1 [FR]

UriSelect™4 20 63726 100 63727 500g 64694

Milieu chromogène non sélectif pour l'isolement, la différenciation et la numération directe des germes urinaires

882044 – 2013/11

Sommaire

1. INTÉRET CLINIQUE

2. RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

3. PRINCIPE DU TEST

4. RÉACTIFS

5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION

6. ÉCHANTILLONS

7. PROCÉDURE

8. LIMITES DU TEST

9. VALEURS ATTENDUES

10. PERFORMANCES

11. BIBLIOGRAPHIES

2 [FR]

1. INTÉRET CLINIQUE UriSelect™4 est un milieu chromogène non sélectif, pour l'isolement, la différenciation et la numération des germes pathogènes urinaires. UriSelect™4 permet la différenciation et l'identification directe des Escherichia coli, Enterococcus spp. et Proteus mirabilis ainsi que l'identification présomptive d’autres agents pathogènes, en particulier les entérobactéries du groupe KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia et Citrobacter) et du groupe PMP (Proteus-Morganella-Providencia). 2. RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST Les infections urinaires (IU) figurent parmi les infections bactériennes les plus courantes et constituent une partie importante de la charge de travail en laboratoires d'analyses de microbiologie clinique. Les organismes fréquemment rencontrés dans les cas

d'infections urinaires sont les Escherichia coli, les entérocoques, le groupe KES (Klebsiella-Enterobacter-Serratia) et le groupe Proteus-Morganella-Providencia. Staphylococcus saprophyticus et Streptococcus agalactiae peuvent également être isolés chez la femme, bien que moins fréquemment. Du fait des différents profils de susceptibilité aux antibiotiques des micro-organismes, une identification de l'espèce s’avère être nécessaire pour assurer l'efficacité du traitement antimicrobien(1). Le laboratoire doit dénombrer les cultures microbiennes afin de déterminer la pertinence clinique de la souche isolée. UriSelect™4 est un milieu chromogène non sélectif pour la différenciation et le dénombrement de tous les micro-organismes urinaires : L’identification directe par la mise en évidence d'activités enzymatiques des bactéries les plus souvent isolées dans

les infections urinaires (Escherichia coli, Proteus mirabilis et les entérocoques); L’identification présomptive de quelques autres agents pathogènes urinaires, notamment les entérobactéries du

groupe KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia and Citrobacter) et du groupe PMP (Proteus-Morganella-Providencia). 3. PRINCIPE DU TEST UriSelect™4 est constitué d’une base nutritive riche associant différentes peptones, du tryptophane et un mélange de substrats chromogènes pour la détection des activités enzymatiques spécifiques permettant la différenciation de certaines espèces ou de certains groupes d'organismes, tout en limitant le nombre de tests de confirmation. La concentration élevée en agar évite l’envahissement de la gélose par les Proteus. Détection de diverses activités enzymatiques : Examen direct Après 18 à 24 heures d’incubation à 35-37°C, observer la couleur des colonies :

o ß-galactosidase : Colonies roses, o ß-glucosidase : Colonies bleu-turquoise, o ß-galactosidase et ß-glucosidase : Colonies bleu-violet, o Tryptophane désaminase (TDA) : Colonies brun-orangé avec un halo brunâtre.

Après ajout de réactif Pour détecter l'activité tryptophanase (production d'indole), déposer une goutte de réactif de Kovac’s (ou de James ou DMACA) directement sur une colonie bien isolée (voir section 7. Procédure) :

Test Indole Réaction positive Réaction négative

Réactif de Kovac’s Le réactif devient rose en moins de 15 secondes

Pas de changement de coloration

Réactif de James La colonie devient rouge en moins de 15 secondes

Réactif DMACA La colonie devient bleu-violet en moins de 2 minutes

4. RÉACTIFS 4.1. DESCRIPTION UriSelect™4 (URI4) est disponible en trois conditionnements :

Identification sur l'étiquette Description Présentation / Préparation

UriSelect™4

63726 Boîtes de Petri 20 x 90 mm / Prêt à l'emploi

63727 Boîtes de Petri 100 x 90 mm / Prêt à l'emploi

64694 Flacon de 500 g 500 g / Déshydraté

3 [FR]

Formulation approximative du milieu (g/L) Mélange de peptones 21 Silice 20 Mélange de substrats chromogènes <1 Tryptophane 1 Agar 16 4.2. STOCKAGE ET CONDITIONS DE MANIPULATIONS Les réactifs peuvent être utilisés jusqu'à la date de péremption indiquée sur l'emballage.

Présentation Conservation

Petri +2-8°C, à l'abri de la lumière

Déshydraté +15-25°C, flacon soigneusement fermé dans un endroit sec

La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur l'emballage. Éviter l'exposition à la lumière avant et pendant l'incubation car la lumière peut diminuer les performances du milieu. 5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION Pour le diagnostic in vitro uniquement. À usage professionnel uniquement. 5.1. CONSIGNES D’HYGIENE ET DE SÉCURITÉ La manipulation de ce milieu est strictement réservée à un personnel qualifié, formé aux procédures de laboratoire et

connaissant les risques potentiels. Porter des vêtements de protection adaptés, des gants et des lunettes/un masque une protection oculaire/faciale et procéder de manière appropriée en appliquant les bonnes pratiques de laboratoire.

Respecter la technique d'aseptisation et les précautions d'usage contre les risques microbiologiques durant toutes les procédures.

Éliminer tous les échantillons et le matériel utilisé pour réaliser le test comme des déchets infectieux. Les déchets de laboratoire, chimiques ou biologiques dangereux doivent être manipulés et éliminés conformément à toutes les réglementations locales, régionales et nationales applicables.

Pour connaître les recommandations liées aux risques et les précautions relatives à certains produits chimiques contenus dans ce milieu, consulter le(s) pictogramme(s) figurant sur les étiquettes et les informations fournies à la fin des instructions d'utilisation. La fiche de données de sécurité (FDS) est disponible sur www.bio-rad.com.

Contient <0,25 % de N,N-Diméthylformamide (DMF) : Toxique pour la reproduction 1B DANGER

5.2. PRÉCAUTIONS RELATIVES À LA PROCÉDURE 5.2.1. PRÉPARATION Avant l'utilisation, laisser les boîtes de Petri se stabiliser à température ambiante (18-30°C). Ne pas utiliser de réactifs périmés. Ne pas utiliser les boîtes de Petri qui présenteraient des signes de contamination, dessèchement, fissures ou tout autre

signe de détérioration. L'exposition prolongée de l’UriSelect™4 à la lumière peut retarder et/ou réduire la coloration des souches de contrôle

qualité ou des souches isolées d’échantillons de patients. 5.2.2. EXECUTION Effectuer le test à température ambiante (entre 18 et 30°C). Ne pas modifier la procédure d'analyse. 6. ÉCHANTILLONS Le recueil approprié des échantillons d’urine a une influence importante sur la pertinence des résultats de culture. Se reporter aux directives ou normes correspondantes pour de plus amples informations sur les procédures de prélèvement et de manipulation des échantillons(2).

4 [FR]

7. PROCÉDURE 7.1. EQUIPEMENT FOURNI UriSelect™4

7.2. EQUIPEMENT REQUIS NON FOURNI Oses calibrées de 10 μL Réactif de test Indole : Réactif de Kovac’s, James ou DMACA Etuve à 35-37°C Récipients pour élimination des déchets (contaminés) Disques de papier Équipement optionnel non fourni : souches bactériennes de contrôle qualité

7.3. PRÉPARATION DES RÉACTIFS (SI APPLICABLE) Préparation à partir du milieu déshydraté (64694) : Bien homogénéiser la poudre avant utilisation. Mettre en suspension 56,8 g dans un litre d'eau distillée en mélangeant continuellement jusqu'à l'obtention d'une suspension homogène (environ 10 min.). Porter à ébullition en remuant fréquemment jusqu'à dissolution complète. Si nécessaire, ajuster le pH à 7,3. Stériliser à l’autoclave à 120°C pendant 15 min. Répartir en boîtes de Petri 90 mm (environ 18-22 mL/boîte).

7.4. PROCÉDURE DE TEST 1) Utiliser une öse bactériologique calibrées de 10 µL. 2) Tenir l'öse verticalement et l’immerger dans l'urine. 3) Décharger l'öse sur la gélose en réalisant une strie sur un rayon de la boîte (a). 4) A partir du haut du dépôt, sans recharger l'öse, effectuer un étalement en stries serrées sur toute la surface de la

gélose, perpendiculairement au tracé de la strie initiale (b). 5) Incuber la boîte dans une étuve à 35-37°C pendant 18 à 24 heures.

7.5. CONTRÔLE DE QUALITÉ Un contrôle de qualité doit être réalisé selon les recommandations locales, nationales ou législatives en vigueur, les exigences de certification et les procédures standardisées de contrôle qualité de votre laboratoire. Les performances culturales du milieu UriSelect™4 peuvent être contrôlées à l'aide des souches suivantes (résultats obtenus après 18 à 24 heures d'incubation à 35-37°C) :

SOUCHES COULEUR DES COLONIES sur UriSelect™4

CARACTÉRISTIQUES

ß-GALACTOSIDASE ß-GLUCOSIDASE INDOLE TDA

Escherichia coli ATCC 25922

ROSE + - + -

Enterococcus faecalis ATCC 29212

BLEU TURQUOISE - + - -

Klebsiella pneumoniae ATCC 13883

BLEU-VIOLET + + - -

Proteus mirabilis ATCC 25933

BRUN-ORANGÉ avec un halo brunâtre - - - +

Providencia stuartii ATCC 33672

BRUN-ORANGÉ avec un halo brunâtre - - + +

Staphylococcus aureus ATCC 25923

BLANC - - - -

7.6. INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS 7.6.1. NUMÉRATION Après 18 à 24 heures d’incubation à 35-37°C, l'interprétation des résultats doit être réalisée en tenant compte du contexte clinique du patient, du mode de prélèvement de l’échantillon, des symptômes cliniques, du taux de leucocytes dans l'urine, de l'identification des micro-organismes et de leur concentration. Le dénombrement des colonies bien isolées sur UriSelect™4 devrait être possible jusqu'à 104 UFC/mL d'urine. Au-delà, la présence de colonies confluentes ne permet plus de dénombrer.

(a) Dépôt de l'öse et strie initiale

(b) Ensemencement de l’urine par stries serrées sur la gélose

5 [FR]

7.6.2. IDENTIFICATION Identifier le(s) micro-organisme(s) en fonction de la couleur des colonies, comme décrit dans le diagramme suivant :

COLONIES ROSES Activité ß-galactosidase : il y a présomption d’un E.coli, qui doit être confirmée par recherche de la production d’indole. Déposer une goutte de réactif de test indole sur 1 colonie rose bien isolée et interpréter comme détaillé au paragraphe 3. Pour les cultures polymicrobiennes, déposer 1 à 3 colonies morphologiquement homogènes sur un disque de papier. Ajouter une goutte de réactif de test indole, et poursuivre l'interprétation. La production d'indole confirme que le micro-organisme est bien E.coli (toutefois, il est à noter qu’une faible proportion de souches d’E. coli présente un caractère indole Θ). En l'absence de production d'indole, identifier le micro-organisme en utilisant une méthode conventionnelle. Plus de 99% des souches d’E.coli ont une activité ß-galactosidase. Une faible proportion d'autres micro-organismes produisent une ß-galactosidase et peuvent apparaître de couleur rose sur UriSelect™4. Il s’agit de micro-organismes rarement isolés au cours des infections urinaires (Salmonella, Shigella) ou de micro-organismes pouvant être rencontrés dans les infections urinaires mais qui ont un caractère indole Θ (Citrobacter freundii), ou encore qui produisent des colonies de plus petite taille (S. saprophyticus). COLONIES BLEU TURQUOISE Activité ß-glucosidase : les petites colonies intensément colorées en bleu turquoise (0,5 à 1,5 mm de diamètre), déterminées comme des cocci Gram lors de l’examen microscopique sont des entérocoques. S’il manque l'une de ces caractéristiques, identifier le micro-organisme par une méthode conventionnelle. Parmi les streptocoques, seuls les entérocoques expriment leur ß-glucosidase en produisant des colonies bleu turquoise intensément colorées. Ainsi, toutes colonies de cocci qui présenteraient un bleu très pâle, ne devront pas être assimilées à des entérocoques, elles devront être identifiées par une méthode conventionnelle (elles peuvent appartenir aux streptocoques du groupe A ou B).

6 [FR]

COLONIES BLEU-VIOLET La double expression des activités ß-galactosidase et ß-glucosidase forment des colonies bleu-violet. Les grosses colonies (2,0 à 3,0 mm de diamètre), déterminées comme des bacilles Gram Θ indiquent un micro-organisme appartenant probablement au groupe KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia ou Citrobacter). Identifier le micro-organisme par une méthode conventionnelle. Généralement, les bactéries appartenant au groupe KESC possèdent la double activité ß-galactosidase et ß-glucosidase, formant donc des colonies bleu-violet. Cependant, certaines souches de ce groupe peuvent présenter une activité de ß-galactosidase faible : les colonies présentent alors une couleur intermédiaire entre le bleu-violet et le bleu-turquoise. Citrobacter diversus forme des colonies bleu-violet mais avec un caractère indole . COLONIES BRUN-ORANGÉ (avec un halo brunâtre) L'activité tryptophane désaminase (TDA) présume un micro-organisme appartenant au groupe PMP (Proteus-Providencia-Morganella). La réalisation d’un test de production d'indole permet de différencier l’espèce Proteus mirabilis du reste du groupe. Déposer 1 goutte d'un réactif de test indole directement sur une colonie brun-orangé présentant un halo brunâtre, bien isolée, comme décrit au paragraphe 3 « Principe du test ». Pour les cultures polymicrobiennes : déposer 1 à 3 colonies morphologiquement homogènes sur un disque de papier buvard. Ajouter ensuite 1 goutte de réactif de test indole et effectuer l'interprétation de production d'indole. La production d'indole indique la présence d’une souche du genre Proteus spp (autre que P. mirabilis), Providencia spp. ou Morganella spp. L'identification du micro-organisme doit être effectuée par méthode conventionnelle. L'absence de production d'indole permet d'identifier le micro-organisme comme Proteus mirabilis (Proteus penneri, qui est rare, est également indole Θ et présente une activité TDA ). Certaines bactéries Proteus vulgaris et Providencia rettgeri présentent une activité ß-glucosidase, ils produisent des colonies bleu-vert ou vertes avec un halo brunâtre. Elles sont identifiées par un test indole . Colonies BLANCHES, D'UNE AUTRE COULEUR ou INCOLORES Identifier le micro-organisme par méthode conventionnelle. 7.6.3. Remarques

i. Les tests de catalase, d'oxidase et d'agglutination au latex peuvent être réalisés directement sur des colonies isolées sur UriSelect™4.

ii. Les méthodes d'identification conventionnelles et antibiogrammes peuvent être réalisés directement à partir de colonies prélevées sur UriSelect™4.

iii. Lors de la reconstitution du milieu déshydraté, certains grains peuvent parfois ne pas se dissoudre. Leur présence n'affecte pas les performances culturales du milieu.

8. LIMITATIONS DU TEST

Un faible pourcentage de souches de staphylocoques peut ne pas se développer en 24 heures sur UriSelect™4.

Un faible pourcentage de souches de levure peut ne pas se développer sur UriSelect™4.

S’il est estimé que la concentration de micro-organismes est supérieure à 107 UFC/mL et afin d'obtenir des colonies bien isolées, il est recommandé d'inoculer successivement deux boîtes UriSelect™4 sans recharger l'öse ou de diluer l'échantillon d'urine avant l'inoculation.

Concernant l’UriSelect™4 préparé à partir du milieu déshydraté : pour une incubation des boîtes au-delà de 24 heures, un reflet bleuâtre brillant peut apparaître sur quelques souches de Staphylococcus aureus.

9. VALEURS ATTENDUES Les infections urinaires figurent parmi les infections bactériennes les plus courantes. Elles constituent également les infections nosocomiales les plus fréquemment rencontrées dans les hôpitaux, représentant 35% des infections nosocomiales, et elles constituent la deuxième cause la plus courante de bactériémie chez les patients hospitalisés.(2,3) Dans de nombreux laboratoires cliniques, les tests urinaires par culture constituent les tests culturaux les plus fréquents, représentant 24 à 40% des cultures demandées dont 80% proviennent de patients en consultation externe. Les espèces bactériennes isolées sont variables en fonction de facteurs tels qu'un séjour antérieur à l'hôpital et/ou les pathologies associées (voir tableau). Au cours de l'évaluation clinique externe du milieu UriSelect™4, la prévalence des infections urinaires détectées par méthodes conventionnelles et milieux chromogènes était de 75,8% (589/777). Parmi les bactéries isolées, une majorité de souches E.coli a été rencontrée (43,3% (351/811)), suivie de souches Enterococcus faecalis à hauteur de 19,2% (156/811).

7 [FR]

IU communautaires IU en milieu hospitalier

Escherichia coli (80 %) Proteus mirabilis Klebsiella – Enterobacter – Serratia Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis Bactéries rares Oligella urethralis Aerococcus urinae Corynebacterium urealyticum Lactobacillus spp.

Escherichia coli (50 %) Pseudomonas aeruginosa Enterobacteriaceae Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus Acinetobacter spp Levures *Particulièrement chez les patients ayant une sonde à demeure ou après un sondage urinaire

10. PERFORMANCES DU TEST 10.1. ÉTUDE DE REPRODUCTIBILITÉ Un panel de neuf souches a été testé en duplicat par deux opérateurs. Les performances culturales (croissance et coloration de colonies) ont été testées sur trois lots distincts d'UriSelect™4. Tous les résultats étaient conformes à ceux attendus. 10.2. PERFORMANCES CLINIQUES Une étude clinique prospective (10) a été conduite sur 777 échantillons d'urine, incluant des urines prélevées en milieu de jet et des échantillons de sondes : 405 échantillons d'urine (52,1%) provenaient de patients hospitalisés et 372 (47,9%) avaient été adressés par des médecins généralistes. Ils ont été sélectionnés sur la présence de micro-organismes ou si l'examen microscopique de routine avait révélé un taux de leucocytes >200/mm3. 1 µL de chaque échantillon a été inoculé en duplicat, par méthode semi-quantitative, sur les milieux UriSelect™4 et CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient). La lecture et l'interprétation des résultats ont été réalisées suivant les instructions du fabricant. Toutes les souches bactériennes qui présentaient une croissance significative (≥50 colonies) ont été étudiées en fonction de leur morphologie et de la couleur de la colonie, puis identifiées par méthodes biochimiques. Sur les 777 échantillons, 589 échantillons d'urine ont révélé une croissance significative pour au moins une souche (échantillons positifs). Au total, 811 souches ont été isolées sur au moins un des deux milieux. Cette étude a permis d'obtenir les résultats suivants : Performances générales

CLED

Positif Négatif Total % Concordance générale

95% IC

UriSelect™4

Positif 733 64 797

91,6 % [89,5 % - 93,4 %]

Négatif 4 10 14

Total 737 74 811

10.3. SPECIFICITE Cette étude a démontré l'utilité du milieu UriSelect™4 pour l'identification présomptive des germes pathogènes urinaires les plus fréquemment isolés, par une meilleure différenciation des cultures polymicrobiennes.

Espèce ou groupe Identification présomptive Sensibilité de

détection Spécificité

de coloration Escherichia coli Colonies rouges/roses

Colonies rouges/roses, indole 97,1 % 97, 1%

98 %

100 %

Groupe des entérocoques Petites colonies bleu turquoise 100 % 100 %

Groupe PMP Colonies brun-orange 82,4 % 100 %

Groupe KESC Colonies bleu-violet 100 % 92 %

S. saprophyticus Petites colonies roses 100 % 88,9 %

8 [FR]

Ces données démontrent que le milieu UriSelect™4 permet :

1) l'identification directe : D'Escherichia coli avec une spécificité élevé (98%). Les autres souches ont formé des colonies de couleur blanche, du

fait de l'absence d'activité ß-galactosidase. La réalisation d'un test d'indole a toutefois permis d’atteindre 100% de spécificité pour E. coli (différenciation entre E.coli et Citrobacter freundii).

Tous les entérocoques (100%) ont formé de petites colonies bleu-turquoise, faciles à distinguer des staphylocoques (qui génèrent également de petites colonies d'autres colorations bien distinctes).

Tous les Proteae génèrent une coloration brune diffuse dans la gélose (100%). Un test Indole négatif s'est également avéré utile pour l'identification spécifique de P. mirabilis.

2) l'identification présomptive de : Toutes les entérobactéries du groupe KESC (100%) ont généré des colonies bleu-violet. Tous les S. saprophyticus ont présenté une bonne croissance sur UriSelect™4 (100%), formant de petites colonies

roses faciles à différencier des autres souches de staphylocoques, qui forment des colonies blanches. Seule une souche de Staphylococcus simulans a présenté une couleur similaire, diminuant ainsi la spécificité de l'identification de S. saprophyticus à 88,9%.

10.4. SENSIBILITE La sensibilité de détection des micro-organismes sur les milieux UriSelect™4 et CLED a été évaluée sur 589 échantillons d'urine positifs (croissance significative ≥ 50 colonies). Les résultats sont présentés ci-dessous. Les limites du test (Section 8) doivent être prises en compte.

Total des Micro-organismes / Milieux d'isolement

Total des souches

CLED UriSelect™4

Total des souches détectées (1) 811 obtenues à partir d'un autre

milieu

737 (90,9 %) 797 (98,3%)

Total des souches non détectées - 74 (9,1%) 14 (1,7%) Acinetobacter spp 8 8 8 Aerococcus viridans 1 1 1 Candida spp 6 5 6 Citrobacter diversus 6 6 6 Citrobacter freundii 11 9 10 Enterobacter aerogenes 5 3 5 Enterobacter cloacae 14 14 13 Enterococcus faecalis (2) 156 119 155 Enterococcus faecium 22 20 21 Escherichia coli (3) 351 344 347 Klebsiella oxytoca 24 21 24 Klebsiella pneumoniae 68 61 68 Morganella morganii 12 9 12 Proteus mirabilis 54 49 53 Proteus penneri 1 0 1 Proteus vulgaris 1 1 1 Providencia stuartii 1 1 1 Pseudomonas aeruginosa 20 17 19 Serratia spp 5 5 5 Staphylococcus aureus 8 8 8 Staphylococcus epidermidis (4) 10 10 7 Staphylococcus saprophyticus 8 8 8 Autres staphylococci à coagulase négative 9 8 8 Stenotrophomonas maltophilia 2 2 2 Streptococcus agalactiae 8 8 8

(1) La sensibilité du milieu UriSelect™4 était de 98,3%, alors que sur milieu CLED seules 90,9% des souches ont été détectées. Les faibles résultats obtenus sur CLED s'expliquent essentiellement par la difficulté à différencier plusieurs souches dans des cultures polymicrobiennes. La distribution des espèces isolées s’est caractérisée par une majorité de souches d'entérobactéries dont une forte proportion d’E.coli (43%). (2) Il a été remarqué que cet écart, le plus important entre les souches isolées sur UriSelect™4 et les autres milieux, est dûe à la détection d'entérocoques. L’UriSelect™4 a favorisé la croissance de 30,3% supplémentaires de ces souches d'entérocoques. Sur le milieu, les petites colonies d'une couleur bleu-turquoise étaient faciles à distinguer au sein d’une culture polymicrobienne, alors qu'elles étaient le plus souvent masquées sur le milieu CLED, par de plus grosses colonies de souches Gram Θ. (3) Les souches E. coli non identifiées étaient β-galactosidase négative et formaient des colonies blanches.

9 [FR]

(4) Trois souches de Staphylococcus epidermidis n'ont pas été détectées sur UriSelect™4. En revanche, toutes les souches de S. saprophyticus et S. aureus se sont bien développées. UriSelect™4 s'est avéré pertinent pour la détection de S. saprophyticus qui forme de petites colonies roses (les autres staphylocoques produisent des colonies blanches, à l'exception d'une souche de S. simulans). Comme indiqué précédemment, les faibles performances du milieu CLED pour la détection des souches en mélange polymicrobien ont été relevées : seules 131 souches (78%) ont été détectées dans les 168 échantillons d'urine (28,5%) contenant un mélange d'au moins 2 souches, alors que 166 souches (99%) ont été détectées sur UriSelect™4. De plus, sur 51 échantillons contenant au moins 3 souches distinctes, le CLED n’a permis de détecter les 3 souches que dans 22 échantillons (43%), tandis que les 3 types de colonies ont pu aisément être distingués sur UriSelect™4 dans 47 échantillons (92%).

Nombre d'échantillons d’urine positifs

CLED UriSelect™4

Nombre de souches isolées

1 453 418

2 109 119

3 22 (43%) 47 (92%)

Cultures polymicrobiennes

131 (78%) 166 (99%) 10.5. ÉTUDE DE SENSIBILITÉ Pour déterminer la sensibilité du milieu UriSelect™4, un panel de souches pathogènes urinaires les plus fréquemment rencontrés - E.coli, Enterococcus, P. mirabilis, S. aureus et K. pneumoniae - a été testé à différentes dilutions. Pour chaque souche, une suspension à 0,5 Mc Farland a été préparée. Des dilutions en séries au 10ème ont été réalisées en solution saline et inoculées sur UriSelect™4. Les boîtes ont été incubées à 35-37°C à l'air ambiant et lues après 18 à 24 heures. La coloration et la densité des colonies ont été relevées. Les données ont démontré qu’une concentration minimale de 103 CFU/mL permet de détecter la majorité des germes pathogènes sur UriSelect™4. 10.6. DÉNOMBREMENT Un panel de souches pathogènes urinaires les plus fréquemment isolées a été testé aux différentes concentrations de 103 à 107 CFU/mL d'urine, de sorte à couvrir la gamme de concentrations habituellement retrouvées en tests de routine. Pour chaque souche testée, une suspension a été préparée à 0,5 Mc Farland. Des dilutions en séries au 10ème en solution saline ont été réalisées et inoculées en 10 réplicats sur UriSelect™4. Les boîtes ont été incubées à 35-37°C à l'air ambiant et lues après 18 à 24 heures. La couleur et le nombre de colonies ont été relevés : le dénombrement de colonies isolées a pu être effectué jusqu'à la concentration de 104 CFU/mL d'urine. Au-delà de cette concentration, la présence de colonies confluentes ne permet plus d‘effectuer un dénombrement.

10 [FR]

11. BIBLIOGRAPHIES

1 Isenberg, H.D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology. Washington, D.C.

2 Miller JM, HT Holmes, K Krisher 2003. General principles of specimen collection and handling. Clinical Microbiology procedures handbook, ASM Washington DC.

3 NCCLS. Quality controls for commercially prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard – Third Edition. NCCLS document M22-A3 (ISBN 1-5638-536-4). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, January 2012.

4 Stamm WE. Scientific and clinical challenges in the management of urinary tract infections. Am J Med 2002;113:1-4.

5 Weinstein MP, Towns ML, Quartey SM, et al. The clinical significance of positive blood cultures in the 1990s: a prospective comprehensive evaluation of the microbiology, epidemiology, and outcome of bacteremia and fungemia in adults. Clin Infect Dis 1997;24:584-602.

6 Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA.

7 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.

8 Basic Laboratory Procedures Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva. 1991. 1st edition.

9 Procedures/Guidelines for the Microbiology Laboratory, College of Physicians & Surgeons of Saskatchewan. Laboratory Quality Assurance Program, January 2010.

10 J D Perry, L A Butterworth, A Nicholson, M R Appleby, K E Orr. Evaluation of a new chromogenic medium, UriSelect4, for the isolation and identification of urinary tract pathogens. J Clin Pathol 2003; 56:528–53.

11 Ferjani A, Marzouk M, Idriss N, Sammoud S, Hannachi N, Boukadida J. Evaluation du milieu chromogène UriSelect4 au cours des urocultures. Biol Clin 2011; 69 (5):541 doi:10.1684/abs.2011.0615.

12 Kornherr et al. Comparison of Three Chromogenic and Two Standard Urine Culture Media for Detection of Urinary Tract pathogens. Department of Microbiology, Gamma-Dynacare Medical Laboratories Ottawa and Toronto, Ontario Canada. Poster ASM 2011.

13 E. Thomas, S. Anderson, L. Dawson, C. Barth, K. Manickam, Regina Qu’Appelle Health Region, Regina SK Canada. The use of UriSelect4 chromogenic media for the detection of urinary tract pathogens. Poster 2005.

14 James A.L., Yeoman P., Detection of specific bacterial enzymes by high cont rast metal chelate formation. Part I. 8-Hydroxyquinoline- ß-D-Glucoside, an altenative to aesculin in the differentiation of members of the family Enterobacteriaceae-Zbl. Bakt. hyg. A267. 188-193 (1987).

15 Clarridge J.E., Pezzlo M.T., Vosti K.L., Cumitech 2A. Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed. Weissfeld A.S., American Society for Microbiology, Washington, D.C.

16 Manafi M., Kneifel W., Fluorogenic and chromogenic substrates - a promising tool in microbiology, Acta Microbiologica Hungarica. 38 (3-4). pp 293-304 (1991).

11 [FR]

12 [FR]

13 [FR]

14 [FR]

15 [FR]

Les boîtes doivent être conservées à l'abri de la lumière.

Certificats d'analyse disponibles sur http://www.bio-rad.com/certificate Distribué aux États-Unis par : Bio-Rad Laboratories 6565 185th Ave NE, Redmond, WA 98052, U.S.A.

For US Customer orders and Technical Service Call: 1 (-800) -2 47 1 -800 -224 -6723

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette - France Tél. : +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/11 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 882044 www.bio-rad.com