Post on 04-Apr-2015
ATC , Rouen , 24 Septembre 2011
M. Roumiguières, V.Goutaloy
Apport de la cytogénétique dans le diagnostic des phases leucémiques
des lymphomes de la zone marginale :
- l’expérience du laboratoire Biomnis Lyon -
2www.biomnis.com
Les études cytogénétiques ont permis une grande avancée dans la classification des hémopathies lymphoïdes chroniques.
Le diagnostic et le pronostic des SLP reposent sur:
- les données cliniques
-l’étude cytologique/histologique
-l’étude immunophénotypique
-l’étude cytogénétique
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Devant la présence d’un hyperlymphocytose (>5000/mm3)
1==> Etude cytologique du frottis sanguin :
Cytologie typique de LLC : petits lymphocytes matures + ombres de Gümprecht
2==> Etude immunophénotypique : Monoclonalité + Score de Matutes
LLC typique : score de Matutes > 3
LLC atypique : score de Matutes = 3
Score de Matutes < 3 = pas une LLC
Immunophénotypage : Diagnostic de certitude de la LLC
4www.biomnis.com
Rôle « PRONOSTIQUE »de la CYTOGENETIQUE
CARYOTYPE FISH
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Culture en 72h +Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2]
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Culture en 72h+Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2]
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Pour les scores de MATUTES ≤ à 3
Etude CYTOLOGIQUE : indispensable
ex : Lymphocytes clivés et Lymphome folliculaire
Etude CYTOGENETIQUE : peut permettre de préciser le DIAGNOSTIC et le PRONOSTIC du lymphome malin non hodgkinien B.
-cas de la translocation (14;18)(q32;q21) et lymphome folliculaire
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CLASSICATION OMS DES LMNH-B
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Parmi les LZM, 3 hémopathies bien distinctes sont identifiées en fonction des sites atteints :
- le lymphome de type MALT (gastrique principalement) - 50 à 70% - le LZM splénique (S-MZL) – 20% - le LZM ganglionnaire (N-MZL) – 10%
Ce sont généralement des lymphomes indolents du sujet âgé
Prise en charge thérapeutique fonction de l'organe atteint : Antibiothérapie (MALT), Splénectomie
ZONEMARGINALE
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.... dans le cadre des phases leucémiques des LZM non MALT
Le score de Matutes est souvent nul (=0) ou faible (groupe CD5-/CD10-)
L’analyse cytologique de la prolifération lymphocytaire peut poser des problèmes diagnostiques (à l’exception des lymphocytes villeux)
EXISTE-T-IL UN AUTRE OUTIL DIAGNOSTIQUE ?
dans le cadre du LZM:DIAGNOSTIC HISTOLOGIQUE = DIAGNOSTIC DE CERTITUDE ...
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LZMLZM : Profils génétiques différents
LZM - Malt LZM Splénique ou ganglionnaire
Translocations réciproques Anomalies de nombre
Gains et/ou délétions
t(11;18)(q21;q21) API2 / MALT1
Translocations avec IGH en14q32
t(1;14)(p22;q32) – BCL10-IGHt(14;18)(q32;q21) – IGH-MALT1t (3;14)(p14;q32)- FOXP1-IGH
Trisomie 3 / 3q Del 7q Trisomie 18 Del 6q Trisomie 12 / 12q Del 8p
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Comment poser un diagnostic de LZM ?
Intérêt de la cytologie ? Oui si L.villeux
Intérêt de l’immunophénotypage ? Matutes 0 à 2 et groupe CD5- / CD10-
souvent insuffisant
Intérêt de la cytogénétique ? Peut apporter une aide précieuse +++
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Etude de 3 cas cliniqueset
Experience de Biomnis sur 2009-2011
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Hyperlymphocytose à 14 G/l
Cytologie atypique
Lymphocyte B normal
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Immunophénotypage :
Matutes < 3 (1/5)
Groupe CD5- / CD10-
Phase leucémique de quel LMNH-B ?
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Délétion de la bande 7q32 = commune à tous les LZM
3q31
q3546,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35)
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4646,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),del(8)(p12)
Evolution en 2 clones:
1er clone : del (8)(p12)
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46,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),der(8) t(8;12) (p12;q13)
2ème clone :
der8 t(8;12)(p12;q13)
= délétion 8p et trisomie 12q partielle
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Hyperlymphocytose à 58 G/l,
Cytologie atypique
Lymphocyte B normal
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Immunophénotypage :
Matutes < 3 (0/5)
Groupe CD5- / CD10-
Phase leucémique de quel LMNH-B ?
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4747,XX,+12
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D13S319D13S1020
D12Z1
4747,XX,i(8)(q10),+12.nuc ish(D12Z1x3,D13s319x2,D13S1020x2
i(8)(q10)
= délétion 8p et trisomie 8q
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Hyperlymphocytose à 33G/l
Cytologie très évocatrice : Lymphocytes villeux
Lymphocyte B normal
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Matutes < 3
Groupe CD5- / CD10-
LZM splénique à lymphocytes villeux
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5’IGH
3’IGHIGH
LSI IGH Dual Color, Break Apart Rearrangement
46,XX,t(6;14)(p21;q32).nuc ish(IGHx2)(5’IGH sep 3’IGHx1)
26www.biomnis.com
ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM
AU LABORATOIRE BIOMNIS 2009 2011
27www.biomnis.com
17 cas identifiés :
7 hommes, 10 femmes Age moyen : 74 ans
28www.biomnis.com
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ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011
Au point de vue cytologique :
Très grand polymorphisme de la cellule lymphomateuse,
Hétérogénéité des données cytologiques dans 94 % des cas (sauf L.Villeux)
Taille moyenne, Chromatine mature, parfois nucléolée, Noyau +/- régulier, Cytoplasme au contour +/- régulier et +/- abondant, Nucléole +/- visible,
= MANQUE FREQUENT DE SIGNATURE CYTOLOGIQUE
www.biomnis.com
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ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011
Au point de vue immunophénotypique:
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Score de Matutes Fréquence
0 35 %
1 35 %
2 30 %
3 0 %
CD5 - / CD10 - dans 94% des cas( 1 cas CD5+ = LZM/CD5+ ?)
31www.biomnis.com
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Au point de vue cytogénétique :
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Anomalies cytogénétiques en association ou non
Fréquence
+3,+18 24 %
del (7)(q32q35) 21 %
+3, del (7q) 18 %
+3, ou +3q 12 %
+3, +12 5 %
3+, iso8q ( = del (8p)),+18 5 %
+12, i(8)q (del (8p)) 5 %
del 7,del(8p) 5 %
+3, +18, del(14q) 1cas
t (6;14) 1 cas
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Chromosomes impliqués Fréquence
3 65 %
7 41%
18 29 %
8 23 %
12 11 %
34www.biomnis.com
Associations d’anomalies chromosomiques dans 76 % des cas.
Anomalies cytogénétiques en association ou non
Fréquence
+3,+18
association isolée ou avec caryotype complexe
iso8q, del6q, del14q,+18
38 %
+3 ,del 7qassociation isolée ou avec caryotype
complexe+3q, del6q,
23 %
del 6q, del 7q, 15%
+3, +12 8 %
+12, i(8)q (del 8p) 8%
del 7,del 8p 8%
35www.biomnis.com
Anomalies cytogénétiques isolées
Nombre de cas
+3, ou +3q 2 cas
del (7)(q32q35) 1 cas
t(6;14) 1 cas
Anomalies isolées dans 24% seulement des cas
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Nombre d’anomalies dans le LZM
Fréquence
1 18 %
2 24 %
3 et > 3 58%
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Pas de délétion ATM (caryotype et FISH)
Pas de délétion 13q14 (caryotype et FISH)
2 délétions p53 dans notre série (11 % des cas)
par iso (17q) =>
SEUL CRITERE PRONOSTIC PEJORATIF dans les LZM ?
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Salido et al, Blood 2010
perte
gain
N = 330
N = 330Salido et al, Blood 2010
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Chr 3
perte
gain
3q25 3q29 = région commune surreprésentée
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Chr 7
perte
gain
7q32.1-32.2
= région commune délétée
Gènes candidats ???
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Chr 1 Chr 6 Chr 8 Chr 14
perte
gain
dup(1q) ? del(6q) ? del(8p)/+8q?del(14q) ?
réarrangement 14q32 ?
IGH
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Cytogénétique
Cytologie
Immuno-phénotypage
Diagnostic du LZM
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