Le Diagnostique
Les Bacilles Gram Positifs
Classification
Bacilles Gram Positifs
Sporulants
Aérobie et aérobie facultatif Bacillus
Anaérobie stricte Clostridium
Non-sporulants Aérobie Listeria
Caractéristiques des Bacilles Sporulants
• Tous sont de gros bacilles Gram positifs• Font des endospores • Principalement retrouvés dans le sol, les eaux
et la poussière• Exigences nutrionelles très diverses
– Utilisent des sources de carbones simples et complexes
– Leurs spores leurs permettent de résister à des conditions extrêmes
Les Bacilles d’Importance Médicale
• Bacillus– Majoritairement inofensifs– Quelques espèces opportunistes
• Bacillus cereus & Bacillus subtilis– Empoisonement alimentaire
– Une espèce pathogène• Bacillus anthracis
– Anthrax
Les Bacilles d’Importance Médicale
• Clostridium– Plusieurs espèces pathogènes
• Clostridium perfringens– Gangrène gazeuse
• Clostridium tetani– Tétanos
• Clostridium botulinum– Botulisme
• Clostridium difficile– Diarrhée
Identification: Tests Métaboliques
• Bouillon de phénol rouge– Métabolisme de sources de carbones simples– Source de carbone:
• Peptone (protéine acides aminés)• Sucre désiré ajouté
– Indicateur de pH• Phénol rouge
– Jaune pH acide– Orange pH neutre– Rouge pH alcalin
Bouillons de Phénols Rouges
• Utilisation de Carbone:– Sucre
• Réaction acide (Jaune) • ou neutre (Original)
– Protéine• Réaction alcaline
(Rouge)
Fermentation du Glucose
• Accumulation d’acide:– Glucose pyruvate acide lactique et/ou acétique + CO2
• Accumulation de produits neutres– Glucose pyruvate acétoine 2 butanediol + CO2
Test de Méthyl Rouge
• Test pour l’accumulation d’acide– Sources de carbones: Glucose et protéines– Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après
• MR +: rouge (pH < 5.2)• MR - : jaune (pH > 5.2)
Test de Voges-Proskauer
VP + = rougeVP - = jaune
Résultats habituelle de MR/VP: MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VP-
Réactifs VP:butanediol + -naphthol + KOH + O2 acétoine
Utilisation d’Urée
• Carbone:– Urée
• Enzyme– Uréase
• Indicateur de pH– Phénol rouge
C O + 2 H2O CO2 + H2O + 2 NH3 (NH4)2CO3
H2N
H2N
uréeammoniumcarbonate(alcalin)Acides aminés
Négatif Positif
Utilisation du Carbone Complexe
• Trop gros pour le transport à l’intérieur• Nécessite enzymes exocellulaires pour la
dégradation externe en petites unités– Polysaccharides
• Amidon (amylase)
– Lipides (lipase)• Tributyrine
– Protéines (protéase)• Caséine (caséinase)
Amylase
Avant l’ajout d’iode Après l’ajout d’iode
Caséinase
Lipase
La Respiration AérobieLa Chaîne de Transport d’e-
3 H2O
H+
2 H+
2 H+
3 H+ + 3 OH-
2 H+
H2O
3 H+ + 1/2 O2
2 e-
2 e-
2 e-
Fp
Fe-S
2 e-
Q
Cyt b
Cyt o
NADH + H+
FADH2
intérieur
extérieur
Test d’Oxydase
• Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur final d’e-, l’oxygène
• Un donneur artificiel d’e-, la phenylenediamine, est utilisé pour réduire le cytochrome oxydase
• Si l’enzyme est présente, le réactif incolore (état réduit) deviendra bleu (état oxydé)
Catalase
Ajout de 3% H2O2 à la croissance bactérienne
2H2O2 2H2O + O2 catalase
Produit de la respirationdommageable pour l’ADN
Métabolisme d’aérobie requière la catalase
Bulles(O2)
Respiration Anaérobie
2 H+
2 H+
3 H+ + 3 OH -3 H2O
2 H+
NO2- + H2O (N = +3) nitrite
NO3- + 2 H+ (N = +5) nitrate
2 e-
2 e-
2 e-
Fp
Fe-S
2 e-
Q
Cyt b
NADH + H+
FADH2
Nitrate réductase
Intérieur
Extérieur
Capteur final d’e-
Nitrate Réductase
NO3- + 2 H+ + 2 e- H2O + NO2
- NO, N2O, NH2OH, NH3, N2
nitrate nitrite
Étape 1: Test pour nitriteNO2
- + acide sulfanilique et alpha naphthylamine HNO2
Nitrate n’est pas réduit
Absence de Nitrite Jaune
Nitrate est réduitProduction de Nitrite
Rouge
Nitrate est réduit au nitrite Nitrite est réduit
Absence de Nitrite Jaune
Nitrate Réductase (suite)
NO3- + 2 H+ + 2 e- H2O + NO2
- NO, N2O, NH2OH, NH3, N2
nitrate nitrite
Étape 2: Test pour présence du nitrateNO3
- + Zn (s) NO2-
Nitrate est présentRéduction au Nitrite
RougeNitrate est absentNitrite a été réduit
Jaune
Le Diagnostique
Les Cocci Gram Positifs
Classification
Cocci Gram Positifs
Streptococcaceae
Catalase -
Aérobie & anaérobie facultatif
Streptococcus
Micrococcaceae
Catalase +Aérobie
Micrococcus
Staphylococcus
Caractéristiques des Cocci Gram Positifs
• Tous sont non sporulants• Principalement retrouvés parmi la flore
naturelle des hommes et des animaux• Exigences nutrionelles fastidieuses
– Utilisent des sources de carbones simples
Aggrégation Cellulaire des Cocci Gram Positifs
Micrococcus & Streptococcus
Streptococcus
Micrococcus
Staphylococcus
Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale
• Micrococcaceae– Staphylococcus aureus
• Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et choc toxique
– Staphylococcus epidermidis• Cause des infections opportunistes
– Staphylococcus saprophyticus• Cause majeure de cystites chez les femmes
Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale
• Streptococcaceae– Streptococcus pyogenes– Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse
de chair– Streptococcus agalactiae
• Infections génitales– Streptococcus mutans
• Endocardites– Streptococcus pneumonia
• Otite, meningite et pneumonie– Enterococcus spp.
• Infections opportunistes
Identification: Tests Métaboliques
• Microccocus Vs Staphylococcus• Test d’oxydase
– Micrococci sont +– Staphylococci sont –
• Bacitracine– Micrococci sont sensibles– Staphylococci sont résistants
Identification: Tests Métaboliques
• Différentitation des espèces de Staphylococcus• Test de coagulase
– Les staphylococci coagulase positifs» S. aureus
– Staphylococci coagulase négatifs» Tous les autres Staphylococci
• Fermentation du mannitol– S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs– S. epidermidis est negatif
S. aureusS. epidermidis
Identification: Tests Métaboliques
• Différentiation des espèces de Streptoccocus• Regroupement sérologique de Lancefield
– Fondé sur le type d’hydrate de carbone dans leur paroi» 8 groupes (A-H et K-U)
» Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes» Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae» Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans» Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus» Pas classifié d’après le regroupement de Lancfield
» α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans
Hémolyse Sanguine
• Gélose de sang:– Discrimination d’après patrons d’hémolyses
• Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète• Hémolyse beta - Hémolyse complète• Hémolyse gamma - Aucune hémolyse
Identification: Tests Métaboliques
• Identification de Streptoccocus pneumoniae– Solubilisation par la bile
• Strep. pneumoniae est positif• Autres Strep. sont négatifs
• Identification d’Enterococcus– Test de bile-esculin
• Enterococcus est positif• Autres Strep. sont négatifs
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