Download - NEISSERIA L2

Dr M. Toukam

HGY, FMSB Yaounde

OBJECTIFS

Définir et classer les Neisseria Décrire les caractères

bactériologiques des Neisseria Décrire le pouvoir pathogène des

Neisseria

PLAN

INTRODUCTION HISTORIQUE CLASSIFICATION Caractères généraux NEISSERIA GONORRHEAE ET

MENINGITIDIS HABITAT ET POUVOIR PATHOGENE CARACTERES BACTERIOLOGIQUES DIAGNOSTIC CLINIQUE DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE TRAITEMENT

INTRODUCTION

Le genre Neisseria→ cocci Gram négatif comprenant:

- 2 espèces qui ne sont pathogènes que chez l’homme Neisseria gonorrhoeae et Neisseria meningitidis

- Des espèces commensales des voies aériennes sup, du pharynx ou de la muqueuse vaginale N. lactamica N. polysaccharea N.sicca N. subflava, flava et perflava N. mucosa N. cinerea

HISTORIQUE

Les gonocoques sont des bactéries connues depuis longtemps. On en parle déjà dans l’ancien testament et c’est Galien qui a introduit le terme de « gonoroia »= flux de semence en 130 avant J-C. Neisseria gonorrhoeae fut ensuite décrit en 1879 par Neisser et cultivé par Leistikow et loeffler en 1882

La première méningite cérébrospinale a été décrite en 1805 à Genève par Vieusseaux. La découverte de l’agent responsable n’a lieu qu’en 1887 par Weichselbaum lors d’une méningite purulente. Le méningocoque a été décrit sous des noms différents.

Kiefer en 1896 a mis en évidence le portage chez les sujets sains

CLASSIFICATION

FAMILLE :Neisseriaceae GENRE : Neisseria ESPECE : Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis,

Neisseria lactamica

Caracteres generaux

Les Neisseria sont -des diplocoques à gram négatif

accolés par une face aplatie donnant l’aspect en grain de café

-immobiles-non sporulés-aérobies stricts-catalase +-oxydase +

NEISSERIA GONORRHEAE

HABITAT ET POUVOIR PATHOGENE N. gonorrhoeae est une bactérie strictement humaine

qui possède des éléments de pathogénicité évolués lui permettant d’infecter les muqueuses et d’échapper au système immunitaire par des déguisements d’origine génétique.

Ces facteurs sont en grande partie portés par la membrane externe.

Les formes virulentes possèdent des pili d’adhésion qui avec la protéine P II assurent la fixation de la bactérie sur la muqueuse uro-génitale et augmentent la résistance de la bactérie à la phagocytose

La protéine P I ou porine semble favoriser l’endocytose de la bactérie et son caractère invasif

La protéine P II va augmenter l’adhérence aux cellules eucaryotes et aux phagocytes

La protéine P III réduirait l’action bactéricide du sérum

HABITAT ET POUVOIR PATHOGENELe principal mode de contamination est une

transmission sexuelle par un partenaire infecté mais la contamination n’est pas systématique(A chaque RS).

L’infection de la muqueuse passe par différentes phases:

-adhérence des gonocoques par les pili à la muqueuse

-endocytose-transport du gonocoque à travers la cellule

épithéliale dans une vacuole d’endocytose où il se multiplie

-relargage des germes dans l’espace sous endothélial d’où il peut disséminer dans l’organisme

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES

morphologie Diplocoques gram

négatif mesurant de 0.6 à 0.8 чm disposés en grain de café très caractéristique.

Dans les produits pathologiques, on les retrouve souvent en situation intracellulaire dans le cytoplasme des polynucléaires

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES culture-pH optimal 7.5-Température 35 - 36˚C-Exigence milieu enrichis aux

substances organiques: sang, sérum-Atmosphère enrichie en CO2 8 à 10 %

nécessaire-Aérobie stricte

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES caractères biochimiques-Oxydase +-Catalase +-Acidifient milieux glucosés-Sans action sur les autres sucres:

maltose, saccharose, fructose-Ne possèdent pas de

bétagalactosidase ni de gammaglutamyltransférase

-Ne réduisent pas le nitrate en nitrite

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES antigènes

Les gonocoques possèdent dans leur paroi des LPS antigéniques et toxiques.

Les protéines de la membrane externe P I, P II et P III sont antigéniques

toxines

Le gonocoque ne produit pas de toxines mais excrète une IgA protéase qui pourrait protéger les microorganismes des IgA sécrétoires.

DIAGNOSTIC CLINIQUE

Chez l’homme: urétrite aigue = forme la + fréquente

Incubation: 2-5jrs -Urétrite purulente avec rougeur du méat, -Suintement, écoulement méat -Brulure mictionnellecomplications: prostatites épididymite rétrécissement urétral

DIAGNOSTIC CLINIQUE

Chez la femmeL’attaque génitale se fait au niveau de l’endocol

bien qu’on puisse retrouver N.gonorrhoeae au niveau de l’urètre, des glandes de skene, des glandes de Bartholin.

La symptomatologie évolue à très bas bruit Incubation: 10 jours environ-Leucorrhées-Dysurie-SaignementsL’infection peut se disséminer provoquant

salpingite, pelvipéritonite pouvant aller jusqu’à la stérilité

DIAGNOSTIC CLINIQUE

Cas particuliers -Manifestations disséminéesMoins fréquentes. Elles se manifestent par un

syndrome de polyartralgie associé a une dermatite -Manifestations néonatalesLa transmission du gonocoque peut se faire

verticalement. Ainsi une conjonctivite gonococcique peut être observée.

-Infections ano-rectales et pharyngéesLiées au comportement sexuel. Le prurit anal et les

saignements peuvent être observésLes gonococcies pharyngées sont le + souvent

asymptomatiques mais peuvent donner des angines

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE

Il repose sur l’examen bactériologique qui comporte:

-Un examen direct par coloration de Gram

-Une culture sur milieux spéciaux avec isolement et identification des germes

-Une étude de la sensibilité aux antibiotiques


Le prélèvement Il constitue un temps essentiel de

l’examenLa nature du prélèvement est en fonction

de l’âge, du sexe, des pratiques sexuelles et de la nature de l’infection

-chez l’homme: on prélève une goutte du pus urétral(la goutte matinale) après massage prostatique éventuellement ou on recueille l’urine du 1er jet. La réactivation de l’infection par l’ingestion de la bière la veille du prélevement est classiquement cité.


-chez la femme : les prélèvements doivent être multiples et peuvent être faits au niveau de l’endocol, des glandes de skène ou de Bartholin ou au niveau de l’urètre

-dans les formes cliniques généralisées, il faut avoir recours aux hémocultures, aux ponctions de liquide articulaire, liquide de vésicule cutanée ou au prélèvement de pus oculaires

On peut également être amené à faire des prélèvements de l’oropharynx, ano-rectaux…


Culture 2 milieux sont classiquement utilisés:-chocolat= gélose au sang cuit + supplément

vitaminique (milieu modifié de Thayer Martin)-milieux clairs ex. milieu méningocoque-

gonocoque pour isolement de gonocoque de Sanofi Diagnostic Pasteur®

Pour faciliter l’isolement des Neisseria pathogènes à partir des sites pluri microbiens, des suppléments antibiotiques peuvent être ajoutés: Vancomycine pour inhiber les germes à gram + Colimycine pour inhiber les germes à gram – Un agent antifongique type nystatine ou fungizone


Identification Elle repose sur la morphologie et les

caractères enzymatiques et biochimiques

Les colonies de gonocoques apparaissent au bout de 24 à 48h. Ce sont des colonies grisâtres de 0.5 à 1 mm de diamètre . Elles ont un bord irrégulier et un aspect ± brillant ou mat.

L’isolement sur milieu sélectif facilite l’identification


Techniques immunologiquesLa recherche d’antigène donne de bons

résultats dans les PU et les urines du 1er jet mais manque de sensibilité dans les prélèvements endo-cervicaux. Il existe aussi des réactions croisées avec les Neisseria commensales diminuant la spécificité du test dans les prélèvements plurimicrobiens.

Biologie moléculaireLes tests par amplification génique sont

plus sensibles que la culture

Prophylaxie

-prophylaxie locale: préservatifs

-traiter le ou les partenaires sexuels

-prophylaxie obligatoire chez tous les nouveau-nés: instillations de collyre au nitrate d’argent

NEISSERIA MENINGITIDIS

HABITAT ET POUVOIR PATHOGENEN. Meningitidis a un réservoir strictement humain

(portage sain et malades).Il colonise la paroi postérieure du rhinopharynx. Il peut être isolé en l’absence de toute manifestation clinique.

La transmission se fait par la salive et les gouttelettes de pflügge

N. meningitidis est responsable de:-méningite cérébro-spinale-coryza-rhinite-Affections ORL diverses-septicémies avec complications rénales, péricardiques

et articulaires-conjonctivites purulentes aigues surtout chez l’enfant


Morphologie

Ce sont des diplocoques gram – de 0.6 à 0.8 µm de diamètre disposés en grain de café apparaissant parfois capsulés et en situation intraleucocytaire dans le LCR purulent

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES Culture Elle est + facile que celle du gonocoque car les

méningocoques se développent sur gélose ordinaire. Mais il est préférable au sortir de l’organisme d’utiliser des milieux riches (gélose au sang ou gélose au sang cuit) que l’on peut rendre sélectif par adjonction d’antibiotiques.

-Ce sont des aérobies stricts qui se développent dans une atmosphère normale

-pH optimal: 7.2-Température optimale: 37°cIls ne survivent que très peu dans le milieu

extérieur. Ils ne peuvent supporter les variations de température, de pH.

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES Caractères biochimiques et enzymatiques-oxydase +-catalase +-dégrade le glucose le maltose-Sans action sur le saccharose et le lactose -possède une GGT

Caractères antigéniquesLes polyosides capsulaires déterminent 12 sérogroupes: A,

B,C, X, Y, Z, 29E, W135,H, I, K et L.90% des infections sont dues aux sérogroupes A,B et C.A l’intérieur des groupes, il existe des sérotypes et des sous

types déterminés par les protéines des membranes externes

CARACTERES BACTERIOLOGIQUES ToxinesLe méningocoque ne produit pas

d’exotoxine mais possède une endotoxine à structure lipopolysaccharidique.

Les souches pathogènes possèdent des pili facilitant leur adhésion et produisent les IgA protéases

DIAGNOSTIC CLINIQUE

TDD: Méningite cérébrospinaleElle est caractérisée par:-incubation: 3 à 10 jours-rhinopharyngite apparente ou non -début brutal marqué par Fièvre Céphalées intenses Vomissements Raideur de la nuque PhotophobieVoire convulsions et déliresEt parfois une éruption pétéchiale, des douleurs

articulaires et même le coma


Il est fondé sur la présence de la bactérie dans le LCR et dans le sang

Le prélèvementN meningitidis est une bactérie fragile et sensible

aux variations de température, présentant une autolyse spontanée. L’ensemencement devra donc être immédiat et les prélèvements traditionnels sont:

-LCR-Hémocultures-Lésions cutanés lorsque les purpuras sont observés-Nasopharynx ( N. meningitidis est trouvé

uniquement sur la paroi postérieure du rhinopharynx et non sur les amygdales)


L’examen directDans un LCR purulent, on peut voir en situation

intra ou extracellulaire, des diplocoques gram- mais ils sont parfois très rares=l’examen direct peut être négatif

La cultureElle est indispensable (même en cas de liquide

clair) et se fait sur milieux riches et avec incubation à 37°c.

Les colonies apparaissent en 24h. Ils sont à bord réguliers, de 1 à 2mm de diamètre, blanchâtres ou grisâtres, ± muqueuses suivant les souches et pouvant s’agrandir dans les jours suivants


L’identificationElle est basée sur-caractères biochimiques-caractères antigéniquesRecherchés par agglutination sur lame

d’une suspension de la souche par des sérums anti méningocoques. On dispose des sérums anti A, anti B, anti C et polyvalent. Il existe toutefois certaines souches ingroupables ou polyagglutinables


La recherche d’antigène solubleOn peut mettre en évidence dans le LCR,

le sérum ou les urines l’antigène du méningocoque à l’aide des réactifs au latex sensibilisés par un antisérum. Ce test est peu sensible et manque de spécificité dans les urines

La méthode par contre-immuno-electrophorèse est utilisable mais + longue

La PCRLe génome du méningocoque peut être

recherché dans le LCR ou dans le sérum

TRAITEMENT

Resistances naturelles: vancomycine, teicoplanine, triméthoprime,lincosamides, colistine et polymyxine B

Resistances acquises: sulfamides, penicilline, chloramphénicol, tetracycline, macrolides, rifampicine

RECAPITULATIF

CARACTERES N. GONORRHEAE N. MENINGITIDIS

OXYDASE + +

CATALASE + +

GLUCOSE + +

MALTOSE - +

LACTOSE - -

SACCHAROSE - -

CULTURE A 37°c + +

pH OPTIMUM 7.5 7.2

GGT - +

EXIGENCE EN CO2 + -

EXIGENCE EN MILIEU ENRICHI

+ -

BON COURAGE