Capteurs-Electrochim-C-2004

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Capteurs et biocapteurs

électrochimiques

Daniel Thévenot, Régis Moilleron& Gilles Varrault, Cereve

Université Paris 12, ENPC, ENGREF (UMR-MA 102)http:// http:// www.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.htmlwww.enpc.fr/cereve/HomePages/thevenot/thevenot.html

IUPAC commission I.7

de Chimie biophysique

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Sommaire

1. Capteurs / électrodes métalliques(EM)

2. Capteurs / électrodes spécifiques

ioniques (ESI) 3. Capteurs / électrodes spécifiques à

gaz (ESG)

4. Biocapteurs / électrodes à enzymesBiocapteurs / électrodes à enzymesou anticorps immobilisé(e)sou anticorps immobilisé(e)s5. Conclusions et perspectivesConclusions et perspectives

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4. Biocapteurs électrochimiques

4.1.4.1. DéfinitionDéfinition des biocapteurs4.2.4.2. ClassementsClassements des biocapteurs4.3.4.3. ConstituantsConstituants des biocapteurs :

sélectivité et sensibilitésélectivité et sensibilité, étapecinétiquementcinétiquement limitante

4.4.4.4. OriginalitéOriginalité des biocapteurs

4.5.4.5. Utilisation de biocapteursUtilisation de biocapteurs en milieuxmilieuxaquatiques : possibilités & limitesaquatiques : possibilités & limites

4.6.4.6. ConclusionConclusion etet perspectivesperspectives

Sommaire

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4. Biocapteur : 4.1. Définition (IUPAC)

D.R. Thévenot, K. Toth, R.A. Durst & G.S. Wilson(1999) Electrochemical biosensors: recommendeddefinitions and classification. Pure and AppliedChemistry, 71 (12), 2333-2348

Self-contained, integratedintegrated device Nomenclature

BiologicalBiological recognition element = receptorreceptor

PhysicoPhysico

--chemicalchemical transducer =

transducertransducer

Ability to be repeatibly calibratedrepeatibly calibrated Either continuouscontinuous operation

Or rapidly and reproducibly regeneratedregenerated

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4. Biocapteur : 4.1. Définitions

Principe de fonctionnement & nomenclature

Retour au sommaire biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

4.2.1. Type de reconnaissance moléculairereconnaissance moléculaire

(récepteur)(récepteur) CatalyseCatalyse enzymatique, métabolisme cellulaire ou

tissulaireFonctionnement continu possible véritable capteur!Enzyme purifié ou présent dans des cellules ou tissus

Oxydases, déshydrogénasses, hydrolases...

Formation de biobio--complexecomplexe: réactionimmunologique, récepteur membranaireNécessité d’amplificationd’amplification (enzyme, fluorescence...) et

de régénérationrégénération (pour fonctionnement séquentiel)

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

4.2.1. Type de reconnaissancereconnaissance

moléculairemoléculaire (suite) Mode de fonctionnementfonctionnement des membranes

Catalytiques : fonctionnement continuChélatantes : nécessité de régénération

Caractère commun entre les 2 types de

membranes à reconnaissance biologique ConsommationConsommation (locale) de l’espèce mesurée :

mesure stationnairestationnaire (si agitation) ou transitoiretransitoire

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

4.2.2. Type de transducteurtransducteur associé ElectrochimiqueElectrochimique

Ampérométrique, potentiométrique,conductimétrique, FET

OptiqueOptiqueOptrode, résonance de plasmon de surface (SPR)

EnthalpimétriqueEnthalpimétrique

Micro-calorimétrie MassiqueMassique

Quartz piézo-électriques, ondes acoustiques desurface

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

4.2.3. Classement par espèceClassement par espèce(s) détectée(s)

SubstratsSubstrats de réactions biologiques

Sucres, acides aminés, alcools, phénols...

NutrimentsNutrimentsMicro-DBO (micro dans sa durée et non sa taille !)

InhibiteursInhibiteurs, toxiques

Pesticides (organo-phosphorés), métaux,

fluorures...

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4. Biocapteurs : 4.2. Classement

Que retenir dans le classement ?

1. Type de reconnaissance moléculaireCatalytique: enzyme(s)Chélatante: complexe antigène-anticorpsDans les 2 cas: consommation de substrat

2. Type de transducteurAmpérométriquePotentiométrique

3. Type d’espèce détectée SubstratNutrimentToxique Retour au sommaire biocapteurRetour au sommaire biocapteur

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.1. Mode d’immobilisationd’immobilisation du récepteurdans/sur la membrane Emprisonnement ou inclusion : facile, ± stable

Gel ou membrane préparée en présence d ’enzyme(s) Adsorption du membrane : facile & peu stable

Liaison covalente, réticulation sur membrane :± complexe mais stableActivation de la membrane, activation de l ’enzyme et

réaction spontanéeContact d ’enzyme avec une membrane activée

StabilitéStabilité de l ’activité de la membrane 3 éléments: membrane + liaison physique ou

chimique (immobilisation) + activité enzyme

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.1. Mode d’immobilisationd’immobilisation du récepteur

dans/sur la membrane Inclusion dans gel ou co-polymérisation

Adsorption Adsorption &

réticulation Liaison covalenteLiaison covalente

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiquescinétiques enzymatiques

hétérogèneshétérogènes

-Enz

-Enz

-Enz

-Enz

Ssolution

Réaction

Transport

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                  T                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              r                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              a                 

n                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              s               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                d                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      u             

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              c                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                       t                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              e               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      u             r

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                (                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                          é                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                 l                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              e               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              c                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                       t                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              r                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              o               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                d               e               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                  )                                                                                                                                                

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                  M                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              e                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                             m

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                  b               r                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              a                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               n                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                              e               

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                   )                                                                                                                                                 TransportPsolution

Pmemb.

Composition de la solution analysée

modifiée, par la réaction, sur une épaisseurépaisseur δδδδδδδδ(δδδδδδδδ fonction de l ’agitation de la solution)

S: substrat(s)P: produit(s)de la réaction

catalysée parl ’enzyme

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 14

4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiquescinétiques enzymatiqueshétérogèneshétérogènes TransportTransport du/des substrat(s) S vers le site

réactionnel (surface ou intérieur membrane)V = (DS / δδδδ) (Ssolution - Smembrane)

avec δδδδ

si agitation

avec DS diffusion substrat S et δδδδ épaisseur couchemodifiée

RéactionRéaction du/des substrat(s) S catalysée par

l ’enzyme (Michaelis-Menten)V = Vmax . Smembrane / (Smembrane + KM,S) avec Vmax activité enzymatique et KM,S (Michaelis) transport de partie du/des produits P vers le

transducteur ( réponse) et vers l ’échantillon (inutile)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 15

4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.2. Rôle des cinétiques enzymatiquescinétiques enzymatiqueshétérogèneshétérogènes Quelle étape la plus lente : cinétiquementlimitante? TransportTransport ou réactionréaction ? Régime diffusionnel si transport = étape la +

lenteVmax / KM,S >> DS / δδδδ forte activité immobilisée Vmax et/ou barrière

diffusionelle externe (DS faible) réponse ‘ indindéépendantependante ’ de l ’activité immobilisée

TB! Régime chimique si réaction = étape la + lenteVmax / KM,S << DS / δδδδ faible activité immobilisée et/ou forte agitation (δδδδ) réponse ‘ dépendante ’ de l ’activité immobilisée =>

peu souhaitable pour instrumentation analytique !

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4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

4.3.3. TransducteurTransducteur électrochimique associé

Electrode métallique : H2O2, Fe(CN) 63/4 -

… Electrode spécifique ionique : H30+, NH4

+… Electrode spécifique à gaz : O2, CO2, NH3..

1. Transducteurampérométrique

oupH métrique2. Membraneenzymatique

Membrane perméableaux gaz

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 17

4. Biocapteurs : 4.3. Constituants

Que retenir sur l’immobilisation ?

1. Immobilisation du récepteur (enzyme) Inclusion ou rétentionAdsorption: peu stableLiaison covalente: stable mais plus complexe

2. Cinétiques hétérogènesRégime chimique: cinétique enzymatique limitanteRégime diffusionnel: transport du substrat limitant

(permet une plus grande stabilité du capteur) 3. Transducteur électrochimique

EM (H2O2), ESI (pH) ou ESG (Clark, CO2, NH3…)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 18

4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

4.4.1. Sélectivité:Sélectivité: détecteur & transducteurdétecteur & transducteur Catalyse enzymatique: très / peu sélective

Glucose oxydase, alcools oxydase, amino-acides oxydasEnzyme(s) purifié ou cellule / tissus biologique

Anticorps mono- ou multi-clonal: très/peu sélective

Transducteur associé: très / peu sélectif  4.4.2. Amélioration de la sélectivitésélectivité

Membrane sélective supplémentaireAcétate de cellulose (anionique): arrêt de l’ascorbate

Transducteur électrochimique: Eappl. + faibleUtilisation de catalyseurs supplémentaires

Montage différentiel à 2 capteurs (≈≈≈≈ colorimétrie)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 19

4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

4.4.2. Amélioration de la sélectivitésélectivité

Montage différentieldifférentiel : soustraction des réponses Suppression réponse aux interférents électrochimiques

Capteursans enzymesans enzyme

Biocapteurà enzymeenzyme

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 20

4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

4.4.3. SensibilitéSensibilité plus élevée que si réactionplus élevée que si réaction

homogène (dosage par kit enzymatique)homogène (dosage par kit enzymatique) Intégration de la reconnaissance moléculaire

et de la transduction du/des produits de laréaction

Pas de dilution dans l’échantillon

Amplification de la réaction principale àl’aide de réaction supplémentaire

Utilisation de seconde réaction enzymatique

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

4.4.4. StabilitéStabilité: méthodes d ’évaluation

Stabilité opératoireopératoire (fonctionnelle)(fonctionnelle)Même biocapteur, calibration séquentielle, répétée Stabilité auau stockagestockage

Différent biocapteurs issus d ’un même lot

(homogène) de production: diverses durées stockage DépendDépend de: membrane, enzyme, immobilisation Durée de vieDurée de vie: modes d ’expression

Durée (quelques heures à quelques mois) 50 % de décroissance de la sensibilité : tt1/21/2 soit en fonctionnementfonctionnement soit au stockagestockage

Vitesse de décroissancedécroissance de la sensibilitéde la sensibilité :: %/mois%/mois

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4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

Que retenir de leur originalité ? 1. Spécificité ou sélectivité du capteur

Spécificité ou sélectivité enzymatique Molécule: glucose oxydase, uréase

Famille: alcool oxydase

Spécificité ou sélectivité du transducteur 2. Amélioration de la sélectivité

Montage différentiel

Membrane permsélective 3. Sensibilité élevée

Intégration spatiale du détecteur et transducteur

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 23

4. Biocapteurs : 4.4. Originalité

Que retenir de leur originalité ?

4. StabilitéModes d’évaluation à bien définir

Au stockage ou en fonctionnement

Dépend de tous les constituants du capteur et durégime cinétique utilisé Régime diffusionnel ou chimique ?

Durée d’utilisation comprise entre 1 semaine: dispositifs de recherche

Plusieurs années: dispositifs commercialisés

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 24

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électro-chimiques 4.5.1. Mesure de substratssubstrats :

Substrats simples de réactions enzymatiques

Applications médicales, environnementales ouagro-alimentaires

4.5.2. Exemple de biocapteur à uréebiocapteur à urée Sucres, acides aminés, phénols, métabolites…

Mesure de matière oxydablematière oxydable Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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4. Biocapteurs : 4.5.2. Urée

4.5.2. UréaseUréase immobilisé & détecteur NH3

•• Réponse stationnaireRéponse stationnaire∆∆∆∆∆∆∆∆E = pente . log [urE = pente . log [uréée]e]O=C(NH2)2 + H2O =>

2 NH4+ + HCO3

-

• NHNH44++

détecté via NH3• pH optimal définidéfini:

• pH = 7 pour uréase

• pH > 9,2 détection NH

• AgitationAgitation nécessaire pourréponse stationnairestationnaire• RemplissageRemplissage dubiocapteur

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 26

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électro-chimiques 4.5.1. Mesure de substratssubstrats :

4.5.2 Exemple de biocapteur à urée

4.5.3. Exemple de biocapteur à glucosebiocapteur à glucose

Acides aminés, phénols, métabolites…

Mesure de matière oxydablematière oxydable

Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 27

4. Biocapteurs : 4.5 3. Glucose

4.5.3.1. Réaction enzymatique

ββββββββ D Glucose oxydaseD Glucose oxydase (GOD ou GOx)immobilisée

ββββ D Glucose + O2 => Gluconate + H3O+ + H2O2

K = 9,3 .1023 à pH 5,7 => rrééactionaction totaletotale (siGOx présent et actif )

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 28

4. Biocapteurs : 4.5 3. Glucose

4.5.3.2. Transducteurs associés : 3possibilités Capteur de pHpH : non spécifique au gluconate Capteur à oxygoxygèènene : très spécifique, mais

réponse décroît si glucose Capteur métallique (Pt) oxydation Hoxydation H22OO22 :

peu spécifique à H2O2 mais réponse avecglucose

Conditions de fonctionnementConditions de fonctionnement du capteurMilieu à pH neutre (sang à pH 7,2)Présence d’oxygène dissous

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 29

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

I (nA)

T (min)

3 mM

3 mM

3 mM

3 mM

∆∆∆∆∆∆∆∆I (nA)I (nA)

4.5.3.3.

Calibration Électrode de Pt:

oxydation de H2O2

Réponses à desadditions deadditions deglucose 3 mMglucose 3 mMdans une solution

tampon (pH 7,4) Mesures des

réponses

stationnaires ∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆Ι∆ΙTemps (min)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 30

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

0 3 6 9 12 15 18

[Glucose total]

0

5

10

15

20

25I - I0 (nA) 4.5.3.3.

CalibrationCalibration desréponsesstationnaires du

biocapteur :I-I0 = f(glucose)total

Soustraction dusignal de fond I

0 Quel domaine dedomaine de

linéaritélinéarité ?

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 31

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

0 3 6 9 12 15 18 21

[glucose total]0

0,5

1

1,5∆∆∆∆I / ∆∆∆∆C (nA/mM)

domaine de linéarité 

4.5.3.3. Calibration Sensibilité stationnaire S (réponse

relative) = ∆∆∆∆∆∆∆∆I/ I/ ∆∆∆∆∆∆∆∆CC Domaine de linéarité de la

réponse lorsque

S =S = ∆∆∆∆∆∆∆∆I/ I/ ∆∆∆∆∆∆∆∆C = constanteC = constante [glucose]max. indicateur de

l’étape cinétiquementl’étape cinétiquementlimitantelimitante Ici diffusiondiffusion du glucose vers le

site réactionnel (membrane àGOx)

Car [glucose]max > KM,glu

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 32

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

Réponse

stationnairestationnaire :

IIstatstat.. = s [glu]= s [glu]

Réponse

transitoire:

(dI/dt)max.

= s [glu]

4.5.3.3.

Calibration

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 33

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

Polyurethanemembrane

Pt-Ir anode

Ag - cathode

450 µ m o.d.

Teflon

Sensing cavity : Cellulose acetateGOx + BSA + GA250 µm o.d.

Ag / AgCl

Teflon

170 µm o.d.

100 µm o.d.

4.5.3.4. Biocapteur implantable (KU, Paris 12,INSERM)

Brevet US 5,165,407 (24/11/1992)Brevet US 5,165,407 (24/11/1992)

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 34

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

4.5.3.4.Biocapteur implantable (Université de

Manchester) capteurcapteur extrémitéextrémité (anode de Pt 125 µm)

et électrode auxiliaire / référence en acier inox

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 35Sensor Research Center, Greifswald, Allemagne

4. Biocapteurs : 4.5.3. GlucoseSuivi de la glycémie sur un volontaire non diabétiquemesure continue sous-cutanée (ligneligne) et ponctuelle plasmatique ()

Absorption 100 g Glu Injection 12 g Glu

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 36

4. Biocapteurs : 4.5.3. Glucose

4.5.3.4. Biocapteur jetable (MediSense) Languette à usage

unique avec zone

d’insertion-aspiration de lagoutte de sang

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 37

4. Biocapteurs : 4.5.1. Substrats

Que retenir sur les biocapteurs à substrats?

Les plus étudiés, publiés, brevetés,commercialisés Marché agro-alimentaire mais surtout médical

Diabète = maladie touchant une part importante dela population et entraînant des problèmesimportants: reins, vision…

Nécessite la mesure multi quotidienne de la glycémie

sanguine (pour injection d’insuline) 2 approches complémentaires

Capteur à usage unique

Capteur implanté in vivo

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 38

4. Biocapteurs : 4.5.1. Substrats

Que retenir sur les biocapteurs à substrats?

Multiplicité de transducteurs électrochimiquespossiblesEau oxygénée produite

Oxygène consommé

Bonne stabilité (conservation etfonctionnement) de la glucose oxydase

Possibilité de commercialisation de capteurs à usageunique (sans étalonnage par usager)

Développements industriels et scientifiques

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http://slidepdf.com/reader/full/capteurs-electrochim-c-2004 39/62

24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 39

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électro-chimiques 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

4.5.2. Exemple de biocapteur à urée

4.5.3. Exemple de biocapteur à glucose 4.5.4. Exemple de mesure d’acide aminé et

métabolites Mesure de matière oxydablematière oxydable

Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 40

4. Biocapteurs : 4.5.4. Métabolites

4.5.4. Capteur à L aminoacidesL aminoacides (spécifique(spécifiquedd ’1 famille)’1 famille) a.a oxydase capteur

à O2

courbesde cali-bration

à diffé-rentamino-acides

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Dispositif de mesure ponctuelle Dispositif d’analyse à circulation

SensLab GmbH, Leipzig (alcool, glucose, lactate, glutamate

4. Biocapteurs : 4.5.4. Métabolite

4 Bi 4 5 A li i

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 42

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électro-chimiques : 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable (levureimmobilisée) :

Micro-DBO: capteur à demandebiologique en oxygène (réponse en ½ h)

Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

4 Bi t 4 5 5 Mi DBO

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 43

4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

4.5.5. Capteur à Demande Biologique en

Oxygène (DBO) Capteur à O2 avecmembrane en téflon

Levures immobilisées

dans une membranemembrane

EchantillonEchantillon aéré : circu-

lation

4 Bi t 4 5 5 Mi DBO

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4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

Biosensores SL, Moncofar, Espagne Suivi du fonctionnement de stations

d ’épuration

4 Bi t 4 5 5 Mi DBO

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Suivi continu de la DBO en entréeentrée et sortiesortie de lastation d’épuration de Valence (Alboraya)

4. Biocapteurs : 4.5.5. Micro-DBO

Biosensores SL, Moncofar, Espagne

4 Bi t 4 5 A li ti

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électrochimiques 4.5.1. Mesure de substratssubstrats

4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable 4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

Pesticides, métaux lourds, fluorures…

Intérêt environnemental: soutien EuropéenExemple de biocapteur à pesticidesbiocapteur à pesticides

4 Biocapte rs : 4 5 6 Pesticides

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4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

4.5.6.1. Importance de la mesure des

pesticidespesticides Contrôle de la qualité des eaux

(réglementation Européennes)

4.5.6.2. Toxicité des pesticides en relationavec leur inhibitioninhibition de l ’AChEAChE 4.5.6.3. Développement de biocapteur

miniaturisé à AChEminiaturisé à AChE pour leur mesuredans échantillons aqueux ou organiques(G. Turdean, Univ. Cluj, Roumanie)

4 Biocapteurs : 4 5 6 Pesticides

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4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

4.5.6.4 Détection

Type 1. MélangeMélange Pesticide + ASCh :Addition 0,2 ou 1 mM ASCh => I0

Addition de pesticide => ∆∆∆∆I = I0 - I

∆∆∆∆I / I0 vs log [pesticide] => courbe calibrationcourbe calibration Type 2. Incubation avec le pesticide seulpesticide seul

Courbe de calibration ASCh, i.e. I vs [ASCh]

Incubation 30 min avec pesticide (sans ASCh)Courbe de calibration ASCh (sans pesticide) =>

inhibition : diminution de la sensibilitéinhibition : diminution de la sensibilité

4 Bi t 4 5 6 P ti id

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 49

4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

Type 1: InhibitionAChE par [pesticide]= 0.1-10 µM avec

[ASCh] = 200 µM Moyenne de 4 capteurs

10% inhib. = 0,4 µM0,4 µM

ParaoxonParaoxon ::

C H O

C H O

O

P - O - C H -NO5

52

2

256

[AChE] = 480 mU/mm2

tampon phosphate pH 8

à 30°C

E=+410 mV vs Ag/AgCl

0,1 10

20

40

60

80

100

      ∆      ∆∆      ∆    I    /    I   o    (    %

    )

log [paraoxon] (µM)

Détection de type I

4 Biocapteurs : 4 5 6 Pesticides

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 50

4. Biocapteurs : 4.5.6. Pesticides

LimiteLimite détectiondétection insecticide organophosphoré

(10% inhibition) [AChE] Trichlorfon (Dipterex) 5 - 55 µM 5-150 mU/mm2

Paraoxon 0,4 µM 480 mU/mm2

RégénérationRégénération (30 min, 1 mM 2-PAM) 85-90 % => réversibilitéréversibilité de l’inhibition insecticide

4 Biocapteurs : 4 5 Applications

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 51

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs électro-

chimiques : 4.5.1. Mesure de substratssubstrats 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable 4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques

4.5.7.4.5.7. Biocapteurs à ADNOxydation électrochimique de la guanineFonction de l ’état d ’hybridation de l ’ADNPermet la reconnaissance d ’ADN

4 Biocapteurs : 4 5 7 ADN

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Université de Florence

Biocapteur électrochimique : ‘hybridation’ ADN

Biocapteur électrochimiquepour détection de

l’hybridation de l ’ADN

Biocapteur électrochimiquepour molécules se liant à ADN

4. Biocapteurs : 4.5.7. ADN

4 Biocapteurs : 4 5 Applications

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4. Biocapteurs : 4.5. Applications

4.5. ApplicationApplication des biocapteurs

électro-chimiques 4.5.1. Mesure de substratssubstrats 4.5.5. Mesure de matière oxydablematière oxydable

4.5.6. Mesure d’inhibiteursd’inhibiteurs enzymatiques 4.5.7. Biocapteurs à ADN

4.5.8. Micro-capteurs et micro-cellules de mesure

4 Biocapteurs : 4 5 8 Miniature

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Micro système

bioanalytique avecun réseau de

biocapteur et

mélangeur deréactifs

Institute of Microsystem Technology (IMTEK),Université de Freiburg, Allemagne

4. Biocapteurs : 4.5.8. Miniature

Retour au sommaire biocapte

4 Biocapteurs : 4 5 Applications

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 55

4. Biocapteurs : 4.5. Applications

Que retenir sur les applications ?

Très grand foisonnement de proposition decapteurs & instruments

Exploitant le principe des biocapteurs

électrochimiques Souvent de dissémination/valorisation

limitéeComplexité du passage de la recherche à la

réalisation industrielle

Moyens et objectifs très différents !

4. Biocapteurs : 4.6. Conclusions

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4. Biocapteurs : 4.6. Conclusions

PotentialitésPotentialités très importantes des biocapteurs

Diversité, sélectivité, sensibilité ComplexitéComplexité opérationnelle des biocapteurs

Multi-disciplinarité des compétences nécessaires

Effets de modemode et perspectivesperspectives des progrès en Electrochimie, miniaturisation, optique, immunologie,

ADN, production industrielle, traitement de signal

Difficultés spécifiques aux mesures en eauxeauxnaturelles ou uséesnaturelles ou usées

Retour au sommaire biocapteurRetour au sommaire biocapteur SommaireSommaire

5 Capteurs électrochim : Conclusion

5/12/2018 Capteurs-Electrochim-C-2004 - slidepdf.com

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 57

5. Capteurs électrochim. : Conclusion

5.1. Synthèse des performancesperformances des capteurs

4 types de capteurs / électrodes spécifiques 5.2. Étapes de développementÉtapes de développement des capteurs

et instruments associés : Quel fonctionnement ?

Mesure unique

Surveillance continue

Alerte... Quels utilisateurs ? Patient, technicien…

Quel degré d’automatisme ?

5. Capteurs électrochim.: 5.1. Synthèse

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5. Capteurs électrochim.: 5.1. Synthèse

Type cap-teur

Métal Spécif.ionique

Spécif. à gaz Biocapteur

Espèce Réduc-teur, oxy-

dant

Ions miné-raux

Gaz oxydantou ac-base

Métabolite, in-hibiteur

Transduc-teur

Pt, Au,

Hg, C

2 électrodes

de référence

Electrode Pt,

Au

ou capt. pH

Electrode Pt, C

ou capteur à pH,

O2 ou CO2

Membrane Sans Verre, cris-taux, orga-

nique

Hydrophobe,perméable aux

gaz

Enzyme(s) ouAb immobili-

sé(s)Réponse :

calibrationIp ∀C

∆E∀ lg C

∆E∀ lg C Istat ∀C

∆E∀ lg C

Istat ∀C

∆E∀ lg C

Réponse :type

Transi-toire, sta-tionnaire,

équilibre

Equilibre Stationnaire,équilibre

Stationnaire,transitoire

5. Capteurs électroch. : 5.3. Perspective

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5. Capteurs électroch. : 5.3. Perspective

5.3. PerspectivesPerspectives offertes par : La miniaturisation, La production industrielle des capteurs et

instruments associés Le traitement de signal

Capteurs “ intelligents ”, redondants (ex: nezartificiel)

L'utilisation de transducteurs non

électrochimiquesOptiquesMassiquesEnthalpiques...

5. Capteurs électroch. : 5.4. Perspective

5/12/2018 Capteurs-Electrochim-C-2004 - slidepdf.com

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5. Capteurs électroch. : 5.4. Perspective

5.4. CompétencesCompétences nécessaires audéveloppement de capteurs et capteurs

électrochimiques : Analytique, Physico-chimique, Biochimique et micro biologique, Electronique et traitement de signal Mathématiques et modélisation

Fort développement en cours : à vous de jouer !

Retour au sommaire

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4. Biocapteurs : 4.5.5. DBO

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24/11/2004 D. Thévenot: Capteurs-Electrochim-C-2004.ppt 62

Biocapteur à DBOBiosensores SL, Moncofar, Espagne

p

Biosensores SL, Moncof ar, Espagne Suivi de la présence de toxiquestoxiques :

inhibiteurs