Agrobacterium tumefaciens portant la construction ci-dessous dans le but de sur exprimer le
gène de la lactoferrine bovine.
Vous devez à présent analyser les plantes régénérées issues de cette transformation et
sélectionnées sur kanamycine. Décrivez de manière concise mais précise (en indiquant
notamment les amorces et endonucléases choisies) comment vous vous y prendriez pour :
1) vérifier que le génome des plantes régénérées contient le gène d’intérêt
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
2) vérifier que le génome des plantes régénérées contient le gène de sélection
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
= 200 pb
tnos t35S Lactoferrine p35S p35S npt II
PstI BamHI HindIII
EcoRI EcoRI EcoRI PstI
EcoRV XhoI
LactoF
LactoR
nptF
nptR
RB LB
p = promoteur t = terminateur
ClaI
19
3) estimer le nombre de copies du gène d’intérêt dans le génome des plantes
transformées
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
4) Estimer le nombre de copies du gène de sélection dans le génome des plantes
transformées
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
5) Déterminer la taille de l’ADN de transfert
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
6) D’après vos premières analyses moléculaires, le génome d’un des clones obtenus
semble bien contenir le gène de sélection, mais pas le gène d’intérêt. Quelles
hypothèses pouvez-vous formuler et quelles expériences allez-vous mettre en œuvre
pour les confirmer ou les infirmer ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
20
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
21
OU
Problème 5B
Tiques : caractères morphologiques et biologiques, infection expérimentale
de tiques.
1. caractères morphologiques et biologiques des tiques.
a/ Compléter la légende du schéma suivant d’Ixodes ricinus femelle
b/ Ixodes ricinus est une tique dont le cycle biologique est triphasique : que signifie ce
terme ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
………………………
c/ Sur quels animaux, les adultes d'I. ricinus se nourrissent-ils en milieu naturel ?
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
………………
d/ Citez une autre espèce de tique :
…………………………………………………………
22
2. Dans le cadre d'un projet de thèse, un doctorant et le chercheur qui l'encadre, souhaitent
évaluer le taux de transmission transovarienne d'une souche de Babesia divergens pour deux
lignées d'Ixodes ricinus dont vous assurez l'entretien. Pour cela, ils décident de réaliser une
expérience de gorgement artificiel avec du sang parasité à une parasitémie* de 1 à 2%. Ils
évalueront le taux de transmission en mesurant, par PCR avec des amorces spécifiques de B.
divergens, la proportion d’œufs infectés sur un échantillon des œufs pondus par la tique ; ils
souhaitent disposer de 30 pontes de tiques issues de chaque lignée. Ils vous demandent
d'organiser l'expérimentation.
Vous présenterez un planning prévisionnel des différentes manipulations à réaliser
impliquant les différents membres de l’équipe.
Informations complémentaires
1/ Le gorgement artificiel des tiques consiste à faire se nourrir les tiques dans un
dispositif visant à se substituer à l'hôte animal. Cela permet de plus de contrôler le repas
sanguin et notamment d'y introduire un agent pathogène pour infecter expérimentalement la
tique.
Pratiquement, les tiques sont introduites dans un appareil spécifique (‘gorgeur’) ;
celui-ci est schématiquement constitué :
- d'une chambre où sont introduite les tiques ; au maximum 20 tiques femelles
adultes peuvent être introduites en même temps ;
- d'une membrane (peau animale spécifiquement traitée) sur laquelle les tiques se
fixent ;
- d'une cellule contenant 2,5 ml de sang dans laquelle les tiques fixées puisent leur
repas.
Le sang doit être changé toutes les 12 ± 3 heures ; le changement du sang demande
environ 30 minutes pour 2 ‘gorgeurs’. Un gorgement complet de tiques adultes dure de 15 à
20 jours. Lorsque l'on souhaite infecter expérimentalement les tiques, le sang infecté est
reconstitué avec 1/3 de globules rouges parasités et 2/3 de plasma issu d'un animal sain (de la
même espèce que les globules rouges utilisés).
2/ Babesia divergens est un protozoaire des bovins cultivable in vitro sur hématies.
L'entretien des différentes souches est assuré par un autre technicien. La culture de la souche
choisie est réalisée en boîte de culture contenant 1 ml de globules rouges de bovin pour 40 ml
de milieu (RPMI + 20% de sérum de veau fœtal). Le milieu doit être renouvelé au minimum
tous les 2 jours. La parasitémie est multipliée par 10 en 3 jours. L'entretien des cultures est
réalisé par sous-cultures successives tous les 2, 3 ou 4 jours en diluant 50 à 100 µl d’hématies
de la culture parasitée dans une boîte de culture contenant 900 à 950 ml d’hématies saines. Le
changement de milieu de culture ou le repiquage demande de 30 à 45 minutes pour 4 boîtes.
Les hématies de bovin proviennent d'un animal hébergé en animalerie A2 ; le sang est prélevé
une fois par mois ; après préparation, il est stocké à +4°C en tube contenant 1/3 de globules
rouges et 2/3 de RPMI.
* parasitémie : proportion d'hématies parasitées dans un échantillon de sang ou de culture in
vitro.
23
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
24
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………………………………………
25
CONCOURS TRA04 : TECHNICIEN BIOLOGISTE
EPREUVE ORALE
Temps de préparation : 15 minutes
Durée : 25 minutes ; coefficient : 3
Question à préparer par les candidats :
Veuillez indiquer aux membres du jury en quoi votre formation et/ou votre expérience vous
permet(ent) d’être en adéquation avec le ou les profil(s) auquel (auxquels) vous postulez.
Temps de l’exposé devant le jury : 5 minutes (inclus dans les 25 minutes)