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Sérodiagnostic de la polyarthrite

rhumatoïde

Par S / Abdessemed

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Introduction

• La polyarthrite rhumatoïde est une maladie inflammatoire du tissu conjonctif atteignant surtout le synoviale des articulations, Son retentissement fonctionnel est grave puisqu’elle provoque souvent des déformations et des destructions articulaires irréversibles.

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• C’est une des affections rhumatismales des plus répandues, avec une nette prédominance féminine.

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• La découverte du Facteur Rhumatoide remonte à 1940. Elle est due à WAALER et sera complétée par ROSE en 1948.

• Ces auteurs ont démontré que les sérums de sujets atteints de polyarthrite rhumatoïde agglutinent les hématies de mouton sensibilisées par un sérum de lapin anti hématies de mouton.

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• Les techniques classiques reposent toutes sur des réactions d’agglutinations passives entre des Facteurs Rhumatoides de classe igM et des igG fixées sur un support (hématies ou particules de latex).

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Réaction de Waaler-Rose modifiée

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Principe

• Des hématies de mouton sont sensibilisées avec du sérum de lapin anti-hématies de mouton (igG).

• La réaction est basée sur les propriétés hémagglutinantes spécifiques du FR, utilisées dans les réactions type WAALER-ROSE.

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Principe

Hématies sensibilisées

FR de classe igM

Agglutination

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Matériel et réactifs

- Hématies test - Hématie contrôle - Compte gouttes délivrant 50µl/gouttes - Agitateur à usage unique - Lame de verre quadrillé

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Mode opératoire Sur une lame de verre : -déposer sur la lame dans chaque case T et R 50 µl de sérum à examiner -Agiter soigneusement les suspensions d’hématies témoin et révélateur.

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- Ajouter dans la case T une goutte de réactif témoin « A » et dans la case R une goutte de réactif révélateur « B ».-Mélanger les deux gouttes en utilisant un agitateur à usage unique.NB : Lire les résultats pendant les deux premiers minutes de la manipulation.

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Lecture

Réaction positive : • case T : absence d’agglutination• Case R : agglutination visible à l’œil

nu. Réaction négative : • case T : Absence d’agglutination• Case R : Absence d’agglutination

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Réaction d’agglutination au LATEX

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Principe • Le test FR –Latex est un test

d’agglutination rapide pour la détection directe et semi quantitative sur carte des facteurs rhumatoides (FR).

• L’antigène, est une suspension de particules de latex recouvertes de gamma globulines humaines, qui s’agglutinent en présence des facteurs rhumatoides présents dans le sérum des patients.

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Réactifs Antigène FR- Latex: 2,5 ml, Suspension de

particules de latex recouvertes de gamma globulines humaines, azide de sodium 0,95 g/l la sensibilité de l’antigène est calibrée de manière à détecter environ 08UI/Ml d’une préparation internationale de référence de sérum de polyarthrite rhumatoïde (WHO).

Contrôle positif: 1ml sérum humain, azide de sodium 0,95 g/l.

Contrôle négatif: 1 ml sérum animal, azide de sodium 0,95 g/l.

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Agitateur rotatif réglable à 100 r.p.m

Cartes tests Agitateurs à usage

unique

Matériel

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Echantillons

Sérum : stable pendant 48h à 2-8°C.• Les sérums hémolysés et lipémiques

ne sont pas adéquats pour le test ; ils risquent de donner des résultats erronés.

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Protocole• Préalablement, sortir les réactifs et les

laisser s’équilibrer à la température de la pièce.

• Déposer 50µl d’échantillon et une goutte de chaque contrôle dans les cercles individualisés sur la carte test.

• Agiter légèrement le flacon d’antigène avant de l’utiliser. Déposer une goutte de réactif FR- Latex dans chaque cercle près de l’échantillon à tester.

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• Mélanger avec agitateur à usage unique de manière à recouvrir totalement l’ère définie par le cercle. Utiliser un nouvel agitateur pour chaque échantillon.

• Faire tourner la carte à 100 r.p.m. pendant 2 minutes

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Lecture et Interprétation

• Apres avoir retiré la carte de l’agitateur rotatif, examiner à l’œil nu la présence ou l’absence d’agglutination dans la minute qui suit .

• Une agglutination visible indique la présence de facteur rhumatoïde ≥08UI/ml.

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• Un sérum positif doit être titré. Pour titrer, faire des dilutions de deux en deux dans une solution saline à 9 g /l.

• le titre d’un sérum est défini comme étant la plus grande dilution donnant un résultat positif.

• Le taux approximatif d’un sérum en FR (UI /mL) peut être obtenu en multipliant le titre par la limite de sensibilité (08 UI/mL).

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Limites de la Méthode

• Un diagnostic ne peut reposer uniquement sur ce test qui doit venir en complément d’autres tests biologiques (ex : Waaler-Rose) et de l’examen clinique.

• L’incidence de résultats positifs avec des sérums de sujet apparemment sains est de l’ordre de 3-5%.

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• Des réactions positives peuvent être obtenues non seulement dans le cas de polyarthrite rhumatoïde, mais aussi de mononucléose infectieuse, d’hépatite, de syphilis, et de patients âgés.

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Notes

• la sensibilité du test diminue à basse température. Les meilleurs résultats son obtenus à des températures supérieures à 10°C.

• une lecture différée peut résulter en une surestimation du titre de FR.

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