Thèse - um c
Transcript of Thèse - um c
REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTERE DE
LrsquoENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA
RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE DES FRERES MENTOURI CONSTANTINE 1
Faculteacute des Sciences de la Nature et de la Vie
Deacutepartement de Biologie et Ecologie Veacutegeacutetale
Ndeg drsquoordre 15DS2018
Ndeg de seacuterie 01BIO2018
Thegravese
En vue de lrsquoobtention du diplocircme de Doctorat en Sciences
Option
Biotechnologie Veacutegeacutetale
Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes
biologiques de Cleome arabica
Soutenue publiquement
Par
MADI AICHA
Devant le jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA AABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NAJDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Anneacutee universitaire 2017 2018
I
Remerciements
Je tiens tout drsquoabord agrave exprimer mes vifs remerciements et ma reconnaissance agrave Mr BELKHIRI
ABDELMALIK Professeur agrave lrsquouniversiteacute 3 de Constantine qui ma honoreacute en acceptant de diriger ce
travail avec une grande rigueur scientifique La qualiteacute de ses conseils et son soutien mont permis de
reacutealiser la preacutesente eacutetude dans les meilleures conditions
Ma gratitude et mes sincegraveres remerciements agrave mon maitre Mr KHELIFI DOUADI Professeur agrave
lUniversiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1 drsquoecirctre toujours disponible par ses conseils importants
et par ses aides preacutecieuses depuis le magistegravere et drsquoavoir accepteacute la preacutesidence du jury de cette thegravese
qursquoil trouve ici mes expressions de reconnaissance les plus sincegraveres et profondes
Je souhaite eacutegalement remercier Professeur AKKAL SALAH Professeur YAHIA ABDELOUAHAB
et Professeur ZELLAGUI AMAR davoir aimablement accepteacute de faire partie du jury et drsquoexaminer
cette thegravese
Un grand merci agrave Madame MOUAS TOUMA NARDJES Maitre de Confeacuterence agrave lrsquoUniversiteacute des
Fregraveres Mentouri Constantine1 pour lrsquohonneur qursquoelle me fait en acceptant drsquoexaminer ce travail
Ma vive reconnaissance et gratitude agrave Madame DR MARIA TERESA DR MONTSERRAT et DR
JULIAN C RIVAS GONZALO de mrsquoavoir accueillis dans leur laboratoire
Je nrsquooublie pas de remercier tous les chercheurs et le directeur du laboratoire de Pharmacologie et
Toxicologie institut des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des Fregraveres Mentouri Constantine 1
II
Deacutedicace
Ma gratitude et ma vive reconnaissance agrave mes parents que dieu protegravege pour
leurs soutiens preacutesences et encouragements durant toutes les longues anneacutees drsquoeacutetude
Merci drsquoecirctre toujours agrave mes coteacutes ce qui mrsquoa permis de surmonter beaucoup
drsquoobstacles dans ma vie professionnelle et personnelle
Un grand amour pour toi mon ange MED IYAD que Dieu te protegravege pour moi ta
preacutesence dans ma vie mrsquoa donneacute beaucoup de bonheur courage et volonteacute je trsquoaime mon
fils
Un grand merci agrave mes fregraveres Med amine amp Med cherif mes sœurs Zahra
Meriem amp Samssouma mes belles sœurs Rokia amp Nesrine sans oublier mon cher
ISLEM et toute ma famille pour leurs gentillesses et soutiens
Un grand merci plein drsquoamour srsquoadresse eacutegalement agrave toutes mes chegraveres amies
pour leurs soutiens encouragements et amours sans oublier mes collegravegues
Je voudrais en fin exprimer ma sincegravere reconnaissance envers toutes les
personnes qui mrsquoont aideacute de preacutes ou de loin tout au long de cette peacuteriode pour leurs
aides preacutecieuses encouragements et sympathies
III
Sommaire
Remerciements helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipI
DeacutedicacehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipII
Liste des tableaux helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVI
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVII
Liste des abreacuteviations helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipIX
Introduction helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
Partie Revue bibliographique
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
1- Descriptionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
2- Classification systeacutematiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
3- Usage ethnobotanique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-1 Constituants chimiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
1- Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
2- 1 Acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
2- 2 Flavonoiumldeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
2- 3 Taninshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecircthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21
5- 1 Activite antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip21
5- 2 Polypheacutenols et cancerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaireshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
5- 4 Polypheacutenols et inflammationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip28
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
IV
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydanthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip35
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaieshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-1 Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip41
Partie Mateacuteriel amp Meacutethodes
I- Mateacuteriel veacutegeacutetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
II- Meacutethodeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcooliquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
2- Meacutethode drsquoextractionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
3- Screening et reacuteactions chimiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip45
4- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip47
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip48
Chapitre 2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
1- Activiteacutes antioxydantes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 1 Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip57
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip60
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip61
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapinhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip64
Analyse statistiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip65
Partie Reacutesultats amp Discussion
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
2- Screening phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
3- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip67
4- Analyse HPLCDADMShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip70
5- Activiteacutes antioxydanteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
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O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
40
B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
eacutevaluer le potentiel toxique ou non de Carabica
Reacutefeacuterences bibliographiques
120
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
I
Remerciements
Je tiens tout drsquoabord agrave exprimer mes vifs remerciements et ma reconnaissance agrave Mr BELKHIRI
ABDELMALIK Professeur agrave lrsquouniversiteacute 3 de Constantine qui ma honoreacute en acceptant de diriger ce
travail avec une grande rigueur scientifique La qualiteacute de ses conseils et son soutien mont permis de
reacutealiser la preacutesente eacutetude dans les meilleures conditions
Ma gratitude et mes sincegraveres remerciements agrave mon maitre Mr KHELIFI DOUADI Professeur agrave
lUniversiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1 drsquoecirctre toujours disponible par ses conseils importants
et par ses aides preacutecieuses depuis le magistegravere et drsquoavoir accepteacute la preacutesidence du jury de cette thegravese
qursquoil trouve ici mes expressions de reconnaissance les plus sincegraveres et profondes
Je souhaite eacutegalement remercier Professeur AKKAL SALAH Professeur YAHIA ABDELOUAHAB
et Professeur ZELLAGUI AMAR davoir aimablement accepteacute de faire partie du jury et drsquoexaminer
cette thegravese
Un grand merci agrave Madame MOUAS TOUMA NARDJES Maitre de Confeacuterence agrave lrsquoUniversiteacute des
Fregraveres Mentouri Constantine1 pour lrsquohonneur qursquoelle me fait en acceptant drsquoexaminer ce travail
Ma vive reconnaissance et gratitude agrave Madame DR MARIA TERESA DR MONTSERRAT et DR
JULIAN C RIVAS GONZALO de mrsquoavoir accueillis dans leur laboratoire
Je nrsquooublie pas de remercier tous les chercheurs et le directeur du laboratoire de Pharmacologie et
Toxicologie institut des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des Fregraveres Mentouri Constantine 1
II
Deacutedicace
Ma gratitude et ma vive reconnaissance agrave mes parents que dieu protegravege pour
leurs soutiens preacutesences et encouragements durant toutes les longues anneacutees drsquoeacutetude
Merci drsquoecirctre toujours agrave mes coteacutes ce qui mrsquoa permis de surmonter beaucoup
drsquoobstacles dans ma vie professionnelle et personnelle
Un grand amour pour toi mon ange MED IYAD que Dieu te protegravege pour moi ta
preacutesence dans ma vie mrsquoa donneacute beaucoup de bonheur courage et volonteacute je trsquoaime mon
fils
Un grand merci agrave mes fregraveres Med amine amp Med cherif mes sœurs Zahra
Meriem amp Samssouma mes belles sœurs Rokia amp Nesrine sans oublier mon cher
ISLEM et toute ma famille pour leurs gentillesses et soutiens
Un grand merci plein drsquoamour srsquoadresse eacutegalement agrave toutes mes chegraveres amies
pour leurs soutiens encouragements et amours sans oublier mes collegravegues
Je voudrais en fin exprimer ma sincegravere reconnaissance envers toutes les
personnes qui mrsquoont aideacute de preacutes ou de loin tout au long de cette peacuteriode pour leurs
aides preacutecieuses encouragements et sympathies
III
Sommaire
Remerciements helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipI
DeacutedicacehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipII
Liste des tableaux helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVI
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVII
Liste des abreacuteviations helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipIX
Introduction helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
Partie Revue bibliographique
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
1- Descriptionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
2- Classification systeacutematiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
3- Usage ethnobotanique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-1 Constituants chimiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
1- Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
2- 1 Acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
2- 2 Flavonoiumldeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
2- 3 Taninshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecircthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21
5- 1 Activite antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip21
5- 2 Polypheacutenols et cancerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaireshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
5- 4 Polypheacutenols et inflammationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip28
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
IV
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydanthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip35
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaieshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-1 Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip41
Partie Mateacuteriel amp Meacutethodes
I- Mateacuteriel veacutegeacutetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
II- Meacutethodeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcooliquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
2- Meacutethode drsquoextractionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
3- Screening et reacuteactions chimiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip45
4- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip47
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip48
Chapitre 2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
1- Activiteacutes antioxydantes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 1 Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip57
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip60
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip61
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapinhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip64
Analyse statistiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip65
Partie Reacutesultats amp Discussion
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
2- Screening phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
3- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip67
4- Analyse HPLCDADMShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip70
5- Activiteacutes antioxydanteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
25
O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
40
B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
eacutevaluer le potentiel toxique ou non de Carabica
Reacutefeacuterences bibliographiques
120
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
II
Deacutedicace
Ma gratitude et ma vive reconnaissance agrave mes parents que dieu protegravege pour
leurs soutiens preacutesences et encouragements durant toutes les longues anneacutees drsquoeacutetude
Merci drsquoecirctre toujours agrave mes coteacutes ce qui mrsquoa permis de surmonter beaucoup
drsquoobstacles dans ma vie professionnelle et personnelle
Un grand amour pour toi mon ange MED IYAD que Dieu te protegravege pour moi ta
preacutesence dans ma vie mrsquoa donneacute beaucoup de bonheur courage et volonteacute je trsquoaime mon
fils
Un grand merci agrave mes fregraveres Med amine amp Med cherif mes sœurs Zahra
Meriem amp Samssouma mes belles sœurs Rokia amp Nesrine sans oublier mon cher
ISLEM et toute ma famille pour leurs gentillesses et soutiens
Un grand merci plein drsquoamour srsquoadresse eacutegalement agrave toutes mes chegraveres amies
pour leurs soutiens encouragements et amours sans oublier mes collegravegues
Je voudrais en fin exprimer ma sincegravere reconnaissance envers toutes les
personnes qui mrsquoont aideacute de preacutes ou de loin tout au long de cette peacuteriode pour leurs
aides preacutecieuses encouragements et sympathies
III
Sommaire
Remerciements helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipI
DeacutedicacehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipII
Liste des tableaux helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVI
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVII
Liste des abreacuteviations helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipIX
Introduction helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
Partie Revue bibliographique
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
1- Descriptionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
2- Classification systeacutematiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
3- Usage ethnobotanique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-1 Constituants chimiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
1- Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
2- 1 Acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
2- 2 Flavonoiumldeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
2- 3 Taninshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecircthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21
5- 1 Activite antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip21
5- 2 Polypheacutenols et cancerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaireshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
5- 4 Polypheacutenols et inflammationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip28
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
IV
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydanthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip35
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaieshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-1 Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip41
Partie Mateacuteriel amp Meacutethodes
I- Mateacuteriel veacutegeacutetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
II- Meacutethodeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcooliquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
2- Meacutethode drsquoextractionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
3- Screening et reacuteactions chimiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip45
4- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip47
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip48
Chapitre 2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
1- Activiteacutes antioxydantes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 1 Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip57
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip60
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip61
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapinhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip64
Analyse statistiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip65
Partie Reacutesultats amp Discussion
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
2- Screening phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
3- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip67
4- Analyse HPLCDADMShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip70
5- Activiteacutes antioxydanteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
25
O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
40
B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
eacutevaluer le potentiel toxique ou non de Carabica
Reacutefeacuterences bibliographiques
120
Reacutefeacuterences bibliographiques
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
III
Sommaire
Remerciements helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipI
DeacutedicacehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipII
Liste des tableaux helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVI
Liste des figureshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipVII
Liste des abreacuteviations helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipIX
Introduction helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip1
Partie Revue bibliographique
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
1- Descriptionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip3
2- Classification systeacutematiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip4
3- Usage ethnobotanique helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-1 Constituants chimiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip5
4-2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip8
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
1- Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip9
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip10
2- 1 Acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip11
2- 2 Flavonoiumldeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip13
2- 3 Taninshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip15
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenolshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip17
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip18
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecircthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip20
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21
5- 1 Activite antioxydantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip21
5- 2 Polypheacutenols et cancerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip26
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaireshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip27
5- 4 Polypheacutenols et inflammationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip28
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip29
IV
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydanthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip35
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaieshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-1 Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip41
Partie Mateacuteriel amp Meacutethodes
I- Mateacuteriel veacutegeacutetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
II- Meacutethodeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcooliquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
2- Meacutethode drsquoextractionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
3- Screening et reacuteactions chimiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip45
4- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip47
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip48
Chapitre 2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
1- Activiteacutes antioxydantes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 1 Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip57
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip60
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip61
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapinhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip64
Analyse statistiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip65
Partie Reacutesultats amp Discussion
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
2- Screening phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
3- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip67
4- Analyse HPLCDADMShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip70
5- Activiteacutes antioxydanteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
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3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
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4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
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5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
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- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
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O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
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Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
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6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
40
B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
eacutevaluer le potentiel toxique ou non de Carabica
Reacutefeacuterences bibliographiques
120
Reacutefeacuterences bibliographiques
Abdeldjelil MC (2016) Effets cicatrisants de produits agrave base drsquohuile de lentisque (Pistacia
lentiscus L) sur les brucirclures expeacuterimentales chez le rat These doctorat drsquoEtat en sciences
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
IV
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydanthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip31
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip33
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip35
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaieshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-1 Deacutefinitionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisationhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip36
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip41
Partie Mateacuteriel amp Meacutethodes
I- Mateacuteriel veacutegeacutetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
II- Meacutethodeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcooliquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
2- Meacutethode drsquoextractionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip44
3- Screening et reacuteactions chimiques helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip45
4- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip47
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip48
Chapitre 2 Activiteacutes biologiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
1- Activiteacutes antioxydantes helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip50
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 1 Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip54
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip57
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip60
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip61
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapinhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip64
Analyse statistiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip65
Partie Reacutesultats amp Discussion
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
2- Screening phytochimiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip66
3- Dosage spectrophotomeacutetriquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip67
4- Analyse HPLCDADMShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip70
5- Activiteacutes antioxydanteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
25
O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
40
B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
eacutevaluer le potentiel toxique ou non de Carabica
Reacutefeacuterences bibliographiques
120
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
V
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH) helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip79
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip81
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdatehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip82
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols et flavnoides vis-agrave-vis lrsquoactiviteacute antioxydantehelliphellip83
6- Toxiciteacute aiguehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6-1 Toxiciteacute par voie oralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip85
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip88
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip91
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip94
9- Activiteacute antalgiquehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-1 Test tail-flickhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip98
9-2 Test de la plaque chauffantehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip100
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip103
10- Effet cicatrisant de C arabicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10-1 Plaies de brucirclures thermiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip107
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcisionhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip111
Conclusion geacuteneacuteralehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip116
Reacutefeacuterences bibliographiqueshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip120
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
25
O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
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B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
VI
Liste des tableaux
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica 4
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome 5
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome 6
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome 8
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques 10
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes 14
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients 29
Tab 8 Tests antioxydants in vitro 32
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage 50
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute 60
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique 66
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica 66
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines 69
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica 72
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica 74
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica 77
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 80
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits 82
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate 83
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes 84
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 86
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage 87
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg 89
Tab 24 Gain du poids par lot 90
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures 91
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H 93
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration 94
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse 96
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 99
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 101
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait 103
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies 107
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques 108
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction 111
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision 111
VII
Liste des figures
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica 4
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs 11
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs 12
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes 13
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables 16
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes 16
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides 19
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+) 25
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation 37
Fig 10 Lors drsquoune blessure 37
Fig 11 Phase vasculaire 38
Fig 12 Phase inflammatoire 39
Fig 13 Phase de remodelage 41
Fig 14 La formule du DPPH 51
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol 51
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde 55
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP) 56
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina 58
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits 59
Fig 20 Les larves sous microscope 59
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux 68
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes 68
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm 71
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm 71
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm 73
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm 73
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm 76
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm 76
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH 80
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine 81
Fig 31 Evolution du poids corporel 87
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats 88
VIII
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux 89
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H 92
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures 92
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse 95
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse 95
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait 98
Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC 98
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick 100
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait 101
Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave 55degC 101
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante 102
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique 103
Fig 45 La crampe 103
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion 104
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques 109
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques 110
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin 112
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions 113
IX
Liste des abreacuteviations
degC Degreacute Celsius
Abs Absorbance
ABTS Acide 22-azino-bis (3-eacutethylbenzothiazoline-6-sulphonique)
ADN Acide deacutesoxyribonucleacuteique
ANOVA Analysis of variance
CCM Chromatographie couche mince
CL Concentration leacutetale
CRL Groupe control
DO Densiteacute optique
DPPH 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
EAG Equivalent drsquoacide gallique
EC50 Concentration effective agrave 50
ED Dose effective
EQ Equivalents de quercetine
ERO Espegraveces Reacuteactives de lOxygegravene
ETH Ethanolique
EXT Extrait
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
GC Chromatographie phase gazeuse
HPLC High performance liquid chromatography
HPLCDAD High-Performance Liquid Chromatography Diode-Array Detection
IASP International Association for the Study of Pain
IC50 Concentration inhibitrice agrave 50
LC-MS Chromatographie liquide ndash Spectromeacutetrie de masse
LDL Lipoproteacuteines de faible densiteacute
OMS Organisation Mondiale de la Santeacute
ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity
PC Poids Corporel
PBS Phosphate Buffer Saline
RL Radicaux libres
TEAC Trolox equivalent antioxidant capacity
TPTZ 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine
Tr Temps de reacutetentions
UV Ultra-violet
Introduction
1
Introduction
Actuellement un grand inteacuterecirct est porteacute agrave lrsquoutilisation traditionnelle des
plantes meacutedicinales dans le cadre des soins de santeacute Toutefois cette utilisation
demeure informelle en Algeacuterie pour deux raisons La premiegravere a trait agrave lrsquoabsence drsquoun
cadre juridico-reacuteglementaire encadrant utilisation des plantes meacutedicinales
traditionnelle et la phytotheacuterapie La seconde raison est lrsquoabsence drsquoeacuteleacutements
scientifiques validant lrsquoutilisation theacuterapeutique des plantes meacutedicinales
traditionnelles
Le thegraveme de recherche abordeacute est en relation avec le second aspect Lrsquoespegravece
deacutesertique Cleome arabica connue sous lrsquoappellation de laquo Natten raquo est couramment
utiliseacutee dans le traitement de linflammation et les douleurs abdominales et
rhumatismales et comme cicatrisant (Boulos 1983 Ahmad et al 1990 Tsichritzis
et al 1993 Baba Aissa 2011) Peu drsquoeacutetudes scientifiques ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur cette
espegravece seules les feuilles ont fait lrsquoobjet drsquoexploration ougrave la preacutesence de flavonoiumldes
agrave diverses geacutenines a eacuteteacute signaleacutee
Sur le volet pharmacologique des activiteacutes antioxydante anticanceacutereuse et insecticide
(El-Mougy et al 1991 Ladhari et al 2013 Tigrine et al 2013) ont eacuteteacute reporteacutees
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances chimiques et
pharmacologiques sur cette plante importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques
(pheacutenols totaux flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la
plante (feuilles graines et racines) compleacuteteacutee par une analyse
HPLCDADMS
- Evaluation in vivo etou in vitro des activiteacutes
biologiques (antioxydante analgeacutesique cicatrisante) et du potentiel
toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Le manuscrit est organiseacute en trois grandes parties
La premiegravere partie comprend 03 chapitres traitant de lrsquoeacutetat de connaissances
de la litteacuterature sur C arabica (phytochimie bio-activiteacutes usages traditionnels) des
Introduction
2
aspects biochimiques et structuraux des composeacutes pheacutenoliques ainsi que leurs
proprieacuteteacutes biologiques Cette partie est compleacuteteacutee par une description sommaire des
meacutethodes drsquoanalyses spectrophotomeacutetriques et chromatographiques utiliseacutees dans la
caracteacuterisation et le dosage de ce type de produits naturels ainsi qursquoune revue des
principales techniques expeacuterimentales utiliseacutees dans lrsquoeacutevaluation des activiteacutes
biologiques abordeacutees dans cette eacutetude
La deuxiegraveme partie deacutecrit le mateacuteriel et lrsquoensemble des meacutethodes utiliseacutees dans
la partie pratique de cette eacutetude
La troisiegraveme et derniegravere partie est consacreacutee aux reacutesultats obtenus leur
discussion et interpreacutetation
Une conclusion geacuteneacuterale suivie des reacutefeacuterences bibliographiques sont situeacutees en
fin du manuscrit
Revue bibliographique
3
Chapitre 1 Preacutesentation de la plante Cleome arabica
1- Description
La plante C arabica est une herbe verte briegravevement poilue glanduleuse
visqueuse et annuelle de 30 agrave 50 cm de hauteur agrave tiges dresseacutees et ramifieacutees feuilles
trifolioleacutees fruit allongeacute en silique souvrant par 2 valves graines revecirctues de poils
aussi longs que le diamegravetre de la graine (Ozenda 1991)
La fleur possegravede un calice agrave 4 seacutepales 4 peacutetales (brun pourpre ou jaunes
bordeacutes de brun-pourpre) 6 eacutetamines (ou 4 ovaires agrave 1 loge porteacutes par un pied court
ou nul) (podogyne) la capsule est de plus de 20 mm de long stipiteacutee siliquiforme agrave 2
valves se seacuteparant des placentas
Cette plante appartient agrave la famille des Capparidaceacutees son nom Cleacuteome vient
du grec kleio qui signifie entourer Localement Elle est deacutenommeacutee laquo Netten raquo et
laquo Netteina raquo en reacutefeacuterence agrave lrsquoodeur nauseacuteabonde que deacutegage la plante (Quezel amp
Santa 1963 Baba Aissa 2000)
Cette espegravece septentrionale pousse au Maghreb et dans les reacutegions
sahariennes commune dans la Hodna (Msila) et dans quelques reacutegions du Sahara
algeacuterien C arabica ozenda (Beniston 1984 Ozenda 1991 Tigrine 2013) Le
genre de Cleome contient environ 250 espegraveces (Wollenweber amp Dorr 1992)
La figure 1 preacutesente des images reacuteelles de lrsquoespegravece de cette eacutetude C arabica
Revue bibliographique
4
Fig 1 Cleome arabica ssp arabica
A Plante entiegravere B Partie aeacuterienne C Gousse D Graines
2- Classification systeacutematique
La classification de la plante preacutesenteacutee dans le tableau 1 est faite selon Quezel amp
santa (1963)
Tab 1 Classification systeacutematique de Cleome arabica
Regravegne Plantes
Sous regravegne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotyleacutedones
Sous classe Dialypeacutetales
Ordre Parieacutetales
Famille Capparidaceacutees
Genre Cleome
Espegravece Cleome arabica L
Sous espegravece Arabica
Revue bibliographique
5
3- Usage ethnobotanique
Le tableau 2 ci-dessus reacutecapitule toutes les utilisations traditionnelles de
diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome citeacutees dans plusieurs travaux
Tab 2 Usage ethnobotanique du genre Cleome
Utilisation traditionnelle du genre Cleome Reacutefeacuterence
Agent Seacutedatif analgeacutesique traitement
gastrique anticolique anti-grippe anti-
vomissement agent diureacutetique contre
les douleurs neacutevralgiques contre les
douleurs rhumatismales agent
hallucinogegravene anti-inflammation anti-
gale contre la fiegravevre rhumatismale
traitement des maladies du foie contre la
diarrheacutee cicatrisant
Unicer 2005 Burkill 1985
Djeridane et al 2010 Baba Aissa
2011 Tsichritzis et al 1993 Ahmad et
al 1990 Boulos 1983 Harraz et al
1995 Nagaya et al 1997
Parimaladevi2002 Narendhirakannan
2007 Farjam et al 2014 Parimaladevi
et al 2003 Asolkar et al 1981
Kirtikar amp Basu 1975
4- Travaux anteacuterieurs sur le genre Cleome
4-1 Constituants chimiques
La famille des capparidaceacutees est connue par sa richesse en meacutetabolites
secondaires
Divers groupes de ces meacutetabolites secondaires ont eacuteteacute identifieacutes dans la plante
Les triterpegravenes les anthraquinones les flavonoiumldes les saponines les steacuteroiumldes les
reacutesines les lectines les glycosides les tannins les alcaloiumldes et les autres composeacutes
pheacutenoliques ont eacuteteacute isoleacutes des diffeacuterentes espegraveces du genre Cleome
Le tableau 3 passe en revue les meacutetabolites isoleacutes dans divers espegraveces
Revue bibliographique
6
Tab 3 Travaux anteacuterieurs sur les composeacutes identifieacutes du genre Cleome
Espegravece Meacutetabolites Reacutefeacuterence
Cleome
paradoxa
Alcaloides paradoxonine
paradoxenoline
Diterpene acide paradoxenoique
Azza 2012
Cleome
paradoxa
Trierpegravenes et phytosteacuterols Alpha ndash
amyrin stigmasterol stigmasterol-3-O-
szlig-D-glucopyranoside
Flavonoides quercetin isoquercetrin
Abdel-Sattar et al
2009
Cleome iberica
DC
Terpanoides glutinol lupeol β-
sitosterol cabraleadiol monoacetate
cabraleadiol daucosterol
Flavonoides calycopterin
Farimani et al 2016
Cleome
amblyocarpa
Les flavones
54-Dihydroxy-3673-
tetramethoxyflavone 53-Dihydroxy-
36745-pentamethoxyflavone 5-
Hydroxy-367345
hexamethoxyflavona
Les flavonols
Kaempferol 37-diRhamnoside
Kaempferol 3-G-7-Rhamnoside
Kaempferol 3-Rha-7-Glycoside
Quercetine 7-Rhamnoside Quercetine
37-diRhamnoside Isorhamnetine 3-
Rutinoside Isorhamnetine 37
diRhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside
Sharaf et al 1997
Cleome
hassleriana
Anthocyanes cyanidine pelargonidine Jordheim et al 2009
Cleome viscosa
Cleomeiscoscins Diterpene cleomaldic
acid Glycoflavanones Lipoflavanones
Glucosinolates
Sharma et al 2012
Bawankule et al
2008 CSIR 2001
Chauhan 1979
Srivastava 1979
Songsak 2002
Cleome
monophylla L
Les huiles essentielles carvacrole 2-
dodecanone 1-a-terpineol 3-
undecanone 2-Dodecanone 1-a-
terpineol
Ndungu et al 1995
Bissinger amp Michael
Roe 2010
Revue bibliographique
7
Cleome
rutidosperma
Terpenes
Flavonoides (flavones)
Arya et al 2014
Cleome
gynandra
Composeacutes pheacutenoliques flavonoides
tannins galliques proanthocyanidines
saponines triterpenes anthroquinones
steroides alcaloides
Moyo et al 2013
Narendhirakannan et
al 2007
Cleome arabica Les flavonoides
Calycopterine Quercetine glucoside
Quercetine 37-diglucoside Kaempferol
3-G-7-Rhamnoside Quercetine 7-
Rhamnoside Apigenine 68-di-C-
Glycoside Kaempferol 37-
diRhamnoside Quercetine 3- G-7-
rhamnoside Keampferol 3rsquomethoxy- 37
diRhamnoside Keampferol 7-
Rhamnoside Isohamnetine
Les triterpenes
11-α-acetylbrachy-carpone-22(23)-ene
Amblyone 17- α ndashhydroxycabraleactone
Les steacuteroides
(17-(4-hydroxy-15-dimethylhexyl)-237-
(acetyloxy) gona-135(10)-trien-15-ol)
β-sitosterol
Cleomine
Touil amp Rhouati
1998
Selloum et al 2001
Selloum et al 2003
Khalafallah et al
2009
Djeridane et al
2010
Ladhari et al 2013
Intan SIsmail et al
2005
Cleome rosea Les anthocyanes
acylated cyanidins peonidins cyanidin
3-(pcoumaroyl) diglucoside-5-glucoside
cyanidin 3-(feruloyl) diglucoside-5-
glucoside
Simoes et al 2009
Cleome
brachycarpa
Flavonol glycoside Megastigmane
glucoside Flavonoids meacutethyleacutes
Sesquiterpenes
Afifi 2014
Cleome
droserifolia
Les triterpegravenes
Drosericarpone Buchariol Stigmasterol
glucoside
El-Askary 2005
Revue bibliographique
8
4-2 Activiteacutes biologiques
Plusieurs recherches scientifiques srsquointeacuteressaient agrave eacutetudier les proprieacuteteacutes
biologiques et pharmacologiques des espegraveces du genre Cleome le tableau 4 reacutecapitule
la majoriteacute des activiteacutes lieacutees aux diffeacuterentes espegraveces de Cleome y compris la Cleome
arabica
Tab 4 Les activiteacutes biologiques du genre Cleome
Espegravece Activiteacutes biologiques Reacutefeacuterence
Cleome
rutidosperma
Acitiviteacute antalgique Activiteacute anti-
inflammatoire Activiteacute antipyreacutetique
Bose et al 2007
Cleome
paradoxa
Activity Antidiabetique Abdel-Sattar et al 2009
Cleome iberica
Activiteacute Antimicrobienne
Activiteacute cytotoxique contre les cellules
canceacutereuses du col de lrsquouteacuterus
Activiteacute antioxydante (DPPH)
Farimani et al 2016
Cleome viscosa Activiteacute antalgique
Activiteacute antipyreacutetique
Activiteacute antimicrobienne
Anti-diarrheacutee Effet antieacutemeacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Parimala Devi et al
2003 Sudhakar et al
2006 Parimala Devi
2002 Gupta amp Dixit
2009 Ahmed et al 2011
Cleome rosea
Inhibition de la production doxyde
nitrique (NO) Effet antioxydant en
proteacutegeant le DNA plasmide
Simoes et al 2006
Cleome
droserifolia
Effet hypoglyceacutemiant
Activiteacute anti-atheacuterogegravene
Activiteacute anti-microbienne
Effet diureacutetique
Effet heacutepato-protecteur
Effet relaxant Effet antihistaminique
Wang amp Ng 1999
Khafagi amp Dewedar
2000 Fushiya et al
1999 Abdel-Kawy et al
2000 El-Shenawy
2006 Abdel-Kader 2009
Cleome
arabica
Activiteacute antagoniste Activiteacute
antifongique Effet alleacutelopathique
Activiteacute anti-inflammatoire Anti-
Goudjala et al 2014
Ladhari et al a amp b 2013
Bouriche et al 2005
Revue bibliographique
9
alimentation Effet insecticide Effet
anti-hyper cholesteacuteroleacutemique Activiteacute
anticanceacutereuse
Samout et al 2015
Tigrine et al 2013
Cleome
gynandra
Inhibition de la production des ROS
(sous condition de stress) Activiteacute
anticanceacutereuse Activiteacute antioxydante
(pieacutegeage des radicaux libres) Activiteacute
anti-inflammatoire
Uzilday et al 2012 Bala
et al 2012 Moyo et al
2013 Narendhirakannan
et al 2007
Cleome
africana
Activiteacute antioxydante (pieacutegeage du
radical libre ABTS)
Tawaha et al 2007
Cleome
Turkmena
Activiteacute antioxydante Activiteacute
antibacteacuterienne Activiteacute antifongique
Farjam et al 2014
Cleome felina Activiteacute anticanceacutereuse Joseph et al 2014
Chapitre 2 Geacuteneacuteraliteacutes sur les composeacutes pheacutenoliques
1- Deacutefinition
Le regravegne veacutegeacutetal y compris les fruits et les leacutegumes constituent une source
importante de polyphenols Ces derniers sont preacutesents dans toutes les parties de la
plante mais avec une reacutepartition quantitative qui varie entre les diffeacuterents organes et
tissus
Plus de 8000 moleacutecules produites dans les plantes sont identifieacutees et qui
constituent trois grandes classes les composeacutes pheacutenoliques les terpenoides et les
alcaloiumldes (Wink 2003 Aharoni amp Galili 2011)
Ces moleacutecules sont pourvues de diffeacuterents rocircles dans la plante notant les
agressions climatiques stresse biotique (agents pathogegravenes blessures symbiose) ou
abiotiques (lumiegravere rayonnements UV faible tempeacuterature carences) Ils contribuent
aussi agrave la qualiteacute organoleptique des aliments issus des veacutegeacutetaux (couleur astringence
arocircme amertume) (Visioli et al 2000)
Revue bibliographique
10
Ils repreacutesentent une large gamme potentielle drsquoagents theacuterapeutiques
largement exploiteacutee par lrsquohomme dans diffeacuterents domaines comme la santeacute et
lrsquoalimentation (Croteau et al 2000 Cragg amp Newman 2010 Ncube et al 2012)
2- Structure et cateacutegories des composeacutes pheacutenoliques
Structuralement les composeacutes pheacutenoliques comprennent un noyau
aromatique qui possegravede un ou plusieurs substituants hydroxyleacutes Ces derniers
permettent aux composeacutes pheacutenoliques simples de se polymeacuteriser pour obtenir des
pheacutenols complexes ou polymeacuteriseacutes
La plupart des composeacutes pheacutenoliques sont conjugueacutes avec un mono ou poly
saccharides ougrave associeacutes agrave des esters et des meacutethyles esters en raison de leur reacuteactiviteacute
et toxiciteacute en vue de la plante elle-mecircme Ces composeacutes peuvent ecirctre groupeacutes dans
plusieurs classes (Nagendran 2006) comme le montre le tableau 5 (Nkhili 2009)
Tab 5 Les principales classes des composeacutes pheacutenoliques
Les acides pheacutenols les flavonoiumldes et les tanins font lrsquoobjet drsquoune description plus
deacutetailleacutee
Revue bibliographique
11
2- 1 Acides pheacutenols
Ces moleacutecules sont caracteacuteriseacutees par la preacutesence drsquoau moins un noyau
benzeacutenique auquel est directement lieacute au moins un groupe hydroxyle libre ou engageacute
dans une autre fonction eacutether ester heacuteteacuteroside (Bruneton 1999) Les acides pheacutenols
comprennent deux sous classes
A ndash Acide hydroxybenzoiques
Cette classe se caracteacuterise par un squelette de C6-C1 en commun Ils sont
particuliegraverement repreacutesenteacutes chez les Gymnospermes et les Angiospermes drsquoougrave ils
sont souvent libeacutereacutes apregraves hydrolyse alcaline ou enzymatique Les acides
hydroxybenzoiumlques existent freacutequemment sous formes drsquoesters ou de glycosides
(Macheix 2005)
Les principaux acides hydroxybenzoiumlques retrouveacutes dans les veacutegeacutetaux sont les
acides phydroxybenzoiumlque protocateacutechique vanillique gallique et salicylique
(Chanforan 2010)
La figure 2 illustre la structure de quelques exemples de ce groupe
R1
R2
CO2H
R3
R4
R1=R2=R4=H R3=OH Acide p-hydroxybenzoiumlque
R1=R4=H R2=R3=OH Acide protocaateacutechique
R1=R4=H R2=OCH3 R3=OH Acide vanillique
R1=H R2=R3=R4=OH Acide gallique
R1=OH R2=R3=R4=H Acide salicylique
Fig 2 Structure drsquoacides hydroxybenzoiumlques communs
B- Acide hydroxycinnamiques
Les acides hydroxycinnamiques repreacutesentent un groupe tregraves important dont la
structure possegravede un cycle aromatique associeacute agrave trois carbones C6- C3 (figure 3) par
Revue bibliographique
12
exemple lacide cafeacuteique lacide feacuterulique p-coumarique et lacide sinapique
(Nagendran 2006)
Le degreacute drsquohydroxylation du cycle benzeacutenique et son eacuteventuelle modification
par des reacuteactions secondaires sont un des eacuteleacutements importants de la reacuteactiviteacute
chimique de ces moleacutecules De plus lrsquoexistence drsquoune double liaison dans la chaicircne
lateacuterale conduit agrave deux seacuteries isomegraveres (Z et E) dont les proprieacuteteacutes biologiques
peuvent ecirctre diffeacuterentes (Macheix 2005)
R1
R2
R1=R2=H Acide cinnamique (non pheacutenolique)
R1=H R2=OH Acide p-coumarique
R1=R2=OH Acide cafeacuteique
R1=OCH3 R2=OH Acide feacuterulique
CO2H
Fig 3 Structure drsquoacides hydroxycinnamiques communs (Chanforan 2010)
2- 2 Flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont formeacutes drsquoun squelette de 15 atomes de carbones C6-C3-
C6 Correspondant agrave la structure des pheacutenylbenzo-pyrones (pheacutenylchromones)
(Santos-buelga amp Scalbert 2000) Ces moleacutecules comprennent deux noyaux
aromatiques A et B lieacutes par un heacuteteacuterocycle oxygeacuteneacute C (figure 4) (Heim et al 2002)
Revue bibliographique
13
O
A C
B1
2
3
5
6
7
8 1
2
3
4
5
6
4
Fig 4 Structure geacuteneacuterale des flavonoiumldes
Leur cycle A est syntheacutetiseacute par la condensation de 3 moleacutecules du malonyl-
coenzyme A issue du meacutetabolisme du glucose Les cycles B et C ont comme
preacutecurseur immeacutediat lrsquoacide cinnamique qui est formeacute par la voie de lrsquoacide
shikimique Ce dernier lui-mecircme deacuteriveacute du meacutetabolisme du glucose (Markham
1982 Formica amp Regelson 1995)
Plus de 6500 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes (Harborne amp Williams 2000
Boumendjel et al 2002) Ils sont quasiment universels chez les plantes vasculaires
ougrave ils jouent un rocircle tregraves important comme pigments responsables des colorations
jaune orange et rouge de diffeacuterents organes veacutegeacutetaux (Ghedira 2005)
Structurellement les flavonoiumldes se reacutepartissent en quinze groupes dont les
plus importants sont illustreacutes dans le tableau 6 (Heim et al 2002) les flavonols les
flavones les flavanones les flavannonols les isoflavones les isoflavannones les
chalcones et les anthocyanes (Formica amp Regelson 1995 Bruneton 2009)
Dans la plupart des cas les flavonoiumldes sont preacutesents sous forme glycosidique
dans les vacuoles des fleurs des feuilles des tiges ou des racines Les flavonoiumldes
aglycones polymethyleacutes sont plutocirct preacutesents sous forme de cires dans les feuilles les
eacutecorces et les bourgeons floraux (Laouini 2014)
Revue bibliographique
14
Tab 6 Structures des diffeacuterentes classes de flavonoiumldes
Structure geacuteneacuterale Flavonoiumlde Substitution Sources alimentaires
O
A C
B1
5
7
3
4
OH
(+)-catechin
(-)-epicatechin
Epigallocatechin
gallate
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH3-
gallate
Theacute (camelliasinensis)
O
O
chrysin
apigenin
rutin
luteolin
luteolin glucosides
57-OH
574rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH 3-rutinose
573rsquo4rsquo-OH
573rsquo-OH 4rsquo-glucose
54rsquo-OH 7-glucose
Peau de fruit
Persil ceacuteleri
Vin rouge sarrasin
Agrumes peau de tomate
Poivron rouge
O
O
OH
Kaempferol
quercetin
myricetin
tamarixetin
3574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
3573rsquo4rsquo5rsquo-OH
3573rsquo-OH4rsquo-OMe
Poireau brocoli endives
Pamplemousse theacute noir
Oignon laiture brocoli
Tomate theacute vin rouge
Baies huile drsquoolive peau
de pomme
Raisins de canneberge
O
O
naringin
naringenin
taxifolin
eriodictyol
hesperidin
54rsquo-OH7-
rhamnoglucose
574rsquo-OH
3573rsquo4rsquo-OH
573rsquo4rsquo-OH
353rsquo-OH4rsquo-OMe7
rutinose
Agrumes pamplemousse
Citron Orange
O
O
genistin
genistein
daidzin
daidzein
54rsquo-OH7-glucose
574rsquo-OH
4rsquondashOH7glucose
74rsquo-OH
Soja
O
Apigenidin
cyanidin
574rsquo-OH
3574rsquo-OH35-OMe
Fruits coloreacutes
Cerise framboise fraise
2-3 Tanins
Les tanins sont des composeacutes pheacutenoliques tregraves abondants chez les
angiospermes les gymnospermes et les dicotyleacutedones (Konig et al 1994) Ils ont la
capaciteacute de se combiner et de preacutecipiter les proteacuteines Ces combinaisons varient drsquoune
proteacuteine agrave une autre selon les degreacutes drsquoaffiniteacutes ce qui leur procure la proprieacuteteacute de
tanner la peau crsquoest-agrave-dire de rendre imputrescible (Dangles et al 1992 Hemingway
amp Karchesy 2012 )
Revue bibliographique
15
Lrsquoaccumulation de ces moleacutecules dans le veacutegeacutetal srsquoeffectue essentiellement
dans les vacuoles les fruits et les tissus acircgeacutes ou drsquoorigine pathologique
Dans lalimentation humaine les sources les plus importantes de tanins sont le
vin et le theacute (Peacutenicaud 2009) De mecircme lrsquoastringence est la qualiteacute organoleptique
qui indique la preacutesence des tannins Elle a un rocircle important dans le choix des
aliments (correacutelation inverse entre les espegraveces veacutegeacutetales choisies et leur teneur en
tanins) (Horn et al 2002 Del Bubba et al 2009)
Comme les autres types de polypheacutenols les tanins sont aussi reacutepandus pour
leurs nombreuses activiteacutes theacuterapeutiques notamment anti-infectieuses (Latte amp
Kolodziej 2000 Leitao et al 2005) cardiovasculaires (Yamanaka et al 1996
Cheruvanky 2004) hormonodeacutependantes et anticanceacutereuses (Notomo et al 2004
Gosse et al 2005)
Selon la structure on distingue les tanins hydrolysables et les tanins
condenseacutes (Roux amp Catier 2007)
A- Tanins hydrolysables
Les tanins hydrolysables ou acides tanniques (figure 5) sont des polymegraveres de
lrsquoacide gallique ou de son produit de condensation lrsquoacide ellagique Ils ont un poids
moleacuteculaire plus faible et preacutecipitent beaucoup moins les proteacuteines que les tanins
condenseacutes Ils peuvent diminuer la deacutegradation des parois dans le rumen et ecirctre
hydrolyseacutes dans lrsquointestin en libeacuterant des produits toxiques pour le foie et le rein
(Jarrige amp Ruckebusch 1995)
Revue bibliographique
16
O
O
O
O
HO
HO
HO
HO
OH
OHHO
OH
OH
OO
OH
O
O
OO
O
O
OH
HOOHHO
HO
OH
Fig 5 Exemple tannins hydrolysables
B- Tanins condenseacutes
Les tanins condenseacutes (proanthocyanidines ou procyanidines) sont des
polypheacutenols de masse molaire eacuteleveacutee (figure 6) Ils reacutesultent de la polymeacuterisation auto
oxydative ou enzymatique des uniteacutes de flavan-34-diol lieacutees majoritairement par les
liaisons C4-C8 ou C4-C6 des uniteacutes adjacentes ou bien des liaisons C4-C8 avec une
liaison drsquoeacutether additionnelle entre C2 et C7 (Wollgast amp Anklam 2000 Dykes amp
Rooney 2006)
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
OH
O
OH
HO
OH
OH
OH
HO
HO
R
O
OH
OH
OH
OH
O
R
OH
OH
OH
HO
Fig 6 Exemple tannins condenseacutes
Revue bibliographique
17
3- Biosynthegravese des composeacutes pheacutenoliques
3-1 Biosynthegravese des acides pheacutenols
Les grandes lignes des voies de biosynthegravese des principaux composeacutes
pheacutenoliques sont maintenant bien connues Les deux acides amineacutes aromatiques
(pheacutenylalanine et tyrosine) sont preacutesents dans les proteacuteines mais sont eacutegalement agrave
lorigine de la formation de la plupart des moleacutecules pheacutenoliques chez les veacutegeacutetaux
(Sarmi amp Cheymer 2006) Ces composeacutes sont issus par deux grandes voies
meacutetaboliques
3-1-1 voie de lacide shikimique
Elle conduit agrave la formation du preacutecurseur immeacutediat des pheacutenols par
deacutesamination de la pheacutenylalanine La seacutequence biosyntheacutetique qui suit deacutenommeacutee
seacutequence des pheacutenylpropanoides permet la formation des principaux acides
hydroxycinnamiques
Les formes actives de ces derniers avec le coenzyme A permettent dacceacuteder aux
principales classes des composeacutes pheacutenoliques citant quelques transformations
Vers les acides de la seacuterie benzoique (acides gallique protocateacutechiquehellip) par
Beacuteta-oxydation Lacide gallique lui-mecircme par combinaison avec des sucres
simples conduit aux tannins hydrolysables (tannins galliques et ellagiques)
Vers les estres de type chlorogeacutenique par esteacuterification avec un acide alcool
(acide quinique tartrique shikimiquehellip) (Sarmi amp Cheymer 2006)
Vers les coumarines par cyclisation interne des moleacutecules suivie de
modifications compleacutementaires (glycosilations preacutenylationshellip)
Vers les lignines par reacuteduction formation des monolignols puis
polymeacuterisation oxydative initieacutee dans la paroi cellulaire par les peroxydases et
eacuteventuellement les laccases (Bruneton 1999)
Revue bibliographique
18
3-1-2 Voie daceacutetate malonate
Elle conduit par condensations reacutepeacuteteacutees agrave des systegravemes aromatiques ex les
chromones les isocoumarines et les quinones La pluraliteacute structurale des composeacutes
pheacutenoliques due agrave cette origine biosyntheacutetique est encore accrue par la possibiliteacute tregraves
freacutequente dune participation simultaneacutee du shikimate et de laceacutetate agrave leacutelaboration des
composeacutes mixtes comme les flavonoiumldes les stilbegravenes et les xanthones (Bruneton
1999)
3-2 Biosynthegravese des flavonoiumldes
La formation de ces moleacutecules flavonoiques seffectue par un intermeacutediaire
connu teacutetrahydroxychalcone agrave partir de la quelle se diffeacuterencient plusieurs types des
flavonoides (Bruneton 1999)
Le squelette moleacuteculaire de base a une double origine 3 moleacutecules daceacutetyl
CoA (CoA = coenzyme A) pour le cycle A qui deacuterive de la voie aceacutetate malonate une
moleacutecule de p-coumaryl pour le cycle B qui deacuterive de la voie shikimate et aussi pour
lheacuteteacuterocycle C Cest alors agrave partir de la chalcone ainsi formeacutee par cette condensation
chimique que vont ecirctre mis en place les flavonoiumldes appartenant aux diverses classes
en particuliers des pigments comme les anthocyanes et les flavonols ou encore
certains monomegraveres de type flavonols dont la polymeacuterisation conduira aux tannins
condenseacutes
La biosynthegravese des diffeacuterents groupes de flavonoiumldes (figure 7) implique un
ensemble complexe de reacuteactions comprenant des hydroxylations meacutethylations
oxydations reacuteductions glycosilationshellip (Sarmi amp Cheymer 2006)
Revue bibliographique
19
OH
O
OH
O
HO
O
HO
Carbohydrates
acetyl-CoA shikimate
phenylalanine
CoAs
3 Malonyl-CoA
4coumaryl-CoA 4-coumarate cinnamate
O
OH
HO
OH
IIIIIVI
I
chalcone4246teacutetrahydroxychalcone
1
2OH
O
OHO
OHOH
O
OOH
HO
OH
O
OHO
OH
3 4
5
OH
O
O
OH
HO
OH
OH
O
O
OH
HO
OH
6
Flavonol Kaempferol
FlavanonolDihydrokaempferol
Isoflavone Genisteine
Flavanone naringenine
Flavone apiginine
Fig 7 Biosynthegravese des flavonoides
Les enzymes
I- Acetyl CoA carboxylase II- Phenylalanine ammonia lyase III- Coumarate 4-
hydroxylase IV- 4-coumarate CoA ligase 1- Chalcone synthase 2- Chalcone isomeacuterase
3- Hydroxy-2 isoflavone synthase 4- Flavone synthase 5- Flavanone-3 hydroxylase 6-
Flavonol synthase
Revue bibliographique
20
4- Polypheacutenols dans les plantes Localisation et inteacuterecirct
A lrsquoeacutechelle de la cellule les composeacutes pheacutenoliques sont principalement
reacutepartis dans deux compartiments les vacuoles et la paroi Dans les vacuoles les
polypheacutenols sont conjugueacutes avec des sucres ou des acides organiques ce qui permet
daugmenter leur solubiliteacute et de limiter leur toxiciteacute pour la cellule
Au niveau de la paroi on trouve surtout de la lignine et des flavonoiumldes lieacutes
aux structures parieacutetales Les composeacutes pheacutenoliques sont syntheacutetiseacutes dans le cytosol
Une partie des enzymes impliqueacutees dans la biosynthegravese des pheacutenylpropanoiumldes est
lieacutee aux membranes du reacuteticulum endoplasmique ougrave elles sont organiseacutees en
meacutetabolons (Beacutenard 2009)
Au niveau tissulaire la localisation des polypheacutenols est lieacutee agrave leur rocircle dans la
plante et peut ecirctre tregraves caracteacuteristique Au sein mecircme des feuilles la reacutepartition des
composeacutes est variable par exemple les anthocyanes et les flavonoiumldes sont
majoritairement preacutesents dans lrsquoeacutepiderme
Au niveau de la plante entiegravere il faut noter que certains composeacutes ne sont
accumuleacutes que dans des organes bien deacutefinis Chez la pomme par exemple les
composeacutes pheacutenoliques interviennent au niveau de la coloration de la peau via les
anthocyanes et dans la qualiteacute organoleptique de la chair notamment pour
lrsquoamertume ou lrsquoastringence (Beacutenard 2009)
Les composeacutes pheacutenoliques jouent un rocircle important dans le meacutetabolisme de la
plante mais aussi peuvent reacuteagir dans les interactions des plantes avec leur
environnement biologique et physique (relations avec les bacteacuteries les champignons
les insectes reacutesistance aux UV) Toutes les cateacutegories de composeacutes pheacutenoliques sont
impliqueacutees dans les meacutecanismes de reacutesistance (Dicko et al 2006)
Ils assurent la communication entres cellules entre veacutegeacutetaux entre veacutegeacutetaux et
animaux (Robert amp Catesson 2000)
Revue bibliographique
21
5- Polypheacutenols et activiteacutes biologiques
5- 1 Activite antioxydante
5- 1- 1 Introduction
Par deacutefinition les radicaux libres (RL) sont des espegraveces chimiques (atomes ou
moleacutecules) qui possegravedent un ou plusieurs eacutelectrons ceacutelibataires (non apparieacutes) sur leur
couche externe Ces radicaux jouent un rocircle essentiel dans le bon deacuteroulement de la
reacuteaction immunitaire la phagocytose et la communication cellulaire (Peynet et al
2005)
Ces moleacutecules (RL) se caracteacuterisent par leur instabiliteacute et leur reacuteaction rapide
avec drsquoautres composants afin de capturer lrsquoeacutelectron neacutecessaire pour acqueacuterir leur
stabiliteacute Une reacuteaction en chaine deacutebute lorsqursquoun radial attaque la moleacutecule stable la
plus proche en lui arrachant son eacutelectron et la moleacutecule attaqueacutee devient alors elle-
mecircme une moleacutecule instable
Fosting (2004) rapporte que le terme de radical libre ait souvent eacuteteacute assimileacute agrave
une espegravece reacuteactive ou un oxydant cependant il est important de signaler que tous les
radicaux libres ne sont pas forceacutement des oxydants De mecircme que tous les oxydants
ne sont pas des radicaux libres
Les radicaux libres ou bien les espegraveces reacuteactives de lrsquooxygegravene (ERO) sont
souvent produites dans lrsquoorganisme mais cette production est toujours controleacutee par
les antioxydants afin de maintenir lrsquoeacutequilibre de la balance oxydative
oxydantantioxydant Le stress oxydatif survient lorsque cet eacutequilibre est rompu en
faveur des radicaux libres Toute fois une production excessive de ces moleacutecules
reacuteactives ou une insuffisance des meacutecanismes antioxydants peut deacuteseacutequilibrer cette
balance (Christophe amp Christophe 2011 Papazian amp Roch 2008)
Poirier (2004) et Meacutedart (2009) rapportent que ce deacuteseacutequilibre peut avoir
diverses origines telle que
- Les radiations ionisantes (exposition importante au soleil radioactiviteacute
artificielle ou naturelle)
- la pollution
- le contact avec certains pesticides et solvants
Revue bibliographique
22
- la consommation de tabac et drsquoalcool
- la consommation de certains meacutedicaments
- la pratique du sport intensif
- tout processus susceptible de surcharger les reacuteactions de deacutetoxication
heacutepatique notamment une perte de poids importante
5-1- 2 Pathologies lieacutees au stress oxydatif
Des leacutesions majeures sur les diffeacuterentes moleacutecules comme lrsquoADN les lipides
et les glucides ainsi que drsquoautres leacutesions secondaires dues au caractegravere cytotoxique et
mutagegravene des meacutetabolites libeacutereacutes notamment lors de lrsquooxydation des lipides peuvent
ecirctre provoqueacutees par la production excessive des radicaux libres dans lrsquoorganisme
Lrsquoorganisme peut aussi reacuteagir contre ces composeacutes anormaux par la
production des anticorps qui peuvent aussi ecirctre des auto-anticorps creacuteant une 3egraveme
vague drsquoattaque chimique (Favier 2003)
En geacuteneacuteral le stress oxydatif est la conseacutequence de plusieurs processus et
pheacutenomegravenes Il peut toucher un tissu ou un type de cellules particuliegraveres et par
conseacutequent les pathologiques du stress oxydant sont donc aussi nombreuses que
varieacutees (Sohal et al 2002)
Sohal et ses collaborateurs (2002) affirment que lrsquoacircge est le seul facteur
commun qui favorise le stress oxydatif dans la mesure ougrave le vieillissement affaiblit
les reacuteponses antioxydantes et perturbe la respiration mitochondriale
Il faut distinguer les maladies dont le stress oxydant est la cause principale et
celles dont lrsquoexpression implique celui-ci (toute maladie implique une inflammation
donc un stress oxydant)
Le premier groupe inclut les rhumatismes lrsquoarthrite lrsquoarthrose la cataracte le
syndrome de deacutetresse respiratoire aigue (SDRA) lrsquoœdegraveme pulmonaire hellipetc
et de faccedilon geacuteneacuterale le vieillissement acceacuteleacutereacute des tissus comme la peau
Le deuxiegraveme groupe inclut le diabegravete la maladie drsquoAlzheimer les cancers et
les maladies cardiovasculaires selon Montagnier et son eacutequipe (1998)
Revue bibliographique
23
5-1- 3 Polypheacutenols sont des antioxydants
Drsquoapregraves Halliwell en 1994 les principaux meacutecanismes de lrsquoactiviteacute antioxydante
dont les composeacutes pheacutenoliques peuvent appliquer sont
Le pieacutegeage direct des EOR
Lrsquoinhibition des enzymes impliqueacutees dans le stress oxydant et la cheacutelation des
traces meacutetalliques responsables de la production des EOR
La protection des systegravemes de deacutefense antioxydants
A- Inhibition enzymatique
Les pheacutenomegravenes drsquointeraction polypheacutenols-proteacuteines ont eacuteteacute largement eacutetudieacutes
in vitro particuliegraverement le cas des flavonoiumldes dont lrsquoinhibition drsquoune grande varieacuteteacute
drsquoenzymes ainsi que le processus de transcription de certains gegravenes (par interaction du
cytosol avec les facteurs de transcription ou certains preacutecurseurs) (Bruneton 1999)
Bruneton en 1999 rapporte que les acides hydroxycinnamiques sont des
inhibiteurs de proteacuteines de coagulation et jouent ainsi un rocircle drsquoanticoagulants
Nombreuses eacutetudes confirment que lrsquoinhibition de la production des EOR par
les composeacutes pheacutenoliques principalement les flavonoiumldes peut srsquoeffectuer
directement par formation de complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe
des EOR (Dangles amp Dufour 2006 Dangles amp Dufour 2008 Woff amp Liu 2008)
Le cas de la xanthine oxydase qui est consideacutereacutee comme une source
biologique importante de radical superoxyde confirme cette double action Drsquoautre
part Hansaki et ses collaborateurs en 1994 ainsi que Cos et son eacutequipe en 1998 en
effectuant une eacutetude sur la maladie de la goutte ont montreacute que les flavonoiumldes
peuvent agir sur lrsquoactiviteacute de la xanthine oxydase et par conseacutequent peuvent preacutevenir
cette maladie en reacuteduisant agrave la fois les concentrations de lrsquoacide urique et celle du
radical superoxyde dans les tissus humains Ces travaux ont confirmeacute que
Les flavanones les dihydroflavonols et les flavan-3-ols (cycle C non plan) ne
sont pas inhibiteurs de la xanthine oxydase alors que les flavonols et les
flavones (cycle C plan et conjugueacute avec les cycles A et B) ont la capaciteacute
drsquoinhiber lrsquoenzyme
Lrsquoabsence du groupe hydroxyle en C3 augmente leacutegegraverement lrsquoactiviteacute
inhibitrice Les flavonoiumldes glycosyleacutees ont des activiteacutes infeacuterieures agrave celles
Revue bibliographique
24
des composeacutes non glycosyleacutes Par exemple la rutine est presque dix fois
moins active que la querceacutetine
Les flavonoiumldes preacutesentant un cycle B de type cateacutechol (ortho-dipheacutenol ou
12- dihydroxybenzegravene) sont de bons piegraveges agrave superoxyde en raison de la
stabiliteacute des radicaux semiquinones formeacutes lors de la capture
B- Cheacutelation des ions meacutetalliques
Les ions du fer ou du cuivre possegravedent une grande importance dans plusieurs
fonctions physiologiques ils entrent eacutegalement dans la composition des
heacutemoproteacuteines et des cofacteurs drsquoenzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant (par
exemple les ions du fer pour la catalase et ceux du cuivre pour le superoxyde
dismutase) Cepondant ils sont aussi responsables de la production du radical
hydroxyle par la reacuteduction du peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton
H2O2 + Fe2+
(Cu+) OHdeg + OH
- + Fe
3+ (Cu
2+)
En outre lrsquoautoxydation des ions Fe+2
et Cu+ est une source de superoxyde et
peroxyde drsquohydrogegravene et lrsquoun des meacutecanismes de lrsquoaction antioxydante est bien la
formation du complexe entre les ions du fer et le cuivre sous une forme qui inhibe leur
pouvoir redox
Plusieurs eacutetudes telle que celle de Morris et ses collaborateurs en 1995 et
Hider et son eacutequipe en 2001 affirment que divers composeacutes pheacutenoliques abondants
dans les plantes et dans lrsquoalimentation sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs des
ions meacutetalliques
Les recherches reacutealiseacutees par Van Acker et ses collaborateurs en 1996 sur la
cheacutelation des ions du fer par certains flavonoiumldes ont mis en eacutevidence les sites
essentiels pour la cheacutelation des ions meacutetalliques (figure 8)
Revue bibliographique
25
O
A C
B1
3
O
O
O
O
O
Mnn+
4 3
Mnn+
4
Mnn+
Fig 8 les flavonoiumldes et leurs sites de cheacutelation des ions meacutetalliques (Mn+)
C- Pieacutegeage des radicaux libres
Le pieacutegeage de divers radicaux par les composeacutes pheacutenoliques a eacuteteacute beaucoup
eacutetudieacute afin de clarifier et identifier les eacuteleacutements majeurs de lrsquoactiviteacute antioxydante
Jovanovic et ses collaborateurs en 1994 notent que gracircce au faible potentiel redox des
polypheacutenols plus particuliegraverement des flavonoiumldes (Fl-OH) ils sont
thermodynamiquement capables de reacuteduire rapidement les radicaux superoxydes
peroxyles (ROOmiddot) alkoxyles (ROmiddot) et hydroxyle par transfert drsquohydrogegravene
Fl-OH + Xmiddot Fl-Omiddot + XH
Dont
X repreacutesente lrsquoun des EOR mentionneacutes ci-dessus
Le radical aryloxyle (Fl-O) peut reacuteagir avec un autre radical pour former une
structure quinone stable
Eventuellement le radical aryloxyle peut reacuteduire le dioxygegravene pour donner
une quinone et un anion superoxyde Cette reacuteaction est responsable drsquoun effet
prooxydant des flavonoiumldes Ainsi la capaciteacute antioxydante des polypheacutenols deacutepend
non seulement du potentiel redox du couple Fl-OFl-OOH mais aussi de la reacuteactiviteacute
du radical Fl-Omiddot
Plusieurs travaux ont eacutetabli des relations entre la structure chimique des
polypheacutenols et leur capaciteacute agrave pieacuteger les radicaux libres (Pietta 2000 Cuvelier
1992 Farkas 2004)
Revue bibliographique
26
Cette mecircme activiteacute antioxydante permet aux polypheacutenols de reacuteguler les
radicaux libres bon-mauvais comme loxyde nitrique qui favorise une bonne
circulation sanguine coordonne lactiviteacute du systegraveme immunitaire avec celle du
cerveau et module la communication entre les cellules de ce dernier (Akroum 2010)
Lrsquoactiviteacute antioxydante des polypheacutenols peut srsquoexercer sur les transporteurs
des lipides du sang et tout particuliegraverement sur le laquomauvaisraquo transporteur du
cholesteacuterol (les LDL ou les lipoproteacuteines de faible densiteacute)
Les polypheacutenols empecircchent ainsi la formation des LDL oxydeacutes formation qui
rend place lors drsquoeacutetats pathologiques varieacutes caracteacuteriseacutes par un stress oxydatif
(Descheemaeker 2003)
Ils aident agrave combattre lrsquoinflammation et reacuteduisent la fragiliteacute des capillaires ils
reacuteduisent les effets du diabegravete et protegravegent la peau contre les rayons ultraviolets en
diminuant les dommages causeacutes par les rayons solaires (Spiller amp Spiller 2007)
De nombreuses eacutetudes eacutepideacutemiologiques montrent qursquoune alimentation riche
en polypheacutenols diminue le risque des maladies chroniques (Negraveve 2002)
5- 2 Polypheacutenols et cancer
Parmi les proprieacuteteacutes biologiques inteacuteressantes des polypheacutenols la preacutevention
du cancer En effet un certain nombre de recherches meneacutees in-vitro et in- vivo ont
montreacute que les polypheacutenols pourraient ecirctre utiliseacutes comme des agents de preacutevention
des diffeacuterentes maladies canceacutereuses (Stagos et al 2012)
De nombreuses eacutetudes ont montreacute que trois types de cancers (sein prostate et
digestif) peuvent ecirctre fortement influenceacutes par lrsquoalimentation notamment lrsquoapport en
lipides et en antioxydants et que lrsquohuile drsquoargan pourrait gracircce agrave sa teneur en
polypheacutenols contribuer agrave la preacutevention de certains cancers tels que le cancer de la
prostate (Bennani et al 2009)
Des recherches plus reacutecentes ont deacutecrit les activiteacutes anti-canceacuterigegravenes de la
curcumine le resveacuteratrol et lrsquoeacutepigallocateacutechine-3-gallate (EGCG) pour le traitement
du cancer du col (Di Domenico et al 2012)
Revue bibliographique
27
Les effets inhibiteurs du theacute vert et noir dans le traitement du cancer ont
largement eacuteteacute eacutetudieacutes Les polypheacutenols du theacute de type flavan-3-ol sont des composeacutes
bioactifs puissants qui interfegraverent avec linitiation le deacuteveloppement et la progression
du cancer par des processus critiques (Lambert amp Elias 2010 Yang et al 2013)
Ils ont la capaciteacute drsquointerrompre ou inverser le processus de canceacuterogenegravese en
agissant sur les moleacutecules de reacuteseau de signalisation intracellulaires impliqueacutees dans
lrsquoinitiation et ou la promotion dun cancer pour arrecircter ou inverser la phase de
progression du cancer (Link et al 2010)
Les polypheacutenols peuvent eacutegalement deacuteclencher lapoptose dans les cellules
canceacutereuses agrave travers la modulation dun certain nombre deacuteleacutements principaux en
signal cellulaire (Link et al 2010)
5- 3 Polypheacutenols et maladies cardiovasculaires
Diverses eacutetudes eacutepideacutemiologiques ont montreacute qursquoil existe une correacutelation
inverse entre la consommation drsquoaliments riches en polypheacutenols et le risque de
deacuteveloppement des maladies cardiovasculaires (Visioli et al 2000 Arts amp Hollman
2005)
Au niveau des artegraveres ces moleacutecules preacuteviennent lrsquooxydation des lipoproteacuteines
de faible densiteacute (LDL) eacutevitant ainsi lrsquoatheacuteroscleacuterose (eacutepaississement des artegraveres qui
contribue agrave reacuteduire le flux sanguins et peut conduire agrave lrsquoasphyxie des tissus irrigueacutes)
Les polypheacutenols inhibent aussi lrsquoagreacutegation plaquettaire impliqueacutee dans le
pheacutenomegravene de thrombose qui induit lrsquoocclusion des artegraveres Ainsi en preacutevenant
lrsquoartheacuteroscleacuterose et les risques de thrombose ces composeacutes limitent les risques
drsquoinfarctus du myocarde (Akroum 2010)
Selon des eacutetudes eacutepideacutemiologiques un plus grand apport de flavonoiumldes tireacutes
des fruits et des leacutegumes srsquoassocie agrave une diminution du risque drsquoapparition de maladie
cardiovasculaire Les meacutecanismes expliquant cette observation ne sont pas clairs
mais drsquoapregraves les donneacutees probantes les flavonoiumldes exerceraient leurs effets par la
diminution des facteurs de risque cardiovasculaire
Revue bibliographique
28
Drsquoapregraves de reacutecentes donneacutees probantes certains polypheacutenols sous forme
purifieacutee y compris le resveacuteratrol la berbeacuterine et la naringeacutenine ont des effets
beacuteneacutefiques sur la dyslipideacutemie chez les modegraveles humains ou animaux Un traitement agrave
la naringeacutenine atteacutenuait lrsquoatheacuteroscleacuterose en corrigeant la dyslipideacutemie (Mulvihill amp
Huff 2010)
5- 4 Polypheacutenols et inflammation
Lrsquoinflammation est la reacuteponse principale de lrsquoorganisme agrave une agression et qui
est preacuteciseacutement reacuteguleacutee afin de limiter les atteintes possibles des structures de
lrsquoorganisme Cependant une reacutegulation inapproprieacutee de ce pheacutenomegravene peut conduire
agrave un eacutetat inflammatoire chronique (Bengmark 2004)
La plupart des pathologies chroniques possegravedent une composante
inflammatoire Crsquoest le cas de lrsquoobeacutesiteacute du diabegravete de type II des maladies
cardiovasculaires et du cancer (Hotamisligil 2006)
Diffeacuterentes eacutetudes meneacutees sur les effets protecteurs des polypheacutenols ont
montreacute que composeacutes diminuaient les marqueurs de lrsquoinflammation et agissaient sur
de nombreuses cibles moleacuteculaires au centre des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010) comme il a eacuteteacute deacutemontreacute qursquoils
agissaient eacutegalement comme des modulateurs des voies de signalisation de
lrsquoinflammation (Santangelo et al 2007)
Drsquoautres eacutetudes meneacutees chez lrsquohomme sain ont montreacute que le suivi drsquoun
reacutegime riche en fruits et leacutegumes eacutetait inversement correacuteleacute aux marqueurs de
lrsquoinflammation dans le plasma et que la consommation drsquoanthocyanes eacutetait associeacutee agrave
la diminution du taux de cytokines circulantes (Lenoir 2011)
Des recherches reacutecentes ont deacutemontreacute que les flavonoiumldes notamment les
flavonols peuvent preacutevenir de la douleur musculaire en acceacuteleacuterant la reacuteparation des
tissus au niveau moleacuteculaire De maniegravere speacutecifique ils inhibent lrsquoenzyme NOS
responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation (Gonzalez-Gallego et al 2010)
Revue bibliographique
29
6- Meacutethodes drsquoanalyse des composeacutes pheacutenoliques
La seacuteparation la deacutetection lrsquoidentification et la quantification des moleacutecules
srsquoeffectuent par plusieurs meacutethodes analytiques et speacutecialement chromatographiques
De nos jours les meacutethodes chromatographiques coupleacutees agrave divers deacutetecteurs
occupent la plus importante place dans le screening moleacuteculaire car elles permettent
de caracteacuteriser simultaneacutement un eacuteventail tregraves large de moleacutecules avec une meilleure
speacutecificiteacute et une plus grande sensibiliteacute compareacutees aux meacutethodes anciennes
Elles sont applicables agrave tous les milieux biologiques quelle qursquoen soit la
nature apregraves une eacutetape drsquoextraction rendue neacutecessaire du fait de la complexiteacute de ces
matrices
Les proprieacuteteacutes physico-chimiques des analytes conditionnent la deacutetection par
chromatographie ce qui explique qursquoil nrsquoy a aucune meacutethode chromatographique qui
permette la deacutetection de toutes les substances et qursquoune bonne strateacutegie impose la
disposition de plusieurs meacutethodes colorimeacutetriques spectrophotomeacutetriques et
chromatographiques compleacutementaires
Le tableau7 preacutesente les diffeacuterentes meacutethodes spectromeacutetriques et
chromatographiques en mentionnant les avantages et les limites de chaque meacutethode
(Ben sakhria 2016)
Tab 7 Meacutethodes drsquoanalyse avantages et inconveacutenients
Meacutethodes Avantages Inconveacutenients
Colorimeacutetriques simple rapide disponible
directe
Manque de speacutecificiteacute et e
sensibiliteacute subjectiviteacute de
lrsquointerpreacutetation neacutecessite
un blanc et un positif agrave
chaque test
Spectro-
photomeacutetrique
Quantification etou identification
spectrale simple et rapide de
certains composeacutes
Manque de speacutecificiteacute et de
sensibiliteacute seacuteparation
preacutealable neacutecessaire
Revue bibliographique
30
CCM Mateacuteriel simple disponible peu
couteux meacutethode seacuteparative
robuste non destructive permet
lrsquoidentification de centaines de
moleacutecules et leurs meacutetabolites
facilite les tests speacutecifiques
drsquoidentification et permet la
collection des fractions apregraves
seacuteparation les nouvelles meacutethodes
sont semi- quantitatives
automatisables et donnent une
meilleure identification
Relativement longue agrave
reacutealiser extraction
preacutealable des analytes
neacutecessaire manque de
sensibiliteacute et de reacutesolution
influence des conditions
locales sur les reacutesultats
interpreacutetation difficile et
deacutelicate en preacutesence de
beaucoup de meacutetabolites
LC-MS Identification et quantification
rapide drsquoun tregraves large nombre de
composeacutes mecircme polaires et
thermolabiles grande sensibiliteacute et
speacutecificiteacute faible volume
drsquoeacutechantillon et plus simple
Coucirct eacuteleveacute manque de
standardisation des
librairies de spectres de
masse
La chromatographie liquide haute performance coupleacutee agrave un deacutetecteur UV agrave
barrettes de diodes (HPLC-DAD) fut la premiegravere technique chromatographique en
phase liquide agrave ecirctre utiliseacutee pour un screening moleacuteculaire large Elle permet lrsquoanalyse
simultaneacutee drsquoun grand nombre de moleacutecules doteacutees de proprieacuteteacutes physico-chimiques
tregraves variables surtout en terme de polariteacute de poids moleacuteculaire et de stabiliteacute
thermiques Crsquoest une meacutethode de seacuteparation robuste facile drsquoemploi avec des
principes de seacuteparation bien connus et qui permet lrsquoanalyse drsquoun grand nombre de
moleacutecules avec une bonne sensibiliteacute et seacutelectiviteacute ajustable Elle est additive et
compleacutementaire agrave la CGMS et avec un coucirct abordable (Ben sakhria 2016)
Le couplage de lrsquoHPLCDAD avec la spectromeacutetrie de masse donne plus de preacutecision
et de caracteacuterisation au profile eacutetablis par lrsquoHPLC seule
La spectromeacutetrie de masse repose sur deux eacuteleacutements essentiels (Alkhatib 2010)
Revue bibliographique
31
La possibiliteacute par diffeacuterentes meacutethodes de fragmenter une moleacutecule en
diffeacuterents ions positifs ou neacutegatifs de rapports mz (massenombre de charges
eacuteleacutementaires) diffeacuterents
La deacutetection de ces fragments Lagrave encore diffeacuterentes techniques existent
(deacuteflection par champ magneacutetique filtre de masse quadripolaire trappe
ionique temps de vol) mais leur nature influe essentiellement sur la preacutecision
des reacutesultats
Chaque moleacutecule peut ecirctre caracteacuteriseacutee par un profil de fragmentation pour une
technique de fragmentation donneacutee De plus la formation drsquoun ion moleacuteculaire (M+)
ou pseudomoleacuteculaire [M+H]+ informe sur la masse de la moleacutecule eacutetudieacutee ce qui
permet son identification
Chapitre 3 Activiteacutes biologiques geacuteneacuteraliteacutes et eacutevaluation
1- Meacutethodes drsquoeacutevaluation du pouvoir antiradicalaire et antioxydant
Lrsquoeacutevaluation du pouvoir antioxydant et antiradicalaire peut se faire par de
nombreuses meacutethodes in vitro et in vivo Ces techniques sont diffeacuterentes les unes des
autres par les reacuteactifs utiliseacutes les conditions drsquoapplication leurs protocoles ainsi le
meacutecanisme drsquoaction par le quel lrsquoextrait ou la moleacutecule testeacutee se manifeste dans le
milieu
Le tableau 8 preacutesente les meacutethodes les plus utiliseacutees en particulier pour les
tests in vitro chimiques en mentionnant les meacutecanismes reacuteactionnels les avantages et
inconveacutenients de chaque meacutethode
Les techniques citeacutees teacutemoignent lrsquoaptitude drsquoune moleacutecule ou drsquoun extrait
naturel agrave neutraliser les radicaux libres par transfert drsquoeacutelectron etou de proton issus de
pheacutenomegravenes drsquooxydations (Prior et al 2005)
Les reacutesultats des activiteacutes antioxydantes sont geacuteneacuteralement exprimeacutes en
fonction drsquoune moleacutecule de reacutefeacuterence posseacutedant de forte proprieacuteteacute antioxydante
(trolox quercetine rutine)
Revue bibliographique
32
Tab 8 Tests antioxydants in vitro
Tests DPPH ABTS ou TEAC FRAP ORAC
Meacutecanismes
reacuteactionnels transfert deacutelectron majoritaire
transfert deacutelectron et de proton
transfert deacutelectron transfert de proton
Nature des
moleacutecules testeacutees hydrophiles et lipophiles hydrophile et lipophiles hydrophiles hydrophiles et
lipophiles
Expression des
reacutesultats
CI50 etou en mg ou μmol
eacutequivalent drsquoune moleacutecule de
reacutefeacuterence
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
en mg ou μmol
eacutequivalent Fe2+
CI50 etou en mg ou
μmol eacutequivalent drsquoune
moleacutecule de reacutefeacuterence
Avantages
tregraves facile agrave mettre en œuvre
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
cineacutetique de reacuteaction tregraves rapide
peu couteux
tregraves facile agrave mettre en
œuvre
peu couteux
facile agrave mettre en
œuvre
couteux (neacutecessiteacute drsquoun fluorimegravetre)
Utilisation dun geacuteneacuterateur de radicaux
(ROObull)
Inconveacutenients
encombrement steacuterique de moleacutecules agrave hauts poids
moleacuteculaires
interfeacuterences possibles agrave 515
nm
forte deacutependance au pH et au solvant
radical inexistant in vivo
produits de deacutegradation antioxydants
radical inexistant in vivo
pH utiliseacute non physiologique
interfeacuterences possibles agrave
595 nm
interfeacuterences avec composeacutes posseacutedant Edeglt
077V
meacutecanismes de geacuteneacuteration des ROObull non
physiologique
interfeacuterences possibles
des proteacuteines
Revue bibliographique
33
2- Geacuteneacuteraliteacutes sur la toxiciteacute
Toute substance biologiquement active est susceptible agrave fortes ou agrave faibles doses et
pour une administration prolongeacutee de produire des effets indeacutesirables voire nocifs Cest le
cas particulier des produits veacutegeacutetaux riches en meacutetabolites secondaires Leurs proprieacuteteacutes
principales sont antifongiques et antimycosiques anti-inflammatoires
Les composeacutes chimiques peuvent confeacuterer agrave la plante des proprieacuteteacutes toxiques agrave
fortes doses par voie geacuteneacuterale il apparaicirct indispensable de proceacuteder agrave la deacutetermination de
leur pouvoir toxique pour une adaptation rationnelle de la theacuterapie traditionnelle surtout
pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave observer en cas de non inteacutegriteacute au
niveau des muqueuses digestives (bouche estomac intestin etc) De mecircme leacutevaluation de
la toxiciteacute geacuteneacuterale aigueuml de lextrait est primordiale pour situer les limites de toleacuterance de
la plante pour toutes les expeacuterimentations (Ouedraogo et al 2001)
Une substance toxique est qualifieacutee comme un composeacute qui peut nuire agrave la santeacute des
organismes vivants en particulier agrave celle des ecirctres humains (Glomot 1986 Reichel et al
2004) Lrsquoeffet drsquoun toxique deacutepend toujours de lrsquoespegravece et de la dose selon leur origine on
distingue les toxiques syntheacutetiques et les toxiques naturels (toxine) provenant des
microorganismes des animaux ou des plantes (Reichel et al 2004)
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute srsquoappuie sur des eacutetudes qualitatives (non mesurables) ou
quantitatives (mesurables) Il existe plusieurs types drsquoeacutetudes permettant drsquoeacutevaluer les effets
drsquoun toxique
Les eacutetudes eacutepideacutemiologiques qui comparent plusieurs groupes drsquoindividus
Les eacutetudes expeacuterimentales in vivo qui utilisent des animaux (ex lapin rat et
souris) Certains organismes de reacuteglementation preacuteconisent lrsquoutilisation drsquoau moins
deux espegraveces animales dont lrsquoune appartenant aux rongeurs
Les eacutetudes expeacuterimentales in vitro biochimiques ou cellulaires les eacutetudes
theacuteoriques par modeacutelisation (exemple structure-activiteacute) (Lapointe et al 2004)
Concernant ces diffeacuterentes meacutethodes drsquoeacutevaluation lrsquoOMS rappelle que les donneacutees in vivo
sur les animaux sont plus indicatives de la toxiciteacute et peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des
marqueurs drsquoinnocuiteacute
Revue bibliographique
34
La toxiciteacute des plantes peut ecirctre directe (composeacutes de la plante-organe) ou indirecte via la
genegravese drsquointeractions avec les meacutedicaments allopathiques ou de phytotheacuterapie (composeacutes
de plante-meacutetabolisme drsquoautres meacutedicaments xeacutenobiotiques)
Les tests de la toxiciteacute in vivo comprennent plusieurs formes
La toxiciteacute aigueuml permet de connaicirctre la plus petite dose qui administreacutee en une
seule prise entraicircne la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le
traitement la dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993)
Elle permet de deacuteterminer la dose leacutetale 50 (DL50)
la toxiciteacute subaigueuml ou subchronique qui permet de deacuteceler les troubles de
croissance drsquoalimentation les troubles biochimiques et histologiques secondaires a
lrsquoadministration continue drsquoune substance (Diezi 1992)
la toxiciteacute chronique qui permet drsquoavoir des renseignements sur le degreacute de toxiciteacute
des meacutedicaments qui habituellement sont utiliseacutes de faccedilon reacutepeacuteteacutee par des patients
(Cheftel et al 1989)
Dans le cas de lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute subaiguumle et chronique la dureacutee drsquoadministration
de la substance expeacuterimentale deacutependra de la dureacutee drsquoutilisation clinique preacutevue La dureacutee
dans le cadre de lrsquoeacutetude de toxiciteacute variera drsquoun pays agrave lrsquoautre selon la reacuteglementation en
vigueur (OMS 2000)
Concernant la dose il est recommandeacute de preacutevoir des groupes pour au moins trois niveaux
de dose diffeacuterents une dose nrsquoengendrant aucun effet toxicologique (dose sans effet) et
une dose entrainant des effets toxicologiques Dans cette fourchette lrsquoadjonction drsquoau
moins un autre niveau de dose augmente la possibiliteacute drsquoobserver une relation dose-
reacuteaction Toutes les eacutetudes doivent inclure un groupe teacutemoin drsquoanimaux drsquoexpeacuterience chez
lequel on nrsquoadministre que le veacutehicule (OMS 2000)
Lrsquoeacutevaluation in vitro de la toxiciteacute peut ecirctre reacutealiseacutee par drsquoautres tests toxicologiques sur
des cellules animales Ces techniques ont comme avantage principal de diminuer fortement
le nombre des animaux utiliseacutes lors des expeacuteriences et des eacutetudes de la toxicologie in vivo
citant
Lrsquoeffet heacutemolytique dont la lyse des globules rouges est un pheacutenomegravene
irreacuteversible par lequel les globules rouges sont deacutetruits et libegraverent
lrsquoheacutemoglobinique
Revue bibliographique
35
Lrsquoeffet larvicide appliqueacute sur les larves drsquoArtemia salina
3- Lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet antalgique
LrsquoIASP (International Association for the Study of Pain) deacutefinie officiellement la
douleur comme suit laquo la douleur est lrsquoexpression drsquoune expeacuterience sensorielle et
eacutemotionnelle deacutesagreacuteable lieacutee agrave une leacutesion tissulaire existante ou potentielle ou deacutecrite en
terme drsquoune telle leacutesion raquo Selon Le bars et ses collaborateurs (2001) la douleur est un
processus physiologique dont le but est drsquoavertir la personne drsquoune menace de son inteacutegriteacute
physique drsquoou le terme nociception Son intensiteacute et sa dureacutee elle peut devenir un veacuteritable
syndrome retentissant sur les grandes fonctions organiques et capable agrave lui seul drsquoaggraver
lrsquoeacutetat du malade (Bounihi 2015)
La dureacutee drsquoeacutevolution permet de distinguer deux sortes de douleurs agrave savoir aigue qui est
consideacutereacutee comme un laquo signal drsquoalarme raquo et chronique qui est une laquo douleur maladie raquo
La douleur aigue est un symptocircme qui aide au diagnostic et qui geacuteneacuteralement
deacutecroit et disparait lorsqursquoun traitement est institueacute Ce type de douleur doit ecirctre
traiteacute deacutes lrsquoaperccedilu du signal drsquoalarme
La douleur chronique est une douleur qui eacutevolue et qui peut durer de 3 agrave 6 mois
LrsquoOMS a classeacute le traitement de la douleur selon lrsquointensiteacute et en associant des principes
theacuterapeutiques en 3 classes
Traitement avec les antalgiques non morphinique (paraceacutetamol acide acetyl
salicylique et keacutetoprofegravene) pour les douleurs faibles
Traitement avec les antalgiques deacuteriveacutes de la morphine (associeacute au paraceacutetamol
tramadol et nefopam) pour les douleurs modeacutereacutees
Traitement avec la morphine et lrsquooxycodone pour les douleurs intenses
Plus de 50 de meacutedicaments utiliseacutes aujourdrsquohui sont drsquoorigine naturelle Dans le domaine
des antalgiques citant la morphine qui est extraite du pavot dans le nom a donneacute naissance
agrave toute une classe drsquoanalgeacutesiques (Badiaga 2012) Les plantes restent une source tregraves
importante pour la recherche de nouvelles moleacutecules analgeacutesiques
Lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antalgique peut ecirctre reacutealiseacutee par plusieurs meacutethodes (Colot
1972) en plus du test de la plaque chauffante test tail flick et le test de torsion on cite
Revue bibliographique
36
Test de Randall et Selitto
Il consiste agrave soumettre agrave une pression mesureacutee la patte du rat qui reacuteagit par un cri lrsquoanimal
analgeacutesieacute ne reacuteagit pas
Test drsquoAmour et Smith
Il srsquoagit de focaliser un rayon lumineux calorifique sur la queue de la souris en moins de 6
secondes la souris deacuteplace la queue Lrsquoanimal est consideacutereacute analgeacutesieacute srsquoil nrsquoy a pas de
reacuteponse au bout de 12 secondes
Test de Charpentier
La base de la queue du rat est stimuleacutee eacutelectriquement lrsquoanimal preacutesente une reacuteaction de
fuite avec cris Le seuil drsquointensiteacute de courant eacutelectrique deacuteterminant le cri et sa variation
apregraves analgeacutesie sont eacutevalueacutes
4- Geacuteneacuteraliteacutes et meacutethode drsquoeacutevaluation de la cicatrisation des plaies
4-1 Deacutefinition
La cicatrisation est lensemble des pheacutenomegravenes physiologiques naturels aboutissant
agrave partir dune plaie agrave la restauration de la structure cutaneacutee De cette maniegravere les tissus
humains et animaux sont capables de reacuteparer des leacutesions localiseacutees par des processus de
reacuteparation et de reacutegeacuteneacuteration qui leurs sont propres
La reacuteparation des leacutesions est un alignement complexe de diffeacuterents processus dynamiques
qui ne sont pas encore complegravetement compris Ce pheacutenomegravene naturel inclus plusieurs
aspects et eacuteveacutenements moleacuteculaire et cellulaire (Ferraq 2007)
4-2 Les diffeacuterentes phases de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene continu comportant trois phases phase
inflammatoire suivie des phases de reacuteparation (phase prolifeacuterative) et de maturation (phase
de remodelage) Toutes les phases sont interdeacutependantes et se chevauchent sans seacuteparation
stricte dans le temps (Figure 9) Les caracteacuteristiques de dureacutee et drsquointensiteacute pour chaque
phase varient en fonction de la plaie et du mode de cicatrisation (Kumar et al 2007 Guo
amp DiPietro 2010)
Revue bibliographique
37
Fig 9 Ordre seacutequentiel des phases de la cicatrisation (Kumar et al 2007)
4-2-1 Phase exsudative
Fig 10 Lors drsquoune blessure
Au moment de la blessure (figure 10) le tissu est lyseacute et les plaquettes adhegraverent au collagegravene et
libegraverent des facteurs de coagulation le PDGF et le TGF-szlig pour initier le processus de reacuteparation
(Diegelmann 2004)
A- Reacuteaction vasculaire
Au moment de la blessure la rupture de vaisseaux sanguins entraicircne lrsquoeacutepanchement
des constituants du sang (figure 11) La coagulation traduit la reacuteaction cellulaire immeacutediate
agrave lrsquoagression du teacutegument (Boykin 1996) Cette reacuteaction est amorceacutee par lrsquoactivation de
Revue bibliographique
38
lrsquoagreacutegation des plaquettes et par la libeacuteration de substances vasoconstrictrices qui
oblitegraverent les vaisseaux sanguins par la formation drsquoun caillot stable Le caillot reacutetablit
lrsquoheacutemostase et forme une matrice extracellulaire dans le lit de la plaie cest-agrave-dire une
structure pour la migration des cellules (Singer amp Clarck 1999) Les plaquettes libegraverent
eacutegalement plusieurs meacutediateurs laquo cytokines raquo ou facteurs de croissances facteurs de
croissance drsquoorigine plaquettaire (platelet derived growth factor ou PDGF) facteur de
croissance transformant alpha (transforming growth factor alpha ou TGFα) facteur de
croissance transformant becircta (TGFβ) Ces facteurs attirent et activent les macrophages et
les fibroblastes (Singer amp Clarck 1999)
Fig 11 Phase vasculaire
Degraves le premier jour apregraves une blessure les neutrophiles se fixent aux cellules endotheacuteliales de la
paroi des vaisseaux autour de la plaie puis elles changent de forme pour passer agrave travers les
jonctions cellulaires (diapeacutedegravese) et migrent vers le site de la plaie (chimiotactisme) Cest le deacutebut
de la phase inflammatoire (Diegelmann 2004)
B- Reacuteaction inflammatoire
Lrsquoinflammation commence en geacuteneacuteral degraves lrsquoagression initiale et dure jusqursquoau
quatriegraveme jour de la cicatrisation environ Les signes cardinaux de lrsquoinflammation aigueuml
sont bien connus chaleur rougeur œdegraveme et douleur La perte de fonction constitue un
autre signe de cette phase (Calvin 1998)
Revue bibliographique
39
Fig 12 Phase inflammatoire
La phase inflammatoire se poursuit (figure 12) les macrophages tissulaires deviennent actifs et se
deacuteplacent dans le site de la leacutesion et se transforment en macrophages tregraves active Ces cellules
hautement phagocytaires libegraverent eacutegalement le PDGF et le TGF-szlig agrave fin de recruter des fibroblastes
sur le site et de commencer ainsi la phase prolifeacuterative (Diegelmann 2004)
4-2-2 Phase prolifeacuterative
La seconde eacutetape du processus cicatriciel conduit agrave la formation du tissu de
granulation Elle permet ainsi la reacuteparation dermique et eacutepidermique gracircce agrave la synthegravese de
collagegravene et agrave la prolifeacuteration de keacuteratinocytes de fibroblastes et de neacuteovaisseaux (Allas
1997 Maurin 2005)
A- Reacuteparation dermique
La phase inflammatoire gracircce notamment aux nombreux meacutediateurs chimiques
libeacutereacutes aboutit agrave lrsquoactivation des fibroblastes preacutesents agrave lrsquoeacutetat quiescent au niveau des
berges et du lit de la plaie Ces fibroblastes activeacutes migrent alors vers le foyer
inflammatoire ougrave ils sont retrouveacutes agrave partir du troisiegraveme jour Ils assurent essentiellement
agrave partir du cinquiegraveme jour la synthegravese de collagegravene de glycoproteacuteines et de
proteacuteoglycannes Ces composeacutes forment ainsi la nouvelle matrice extra-cellulaire qui
succegravede la matrice provisoire formeacutee lors de la phase exsudative (Allas 1997 Hatz 1994
Vandenbussche 1983)
Revue bibliographique
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B- Angiogeacutenegravese
Parallegravelement agrave la prolifeacuteration cellulaire lrsquoangiogeacutenegravese se deacuteveloppe au site de la
plaie agrave partir du cinquiegraveme jour La formation de nouveaux vaisseaux sanguins se deacuteroule
en plusieurs eacutetapes chacune reacutegie par des facteurs de croissance essentiellement drsquoorigine
plaquettaire et macrophagique La neacuteovascularisation reacutegresse lorsque les besoins en
oxygegravene sont moins intenses notamment lorsque la synthegravese de collagegravene et de matrice
extra-cellulaire diminue (Allas 1997 Maurin 2005 Stashak 1984)
C- Reacuteparation eacutepidermique
La reacuteeacutepitheacutelialisation assure la couverture finale de la plaie par un eacutepitheacutelium
stratifieacute et keacuteratiniseacute formeacute agrave partir des cellules eacutepidermiques provenant des berges du
foyer cicatriciel voir des follicules pileux (Allas 1997 Dereure 2001 Maurin 2005)
4-2-3 Phase de contraction et remodelage
Il srsquoagit drsquoun meacutecanisme de reacuteduction de la taille de la plaie par le mouvement
centripegravete du tissu cutaneacute entourant la plaie Crsquoest un processus dans lequel les fibroblastes
joueraient un rocircle du premier plan se produisant sept jours apregraves la blessure et son activiteacute
atteint un pic apregraves deux semaines (Calvin 1998)
Apregraves lrsquoarrecirct de la transformation fibroblastique et de lrsquoangiogenegravese et longtemps
apregraves la reacuteeacutepitheacutelialisation une longue phase de remodelage de la cicatrice se fait par
synthegravese de collagegravene qui se poursuit essentiellement par remplacement du collagegravene de
type III par du collagegravene de type I Il srsquoagit drsquoune lente eacutevolution vers lrsquoeacutequilibre entre
synthegravese et deacutegradation surtout par les meacutetalloproteacuteases une rupture de cet eacutequilibre
entraicircne des vices de cicatrisation (cicatrice hypertrophique cheacuteloiumlde cicatrice atrophique)
entre autres la collageacutenase 4 et la geacutelatinase Cette phase finale de la cicatrisation se
poursuit pendant des mois voire des anneacutees apregraves la cicatrisation de la plaie (Coulibaly
2007 Moulin 2001)
Revue bibliographique
41
Fig 13 Phase de remodelage
La phase de remodelage (figure 13) est caracteacuteriseacutee par la synthegravese continue et la
deacutegradation des composants de la matrice extracellulaire en tentant deacutetablir un nouvel eacutequilibre
(Diegelmann 2004)
4-3 Meacutethodes drsquoeacutetude de la cicatrisation
La cicatrisation est un pheacutenomegravene tregraves complexe dont les eacutetudes ont eacuteteacute effectueacutees
auparavant sur des plaies traumatiques cest-agrave-dire issues des accidents (coupures et
contusion) ou des pathologies (particuliegraverement dans les cas descarres dulcegravere de jambe
et lulcegravere diabeacutetique) ou bien des interventions chirurgicales Ces leacutesions preacutesentent des
origines diverses avec des paramegravetres non controcircleacutes ne permettant pas une bonne
comparaison entre les diffeacuterentes leacutesions
Comme solution agrave ces problegravemes des eacutetudes de cicatrisations sont actuellement reacutealiseacutees
par induction expeacuterimentale des leacutesions cutaneacutees plus controcircleacutees Ces derniegraveres sont
induites en utilisant plusieurs modegraveles classeacutes en trois groupes
4-3-1 Modegraveles physiques
Principalement utiliseacute lors des preacutelegravevements des greffons de peau (derme et
eacutepiderme) le rasoir agrave dermatome permet de reacutegler la profondeur du preacutelegravevement Cette
proprieacuteteacute est aussi exploiteacutee dans les eacutetudes de cicatrisation et reacuteparation tissulaire de peau
ce modegravele permet davoir une profondeur assez uniforme (Yamamoto 2006) Il existe
drsquoautres modegraveles physiques tel que les brucirclures par immersion dans une eau chauffeacutee
Revue bibliographique
42
(90deg10s) sont utiliseacutes comme modegravele deacutetude de brucirclure thermique Cependant cette
derniegravere peut varier selon diffeacuterents facteurs tel que le temps drsquoapplication et la pression
exerceacutee Les brucirclures thermiques eacutetudieacutees sont geacuteneacuteralement du 2egraveme
degreacute
Les brucirclures sont des leacutesions causeacutees par la chaleur excessive lrsquoeacutelectriciteacute
radioactiviteacute ou des agents corrosifs qui deacutenaturent les proteacuteines dans les cellules cutaneacutees
Les brucirclures suppriment certaines des fonctions homeacuteostatiques majeurs de la peau
notamment la thermoreacutegulation la protection contre les microorganismes et la
deacuteshydratation (Tortora amp Derrickson 2007)
On distigue 3 classes selon leur graviteacute
Brucirclures du premier degreacute
Atteignent uniquement lrsquoeacutepiderme Elles causent une douleur modeacutereacutee et un
eacuterythegraveme (rougeur) mais nrsquoentrainent pas la formation de cloques Les fonctions de la peau
restent intactes En cas de brucirclure premier degreacute on peut limiter la douleur et les leacutesions en
appliquant immeacutediatement de lrsquoeau froide sur la zone toucheacutee La gueacuterison prend
geacuteneacuteralement de trois agrave six jours et peut srsquoaccompagner de desquamation Les coups de
soleil leacutegers sont des brucirclures du premier degreacute (Tortora et Derrickson 2007 Marieb
2008)
Brucirclures du deuxiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme et une partie du derme Elles suppriment partiellement les
fonctions de la peau et entrainent une rougeur la formation de cloques un œdegraveme et de la
douleur La formation de cloques est due agrave lrsquoaccumulation de liquide tissulaire qui srsquoinsegravere
entre lrsquoeacutepiderme et le derme En lrsquoabsence drsquoinfection ce genre de brucirclure gueacuterit
habituellement en trois ou quatre semaines mais il peut laisser des cicatrices (Tortora amp
Derrickson 2007 Marieb 2008)
Brucirclures du troisiegraveme degreacute
Deacutetruisent lrsquoeacutepiderme le derme et le fascia superficiel Elles suppriment en outre la
plus part des fonctions de la peau La couleur des leacutesions peu aller du blanc marbreacute agrave
lrsquoacajou dans certains cas ces brucirclures ont un aspect sec et carboniseacute Elles causent un
œdegraveme consideacuterable La destruction des terminaisons nerveuses supprime les sensations
dans la reacutegion atteinte (Tortora amp Derrickson 2007 Marieb 2008)
Revue bibliographique
43
4-3-2 Modegraveles chimiques
Linduction de leacutesions chimiques est reacutealiseacutee en grande partie pour reproduire des
cas accidentels par exemple en utilisant lacide chlorhydrique (Cavallini amp Casati 2004)
afin deacutetudier la phase inflammatoire et de deacutevelopper des traitements adeacutequats
4-3-3 Eacutetudes in vitro
La contraction des plaies au cours de leurs reacuteparations est difficilement
appreacuteciable agrave partir de lagrave la peau reconstruite est un bon modegravele deacutetude (Laplante et al
2001) En effet le derme eacutequivalent et la peau reconstruite preacutesentent lavantage davoir des
caracteacuteristiques proches de la peau in vivo et de permettre lobservation ainsi que leacutetude
des pheacutenomegravenes qui se deacuteroulent lors de la cicatrisation Ainsi lobservation de la
reacuteeacutepitheacutelialisation sur le modegravele de la peau reconstruite est plus appreacuteciable que sur le
modegravele in vivo Dans ce dernier cas lobservation est rendue difficile par la formation de la
croucircte sur la plaie qui saccompagne dune contraction importante du derme
Dans la grande majoriteacute de ces eacutetudes les objectifs sont leacutevaluation et lestimation
de la cineacutetique de cicatrisation (vitesse) et les possibiliteacutes de lameacuteliorer par diffeacuterents
moyens (moleacutecules actives des mateacuteriaux de substitution particuliegraverement dans le cas des
grands brucircleacutes)
Les eacutetudes de la cicatrisation cutaneacutee passe par deux phases la premiegravere eacutetant
linduction et le controcircle des leacutesions suivie dune phase deacutevaluation et de suivi de la
cineacutetique de ce pheacutenomegravene Dans un premier temps le suivi est reacutealiseacute par simple
observation clinique et peut ecirctre compleacuteter par des preacutelegravevements histologiques
La cicatrisation peut ecirctre eacutevalueacutee par
Mesure directe des dimensions de la plaie agrave la regravegle une largeur et longueur
(Vowden 1994)
Lutilisation de calques transparents permet le releveacute du contour sur du papier
millimeacutetreacute (Bohannon amp Pfaller 1983)
Mesure du volume des plaies par un moulage au moyen dune gomme siliconeacutee
(Zahouani 1992)
Cependant Ces techniques preacutesentent le mecircme inconveacutenient qui est le contact direct avec
la plaie mais ccedila reste un outil tregraves utiliseacute pour lrsquoeacutevaluation de la cicatrisation
Mateacuteriel amp Meacutethodes
44
I- Mateacuteriel veacutegeacutetal
La plante Cleome arabica a eacuteteacute reacutecolteacutee agrave maturiteacute dans la reacutegion de Biskra
(lieu dit El outaya) en avril 2011 Lrsquoidentification eacutetait faite par Professeur Hocine
Laouer (LVRBN Universiteacute de Ferhat Abbas Seacutetif)
Le voucher speacutecimen ndegCA1101 a eacuteteacute conserveacute dans lrsquoherbier du laboratoire
de pharmaco-toxicologie institut National des sciences veacuteteacuterinaires Universiteacute des
fregraveres Mentouri Constantine 1
II- Meacutethodes
Chapitre 1 Caracteacuterisation phytochimique
1- Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Une extraction eacutetait faite par lrsquoultrason de marque Fisher scientific (FB15046)
en utilisant de lrsquoeacutethanol agrave 70 agrave tempeacuterature ambiante La teneur en substances
extractibles par lrsquoeacutethanol est eacutevalueacutee par la formule suivante
SE Et-OH = M2 X 100
M1
SE Et-OH Teneur en substance extractible par Ethanol
M1 poids de lrsquoextrait sec
M2 poids initial de lrsquoeacutechantillon
2- Meacutethode drsquoextraction
Avant de proceacuteder agrave lrsquoextraction le mateacuteriel veacutegeacutetal est broyeacute apregraves seacutechage agrave
lrsquoair libre et agrave lrsquoobscuriteacute Le broyage eacutetait reacutealiseacute agrave lrsquoaide drsquoun broyeur (type Gulatti
MFC) qui tourne agrave vitesse de 1000 trmin et eacutequipeacute drsquoun tamis de maille de 085 mm
(80 mesh) La poudre ainsi obtenue est conserveacutee dans un bocal en verre hermeacutetique agrave
une tempeacuterature ambiante
Mateacuteriel amp Meacutethodes
45
La meacutethode drsquoextraction est faite selon le protocole de Laghari et al (2013)
Pratiquement le mateacuteriel veacutegeacutetal seacutecheacute et broyeacute est mis dans un beacutecher contenant une
solution hydroalcoolique agrave 70 drsquoeacutethanol avec un rapport de 15 (MasseVolume)
Lrsquoextraction est reacutealiseacutee dans une cuve agrave lrsquoultrason pendant deux heures (2H) avec
une freacutequence de 20 kHZ Elle est refaite trois fois avec renouvellement du solvant agrave
chaque fois La solution ainsi obtenue est filtreacutee puis eacutevaporeacutee dans lrsquoeacutevaporateur
rotatif (Buchi) agrave 45degC
Les extraits obtenus sont peseacutes ensuite conserveacutes agrave tempeacuterature - 4degC agrave lrsquoabri de la
lumiegravere jusqursquoagrave leur utilisation
3- Screening et reacuteactions chimiques
Les diffeacuterentes reacuteactions chimiques ont pour objectif de caracteacuteriser et
rechercher les principaux groupes et familles chimiques dans les diffeacuterentes parties
graines feuille racine ainsi que lrsquoextrait de la partie aeacuterienne
Cette caracteacuterisation chimique preacuteliminaire se fait dans des tubes agrave essais en
utilisant diffeacuterents protocoles avec plusieurs produits chimiques
Les reacutesultats qualitatifs sont classeacutes en
Reacuteaction tregraves positive +++ Preacutesence confirmeacutee
Reacuteaction positive ++ preacutesence modeacutereacutee
Reacuteaction plus au moins positive + preacutesence en tant que trace
Reacuteaction neacutegative - absence
Test des Alcaloiumldes
Ce test est baseacute sur le pheacutenomegravene de preacutecipitation avec un reacuteactif speacutecifique
laquo le Dragendorff raquo qui est consideacutereacute comme reacuteveacutelateur des alcaloiumldes (Dohou et al
2003)
Dans des tubes agrave essai 5 ml de lrsquoextrait sont introduits en ajoutant 2 ml drsquoHCl
et 1 ml de reacuteactif de Dragendorff La formation drsquoun preacutecipiteacute rouge ou orange
indique la preacutesence des alcaloiumldes dans lrsquoextrait
Mateacuteriel amp Meacutethodes
46
Test des Flavonoiumldes
Le test consiste agrave ajouter agrave 1ml drsquoextrait agrave une solution de NaOH et laisser agir
3 minutes Lrsquoapparition drsquoune coloration jaune intense implique la preacutesence des
flavonoiumldes (Karumi et al 2004) Lrsquoajout de quelques gouttes drsquoune solution acide
dilueacutee permet la persistance de la coloration
Test des Tanins
Dans un tube agrave essai 2ml de chaque extrait est ajouteacute au trichlorure de fer
(FeCl3) agrave 2 Ce test permet de deacutetecter la preacutesence ou lrsquoabsence des tannins
Lrsquoapparition drsquoune couleur brune noir confirme la preacutesence des tannins galliques
(tannins hydrolysables) et la couleur bleu verdacirctre pour la preacutesence des tannins
cateacutechiques (ou tannins condenseacutes) (Doh et al 2003)
Test des Coumarines
Dans un tube agrave essai 5ml de chaque extrait est ajouteacute agrave 05ml de NH4OH agrave
25 La preacutesence des coumarines est reacuteveacuteleacutee par lrsquoobservation de la fluorescence sous
une lampe UV agrave 366 nm
Une fluorescence intense dans le tube dont lrsquoammoniaque a eacuteteacute ajouteacute indique
la preacutesence des coumarines (Rizk 1982)
Test des Saponines
La deacutetection des saponines est reacutealiseacutee en ajoutant un peu drsquoeau agrave 1 ml de
lrsquoextrait aqueux Par la suite cette solution est fortement agiteacutee Apregraves 15 min de
repos
La deacutetection des saponines se traduit par la persistance drsquoune mousse drsquoau
moins 1 cm apregraves les 15 minutes (Dohou et al 2003 Koffi et al 2009)
Test des Terpenoiumldes
Ce test consiste agrave ajouter 2ml de CHCl3 1ml drsquoanhydre aceacutetique et 1 ml
drsquoacide sulfurique concentreacute agrave chaque extrait
La preacutesence des terpenoides est confirmeacutee par lrsquoapparition drsquoune coloration
violette (Koffi et al 2009)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
47
Test des Steacuteroiumldes
Les steacuteroiumldes sont mis en eacutevidence par dissoudre chaque extrait dans 1 ml de
chloroforme et ajouter 1 ml drsquoacide sulfurique concentreacute Le test positif est reacuteveacuteleacute par
lrsquoapparition drsquoune couche supeacuterieure de couleur rouge (Trease amp Evans 1978)
4- Dosage spectrophotomeacutetrique
4-1 Dosage des pheacutenols totaux
Lrsquoestimation quantitative exprimeacutee en mg drsquoacide gallique est reacutealiseacutee par la
meacutethode de Folin-Ciocalteu (Li et al 2007)
Dans un tube agrave essai un volume de 200 μl de chaque extrait est ajouteacute agrave 15 ml
du reacuteactif Folin Ciocalteu (dilueacute dix fois) Apres 5 minutes 15 ml de Carbonate de
sodium (Na2CO3) agrave 5 est ajouteacute agrave la solution preacuteceacutedente
Lrsquoabsorbance est lue au spectrophotomegravetre agrave une longueur drsquoonde de 750 nm
apregraves deux heures dans lrsquoobscuriteacute et la concentration des pheacutenols totaux est estimeacutee
agrave partir drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage eacutetablie avec de lrsquoacide gallique (0-100microg ml)
Lrsquoeacutequation de reacutegression deacuteduite de la courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique
permet de deacuteterminer la teneur en pheacutenols totaux exprimeacutee en milligramme eacutequivalent
drsquoacide gallique par gramme drsquoextrait (mg EAG g drsquoextrait)
4- 2 Estimation quantitative des flavonoiumldes
Les flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme une importante classe des polypheacutenols
et vue la richesse des plantes en ces moleacutecules leur teneur est estimeacutee dans les
graines feuilles et racine de Cleome arabica
Lrsquoapplication de la meacutethode du trichlorure drsquoaluminium (AlCl3) (Bahorun et al
1996) est freacutequemment utiliseacutee pour estimer la teneur des flavonoiumldes dans les extraits
des diffeacuterentes parties de la plante
Le protocole consiste agrave mettre dans un tube agrave essai 1ml de chaque extrait (avec
dilution convenable) puis 1ml drsquoune solution drsquoAlCl3 (2 dans le meacutethanol) a eacuteteacute
ajouteacute Apregraves 10 minutes de reacuteaction lrsquoabsorbance est lue agrave une longueur drsquoonde de
430nm
Mateacuteriel amp Meacutethodes
48
La courbe drsquoeacutetalonnage des flavonoiumldes est effectueacutee en utilisant la Rutine agrave une
concentration allant de 0 agrave 100 microgml La quantiteacute des flavonoiumldes dans chaque extrait
est deacutetermineacutee suite agrave lrsquoeacutequation de reacutegression lineacuteaire deacuteduite agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage et exprimeacutee en milligramme eacutequivalent de rutine par gramme drsquoextrait
(mg ERg extrait)
4-3 Dosage des tannins condenseacutes (proanthocyanidins)
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des proanthocyanidines a eacuteteacute proposeacutee
par Vermerris amp Nicholson (2008)
La meacutethode est baseacutee sur le meacutelange butanolHCl Un volume de 250microl de
chaque extrait a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25 ml dune solution drsquoacide de sulfate ferreux
(77mg de sulfate dammonium ferrique Fe2(SO4)3 dissous dans 500 ml de (32 n-
butanol HCl) Apregraves incubation agrave 95degC pendant 50 minutes labsorbance a eacuteteacute
mesureacutee agrave 550nm La teneur en Proanthocyanidine a eacuteteacute calculeacutee selon la formule
suivante
A550nm x DF x MW
T =
(ε l)
DF est le facteur de dilution
MW la masse moleacuteculaire de la cyanuration (287gmol)
ε le coefficient dextinction moleacuteculaire (34700 lmolcm)
Les proanthocyanidines ont eacuteteacute exprimeacutees en mg de cyanidine eacutequivalent g drsquoextrait
5- Analyse par chromatographie liquide a haute performance (HPLCDADMS)
Les extraits des feuilles des graines et des racines de C arabica ssp arabica
ont eacuteteacute analyseacutes selon le protocole de Martins et ses collaborateurs (2016) agrave laide
dun HPLC Hewlett-Packard 1100 (Hewlett-Packard 1100 Agilent Technologies
Santa Clara CA US) avec une pompe quaternaire et un deacutetecteur de rayon diode
(DAD) coupleacute agrave une station HP Chem (Rev A0504) de traitement de donneacutees Une
colonne Waters Spherisorb S3 ODS-2C18 (150 mm x 46 mm x 3 μm) thermostateacutee agrave
35deg C a eacuteteacute utiliseacutee avec un volume dinjection eacutegal agrave 100 μL
Mateacuteriel amp Meacutethodes
49
Lrsquoeacuteluant utiliseacute est composeacute de (A) 01 dacide formique dans leau (B)
laceacutetonitrile Le gradient deacutelution utiliseacute est de 15 B pendant 5 min 15 agrave 20 B
pendant 5 min 20-25 B en 10 min 25-35 B en 10 min 35-50 B pendant 10
minutes et Reacuteeacutequilibrage de la colonne en utilisant un deacutebit de 05 ml min
Une double deacutetection en ligne a eacuteteacute effectueacutee dans la DAD en utilisant 280 et
370 nm Le spectromegravetre de masse (MS) connecteacute au systegraveme HPLC via la sortie de la
cellule DAD
La deacutetection MS a eacuteteacute effectueacutee dans un API 3200 Qtrap (Applied Biosystems
Darmstadt Allemagne) eacutequipeacute dune source ESI et dun analyseur de masse triple
quadripocircle-iontrap controcircleacute par le logiciel Analyst 51 Lair de qualiteacute zeacutero servait de
gaz neacutebuliseur (30 psi) et le gaz turbo pour le seacutechage par solvant (400 degC 40 psi)
Lazote servait de rideau (20 psi) et de gaz de collision (moyen)
Les quadrupoles ont eacuteteacute deacutefinis dans une reacutesolution deacutefinie La tension de
pulveacuterisation ionique a eacuteteacute reacutegleacutee agrave 4500 V en mode neacutegatif Le deacutetecteur MS a eacuteteacute
programmeacute pour lenregistrement en deux modes conseacutecutifs analyse de la MS
(EMS) et de lanalyse de lion produit (EPI)
Lrsquoanalyse de la masse a eacuteteacute utiliseacutee pour montrer les spectres de balayage
complets afin dobtenir un aperccedilu de tous les ions dans leacutechantillon
Les paramegravetres utiliseacutes eacutetaient potentiel de deacuteploiement (DP) - 450 V
potentiel dentreacutee (EP) -6 V eacutenergie de collision (CE) -10 V Le mode EPI a eacuteteacute
effectueacute afin dobtenir le motif de fragmentation de lion (s) parent (s) dans le spectre
preacuteceacutedent en suivant les paramegravetres DP - 50 V EP - 6 V CE - 25 V et propagation
de leacutenergie de collision (CES) 0 V Les spectres ont eacuteteacute enregistreacutes en mode ion
neacutegatif entre mz 100 et 1000
Les composeacutes pheacutenoliques ont eacuteteacute identifieacutes en comparant leur temps de
reacutetention (Tr) les spectres UV-VIS et les spectres de masse avec ceux obtenus agrave partir
des composeacutes standards lorsquils sont disponibles Dans le cas contraire les
composeacutes ont eacuteteacute identifieacutes provisoirement en comparant linformation obtenue avec
les donneacutees disponibles rapporteacutees dans la litteacuterature
Pour une analyse quantitative une courbe deacutetalonnage pour chaque composeacute
pheacutenolique disponible a eacuteteacute construite en fonction du signal UV
Mateacuteriel amp Meacutethodes
50
Pour les composeacutes pheacutenoliques identifieacutes pour lesquels le standard commercial
neacutetait pas disponible la quantification a eacuteteacute effectueacutee par la courbe deacutetalonnage dun
autre composeacute agrave partir du mecircme groupe pheacutenolique Les reacutesultats ont eacuteteacute exprimeacutes en
mg par g dextrait sec Tableau 9 illustre les standards utiliseacutes
Tab 9 Les standards et leurs courbes drsquoeacutetalonnage
Standards Courbe drsquoeacutetalonnage
Catechine y=13492x+32987 R2= 0999
acide p-Hydroxybenzoique y= 28667x+34798 R2= 0998
acide Ferulique y=52536x+23382 R2= 0999
acide p-coumarique y=70609x+12281 R2= 0999
acide Sinapique y=27042x+62292 R2= 0999
acide Vanillique y=39449x+42386 R2= 0998
acide Gallique y=3652x -38923 R2= 0999
acide caffeique y=359x+4884 R2= 0997
apigenine-6-C-glucoside y=17952x+11683 R2= 0999
Kaempferol 3-rutinoside y=18294x+96644 R2= 0999
Quercetine 3-glucoside y=33636x+35806 R2= 0998
Kaempferol 3-glucoside y=23633x+70006 R2= 1
Isorhamentine 3-glucoside y=21826x-098 R2= 1
Isorhamentine 3-rutinoside y=28412x+67055 R2= 0999
Quercetine -3-rutinoside y=28087x+37373 R2= 0998
Chapitre 2 Activiteacutes biologiques
1- Activiteacutes antioxydantes
Il nrsquoexiste pas agrave lrsquoheure actuelle de meacutethode universelle unique et fiable
traduisant la capaciteacute antioxydante En effet pour juger lrsquoeffet antioxydant global
drsquoun extrait drsquoune ressource veacutegeacutetale ou alimentaire lrsquoutilisation de plusieurs tests
drsquoactiviteacute est neacutecessaire (Cao amp Prior 1998)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
51
1-1 Test antioxydant DPPH
Cette activiteacute est eacutevalueacutee par la meacutethode de pieacutegeage du radical libre DPPH
(figure 14) qui est un radical libre stable de forme syntheacutetique
N N NO2
NO2
NO2
Fig 14 La formule du DPPH
Lrsquoutilisation de ce radical permet lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de
nombreux composeacutes y compris les meacutetabolites secondaires La premiegravere eacutetape de la
reacuteaction est la capture drsquoun atome drsquohydrogegravene du composeacute pheacutenolique par le radical
DPPH pour donner du dipheacutenylpicrylhydrazine et un radical pheacutenoxy (figure 15)
Cette eacutetape est la premiegravere drsquoune seacuterie de reacuteactions telles que des
fragmentations additions ou autres qui peuvent eacuteventuellement influencer les reacutesultats
obtenus notamment les cineacutetiques de la capture du DPPH par le composeacute testeacute
(Chaabi 2008)
N N NO2
NO2
NO2
+
OH
N N NO2
NO2
NO2
+
O
DPPH pheacutenol
H
dipheacutenylpicryhydrazine pheacutenoxy
Fig 15 Reacuteaction du radical DPPH avec un pheacutenol
Mateacuteriel amp Meacutethodes
52
Lrsquoutilisation du DPPH preacutesente plusieurs avantages
Il forme un spectre caracteacuteristique et facile agrave deacutetecter
Il est stable au cours du temps
Il est compatible avec tous les solvants utiliseacutes
Le pieacutegeage du radical DPPH se traduit par le changement de la couleur de la
solution laquo violet raquo agrave une couleur laquo jaune raquo ce qui permet de suivre la deacutecoloration agrave
une longueur drsquoonde de 517nm (Chaabi 2008)
Le protocole suivi est celui de Braho et al (2013) ougrave lrsquoactiviteacute antioxydante
des extraits eacutethanoliques des feuilles graines et racines eacutetait eacutevalueacutee en prenant 2 ml
de chaque extrait agrave une concentration eacutegal agrave 1mgml (agrave partir de la quelle une gamme
de concentration allant de 1mgml jusqursquoagrave 01mgml) ajouteacute agrave 2 ml de la solution
DPPH (00394gl)
Lrsquoacide ascorbique eacutetait utiliseacute comme un standard positif Toutes les
expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee par un spectrophotomegravetre agrave 517 nm apregraves 30 min
drsquoincubation dans lobscuriteacute agrave tempeacuterature ambiante Lrsquoactiviteacute antiradicalaire est
estimeacutee selon lrsquoeacutequation suivante
drsquoactiviteacute antioxydante = [(Abs controcircle - Abs eacutechantillon)Abs controcircle] times100
La valeur drsquoIC 50 a eacuteteacute deacuteduite agrave partir des reacutesultats obtenus dont 50 de
radicaux libres ont eacuteteacute pieacutegeacutes Une faible valeur de lrsquoIC50 indique une forte capaciteacute
agrave neutraliser le radical libre DPPH
1-2 Test antioxydant de molybdate
La meacutethode de phosphomolybdate est baseacutee sur la reacuteduction de molybdegravene par
les antioxydants non enzymatiques ce qui entraicircne la formation dun complexe de
molybdegravene vert (Sudha et al 2011)
Un volume de 01 ml de chaque extrait eacutethanolique (feuilles graines et
racines) a eacuteteacute ajouteacute agrave 1 ml dune solution contenant (06 M acide sulfirique
phosphate de sodium 28 mM et 4 mM de molybdate dammonium)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
53
Tous les tubes ont eacuteteacute bien fermeacutes et incubeacute agrave 90degC pendant 90 min
Apregraves incubation et refroidissement labsorbance a eacuteteacute lue agrave 695nm contre un blanc
Lacide ascorbique a eacuteteacute utiliseacute comme un controcircle positif et les reacutesultats sont
exprimeacutes en eacutequivalent dacide gallique mg par gramme dextrait (mg EAGg
drsquoextrait) Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees 3 fois
1-3 Test du pouvoir reacuteducteur FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Cette technique a eacuteteacute deacuteveloppeacutee pour mesurer la capaciteacute du plasma agrave reacuteduire
le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe
2+) En effet le Fe
3+ participe agrave la formation du
radical hydroxyle par la reacuteaction de Fenton Le Fe2+ agrave un pH faible forme un
complexe avec la 246-tris(2-pyridyl)-135-s-triazine (TPTZ) de couleur bleue qui a
une absorption maximale agrave 594 nm
Ainsi la formation de ce complexe indiquera un pouvoir reacuteducteur qui
deacutetermine la capaciteacute drsquoun composeacute agrave se comporter comme un antioxydant Les
valeurs sont obtenues sont compareacutees avec lrsquoabsorbance drsquoun teacutemoin qui est lrsquoacide
ascorbique usuellement (Benzie amp Strain 1996 Pulido 2000)
Le pouvoir reacuteducteur de lextrait des feuilles des graines et les racines a eacuteteacute
deacutetermineacute selon le protocole de Amarowicz et al (2010)
Un volume de 1 ml de chaque extrait dissous dans de leau deacutesioniseacutee a eacuteteacute
ajouteacute agrave 25 ml de tampon phosphate (pH 66) et 2 ml de ferricyanure de potassium
(1) Apregraves 20 min agrave 50 deg C un volume de 25 ml dacide trichloroaceacutetique (10) a
eacuteteacute ajouteacute au meacutelange et centrifugeacute pendant 10 min agrave 3000Tr min Un volume de
25ml de la couche supeacuterieure (surnageant) a eacuteteacute meacutelangeacute avec 25ml deau deacutesioniseacutee
et 05 ml de (01) de solution de chlorure ferrique (FeCl3)
Labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 700 nm dont labsorbance la plus eacuteleveacutee indique
le pouvoir reacuteducteur le plus important Toutes les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutepeacuteteacutees en
triple et les valeurs de lrsquoIC50 ont eacuteteacute calculeacutees agrave partir de labsorbance graphique
Mateacuteriel amp Meacutethodes
54
2- Activiteacutes Pharmacologiques et Toxicologique
Les animaux utiliseacutes dans lrsquoexpeacuterimentation sont soit des rats albinos ou les
lapins de sexe male Les conditions de vie eacutetaient les mecircmes pour toutes les activiteacutes
et qui sont mentionneacutees ci-dessous
Les rats
Les rats macircles Albinos de la souche Wistar proviennent de lrsquoInstitut Pasteur
drsquoAlger pesant entre 100 et 300g
Lrsquoeacutelevage a eacuteteacute effectueacute dans le laboratoire de la Pharmacologie et Toxicologie agrave
Universiteacute de constantine1 avec un cycle photopeacuteriodique naturel La tempeacuterature
dans le laboratoire est 20 plusmn 1degC
Les animaux sont logeacutes dans des cages drsquoaluminium chacun porte 4 animaux
avec un accegraves libre agrave la nourriture et agrave lrsquoeau La litiegravere utiliseacutee est la sciure renouveleacutee
trois fois par semaine pour assurer le bon eacutetat hygieacutenique des animaux
Les lapins
Des lapins macircles acircgeacutes de 2 agrave 3 mois et pesant 15 agrave 19 Kg ont eacuteteacute utiliseacutes dans
cette eacutetude Ces animaux ont eacuteteacute fournis par une ferme deacutelevage de la ville de
Constantine
Ils sont gardeacutes agrave lanimalerie de lUniversiteacute pendant au moins une semaine avant
lexpeacuterience dans des cages individuelles La nourriture et leau ont eacuteteacute fournis ad
libitum et le cycle lumiegravere-obscuriteacute eacutetait de 12 heures avec une tempeacuterature de 22 plusmn
2 deg C et une humiditeacute relative de 60
Toutes les proceacutedures expeacuterimentales adopteacutees eacutetaient en conformiteacute avec les
directives internationales pour la protection des animaux
2- 1 Toxiciteacute aigue
2-1-1 Administration par voie orale (per Os)
Les rats macircles Wistar albinos adultes pesant entre 100 et 250 g ont eacuteteacute reacutepartis en
Cinq groupes expeacuterimentaux renfermant chacun 06 rats
Un groupe drsquoanimaux teacutemoins
Quatre groupes drsquoanimaux traiteacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
55
Chaque lot reccediloit une dose unique de lrsquoextrait Les animaux sont placeacutes dans des
cages speacuteciales quelques jours avant lrsquoexpeacuterience
Apregraves avoir soumis les animaux agrave jeun pendant 24 heures un volume de 1ml des
diffeacuterentes solutions est administreacute par gavage agrave lrsquoaide drsquoune sonde rigide agrave bout
olivaire (figure 16) La dose administreacutee est exprimeacutee en mgkg de poids corporel
Fig 16 Administration de lrsquoextrait par la sonde
Pour ce test des lots de rats reccediloivent per os des doses croissantes du produit agrave
tester Cette proceacutedure permet de deacuteterminer la plus forte des faibles doses qui donne
0 de mortaliteacute et la plus faible des fortes doses qui donne 100 de mortaliteacute
Des dilutions sont effectueacutees entre ces deux valeurs extrecircmes afin de
deacuteterminer la dose leacutetale 50
Apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait reconstitueacute dans lrsquoeau distilleacutee aux doses de 500
2500 5000 et 10000 mgKg et lrsquoeau distilleacutee seule pour le lot teacutemoin les animaux
sont observeacutes toutes les 30 minutes pendant 8 heures le premier jour et tous les jours
pendant 14 jours agrave la recherche drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee (Osorio
Esquivel et al 2012) Ils ont aussi eacuteteacute peseacutes pour suivre lrsquoeacutevolution de leur poids
Pendant cette peacuteriode drsquoobservation on note le nombre de morts ainsi que les troubles
symptomatiques Apregraves dissection les organes (rein rate foie poumons et cœur) sont
observeacutes macroscopiquement in-situ preacuteleveacutes deacutebarrasseacutes de lexcegraves de graisse
seacutecheacutes avec du papier filtre et peseacutes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
56
Les organes preacuteleveacutes (rein rate foie poumon et cœur) sont conserveacutes dans
une solution de formol agrave 10 pour des eacutetudes anatomopathologiques
2-1-2 Administration par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Pour permettre une meilleure biodisponibiliteacute du principe actif le test de
toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacute par injection intrapeacuteritoneacuteale de lrsquoextrait hydroalcoolique
de C arabica agrave un groupe de 24 rats albinos de poids allant de 100 et 250 g eacuteleveacutes agrave
lrsquoanimalerie du laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie de lrsquoinstitut des sciences
veacuteteacuterinaires universiteacute des fregraveres Mentouri Constantine1
Les animaux ont eacuteteacute reacutepartis en 4 lots de six rats chacun et mis agrave jeun pendant
24 heures Ces groupes ont reccedilu par voie intrapeacuteritoneacuteale les extraits reconstitueacutes dans
de lrsquoeau distilleacutee des doses de 750 et 1500 et 3000mgkg de poids corporel et de lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin (figure 17)
Fig 17 Administration de lrsquoextrait par voie intrapeacuteritoneacuteale (IP)
Les rats ont eacuteteacute ensuite observeacutes durant les deux premiegraveres heures suivant
lrsquoadministration des extraits Puis ils ont reccedilu lrsquoeau et lrsquoalimentation ad libitum
Lrsquoobservation des animaux srsquoest poursuivie pendant 14 jours agrave la recherche
drsquoeacuteventuels signes de toxiciteacute retardeacutee
Mateacuteriel amp Meacutethodes
57
Le deacutenombrement de morts ainsi que les troubles symptomatiques sont noteacutes
jusqursquoau 14egraveme
jour apregraves lrsquoadministration des extraits (Nene BI et al 2008)
La dose leacutetale DL50 drsquoun extrait eacutegale agrave la dose qui entraicircne la mort de 50 de
lrsquoeffectif des rats drsquoun lot
La DL50 est deacutetermineacutee par la meacutethode graphique de Miller amp Tainter
(1944) La valeur de la DL50 permet de classer les extraits eacutetudieacutes sur leacutechelle de
toxiciteacute proposeacutee en 1980 par Hodge et Sterner chez le rat ou la souris (Hodge amp
Sterner 1943)
Extrecircmement toxique DL50 lt 1 mgkg Pc
Tregraves toxique DL50 de 1 agrave 50 mgkg Pc
Moyennement toxique DL50 de 50 agrave 500 mgg Pc
Faiblement toxique DL50 de 500 agrave 5000 mgkg pc
Pratiquement non toxique DL50 de 5000 agrave 15000 mgkg Pc
Relativement sans danger DL50 gt 15000 mgkg Pc
2- 2 Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
Preacuteparation des Artemia
Les œufs drsquoArtemia salina ont servit agrave la reacutealisation du test Pour cela il faut
preacuteparer 2g drsquoœufs ils sont mis agrave eacuteclore dans une cuve contenant 1 litre deau
de mer reconstitueacute agrave 70 sous oxygeacutenation
Remarque la preacuteparation seffectue la veille leacuteclosion eacutetant supeacuterieure agrave 80 en 24
heures
Paramegravetres de culture
Tempeacuterature il est preacutefeacuterable de la maintenir entre 25 et 30degC si ce paramegravetre
nest pas respecteacute le meacutetabolisme du cyste est stoppeacute de faccedilon irreacuteversible
Saliniteacute favorable entre 20 et 25 gl
Aeacuteration permet dhomogeacuteneacuteiser le milieu et de favoriser leacuteclosion
Eclairage une lumiegravere artificielle continue favorise un meilleur rendement
(Geneviegraveve amp Caporalino-Djian 1994)
Mateacuteriel amp Meacutethodes
58
Eclosion des nauplii
Au bout de 30 heures le bullage est stoppeacute pour reacutecolter les nauplii Une
source lumineuse est dirigeacutee vers le bas de la cuve Par phototropisme les larves se
seacuteparent des œufs non eacuteclos et des deacutebris dœufs Il suffit alors de les recueillir pour
proceacuteder agrave la reacutealisation des tests (figure 18)
Fig 18 Culture des larves drsquoArtemia salina
Preacuteparation des extraits
Les extraits hydroalcooliques secs des feuilles graine racine et partie aeacuterienne
de C arabica sont peseacutes avec preacutecision et dilueacutes dans lrsquoeau de mer reconstitueacutee afin
de reacutealiser les diffeacuterentes concentrations
Chaque extrait est testeacute aux concentrations 100 250 500 et 1000 microgml pour
la reacutealisation de ce test des plaques de 24 puits ont eacuteteacute utiliseacutees (figure 19)
La solution dextrait agrave tester est ajouteacutee dans les puits contenant les larves A laide
dune pipette Pasteur dix larves sont transfeacutereacutees dans chaque puits Le volume est
ensuite ajusteacute agrave 3ml avec de leau de mer reconstitueacutee agrave 70
Une seacuterie de puits de teacutemoins positifs est reacutealiseacutee aux concentrations
suivantes 100 250 500 et 1000microgml avec le sulfate de cuivre et des puits de
teacutemoins neacutegatifs reacutealiseacutes avec lrsquoeau de mer Les preacuteparations sont ensuite laisseacutees 24
heures
Trois reacutepeacutetitions ont eacuteteacute reacutealiseacutees pour chaque dilution et les teacutemoins
Mateacuteriel amp Meacutethodes
59
Fig 19 Plaque de 24 puits contenant les larves et des diffeacuterents extraits
Lecture des reacutesultats
Apregraves 24 heures et ensuite 48 heures le nombre de larves survivantes est compteacute dans
chaque puits et la mortaliteacute calculeacutee agrave chaque concentration (figure 20)
Fig 20 Les larves sous microscope
Le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est eacutevalueacute en utilisant la formule
m = NLm (NLtotal - NNy)
m Pourcentage de mortaliteacute
NLm Nombre de larves mortes
NL total Nombre de larves total
NNy Nombre de nymphes
Mateacuteriel amp Meacutethodes
60
Le test est consideacutereacute valide si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est
infeacuterieur agrave 5 ou compris entre 5 et 20
Si le pourcentage de mortaliteacute chez les teacutemoins est compris entre 5 et 20
la mortaliteacute apregraves exposition doit ecirctre corrigeacutee en utilisant la formule dAbbott
(OMS 2004)
Si la mortaliteacute chez les teacutemoins excegravede 20 le test est invalide et doit ecirctre
recommenceacute
Mortaliteacute corrigeacutee = ( MortObserveacutee - MortTeacutemoin100 -
MortTeacutemoin) times100
A partir des reacutesultats la concentration leacutetale 50 (CL50) refleacutetant la toxiciteacute des
produits est estimeacutee (tableau 10)
Tab 10 Estimation de la toxiciteacute
CL50 Toxiciteacute
CL50 ge1000microgml -
1000microgmlgt CL50 ge 500microgml +
500microgml gt CL50 ge 250microgml ++
250microgml gt CL50 ge 100microgml +++
2- 3 Etude de lrsquoeffet heacutemolytique des extraits de Cleome arabica
Ce test drsquoeffet heacutemolytique de la plante eacutetudieacutee est reacutealiseacute selon la meacutethode de
Guo-Xiang amp Zai-Qun (2008) avec une leacutegegravere modification
Des eacutechantillons de sang des lapins ont eacuteteacute recueillis dans des tubes heacuteparines
Apregraves centrifugation agrave 1500 rpm pendant 5 min le surnageant est eacutelimineacute le culot est
laveacute trois fois par une solution tampon phosphate salin PBS (125 mM NaCl 10mM de
diphosphate de sodium pH 74) la derniegravere centrifugation dure 10 min Le culot
cellulaire obtenu est dilueacute avec la solution PBS pour obtenir un heacutematocrite de 2
Mateacuteriel amp Meacutethodes
61
Les extraits hydroalcooliques des quatre parties (feuille graine partie aeacuterienne et
racine) de C arabica sont dilueacutes dans du tampon phosphate salin pour obtenir les
diffeacuterentes concentrations 20 10 5 et 1mgml
Dans chaque tube 1m drsquoextrait agrave diffeacuterentes concentrations 25ml de tampon
phosphate salin (PBS) et 35 ml de la suspension eacuterythrocytaire preacutepareacutee sont ajouteacutes
On meacutelange les tubes deacutelicatement et on les laisser dans un incubateur agitateur agrave
37degC durant 60 min
La lecture de lrsquoabsorbance de chaque tube est effectueacutee agrave 630nm agrave lrsquoaide drsquoun
spectrophotomegravetre UV- Visible apregraves leur centrifugation agrave 1500 tourminute durant 5
min contre un blanc contenant du PBS
Un tube teacutemoin neacutegatif est preacutepareacute dans les mecircmes deacutemarches expeacuterimentales Il est
composeacute de la suspension eacuterythrocytaire et de la solution tampon de PBS en absence
drsquoextrait Un tube drsquoheacutemolyse totale contient la suspension eacuterythrocytaire et Saponine
Lrsquoexpeacuterience est reacutepeacuteteacutee trois fois et le taux drsquoheacutemolyse des diffeacuterents extraits est
calculeacute en pourcentage () par rapport agrave lrsquoheacutemolyse totale selon la formule suivante
Taux drsquoheacutemolyse () = [(Abs de lrsquoextrait minus Abs de teacutemoin neacutegatif) Abs
heacutemolyse totale] X 100
2- 4 Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antalgique
2-4-1 Test de tail flick
Une heure apregraves lrsquoadministration orale de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de Cleome arabica la queue de chaque animale est placeacute dans de leau
chaude maintenue agrave 55degC Le temps que met lanimal pour retirer sa queue est mesureacute
et consideacutereacute comme temps de reacuteaction (Al-Sobarry et al 2013)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaque des lots reccediloit
comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
62
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
2-4-2 Test de la plaque chauffante
Ce test consiste agrave deacuteposer le rat sur une plaque chauffante reacutegleacutee agrave 55degC une
heure apregraves lrsquoadministration de lrsquoextrait agrave diffeacuterentes doses pour les lots traiteacutes lrsquoeau
distilleacutee pour le lot teacutemoin et lrsquoacide aceacutetylsalicylique pour le lot de reacutefeacuterence Le
chronomegravetre est deacuteclencheacute degraves que les pattes de rat touchent la plaque
Les seules reacuteponses agrave consideacuterer chez le rat sont le leacutechage des pattes les sauts
reacutealiseacutes par le rat sur la plaque et ses reacuteactions agrave vouloir quitter la plaque chauffante
Drsquoautres types de comportements ne sont pas pris en compte
Le temps de reacuteaction est mesureacute au moment ougrave le rat est maintenu sur la
plaque chauffante pendant une dureacutee de 30 seconds maximums
Ces temps de reacuteaction des animaux traiteacutes sont compareacutes agrave ceux des rats ayant reccedilu
uniquement de leau distilleacutee (Vaz et al 1996 Le Bars et al 2001)
Les lots sont reacutepartit comme suit
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
250mgkg de poids corporel
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
500mgkg de poids corporel
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica agrave la dose de
1000 mgkg de poids corporel
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot de reacutefeacuterence un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide aceacutetylsalicylique agrave
la dose de 100 mg kg de poids corporel
Mateacuteriel amp Meacutethodes
63
2-4-3 Test de torsion
Les expeacuteriences ont eacuteteacute reacutealiseacutees sur un modegravele de douleur induit par lrsquoacide
aceacutetique chez des rats mis agrave jeun 15 heures avant lrsquoexpeacuterimentation
Lrsquoinjection intrapeacuteritoneacuteale drsquoacide aceacutetique agrave 1 chez le rat provoque un
syndrome douloureux qui se manifeste par des contorsions caracteacuteristiques avec
eacutetirement des pattes posteacuterieures et de la musculature dorso-ventrale
Le nombre drsquoeacutetirements est comptabiliseacute 15 minutes apregraves injection de lrsquoacide
aceacutetique (Sy et al 2009)
Le gavage a eacuteteacute fait agrave lrsquoaide drsquoune sonde gastrique dont chaqursquoun des lots reccediloit
comme suit
Lot teacutemoin de lrsquoeau distilleacutee agrave raison de 1 mlKg de poids corporel
Lot 1 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
250mgkg per os
Lot 2 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de
500mgkg per os
Lot 3 lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose de 1000
mgkg per os
Lot 4 (reacutefeacuterence) un analgeacutesique utiliseacute en theacuterapeutique lrsquoAcide acetyl salicylique
agrave la dose de 100 mg kg per os
Une heure apregraves le gavage une solution drsquoacide aceacutetique agrave 1 est injecteacutee par voie
intra-peacuteritoneacuteale aux rats et le nombre de contorsions (NC) pour chaque rat a eacuteteacute
compteacute sur une dureacutee de 15 minutes
Les moyennes de contorsions dans les groupes traiteacutes ont eacuteteacute compareacutees au groupe
teacutemoin et le pourcentage drsquoinhibition (PI) de la douleur a eacuteteacute obtenu agrave partir de la
formule suivante
NCTe-NCTr
PI = x 100
NCTe
Mateacuteriel amp Meacutethodes
64
Avec
NCTe nombre moyen des contorsions dans le lot teacutemoin
NCTr nombre moyen des contorsions dans le lot traiteacute
2- 5 Effet de la cicatrisation chez le lapin
2-5-1 Essais sur les plaies de brucirclures thermiques
Les lapins utiliseacutes pour ce test sont anestheacutesieacutes par 50 mgkg de chlorhydrate
de keacutetamine apregraves une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de
diazeacutepam sur le lieu de lrsquoexpeacuterimentation
Le dos de lanimal a eacuteteacute raseacute et eacutepileacute ensuite une brucirclure a eacuteteacute faite en mettant
une plaque meacutetallique chauffeacutee agrave 170degC sur la zone preacutepareacutee pendant 10s Apregraves
250mg des extraits dessai a eacuteteacute appliqueacutes par voie topique sur la zone brucircleacutee une fois
par jour (Farnood-Shokouhi et al 2012)
La zone brucircleacutee a eacuteteacute mesureacutee immeacutediatement apregraves la brucirclure et chaque 3 jour
jusquagrave ce que lrsquoeacutepitheacutelialisation complegravete ait eu lieu agrave lrsquoaide drsquoun pied agrave coulisse
Plaie 1 nrsquoa reccedilu aucun traitement et a servi de teacutemoin
Plaie 2 a reccedilu un traitement avec cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Plaie 3 a reccedilu lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica agrave la dose de 250 mg
Le degreacute de cicatrisation de la plaie a eacuteteacute calculeacute selon la formule suivante
Degreacute de cicatrisation de la plaie () =
Taille de la plaie initiale - taille de la plaie du jour speacutecifique
= X 100
Taille de la plaie initiale
2-5-2 Essais sur les plaies drsquoexcision
Les proprieacuteteacutes cicatrisantes sont testeacutees sur des plaies drsquoexcision sur le dos des
lapins Ces derniers sont anestheacutesieacutes par 50mgkg de chlorhydrate de keacutetamine apregraves
une tranquillisation par voie intramusculaire avec 5 mgkg de diazeacutepam sur le lieu de
lrsquoexcision
Mateacuteriel amp Meacutethodes
65
Un lambeau de peau drsquoenviron 17mm est exciseacute (Bensegueni et al 2007) Les lapins
sont reacutepartis en 4 lots
Lot 1 aucun traitement et serviront de teacutemoin neacutegatif
Lot 2 traiteacute par cicatrylreg cregraveme agrave raison de 250 mg
Lot 3 traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica agrave la dose
de 250mg
Les applications sont faites agrave raison drsquoune fois par jour pendant neuf jours Les
plaies ne sont pas proteacutegeacutees par un pansement
Une eacutetude planimeacutetrique est mise en œuvre pour eacutevaluer lrsquoactiviteacute cicatrisante
des extraits de Cleome arabica Les diamegravetres des plaies drsquoexcision des diffeacuterents lots
sont mesureacutes tous les trois jours
Analyse statistique
Le logiciel EXCELSTAT 2014 a eacuteteacute utiliseacute pour toutes les analyses
statistiques
Reacutesultats amp discussion
66
1- Rendement de lrsquoextraction par lrsquoeacutethanol
Le rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique a eacuteteacute calculeacute pour les 3
diffeacuterentes parties de C arabica feuille graine et racine (tableau 11)
Tab 11 Rendement de lrsquoextraction hydroalcoolique
Partie de plante Rendement (g100g)
Feuille 1333 plusmn 133
Graine 1286 plusmn 019
Racine 553 plusmn 015
valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats obtenus montrent que les feuilles preacutesentent le taux en matiegravere
extractible le plus important et qui est de 1333 plusmn 133 g100g matiegravere segraveche (mm)
Un rendement de 1286 plusmn 019 et 553 plusmn 015 g 100g matiegravere segraveche pour les graines et
les racines respectivement
2- Screening phytochimique
Les tests de caracteacuterisation reacutealiseacutes sur les diffeacuterents extraits hydroalcoolique
des feuilles graines et racines ont donneacute les reacutesultats illustreacutes dans le tableau 12
Tab 12 profil phytochimiques des diffeacuterents extraits de C arabica
Meacutetabolites secondaires Feuille Graine Racine
Alkaloiumldes +++ - -
Flavonoiumldes +++ ++ +
Saponines +++ + +
Tannins +++ ++ +
Steacuteroiumldes +++ ++ ++
Triterpenes +++ ++ +
Coumarines +++ ++ +
+++ Preacutesence confirmeacutee ++ preacutesence modeacutereacutee + preacutesence en tant que trace
- absence
Reacutesultats amp discussion
67
Les reacutesultats preacutesenteacutes dans le tableau 13 montrent une richesse relative en
meacutetabolites secondaires analyseacutes de lrsquoextrait des feuilles par rapport aux extraits des
graines et racines
Lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles reacutevegravele la preacutesence des alcaloiumldes
flavonoiumldes saponines triterpegravenes tannins steacuteroiumldes et coumarines
Lrsquoanalyse des graines montre une absence des alcaloiumldes mais une preacutesence
plus au moins importante en flavonoiumldes saponines triterpegravenes steacuteroiumldes et
coumarine par rapport aux feuilles
Lrsquoexamen des racines montre notamment lrsquoabsence des alcaloiumldes et une
preacutesence modeste des autres groupes de meacutetabolites
Nos reacutesultats phytochimiques de Carabica confortent avec les travaux
preacuteceacutedents notamment concernant la preacutesence des flavonoiumldes dans les parties
aeacuteriennes (Sharaf et al 1997 Intan et al 2005 et Touil amp Rhouati 1998) Les
steacuteroiumldes (Harraz et al 1995) et les alcaloiumldes (Djeridane et al 2010 Takhi et al
2011)
3- Dosage spectrophotomeacutetrique
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
dans les diffeacuterentes parties de la plante C arabica sont illustreacute dans le tableau 13
Lrsquoestimation du contenu en pheacutenols totaux des diffeacuterentes parties de
C arabica a eacuteteacute faite par rapport agrave lrsquoacide gallique La courbe drsquoeacutetalonnage est
illustreacutee dans la figure 21 et la teneur en pheacutenols totaux est exprimeacutee en mg
eacutequivalent acide gallique (EAG) par g drsquoextrait sec
Reacutesultats amp discussion
68
Fig 21 Courbe drsquoeacutetalonnage des acides pheacutenols totaux
Lrsquoeacutevaluation des contenus en flavonoiumldes dans les diffeacuterents extraits de
C arabica a eacuteteacute reacutealiseacutee par rapport agrave la rutine La courbe drsquoeacutetalonnage est illustreacutee
dans la figure 22 et la teneur en flavonoiumldes est exprimeacutee en mg eacutequivalent rutine par
g drsquoextrait sec
Fig 22 Courbe drsquoeacutetalonnage des Flavonoiumldes
La meacutethode deacutecrite par Vermerris amp Nicholson (2006) a permis de quantifier
les proanthocyanindines dans les diffeacuterents extraits hydroalcooliques en utilisant
lrsquoeacutequation mentionneacutee preacuteceacutedemment dans le protocole Les teneurs en
proanthocyanidines sont exprimeacutes en mg eacutequivalent cyanidine par g drsquoextrait sec
y = 1014x
Rsup2 = 0945
0010203040506070809
1
0 002 004 006 008 01
Teneur en pheacutenols totaux
Concentration dacide gallique mgml
Abso
ban
ce
y = 2025x
Rsup2 = 0990
002040608
11214
0 002 004 006 008
Quantification des flavonoides
Concentration de la Rutine mgml
Abso
rban
ce
Reacutesultats amp discussion
69
Les reacutesultats du dosage des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines des les
extraits des feuilles graines et racines figurent dans le tableau 13
Tab 13 Quantification des pheacutenols totaux flavonoiumldes et proanthocyanidines
Extrait Phenols totaux A
(mg EAGg drsquoext) Flavonoides
B(mg ER g drsquoext)
Proanthocyanidines C
(mg ECg drsquoext)
Feuille 3517 plusmn 001 1135 plusmn 001 515 plusmn 001
Graine 2886 plusmn 001 531 plusmn 001 777 plusmn 002
Racine 1453 plusmn 001 291 plusmn 001 449 plusmn 001
A Polyphenols exprimeacutes en mg equivalent acide gallique g drsquoextrait B Flavonoides
exprimeacutes en mg equivalent Rutineg drsquoextrait C Proanthocyanidines exprimeacutes en mg
cyanidineg drsquoextrait valeurs exprimeacutees en moyennes plusmn Ecartype (n=3)
Lrsquoestimation quantitative des diffeacuterents extraits hydroalcooliques des feuilles
graines et racines de C arabica reacutevegravele que lrsquoextrait des feuilles preacutesente la quantiteacute la
plus importante en pheacutenols totaux et aussi en flavonoiumldes (3517 plusmn 001 mg EAGg
drsquoextrait et 1135 plusmn 001mg ERg drsquoextrait) avec une quantiteacute plus au moins modeacutereacutee
en proanthocyanidines (515plusmn 001 mg ECg drsquoeacutextrait)
Le taux estimeacute des proanthocyanidines dans lrsquoextrait des graines est plus eacuteleveacute (777plusmn
002 mg ECg drsquoextrait) en le comparant avec lrsquoextrait des feuilles et des racines alors
que le taux des phenols totaux et flavonoides sont estimeacutes agrave 2886plusmn001 mg EAGg
drsquoextrait et 531plusmn001mg ERg drsquoextrait respectivement
Lrsquoextrait des racines reacutevegravele les quantiteacutes les plus faibles en pheacutenols totaux
flavonoiumldes et aussi proanthocyanidines avec des taux eacutegales agrave 1453 plusmn 001 mg
EAGg drsquoextrait 291 plusmn 001mg ERg drsquoextrait et 449 plusmn 001mg ECg drsquoextrait
respectivement
Quelques travaux ont eacuteteacute faits sur la plante Carabica citant Djeridane et ses
collaborateurs (2010) qui rapportent que le dosage des phenols totaux et des
flavonoides sont estimeacute agrave 217 et 135 mgg de matiegravere segraveche
Lrsquoeacutetude de Takhi et al 2011 estime que les pheacutenols totaux sont eacutegales agrave
19120mg100g des feuilles de C arabica
Reacutesultats amp discussion
70
Tigrine et al 2013 rapportent que lrsquoestimation des phenols totaux et des flavonoides
dans lrsquoextrait des feuilles de Carabica est de 3221 plusmn 344 mg EAGg drsquoextrait et
2456 plusmn 467 mg EQg drsquoextrait respectivement
Nos reacutesultats estimeacutes en mg100g de matiegravere segraveche des feuilles sont en accords avec
les travaux de Tigrine et al 2013 (Taux en PT = 46881 mg100g taux en
flavonoides = 15129 mg100g)
4- Analyse HPLCDADMS
Lrsquoanalyse par HPLCDADMS a permis drsquoidentifier et quantifier les acides
pheacutenols et les flavonoides des trois extraits (Feuille graine et racine)
Les extraits ont eacuteteacute analyseacutes dans deux longueurs drsquoondes diffeacuterentes agrave 280 nm
pour lrsquoidentification des acides pheacutenols et agrave 370 nm pour lrsquoidentification des
flavonoiumldes
Les reacutesultats de lrsquoanalyse qualitative et quantitative effectueacutee par
HPLCDADMS des trois extraits hydroalcoolique (feuilles graines et racines) sont
preacutesenteacutes dans les tableaux (14 15 16) Les spectres chromatographiques agrave 280 nm et
370 nm respectifs sont illustreacutes dans les figures (23 24 25 26 27 28)
Reacutesultats amp discussion
71
Fig 23 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 280 nm
Fig 24 Chromatogramme de lrsquoextrait des feuilles agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
72
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification Quantification mgg
1 769 278 289 245 catechine 1234 plusmn 0011
2 11 338 593 503 473 383 353 325 297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 1585 plusmn 0103
3 123 272 307 145 Cleomine hexoside Nrsquoest pas quantifieacute
4 1653 354 609 463 447 300 Quercetine rutinoside 546 plusmn 0106
5 1751 354 651 447301 Quercetine acylhexoside rhamnoside 0175 plusmn 0022
6 1892 350 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 3814 plusmn 0148
7 1945 348 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 2662 plusmn 0057
8 1978 354 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 4565 plusmn 0179
9 2034 354 463 301 Quercetine 3-glucoside 0031 plusmn 0005
10 2077 346 635 489 431 285 Kaempferol rhamnoside acylhexoside 0258 plusmn 0007
11 2187 356 665 519 461 315 Isorhamnetin acylhexoside rhamnoside 0428 plusmn 0023
12 2247 356 593 461 315 Isorhamnetine pentoside rhamnoside 0065 plusmn 00002
13 2300 342 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 3116 plusmn 0066
14 2382 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 2932 plusmn 0056
15 2501 356 477 315 Isorhamnetine hexoside 0124 plusmn 0002
Tab 14 Reacutesultats analyse HPLCDADMS de lextrait des feuilles de Carabica
Reacutesultats amp discussion
73
Fig 25 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 280nm
Fig 26 Chromatogramme drsquoextrait des graines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
74
Composeacute tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 403 254290 315 153 acide 34-dihydroxybenzoiumlque hexoside 0003 plusmn 0001
2 592 260296 153 109 acide 34-dihydroxybenzoiumlque 0004 plusmn 0001
3 728 280 577 119 Acide p-coumarique Dimere 0021 plusmn 0001
4 907 254 137
Acide p-OH benzoique 0024 plusmn 001
5 98 324 509 452436332296236 193 Deriveacute acide ferulique TRACES
6 102 280 289 245 Catechine 015 plusmn 0014
7 1057 334 593
503 473 383 353 325
297 Apigenine -6-C-hexoside-8C-hexoside 0149 plusmn 0014
8 133 280 203 159 142 Tryptophane Nrsquoest pas quantifieacute
9 142 312 551 405 275 163 deriveacute acide p-coumarique TRACES
10 1503 326 581 435 295 235 193 deriveacute acide Ferulique 0036 plusmn 0006
11 1538 310 611 325 223 deriveacute acide Sinapique 0167 plusmn 0037
Tab 15 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des graines de C arabica
Reacutesultats amp discussion
75
12 163 356 609 463 447 300 Quercetin rutinoside 0029 plusmn 0001
13 188 352 593 447 431 285 Kaempferol rutinoside 0121 plusmn 0007
14 194 352 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0009 plusmn 00001
15 197 356 623 477 461 315 Isorhamnetine rutinoside 0034 plusmn 0004
16 202 354 463 301 Quercetine hexoside TRACES
17 229 342 577 431285 Kaempferol dirhamnoside 0064 plusmn 0001
18 237 348 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0031 plusmn 0002
19 2916 370 447 301 Quercetin rhamnoside 0021 plusmn 0001
20 338 368 431 285 Kaempferol 4 rhamnoside 0173 plusmn 0016
21 349 374 461 315 Isorhamnetine 4 rhamnoside 0044 plusmn 0002
22 415 374 331 315 Laricitrine 0006 plusmn 0001
Reacutesultats amp discussion
76
Fig 27 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 280 nm
Fig 28 Chromatogramme drsquoextrait des racines agrave 370 nm
Reacutesultats amp discussion
77
Tab 16 Reacutesultats HPLCDADMS de lextrait des racines de C arabica
Peak tr (min) λ [M-H]- Fragments Identification
QUANTIFICATION
mgg
1 447 250290 474 167 Deriveacute acide vanillique 0004 plusmn 00001
2 593 276 475 414 374 332 169 Deriveacute acide gallique 0017 plusmn 0002
3 861 254292 473 329 167 Deriveacute acide vanillique 0012 plusmn 0002
4 128 330 355 193 Deriveacute acide ferulique 0006 plusmn 0003
5 163 356 609 463 447 301 Quercetine rutinoside 0006 plusmn 00003
6 194 350 593 447 301 Quercetine dirhamnoside 0011 plusmn 00003
7 197 360 623 477 461315 Isorhamnetine rutinoside 001 plusmn 00005
8 229 344 577 431 285 Kaempferol dirhamnoside 0033 plusmn 00001
9 2370 346 607 461 315 Isorhamnetine dirhamnoside 0044 plusmn 00005
10 244 326 677 535 353 acide tricaffeoylquinique 0002 plusmn 00001
Reacutesultats amp discussion
78
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles de
Carabica est marqueacute surtout par la preacutesence des flavonoiumldes principalement de type flavonol
avec la seule mention drsquoun composeacute de type flavanol qui est la cateacutechine
Les quatre geacutenines de type flavonol identifieacutes sont quercetine isorhamnetine keampferol et
apigenine avec des pourcentages de 315 3065 2718 6 respectivement Une seule
moleacutecule de type flavanol eacutetait identifieacutee comme cateacutechine et estimeacutee preacutesente avec un taux
de 467
Les reacutesultats montrent que la composition de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines de
Carabica est marqueacutee par la preacutesence des acides pheacutenols et des flavonoides avec des taux de
2348 et 7652 respectivement
Le profil des acides pheacutenols est marqueacute par la preacutesence drsquoun acide sinapique feacuterulique
acides para-hydroxy benzoique para-coumarique et drsquoautres acides mineurs
En geacuteneacuteral le profil flavonique de lrsquoextrait hydroalcoolique des graines est qualitativement
comparable agrave celui de lrsquoextrait des feuilles agrave lrsquoexception de la preacutesence dans lrsquoextrait des
graines un flavonoide de type flavonol qui est le laricitrine Ce dernier a eacuteteacute identifieacute dans
plusieurs espegraveces comme le fruit de Vitis vinifera L (Nazareth Torres et al 2017) le fruit et
le jus de Syzygium cumini L (Carvalho et al 2017) Vaccinium myrtillus et Ribes nigrum
(Tian et al 2017)
Sur le plan quantitatif lrsquoextrait des graines preacutesente un contenu relativement plus faible en
flavonoides par rapport agrave celui des feuilles et avec des pourcentage de preacutesence diffeacuterents
dont le keampferol est dominant avec un taux de 4308 suivi par la cateacutechine 1805 et
lrsquoapigenine 1793 Lrsquoisorhamnetine et la quercetine sont preacutesentent avec un taux moins
important 1312 et 710 et finalement laricitrine avec un pourcantage de 072
Le composeacute deacutetecteacute agrave 123 mn est identifieacute comme la cleacuteomine hyxoside par rapport agrave la
litteacuterature (Intan et al 2005)
Lrsquoanalyse de lrsquoextrait hydroalcoolique des racines reacutevegravele aussi le mecircme profil flavonique On
note la preacutesence des heacuteteacuterosides quercetine isorhamnetine keampferol agrave lrsquoexception de
lrsquoapigenine et ses deacuteriveacutes Les flavonoides sont preacutesents au niveau des racines avec un taux
de 7172 par rapport au contenu global identifieacute de lrsquoextrait racinaire
Reacutesultats amp discussion
79
Les reacutesultats montrent aussi un profil des acides pheacutenols diffeacuterents des graines par la preacutesence
de lacide tricaffeoylquinique deacuteriveacute de lacide gallique deacuteriveacute de lacide ferulique et deux
deacuteriveacutes de lacide vanillique et qui sont preacutesents avec un taux de 2828 du contenu identifieacute
Les reacutesultats obtenus sont conformes aux ceux de Touil amp Rhouati (1998) qui ont signaleacute la
preacutesence de deacuteriveacutes dapigenine de querceacutetine et de kampferol dans la partie aeacuterienne de
Cleome arabica
Sharaf et al (1997) ont analyseacute quatre espegraveces de Cleome speacutecialement Cleome
amblyocarpa et ils ont confirmeacute la preacutesence du Kaempferol 7-Rha et ses deacuteriveacutes Quercetin
7-Rha Isorhamnetin et ses deacuteriveacutes Apigenin 68-di-CG
De mecircme les travaux drsquoIntan et al (2005) sont en accord avec nos reacutesultats
En 2015 les travaux de Samout et ses collaborateurs lors drsquoune analyse par HPLC sur les
feuilles et les tiges de C arabica concordent avec nos reacutesultats par la preacutesence des moleacutecules
de type acides pheacutenols (acide protocatecique gallique hydroxybenzoique vanillique et acide
syringique) et flavonoides (Quercetine keampferol isorhamnetine avec mention de la
luteoline)
On note que les donneacutees obtenues par HPLCDADMS srsquoaccordent avec ceux obtenus par le
dosage spectrophotomeacutetrique Les teneurs les plus eacuteleveacutees en pheacutenols totaux et en
flavonoides sont identifieacutees dans lrsquoextrait des feuilles suivi par lrsquoextrait des graines et en
derniegravere position lrsquoextrait des racines
5- Activiteacutes antioxydantes
Le potentiel antioxydant des diffeacuterentes parties de Carabica meacutesureacute par les trois tests
(DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDENUM) et est correacuteleacute avec leurs contenus en pheacutenols
totaux et flavonoides
5-1 Activiteacute antioxydante par dipheacutenyle-picryl-hydrazyl (DPPH)
Les valeurs drsquoIC50 sont deacutetermineacutees graphiquement agrave partir de la courbe reacutealiseacutee en
fonction des concentrations des extraits et leurs pourcentages drsquoinhibition respectifs (figure
29 tableau 17)
Reacutesultats amp discussion
80
Fig 29 Le pourcentage drsquoinhibition de DPPH
Tab 17 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Extrait hydroalcoolique IC 50(mgml)
FEUILLE 0092 plusmn 0012+
GRAINE 046 plusmn 0003+
RACINE 0979 plusmn 0025+
ACIDE ASCORBIQUE 0020 plusmn 0001
RUTINE 0019 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique et la rutine valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET
(n=3) Rutine vs Acide ascorbique (non significative) + Extrait vs control
En geacuteneacuteral toutes les parties de la plante C arabica ont provoqueacute une deacutecoloration plus
au moins diffeacuterente de la solution DPPH ceci prouve leur capaciteacutes antioxydantes qui est
exprimeacutee par les valeurs IC50
Lrsquoextrait des feuilles possegravede une activiteacute antiradicalaire vis-agrave-vis du radical libre DPPH
importante compareacutee agrave celles obtenues par les extraits des graines et racines
Les valeurs drsquoIC50 obtenues pour les feuilles graines et racines sont 0092 plusmn 0012 046 plusmn
0003 0979 plusmn 0025 mgml respectivement
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
Feuille
Graine
Racine
concentration mgml
DP
PH
ihn
ibit
ion
Activiteacute antioxydante DPPH
Reacutesultats amp discussion
81
Lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoacide ascorbique et de la rutine sont comparables avec des IC50 de
0020 plusmn 0001 et 0019 plusmn 0001 mgml respectivement
Lrsquoactiviteacute antiradicalaire de lrsquoacide ascorbique et la rutine est significativement supeacuterieure agrave
celle obtenues par les feuilles de C arabica
Selon Kasangana et al (2015) la capaciteacute antioxydante du pieacutegeur du radical libre DPPH est
attribueacute agrave sa capaciteacute agrave fournir de lhydrogegravene agrave ce radical afin de le stabiliser
5-2 Reacuteduction du fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
Le pouvoir reacuteducteur du fer des diffeacuterentes parties de C arabica (feuille graine et racine) et
les valeurs drsquoIC50 obtenues respectives sont illustreacutees dans la figure 30 et le tableau 18
Fig 30 Pouvoir reacuteducteur FRAP des feuille graine et racine
0000
0100
0200
0300
0400
0500
0600
0700
0800
01 02 03 04 05 06 07 08 09 1
FEUILLE
GRAINE
RACINE
concentration mgml
DO
of
extr
acts
POUVOIR REDUCTEUR DE FER
Reacutesultats amp discussion
82
Tab 18 Les valeurs drsquoIC50 des diffeacuterents extraits
Ext hydroalcoolique IC 50 (mgml)
FEUILLE 0674 plusmn 0007+
GRAINE 1076 plusmn 0006+
RACINE 4470 plusmn 0072+
Acide ascorbique 006 plusmn 0001
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur drsquoIC50 exprimeacutee en moyenne plusmn ET (n=3)
Les reacutesultats montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
possegravedent un pouvoir reacuteducteur sur le modegravele utiliseacute
Le pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait des feuilles exprimeacute en IC50 est de 0674 plusmn 0007 mgml
valeur significativement plus faible que celles obtenues par lrsquoextrait des graines (1076 plusmn
0006mgml) et lrsquoextrait des racines (4470 plusmn 0072mgml) Par contre ces valeurs sont
significativement supeacuterieure agrave celle obtenue par le teacutemoin positif (acide ascorbique) avec
IC50 eacutegale agrave 006 plusmn 0001 mgml
Ceci deacutenote drsquoun pouvoir reacuteducteur plus important de lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles
par rapport aux extraits des graines et racines Ce reacutesultat corrobore le reacutesultat du test effectueacute
sur le DPPH
Divers travaux ont suggeacutereacute que les proprieacuteteacutes reacuteductrices quils exercent sont baseacutees sur le
don dune atome dhydrogegravene pour briser la chaicircne des radicaux libres (Naima et al 2012)
5-3 Evaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante par le phosphomolybdate
Les reacutesultats de la capaciteacute antioxydante mesureacutee par le test de phosphomolybdate sont
exprimeacutes dans le tableau 19
Reacutesultats amp discussion
83
Tab 19 Taux des antioxydants par le phosphomolybdate
Extrait hydroalcoolique Taux des antioxydants
(mg EAGg drsquoextrait)
Feuille 1400 plusmn 0019+
Graine 1206 plusmn 0004+
Racine 1004 plusmn 0003+
Acide ascorbique 13753 plusmn 0021
(+ P gt 00001) Valeur compareacutee agrave lrsquoacide ascorbique valeur du taux des antioxydants exprimeacutee en moyenne
plusmn ET (n=3)
La lecture des reacutesultats montre que le taux des antioxydants est plus eacuteleveacute dans
lrsquoextrait des feuilles compareacute aux extraits des graines et racines
Les valeurs de la teneur en antioxydants exprimeacutes en mgg drsquoextrait sont respectivement
1400 plusmn 0019 1206 plusmn 0004 1004 plusmn 0003 mg EAGg drsquoextrait Lrsquoextrait hydroalcoolique
des feuilles montre le taux en antioxydants le plus eacuteleveacute
Les reacutesultats obtenus par ce test vont dans le mecircme sens que ceux obtenus par le DPPH et le
FRAP
5-4 Correacutelation entre les contenus en Pheacutenols Totaux et flavnoides vis-agrave-vis
lrsquoactiviteacute antioxydante
Une eacutetude a eacuteteacute faite statistiquement pour deacuteterminer une eacuteventuelle relation entre le
contenu en pheacutenols totaux et favonoides des diffeacuterentes parties de Carabica et les activiteacutes
antioxydantes obtenues par les trois tests (DPPH FRAP PHOSPHOMOLYBDATE) Les
reacutesultats sont exprimeacutes dans le tableau 20
Reacutesultats amp discussion
84
Tab 20 Correacutelation entre les pheacutenols totaux les flavonoides et les activiteacutes antioxydantes
Coefficient de
correacutelation (R)
DPPH FRAP Les antioxydants
totaux
Pheacutenols totaux
Flavonoides
- 099
- 094
- 098
- 078
098
097
Les valeurs des coefficients de correacutelation qui se situent dans la plage de 06 et 1 indique une
correacutelation tregraves fortes
Pour le premier test une tregraves bonne correacutelation entre la capaciteacute du pieacutegeage du
radical libre DPPH par les trois extraits et leurs teneurs en pheacutenols totaux et flavonoiumldes
comme le deacutemontre les valeurs du coefficient de correacutelation R - 099 et - 094 respectivement
Dans le second test lrsquoanalyse montre une correacutelation importante entre les contenus en
pheacutenols totaux des trois extraits et lrsquoactiviteacute FRAP avec une valeur de R eacutegale agrave - 098 Alors
que cette correacutelation est moins eacutevidente entre les contenus en flavonoides des trois extraits et
la mecircme activiteacute ougrave la valeur du R est eacutegale agrave - 078
La valeur neacutegative est due agrave lrsquoutilisation des IC50 dont lextrait ayant une valeur IC50
plus faible possegravede de bonnes proprieacuteteacutes antioxydantes
Dans le troisiegraveme test une tregraves bonne correacutelation est enregistreacutee entre le taux en
antioxydants totaux et les deux contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des trois extraits
avec des coefficients de correacutelation 098 et 097 respectivement
Lrsquoactiviteacute antioxydante de Carabica a fait lrsquoobjet de quelques eacutetudes en occurrence agrave
celle de Selloum et al (1997) Cette eacutetude a mis en eacutevidence le pouvoir antioxydant de
lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles en preacutesence des espegraveces reacuteactives drsquooxygegravene O-2 H2O2
et HOCI qui est estimeacute agrave 5287 6634 et 9145 respectivement
Djeridane et al (2010) rapportent que lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante de lrsquoextrait de
Carabica eacutetait reacutealiseacutee par le test du DPPH et lrsquoIC50 est estimeacutee eacutegale 1315 plusmn 001mgl
Plus reacutecemment Tigrine et al (2013) rapportent que lrsquoextrait des feuilles de Cleome arabica
est pourvu drsquoune forte activiteacute antiradicalaire contre le radical libre DPPH (IC50 488 μgml)
et un puissant pouvoir reacuteducteur Cependant une bonne activiteacute cheacutelatrice eacutetait obtenue
qursquoavec des concentrations eacuteleveacutees (IC50 = 37775 μgml)
Reacutesultats amp discussion
85
Nos reacutesultats confortent drsquoune part les eacutetudes preacuteceacutedentes en ce qui concerne la
preacutesence drsquoune activiteacute antioxydante dans la partie aeacuterienne de Carabica Drsquoautre part notre
eacutetude montre que cette activiteacute est plus importante dans les feuilles que dans les autres parties
de la plante (graines et racines)
La preacutesence drsquoun taux eacuteleveacute en flavonoiumldes et en pheacutenols totaux dans les feuilles
compareacute agrave celui des racines et des graines pourrait justifier son potentiel antioxydant
important
Cette activiteacute antioxydante est lieacutee agrave plusieurs paramegravetres physico-chimiques et qui est
deacutependante de la structure moleacuteculaire selon plusieurs eacutetudes (Teixeira et al 2005 Brenda et
al 2005 Trouillas et al 2006 Mendoza-Wilson amp Glossman-Mitnik 2006 Wei et al
2006) Cela ducirc agrave la preacutesence des groupements hydroxyles dans les composeacutes pheacutenoliques qui
peuvent servir comme donneurs drsquohydrogegravene etou drsquoeacutelectron (Alimi et al 2013)
Concernant la correacutelation entre le pouvoir antioxydant et les contenus en pheacutenols
totaux et en flavonoiumldes nos reacutesultats confortent de nombreuses recherches qui confirment
cette correacutelation (Kalt et al 1999 Zheng amp Wang 2001 Cai et al 2004 Rosa et al 2006
Katalinic et al 2006 Tawaha et al 2007 Kopjar et al 2009 Zhang et al 2013 Kasangana
et al 2015)
6- Toxiciteacute aigue
La partie aeacuterienne de la plante Carabica a eacuteteacute sujet drsquoune eacutetude toxicologique in vivo
Lrsquoeacutevaluation de la toxiciteacute aiguumle a eacuteteacute reacutealiseacutees par deux meacutethodes une par vois orale et
lrsquoautre par vois intrapeacuteritoniale
6-1 Toxiciteacute par voie orale
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica de la partie aeacuterienne a eacuteteacute testeacute pour sa
toxiciteacute in vivo sur des rats avec des doses de 500mgkg agrave 10000mgkg Lrsquoadministration de
lrsquoextrait eacutetait par voie orale -gavage-
La toxiciteacute aigue permet de connaitre la plus petite dose qui administreacutee en une seule
prise entraine la mort de 50 des animaux dans les 24 agrave 48 heures apregraves le traitement la
dureacutee maximale drsquoobservation eacutetant de 15 jours (Dubick et al 1993) Ceci permet de
deacuteterminer la dose leacutetale (DL50) Lrsquoeacutevolution du poids corporel (tableau 21 figure 31) est
Reacutesultats amp discussion
86
enregistreacutee le long de la peacuteriode drsquoessai (14 jours) Le gain du poids est calculeacute pour chacun
des lots (tableau 22)
Au bout des 14 jours aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee chez les diffeacuterents lots traiteacutes
par lrsquoextrait de la plante C arabica On peut deacuteduire que la DL50 est supeacuterieure agrave
10000mgkg Drsquoautre part les rats traiteacutes par lrsquoextrait ont preacutesenteacute une carte clinique
deacutepourvue de signes de toxiciteacute Leur comportement eacutetait semblable agrave celui des rats teacutemoins
Selon la classification de Hodge amp Sterner (1943) lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de la plante C arabica ssp arabica est pratiquement non toxique
Tab 21 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L) JOURS
J1 J2 J4 J6 J10 J14
L Teacutemoin 0125plusmn
007
0135plusmn
005
0137 plusmn
004
0137plusmn
005
0141plusmn
0025
0146plusmn
0017
L 1
(10000mgkg)
0149plusmn
004
0152plusmn
003
0164plusmn
007
0162plusmn
0046
0167plusmn
0065
0181plusmn
007
L 2
(5000mgkg)
0136plusmn
0017
0151plusmn
002
0151plusmn
003
0152plusmn
0012
0162plusmn
005
0168plusmn
007
L 3
(2500mgkg)
0096plusmn
0016
0101plusmn
0016
0109plusmn
0012
0102plusmn
0012
0107plusmn
0011
0125plusmn
0009
L 4
(500mgkg)
0103plusmn
003
0104plusmn
0015
0108plusmn
0026
0110plusmn
0016
0112plusmn
0016
0124plusmn
0013
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Reacutesultats amp discussion
87
Fig 31 Evolution du poids corporel
Drsquoapregraves la figure 31 tous les lots ont preacutesenteacute une eacutevolution corporelle normale et
similaire agrave celle du lot teacutemoin
Tab 22 Gain du poids par lot exprimeacute en Kg et en pourcentage
Gain Poids
(GP) LOT 1 LOT 2 LOT 3 LOT 4 Teacutemoin
Moyenne 1er
jour
0149 plusmn
0004
0136 plusmn
0017
0096 plusmn
0016
0103 plusmn
0015
0125 plusmn
0007
Moyenne
14egraveme
jour
0181 plusmn
0007
0168 plusmn
001
0125 plusmn
0009
0124 plusmn
0013
0146 plusmn
0007
GP en Kg 0032 0032 0029 0021 0021
GP en 1776 1915 2310 1694 1438
Apregraves la peacuteriode de surveillance les rats ont eacuteteacute sacrifieacutes pour isoleacutes les diffeacuterents
organes Ces derniers preacutesentaient un aspect normal similaire agrave celui des organes du lot
teacutemoin (figure 32)
0
002
004
006
008
01
012
014
016
018
02
1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14 J
LOT 1
LOT 2
LOT 3
LOT 4
TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
88
Le sacrifice des rats
Rat sacrifieacute Le foie Le cœur
Les reins Les poumons La rate
Fig 32 les organes peseacutes apregraves sacrifice des rats
6- 2 Toxiciteacute aigue par voie Intra-peacuteritoneacuteale (IP)
La toxiciteacute aigue a eacuteteacute testeacutee sur des rats regroupeacutes en 4 lots dont 3 lots ont eacuteteacute traiteacute
respectivement par 3 doses de lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica (750mgkg
1500mgkg 3000mgkg) et le 4egraveme
lot est consideacutereacute comme lot teacutemoin
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoabsence de symptocircmes de toxiciteacute dans les 3 lots ainsi
que le lot teacutemoin Le comportement des rats eacutetait normal avec une deacutemarche et activiteacute
normale Absence de difficulteacutes respiratoires convulsion diarrheacutee coma sang dans les
urines et gonflement de la partie drsquoinjection chez tous les rats des diffeacuterents lots testeacutes ainsi
que le lot teacutemoin
Lrsquoeacutevolution du poids corporel des lots traiteacutes par la partie aeacuterienne de Carabica eacutetait normale
et comparable agrave celle du lot control (tableau 23 figure 33)
Reacutesultats amp discussion
89
Tab 23 Evolution du poids corporel des animaux en Kg()
LOT (L)
JOURS
J 1 J 2 J 4 J 6 J 10 J 14
L 1
(750mgkg)
0120plusmn
0015
0123plusmn
0014
0124plusmn
0014
0126plusmn
0013
0130plusmn
0012
0138plusmn
0010
L 2
(1500mgkg)
0131plusmn
0028
0133plusmn
0018
0136plusmn
0023
0140plusmn
0013
0145plusmn
003
0153plusmn
0044
L 3
(3000mgkg)
0123plusmn
0034
0125plusmn
0011
0128plusmn
0019
0126plusmn
0017
0136plusmn
002
0149plusmn
0047
L Teacutemoin 0125plusmn
0018
0126plusmn
005
0130plusmn
0032
0134plusmn
006
0139plusmn
005
0148plusmn
0048
valeurs exprimeacutee en moyenne plusmn Ecartype (n= 6)
Fig 33 Evolution du poids corporel des animaux
Le gain du poids dans chaque lot eacutetait calculeacute qui est preacutesenteacute par la diffeacuterence entre
la moyenne du poids final et la moyenne du poids initial de chaque de chaque lot tableau 24)
Ces derniers preacutesentaient un aspect normal et similaire agrave celui des organes du lot teacutemoin
000
002
004
006
008
010
012
014
016
018
1er jour 2egraveme jour
4egraveme jour
6egraveme jour
10 egraveme jour
14egraveme jour
Lot 1
LOT 2
LOT3
LOT TEMOIN
Evolution du poids
Po
ids
Kg
Reacutesultats amp discussion
90
Tab 24 Gain du poids par lot
GAIN POIND LOT 1 LOT 2 LOT3 TEMOIN
Moyenne J 1 0120plusmn
0015
0131plusmn
0009
0123plusmn
0009
0125plusmn
0008
Moyenne J 14 0138plusmn
0010
0153plusmn
0014
0149plusmn
0007
0148plusmn
0008
GP en Kg 0018 0022 0026 0023
GP en gram 18167 22000 25833 23000
GP en 13164 14379 17338 15541
Les rats des lots traiteacutes nrsquoont pas preacutesenteacute des signes de toxiciteacutes ou troubles
anormaux ainsi que lrsquoeacutevolution du poids apparait semblable entre le lot teacutemoin et les lots
traiteacutes
Drsquoapregraves ces reacutesultats lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante C arabica est consideacutereacute
non toxique pour les doses traiteacutees
Selon les eacutetudes faites sur drsquoautres espegraveces du genre Cleome il ressort que les extraits
obtenus de ce genre Cleome ne sont pas toxiques
Parimala Devi et al (2002) ont rapporteacute que lrsquoextrait meacutethanolique de Cviscosa est non
toxique et ne provoque pas la mort des animaux agrave une dose de 3200mgKg poids corporel
Asis Bala et al (2010) ont deacutetermineacute la DL de lrsquoextrait meacutethanolique de Cgynandra sur des
souris qui est eacutegale agrave 2000mgKg poids corporel
Notre eacutetude a reacuteveacuteleacute que lrsquoadministration de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Cleome arabica par voie orale et par voie intrapeacuteritoneacuteale
respectivement agrave une dose de 10000mgKg et 3000mgKg nrsquoinduit pas de signes de toxiciteacute
ou altegravere neacutegativement ni le comportement ni le poids des animaux aux doses prescrites
En conclusion les reacutesultats de notre eacutetude srsquoaccordent avec les eacutetudes deacutejagrave reacutealiseacutees sur
drsquoautres espegraveces du genre Cleome (Parimala Devi et al 2002 Asis Bala et al 2010)
Reacutesultats amp discussion
91
7- Toxiciteacute larvicide sur les larves Artemia salina
La cytotoxiciteacute de lrsquoextrait hydroalcoolique des diffeacuterentes parties feuille graine
racine a eacuteteacute eacutevalueacutee par le test des larves (Artemia salina)
Le taux de mortaliteacute des larves eacutetait calculeacute apreacutes 24 heures pour quatre doses
diffeacuterentes des extraits (1mgml 05mgml 025mgml 01mgml)
Une solution de CuSO4 avec les mecircmes doses et lrsquoeau de mer reconstitueacutee sont servis de
teacutemoin positif et control respectivement (tableau 25 figure 34)
Tab 25 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24 heures ()
Concentration
(microgml)
Taux de mortaliteacute (TM )
Feuille graine racine teacutemoin + teacutemoin -
1000 9333plusmn115 100 plusmn000 8667plusmn153 100 plusmn000 Abs
500 8667plusmn153 9333plusmn115 8333plusmn115 100 plusmn000 Abs
250 6667plusmn153 6333plusmn153 7000plusmn100 100 plusmn000 Abs
100 333plusmn058 5667plusmn153 10 plusmn000 100 plusmn000 Abs
Abs absence de mortaliteacute valeur exprimeacutee en moyenne plusmn eacutecartype (n=3)
Les reacutesultats montrent lrsquoeacutevolution de la mortaliteacute et fonctions des concentrations des extraits
des diffeacuterentes parties de la plante Carabica
Les concentrations du CuSO4 comparables aux extraits ont provoqueacutees 100 de mortaliteacute
dans le lot teacutemoins positif Par contre aucune mort nrsquoa eacuteteacute enregistreacutee dans le lot control
On observe dans les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles graines et racines
une mortaliteacute des larves drsquoArtemia salina dose- deacutependante
Reacutesultats amp discussion
92
Fig 34 Evolution de la mortaliteacute apregraves 24H
Les valeurs des CL50 deacuteduites des courbes (figure 35) sont exprimeacutees dans le tableau 26
Fig 35 Courbes des CL50 apregraves 24 heures
0
20
40
60
80
100
Feuille graine racine temoin + temoin -
1000 microgml
500 microgml
250 microgml
100 microgml
Ta
ux
de
mo
rta
liteacute
Taux de mortaliteacute apregraves 24 heures
y = 4780x - 4233Rsup2 = 0901
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
GRAINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 9017x - 1651Rsup2 = 0881
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
FEUILLE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mort
ali
teacute e
n
y = 7616x - 1297Rsup2 = 0829
020406080
100120
1 15 2 25 3 35 4
RACINE CL 50 24H
Log concentration microgml
Mo
rta
liteacute
en
Reacutesultats amp discussion
93
Tab 26 Valeurs des CL50 apregraves 24H
Partie de plante CL5024H microgml
Feuille 24266
Graines 8531
Racine 22855
De la lecture des reacutesultats il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoextrait hydroalcoolique des graines
preacutesente la toxiciteacute la plus eacuteleveacutee avec une valeur de CL50 de 8531microgml Alors que lrsquoextrait
des feuilles est consideacutereacute relativement moins toxique par rapport agrave lrsquoextrait des racines de
Carabica
Ces reacutesultats permettent drsquoeacutetablir lrsquoordre des trois extraits selon leur cytotoxiciteacute Extrait de
graine gt extrait des racines gt extrait des feuilles Selon les valeurs drsquoIC50 les extraits sont
cytotoxiques +++ (250microgml gt CL50 ge 100microgml)
Plusieurs eacutetudes comme celles de Zani et al (1995) et El-Gohary et al (2013) ont
rapporteacute que la toxiciteacute pour les crevettes a une bonne correacutelation avec lactiviteacute antitumorale
antiparasitaire chez lhomme
Notre travail montre que la cytotoxiciteacute sur les larves de crevettes Artemia salina la
plus eacuteleveacutee est localiseacutee au niveau des graines par rapport aux autres parties de la plante
Carabica (feuilles et racines) Ceci reacutevegravele que cette partie de la plante contient des
substances qui peuvent ecirctre consideacutereacutees comme des agents cytotoxiques et qui sont utiliseacutes
comme des produits anticanceacutereux
Nos reacutesultats sont en accord avec les travaux faits par Tigrine et al (2013) qui
montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique des feuilles possegravede une activiteacute anticanceacutereuse sur
cinq ligneacutees cellulaires canceacutereuses MCF-7 DLD-1 HepG2 HeLa et SK-N-BE
correspondent au cancer du sein du colon du foie du col de lrsquouteacuterus du cerveau
respectivement Ils rapportent que lrsquoeffet preacuteventif et apoptotique de lrsquoextrait de C arabica
est peut ecirctre du sa richesse en matiegravere de polypheacutenols y compris les flavonoiumldes
Reacutesultats amp discussion
94
Une eacutetude plus avanceacutee de Molla et al (2016) a permis drsquoeacutevaluer lrsquoeffet
anticanceacutereux des composeacutes pheacutenoliques isoleacutes acides pheacutenols et flavonoiumldes de type
flavonol et flavanol sur quatre ligneacutees canceacutereuses (HELA HCT-116 MCF-7 HEPG-2
respectivement pour les cancers du col de lrsquouteacuterus colon sein foie) Cette eacutetude a permis de
confirmer que tous composeacutes pheacutenoliques testeacutes sont pourvus drsquoun effet anticanceacutereux
Quelques moleacutecules sont aussi identifieacutees dans nos extraits comme la quercetine quercetine-
3-O-glucoside deacuteriveacute drsquoapigenine Deacuteriveacute drsquoacide cinnamique et acide p-coumarique Ceci
peut expliquer nos reacutesultats concernant la cytotoxiciteacute des graines par rapport aux feuilles et
qui peut ecirctre ducirc agrave la preacutesence des acides pheacutenols en plus des flavonoiumldes dans lrsquoextrait des
graines et pareillement pour lrsquoextrait des racines
8- Cytotoxiciteacute heacutemolytique
La toxiciteacute heacutemolytique des extraits eacutetait eacutevalueacutee vis-agrave-vis les eacuterythrocytes du sang
preacuteleveacute des lapins
Les reacutesultats du tableau 27 illustrent lrsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse des globules
rouges en fonction de la concentration des diffeacuterents extraits des feuilles graines et racines de
C arabica Les concentrations testeacutees sont 1mgml 5mgml 10mgml et 20mgml
Tab 27 Taux drsquoheacutemolyse par concentration
Concentration 1 mgml 5 mgml 10 mgml 20 mgml
GRAINE 2143plusmn 033 6714plusmn 027 9286plusmn 027 20143plusmn012
FEUILLE 714plusmn 006 1857plusmn 004 3286plusmn 001 5857plusmn 002
RACINE 571plusmn 004 1000plusmn 006 1429plusmn 002 3000plusmn 014
La figure 36 exprime en courbe lrsquoeacutevolution du taux heacutemolytique des eacuterythrocytes Les CL50
ont eacuteteacute deacuteduites agrave partir des graphes (figure 37) et preacutesentaient dans le tableau 28
Reacutesultats amp discussion
95
Fig 36 Evolution du taux drsquoheacutemolyse
Fig 37 Courbes des IC50 de lrsquoheacutemolyse
0
50
100
150
200
250
1 5 10 20
GRAINE
FEUILLE
RACINE
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Evolution du taux dheacutemolyse
Concentration des extraits (mgml)
y = 0012x + 0034Rsup2 = 0983
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 RACINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0027x + 0049Rsup2 = 0999
0
20
40
60
80
100
0 10 20 30
IC 50 FEUILLE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
y = 0092x + 0122Rsup2 = 0987
0
50
100
150
200
250
0 10 20 30
IC 50 GRAINE
Concentration mgml
Ta
ux
dh
eacutemo
lyse
Reacutesultats amp discussion
96
Tab 28 Les valeurs des IC50 correspondent agrave 50 drsquoheacutemolyse
Extrait IC 50 (mgml)
GRAINE 41
FEUILLE 167
RACINE 3883
Saponine 0 316
Les reacutesultats indiqueacutes dans le tableau 27 montrent que lrsquoextrait des graines preacutesente
lrsquoeffet heacutemolytique le plus important avec un taux de 2143 plusmn 033 agrave la concentration de
1mgml suivi par lrsquoextrait des feuilles et racines (714 plusmn 006 et 571 plusmn 004)
respectivement
A la concentration de 5mgml lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse qui
deacutepasse les 50 A cette mecircme concentration lrsquoextrait des feuilles preacutesente un taux
relativement infeacuterieur (1857 plusmn 004) et agrave effet moins important lrsquoextrait des racines (10 plusmn
006)
Signalant que le taux drsquoheacutemolyse approche agrave 100 pour lrsquoextrait des graines agrave
concentration de 10mgml en le comparant agrave celui de lrsquoextrait des feuilles (3286 plusmn 001)
et aussi lrsquoextrait des racines (1429plusmn 002)
En augmentant la concentration agrave 20mgml on remarque que le pourcentage de
cellules heacutemolyseacutees en preacutesence de lrsquoextrait des graines atteint les 100 En ce qui concerne
les deux autres extraits celui des feuilles et des racines le taux est plus important par rapport
aux concentrations preacuteceacutedentes qui est de 5857 plusmn 002 et 30 plusmn 014 respectivement
Une relation Dose-deacutependante entre la concentration des diffeacuterents extraits et le taux
drsquoheacutemolyse des eacuterythrocytes a eacuteteacute deacutemontreacutee ougrave le pourcentage drsquoheacutemolyse augmente avec
la concentration de lrsquoextrait Les courbes drsquoeacutevolution du taux drsquoheacutemolyse ont eacuteteacute traceacutees afin
de deacuteterminer lrsquoIC50 qui correspond agrave la concentration neacutecessaire pour provoquer
lrsquoheacutemolyse de 50 des globules rouges
Les IC50 obtenues sont de 41 167 et 3883mgml pour lrsquoextrait des graines feuilles
et racines respectivement
Reacutesultats amp discussion
97
La saponine est utiliseacutee comme teacutemoin positif preacutesente une valeur drsquoIC50 eacutegale agrave
0316mgml une concentration faible qui reflegravete un pouvoir heacutemolytique potentiel Ceci est
conforme avec drsquoautres eacutetudes qui ont rapporteacute que les saponines ont la capaciteacute de lyser les
eacuterythrocytes (Ahn et al 1998 Sindambiwe et al 1998 Estrada et al 2000 Molgaard et al
2000 Woldemichael amp Wink 2001) Les recherches sur les proprieacuteteacutes heacutemolytiques des
saponines sont geacuteneacuteralement attribueacutees agrave linteraction entre ces moleacutecules et les steacuterols de la
membrane eacuterythrocytaire (Sparg et al 2004)
Lrsquoeffet heacutemolytique des extraits testeacutes peut ecirctre ducirc agrave un effet synergique des autres
meacutetabolites secondaires qui se combinent avec les saponines de chaque extrait brut ou peut-
ecirctre en raison de la varieacuteteacute des saponines existantes dans lextrait (diffeacuterents les uns des autres
par les fragments glycon et aglycon qui semblent jouer un rocircle dans lactiviteacute heacutemolytique des
saponines) (Baumann et al 2000 Hashim 2014)
Il a eacuteteacute rapporteacute que lactiviteacute heacutemolytique augmente avec le nombre croissant de
groupes polaires dans le groupe aglycon en plus les saponines steacuteroiumldiennes et triterpeacutenoiumldes
avec une seule chaicircne de sucre (monodesmosides) ont une forte activiteacute heacutemolytique par
rapport agrave celles agrave deux chaicircnes de sucre (bidesmoside) qui ont montreacute une activiteacute plus faible
(Francis 2002)
Les reacutesultats obtenus par le criblage phytochimique reacutevegravelent la preacutesence des saponines
dans les trois extraits de C arabica mecircme que lrsquoheacutemolyse des cellules neacutecessite des doses
fortes par rapport au teacutemoin positif
Lrsquoextrait des graines a preacutesenteacute un taux drsquoheacutemolyse relativement important par
rapport aux deux autres extraitsEn ce basant sur ces donneacutees cet effet peut ecirctre expliqueacute par
sa richesse en tripterpegravenes
Les reacutesultats obtenus peuvent ecirctre beacuteneacutefiques vu que ces parties de la plantes (feuilles
graines et racines) sont pourvues drsquoun effet heacutemolytique et toxique sur les eacuterythrocytes agrave des
concentrations relativement eleveacutees La deacutetermination du pouvoir heacutemolytique de notre
plante est parait indispensable pour une meilleure connaissance et adaptation rationnelle de la
phytotheacuterapie traditionnelle surtout pour les modes dadministration et les preacutecautions agrave
prendre lors de son utilisation afin drsquoeacuteviter lrsquoeacuteclatement des cellules sanguines
Reacutesultats amp discussion
98
9- Activiteacute antalgique
Lrsquoeffet antalgique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica a eacuteteacute eacutevalueacute par les trois tests (tails-flick test de la plaque chauffante et le test de
torsion)
9-1 Test tail-flick
Lrsquoextrait hydroalcoolique de C arabica a eacuteteacute eacutevalueacute (figure 38 39) par trois doses
250mgkg 500mgkg et 1000mgkg Le taux drsquoinhibition eacutetait calculeacute par rapport au teacutemoin
neacutegatif
Les reacutesultats obtenus pour le lot controcircl lot teacutemoin positif (acide aceacutetylsalicylique) et
les lots traiteacutes par les diffeacuterentes doses de lrsquoextrait sont exprimeacutes dans le tableau 29
Fig 38 Gavage de lrsquoextrait Fig 39 Immersion de la queue agrave 55degC
Reacutesultats amp discussion
99
Tab 29 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test tail-flick Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 346 plusmn 028
4921
LOT 2 500 367 plusmn 011 +
5803
LOT 3 1000 426 plusmn 087 +
8360
TEMOIN + 100 498 plusmn 041
11442
control (-) 232 plusmn 065
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 0001) (P lt 00001) valeur
compareacutee au control (-) (P lt 0001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +(P lt 001) valeur compareacutee
au lot 1
Les reacutesultats obtenus par les lots traiteacutes par lrsquoextrait hydraolcoolique de la partie
aeacuterienne de Carabica (250 500 1000 mgKg) et lrsquoacide aceacutetylsalicylique (100mgkg)
compareacutes au lot control - (H2O) montrent que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot teacutemoin
positif est de 498 plusmn 041 secondes Cette valeur est significativement supeacuterieure agrave celle
obtenue par le lot control - Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoacide aceacutetylsalicylique possegravede un effet
inhibiteur de la douleur thermique
Les lots traiteacutes par lrsquoextrait de Carabica agrave diffeacuterentes doses ont montreacute un effet analgeacutesique
significativement supeacuterieur au control - Les deux lots 2 et 3 (500 et 1000mgKg) preacutesentent
des diffeacuterences significatives par rapport au lot 1 (250mgKg)
Lrsquoeffet produit par lrsquoextrait de Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel a produit un
temps de reacuteaction (426 plusmn 087 secondes) non significativement diffeacuterent agrave celui du temps de
reacuteaction du teacutemoin positif (498 plusmn 041secondes) Il peut ecirctre deacuteduit que lrsquoeffet analgeacutesique
produit par lrsquoextrait Carabica agrave la dose de 1000mgKg poids corporel est comparable agrave celui
de lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave la dose de 100mgKg
Lrsquoordre du pourcentage drsquoinhibition (tableau 34) est de
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
Il ressort de la lecture des reacutesultats qursquoil yrsquoa une relation entre la dose et lrsquoeffet
produit (figure 40) les lots 1 2 et 3 traiteacutes avec les doses respectives (250 500 et 1000
mgml) preacutesentent des temps de reacuteaction de (346 plusmn 028 367 plusmn 011 et 426 plusmn 087
secondes)
Reacutesultats amp discussion
100
Fig 40 Relation dose-deacutependante de test tail-flick
La dose effective (ED50) est la dose responsable de 50 de lrsquoeffet analgeacutesique par
rapport au lot teacutemoin neacutegatif dont elle est eacutegale agrave 29184mgkg poids corporel
9-2 Test de la plaque chauffante
Le test de la plaque chauffante (figure 41et 42) est effectueacute en traitant trois lots avec
les doses 250mgkg 500mgkg et 1000mgkg de lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de C arabica
Un lot gaveacute avec lrsquoeau distilleacutee comme teacutemoin neacutegatif et un lot teacutemoin positif qui est traiteacute
par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgkg
y = 0466x + 0364Rsup2 = 0993
0
20
40
60
80
100
0 02 04 06 08 1 12
Test tail-flick
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
101
Fig 41 Gavage de lrsquoextrait Fig 42 Rat sur la plaque chauffante agrave
55degC
Le tableau 30 montre le temps de reacuteaction et le taux inhibition calculeacute par rapport agrave lot
teacutemoin neacutegatif
Tab 30 Temps de reacuteaction et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test plaque chauffante Dose mgkg T de reacuteaction laquo S raquo Inhibition
LOT 1 250 192 plusmn 019
735
LOT 2 500 246 plusmn 012 +
3740
LOT 3 1000 28 plusmn 011 ++
5637
TEMOIN + 100 426 plusmn 061
13786
TEMOIN - 179 plusmn 026
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 005)
(P lt 0001)
(P lt
00001) valeur compareacutee au control (-)
(P lt 0001)
(P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin
(+) + ( P lt 001)
++ ( P lt 001) valeur compareacutee au lot 1
Il ressort de la lecture de tableau 30 que le temps de reacuteaction enregistreacute par le lot
teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique (426 plusmn 061 secondes) est tregraves hautement
significatif par rapport aux diffeacuterents lots (traiteacutes par lrsquoextrait et teacutemoin neacutegatif)
Reacutesultats amp discussion
102
Une diffeacuterence hautement significative est signaleacutee entre le lot teacutemoin neacutegatif et le lot 3
(1000mgKg) et une diffeacuterence moins importante enregistreacute avec le lot 2 (500mgKg) Par
contre la comparaison avec le lot 1 (250 mgKg) reacutevegravele qursquoil nrsquoexiste pas de diffeacuterences
significatives
Lrsquoanalyse statistique de la comparaison des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait
de la plante signale qursquoil existe des diffeacuterences significatives et tregraves significatives entre les
trois lots Ceci deacutenote que la dose de lrsquoextrait peut avoir un effet sur le temps de reacuteaction
enregistreacute
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit et permet drsquoordonner les diffeacuterents lots selon leur effet
analgeacutesique Acide aceacutetylsalicylique gt extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait
(250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 30) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant on
remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des temps de reacuteaction (192 plusmn 019 246 plusmn 012 28 plusmn 011 secondes)
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
43)
Fig 43 Relation dose-effet par le test plaque chauffante
La courbe reacutealiseacutee a permis de deacuteduire la valeur ED50 qui est eacutegale agrave 84853mgkg
du poids corporel
y = 0614x - 0021Rsup2 = 0901
0
10
20
30
40
50
60
70
0 02 04 06 08 1 12
Plaque chauffante
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
103
9-3 Test de torsion (acide aceacutetique)
Lrsquoeffet analgeacutesique est mesureacute par le test de torsion (figure 44 et 45) Lrsquoactiviteacute des
lots traiteacutes par lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica agrave diffeacuterentes doses est compareacutee agrave
celui de lot teacutemoin positif traiteacute par lrsquoacide aceacutetylsalicylique et le lot control neacutegatif (sans
traitement) Les reacutesultats obtenus sont exprimeacutes dans le tableau 31
Fig 44 Injection IP de lrsquoacide aceacutetique Fig 45 La crampe
Tab 31 Nombre de torsion et le pourcentage drsquoinhibition de lrsquoextrait
Test de torsion Dose mgkg Nbr de crampes Inhibition
LOT 1 250 6716 plusmn 248
2942
LOT 2 500 6033 plusmn 163 +
3660
LOT 3 1000 3016 plusmn 325 ++
6830
TEMOIN + 100mg 28 plusmn 236 7058
TEMOIN - 9516 plusmn 312
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET (Test Newman-Keuls n=6) (P lt 00001) valeur compareacutee au
control (-) (P lt 00001) valeur compareacutee au teacutemoin (+) +( P lt 001) ++ (Plt00001) valeur
compareacutee au lot 1
Reacutesultats amp discussion
104
Lrsquoanalyse statistique des reacutesultats obtenus entre les lots traiteacutes par lrsquoextrait de la plante
signale qursquoil existe des diffeacuterences tregraves hautement significatives Une diffeacuterence tregraves
hautement significative est aussi enregistreacutee entre le lot teacutemoin positif et le lot teacutemoin neacutegatif
Il ressort de la lecture de tableau 31 que le nombre de torsion enregistreacute par le lot
teacutemoin positif (28 plusmn 236) est tregraves hautement significatif par rapport aux lots traiteacutes 1 et 2
(6716 plusmn 248 et 6033 plusmn 163 crampes) respectivement alors la diffeacuterence par rapport au lot
3 (1000mgKg) est non significative
Le pourcentage drsquoinhibition est deacuteduit dont le lot 3 preacutesente le taux drsquoinhibition le
plus important (6830) par rapport aux deux autres lots Les reacutesultats ont permis drsquoordonner
les diffeacuterents lots selon lrsquoeffet analgeacutesique comme suit
Acide aceacutetylsalicylique ~ extrait (1000mgKg) gt extrait (500mgKg) gt extrait (250mgKg)
A partir des reacutesultats obtenus (tableau 31) le temps de reacuteaction est dose-deacutepondant
On remarque que les lots 1 2 et 3 avec les doses respectives (250 500 et 1000 mgml)
preacutesentent des nombres de contorsion de 6716 plusmn 248 6033 plusmn 163 3016 plusmn 325 crampes
respectivement Ceci deacutenote une relation dose-deacutependante vis-agrave-vis de lrsquoeffet mesureacute (figure
46)
Fig 46 Relation dose-effet par le test de torsion
La courbe traceacutee permet de deacuteduire la dose effective ED50 qui est trouveacutee eacutegale agrave
68352mgkg poids corporel
y = 0534x + 0135Rsup2 = 0974
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 02 04 06 08 1 12
Test de torsion
Dose de lextrait g kg
Ta
ux
di
nh
ibit
ion
Reacutesultats amp discussion
105
Dans notre eacutevaluation de lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie
aeacuterienne de la plante Carabica 3 tests ont eacuteteacute utiliseacutes test de tail flick test de la plaque
chauffante et le test de torsion
Il est clairement visible que lrsquoextrait Carabica agrave travers les trois tests utiliseacutes preacutesente un
effet analgeacutesique significatif par rapport au lot control neacutegatif Dans le test de la plaque
chauffante lrsquoeffet produit par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose la plus eacuteleveacutee
est significativement infeacuterieur agrave celui produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique agrave 100mgKg poids
corporel Les deux tests en occurrence celui de tail flick et le test de torsion lrsquoeffet produit
par lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica agrave la dose de 1000mgKg est comparable agrave celui
produit par lrsquoacide aceacutetylsalicylique
Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait de Carabica est dose-deacutependant pour les trois tests
ceci est en accord avec plusieurs eacutetudes (Biswas et al 1991 Okolo et al 1995 Olugbenga
et al 2001 Halmi et al 2016 Zeghad et al 2016)
Les deux premiers tests (tail flick et test de la plaque chauffante) nous renseigne sur
lrsquoeffet analgeacutesique produit agrave travers une action centrale Le 3egraveme
test de torsion nous oriente
sur un meacutecanisme peacuteripheacuterique (Xie et al 2008)
Elisabetsky et ses collaborateurs (1995) rapportent que ces contractions provoqueacutees
par lrsquoacide aceacutetique sont dues agrave la production et agrave la libeacuteration des meacutediateurs algogegravenes via
les cyclooxygeacutenases (COX) et la biosynthegravese des prostaglandines notamment la PGE2
produite par la COX-1 Ces derniers excitent par la suite les terminaisons nerveuses de la
douleur eacutetant donneacute que la contraction abdominale est lieacutee agrave la sensibilisation des reacutecepteurs
nociceptifs aux prostaglandines (Chen 1993) Lrsquoadministration de lrsquoacide aceacutetylsalicylique
(100mgkg) en traitement preacuteventif aux rats a inhibeacute de faccedilon significative lrsquoaction algogegravene
de lrsquoacide aceacutetique en inhibant la formation des meacutediateurs de la douleur dans les tissus
peacuteripheacuteriques car elle inhibe lrsquoactiviteacute de la COX-1 et de la COX-2 (Hirose et al 1984)
A partir des reacutesultats obtenus on peut conclure que lrsquoextrait de Carabica possegravede une
activiteacute analgeacutesique On peut postuler que cette activiteacute pourrait ecirctre attribueacutee agrave diffeacuterents
constituants preacutesents dans lrsquoextrait qui pourraient exercer leur effet analgeacutesique au niveau
central etou peacuteripheacuterique
Reacutesultats amp discussion
106
Des eacutetudes preacuteceacutedentes utilisant des souris swiss albinos ont rapporteacute que des extraits
hydroalcooliques (100 agrave 400 mgKg po) des espegraveces du genre Cleome en lrsquooccurrence de
Cviscosa et C rutidosperma possegravedent un effet analgeacutesique (Bose et al 2007
Parimaladevi et al 2003)
Le criblage phytochimique effectueacute sur lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica a
reacuteveacuteleacute la preacutesence de phytoconstituants comme les alcaloiumldes flavonoiumldes (quercetine
apigenine kaempferol) et triterpegravenes (Koyama et al 2001 Sukma et al 2002
Deachapunya et al 2005 Ajaiyeoba et al 2008 Nsonde-Ntandou et al 2010) Ces
constituants sont susceptibles drsquoecirctre responsables de lrsquoeffet analgeacutesique observeacute agrave travers les
trois tests de lrsquoextrait hydroalcoolique de Carabica
Ce reacutesultat nous incite agrave approfondir cet aspect par une eacutetude pharmacologique
rationnelle Le point de deacutepart serait de proceacuteder par un fractionnement pharmaco-guideacute de
lrsquoextrait hydroalcoolique dans le but drsquoidentifier et drsquoisoler la ou les moleacutecules impliqueacutees
dans lrsquoactiviteacute Ceci pourrait ecirctre poursuivi par lrsquoeacutevaluation des effets des moleacutecules pures et
de leurs meacutecanismes drsquoaction
Reacutesultats amp discussion
107
10- Effet cicatrisant de C arabica
Les reacutesultats des deux types drsquoessais (brulures thermiques et test drsquoexcision) effectueacutes pour
lrsquoeacutevaluation de lrsquoeffet cicatrisant de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de la plante
Carabica sont preacutesenteacutes comme suit
10-1 Plaies de brucirclures thermiques
Les reacutesultats obtenus dans le cas des brulures thermiques pour les trois lots control ndash
(physiologique) lot teacutemoin + (Cicatrylreg) et le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de Carabica sont preacutesenteacutes dans le tableau 32 en exprimant lrsquoeacutevolution de la
contraction des plaies
Tab 32 Pourcentage drsquoeacutevolution de contraction des plaies
Lot
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12 J15
Control ndash - 399 plusmn 115 616 plusmn 121 1324 plusmn 142 3480 plusmn 113 6560 plusmn 140
Teacutemoin + - 435 plusmn 129 1312 plusmn 124 2130 plusmn 128 4418 plusmn 132 8008 plusmn 108
EXT ETH - 768 plusmn 107 1468 plusmn112 2859 plusmn 146+
5550 plusmn 126+
9169plusmn101+
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET Test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash
(+ P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin +
Le tableau 33 et la figure 47 preacutesentent la progression et la description de la
contraction des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
Reacutesultats amp discussion
108
Tab 33 Preacutesentation des reacutesultats des plaies Brucirclures thermiques
Jours Description des reacutesultats
J0 Pratiquement toutes les plaies preacutesentent la mecircme surface et la mecircme
texture
J3 Toutes les plaies des diffeacuterents lots ont preacutesenteacute un aspect sec avec
un gonflement leacuteger et un changement de la couleur de la peau bruleacutee
Notant que les plaies traiteacutees par le teacutemoin + ont eacuteteacute leacutegegraverement
humides par rapport aux autres plaies La diffeacuterence des taux de
contraction agrave ce jour nrsquoest pas vraiment importante et qui varie de 4 agrave
7
J6 la couche supeacuterieure nrsquoest pas encore deacutetacheacutee mais un deacutebut drsquoun
eacutepaississement est remarqueacute La taille des plaies a connu une
diminution dont lrsquoextrait hydroalcoolique a preacutesenteacute un taux de
contraction important (1468 plusmn 112) par rapport agrave celui du controcircle-
(616 plusmn 121) et moins important par rapport agrave celui enregistreacute par le
teacutemoin + (1312 plusmn 124)
J9 Un eacutepaississement important de la peau des plaies eacutetait remarqueacute chez
les lots traiteacutes et la contraction est deacutebuteacutee par un deacutetachement de la
peau bruleacutee agrave partir des bords Les lots traiteacutes par EXT ETH et le
teacutemoin+ ont preacutesenteacute des taux de contraction importants (2859
plusmn146 et 2130 plusmn 128) par rapport au lot control ndash (1324 plusmn 142
)
J12 Toutes les plaies ont eacuteteacute deacutepourvues totalement de la couche de la
peau bruleacutee et les tailles des plaies ont vraiment diminueacute avec des
taux de 555 plusmn 126 4418 plusmn 132 et 3480 plusmn113 pour les lots
EXT ETH teacutemoin + et le lot control- respectivement
J15 La contraction est presque totale pour le lot EXT ETH (9169 plusmn
101) La contraction estimeacutee du lot teacutemoin + est eacutegale agrave 8068 plusmn
108 alors que les plaies non traiteacutees ont montreacute une contraction de
6560 plusmn140
Reacutesultats amp discussion
109
Fig 47 Progression de la cicatrisation des plaies de brucirclures thermiques chez le model lapin
LOT Control - Teacutemoin + (Cicatrylreg) EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
J15
Reacutesultats amp discussion
110
Fig 48 Evolution de la contraction des plaies des brucirclures thermiques
La lecture des reacutesultats des tableaux et de la figure 48 montre clairement qursquoil yrsquoa une
diffeacuterence significative dans lrsquoeacutevolution de la cicatrisation entre drsquoune part le lot traiteacute par
lrsquoextrait hydroalcoolique et le control- et drsquoautre part le lot teacutemoin + qui traiteacute par la
pommade (Cicatrylreg) et le control -
Concernant lrsquoextrait une diffeacuterence significative avec le control- est observeacutee dans la
contraction des plaies degraves le 3egraveme
jour (J3) et jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience Quant au lot traiteacute
par la pommade cette diffeacuterence avec le control ndash nrsquoest visible qursquoagrave partir du 6egraveme
jour (J6) et
se maintien jusqursquoagrave la fin de lrsquoexpeacuterience
La comparaison entre les lots traiteacutes par la pommade et lrsquoextrait hydroalcoolique de
C arabica montre que ce dernier preacutesente une meilleure efficaciteacute concernant la contraction
des plaies observable degraves le 3egraveme
jour (J3) et se maintient jusqursquoagrave la fin de la peacuteriode drsquoessai
A lrsquoissu du 15egraveme
jour (J15) le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique montre une contraction
presque totale des plaies Cette contraction est significativement meilleure que celle du lot
traiteacute par la pommade teacutemoin et le lot control-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12 J15
EXT ETH
Teacutemoin +
Control -
Jours apregraves les brucirclures
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
111
10- 2 Effet cicatrisant sur les plaies drsquoexcision
Le tableau 34 preacutesente lrsquoeacutevolution dans le temps du pourcentage de contraction des plaies
exprimeacutee en moyenne plusmn ET
Tab 34 Evolution des plaies drsquoexcision exprimeacutee en pourcentage de contraction
Lots
Pourcentage de contraction ()
J0 J3 J6 J9 J12
Control - - 592 plusmn 137 1639 plusmn 049 3762 plusmn 089 6776 plusmn 153
Teacutemoin + - 478 plusmn 14 2404 plusmn 092 4732 plusmn 103
7948 plusmn078
EXT ETH - 692 plusmn 117 3665 plusmn 113 +
7113 plusmn 092 +
92 plusmn 081 +
Valeur exprimeacutee en moyenne plusmn ET test de student (n=6) ( P lt 001 P lt 0001) valeur compareacutee au control ndash (+
P lt 001) valeur compareacutee au teacutemoin+
Tab 35 Description des reacutesultats des plaies dexcision
Jours Preacutesentation des reacutesultats
J0 la forme et la taille des plaies des diffeacuterents lots traiteacutes et non traiteacute sont
Pratiquement semblables
J3
La taille et la forme des diffeacuterentes plaies sont leacutegegraverement diffeacuterentes
avec des taux de contraction de 592 plusmn137 478 plusmn14 et 692 plusmn117
pour le control - le teacutemoin + et lot traiteacute par lrsquoextrait respectivement
J6
Une reacuteduction importante des surfaces des plaies traiteacutees par lrsquoextrait de
la plante (3665 plusmn 113) ce qui signifie une ameacutelioration de la
contraction Le lot control a preacutesenteacute le taux le plus faible qui est de
1639 plusmn 049 alors le lot traiteacute par cicatrylreg a preacutesenteacute un taux de
2404 plusmn 092
J9
La contraction des plaies est de plus en plus importante principalement
le lot traiteacute par lrsquoextrait de la plante (7113 plusmn 092) Les taux de 4732 plusmn
103 3762 plusmn 089 sont enregistreacutes par le lot teacutemoin + et le lot control
ndash respectivement
J12
La contraction est presque totale pour le lot traiteacute avec lrsquoextrait de la
plante (92 plusmn 081 ) et moins importante pour les deux autres lots
teacutemoin + et control ndash (7948 plusmn 078 6776 plusmn 153 )
Reacutesultats amp discussion
112
Fig 49 Chronologie de la cicatrisation des plaies drsquoexcision chez le model lapin
LOT Control- Teacutemoin + EXT ETH
J0
J3
J6
J9
J12
Reacutesultats amp discussion
113
Fig 50 Evolution de la contraction () des plaies drsquoexcisions
De la lecture du tableau (34 35) et de la figure (49 50) les reacutesultats montrent qursquoagrave J3
il n yrsquoa pas de diffeacuterences significatives entre le lot traiteacute par lrsquoextrait hydroalcoolique et le
lot control - Cette remarque est aussi valable pour le lot traiteacute par la pommade teacutemoin et le
lot control -
De J6 jusqursquoagrave J12 une bonne eacutevolution de la cicatrisation est observeacutee pour les lots traiteacutes
par lrsquoextrait hydroalcoolique de la plante Carabica et par la pommade compareacutee au lot
control- (P lt 0001)
Le lot traiteacute par lrsquoextrait montre une eacutevolution significativement meilleure de la gueacuterison sur
la peacuteriode de J6 jusqursquoagrave J12 par rapport au lot traiteacute par la pommade (P lt 001)
Dans la preacutesente eacutetude il est utile de souligner que seul le paramegravetre contraction des
plaies a eacuteteacute eacutevalueacute sur les deux tests (brulures thermiques et excision) Toute fois ce seul
paramegravetre demeure insuffisant pour eacutevaluer lrsquoefficaciteacute clinique chez lrsquoanimal et doit ecirctre
compleacuteteacute par la mesure drsquoautres paramegravetres notamment biochimiques et histologiques
Le paramegravetre contraction des plaies demeure une bonne indication pour deacuteceler drsquoeacuteventuels
extraits potentiellement actifs La contraction de la plaie indique le taux de la zone cicatriseacutee
pendant le processus de cicatrisation et un taux important de contraction de la plaie indique
une meilleure efficaciteacute du traitement (Krishnappa et al 2016)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
J0 J3 J6 J9 J12
Control -
Teacutemoin +
EXT ETH
Jours apregraves les excisions
Co
ntr
acti
on
des
pla
ies
Chronologies de contraction des plaies
Reacutesultats amp discussion
114
Les reacutesultats obtenus montrent que lrsquoextrait hydroalcoolique est doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante comparable agrave celle de la pommade Cicatrylreg par rapport au paramegravetre reacutegression
des plaies
Nos reacutesultats confortent ceux obtenus lors drsquoune eacutetude reacutealiseacutee par Singh et al 2017
sur plusieurs fractions (extrait meacutethanolique eacutether de peacutetrole aceacutetate drsquoeacutethyle et lrsquoextrait
aqueux) des graines de Cleome viscosa Cette eacutetude a reacuteveacuteleacute un potentiel cicatrisant tregraves
important des diffeacuterentes fractions dont lrsquoextrait meacutethanolique a enregistreacute un pourcentage de
contraction de 9089 plusmn 069 sur une peacuteriode drsquoeacutepitheacutelialisation de 23 jours
Drsquoautres travaux rapportent lrsquoeffet important de lrsquoextrait hydroalcoolique de plusieurs
plantes Les travaux de Farahpour et al (2016) indiquent que lextrait eacutethanolique de Moltkia
coerulea augmente significativement (p lt005) le pourcentage de contraction de la plaie
drsquoexcision caracteacuteriseacutee par une distribution de fibroblastes et de fibrocytes remarquablement
supeacuterieure par rapport aux autres lots Bramara et al (2017) rapportent que ladministration et
lrsquoapplication de lextrait hydroalcoolique de Lepidium meyenii deacutemontre un effet dose-
deacutependant remarquable sur les diffeacuterentes eacutetapes de la cicatrisation telles que la synthegravese du
collagegravene la contraction et la reacuteduction de la charge bacteacuterienne de la plaie
Bensegueni (2007) rapporte que lrsquohuile de lentisque est doueacutee drsquoun effet cicatrisant
important pour le traitement des brucirclures ce qui est aussi confirmeacute par les travaux de
Boulebda et al (2009) Belfadel (2009) Djerrou et al (2010) Maameri et al (2012) et
Abdeldjelil (2016)
Selon Bahramsoltani et al (2014) les produits naturels cicatrisants peuvent agir par
un des meacutecanismes suivants effet antioxydant antimicrobien anti-inflammatoire ou
stimulation de la synthegravese du collagegravene
Les travaux anteacuterieurs reacutealiseacutes par drsquoautres auteurs ont deacutemontreacute que C arabica est
doueacutees de proprieacuteteacutes antioxydantes (Djeridane et al 2010 Tigrine et al 2013) Nos travaux
sur lrsquoextrait hydroalcoolique utilisant les tests antioxydants in vitro (DPPH FRAP
Phosphomolybdenum) confortent cette information
Au cours du processus de la cicatrisation et speacutecialement pendant la phase inflammatoire les
cellules neutrophiles agrave activiteacute phagocytaire et non phagocytaire entrainent la production des
radicaux libres (Forman amp Thomas 1986 Dobke et al 1989 Chan et al 2009) dans la
plaies Ceci entraine un deacuteseacutequilibre de la balance oxydative malgreacute les meacutecanismes de
protection de lrsquoorganisme qursquoils soient enzymatiques (catalase superoxyde dismutase) ou
Reacutesultats amp discussion
115
non enzymatique (vitamine C E glutathion polyphenols) (Nguyen et al 1993 Horton
2003) Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures eacutetait effectueacute dans plusieurs
eacutetudes expeacuterimentales et cliniques Suite agrave cette action une ameacutelioration du pheacutenomegravene de la
cicatrisation et des effets beacuteneacutefiques ont eacuteteacute rapporteacutes tel que la reacuteduction de lrsquoincidence de
lrsquoinfection de la plaie la reacuteduction du temps de gueacuterison (Sahib et al 2010)
Drsquoautre part on note que parmi les contaminants les plus courants dans les plaies sont
Escherichia coli Staphylococcus aureus Streptococcus faecalis Pseudomonas aeruginosa et
Clostridium perfringens Clostridium tetani et les bacilles coliformes
De cet effet Heisey amp Gorham (1992) note que C arabica est pourvue drsquoun pouvoir
antibacteacuterien Drsquoautres travaux sur des espegraveces du genre Cleome ont mis en eacutevidence
Sudhakar et al (2006) rapportent que lrsquoextrait eacutethanolique des feuilles et des fleurs de
Cleome viscosa a preacutesenteacute un large spectre drsquoactiviteacute antimicrobienne particuliegraverement
important contre Escherichia coli et pseudomonas aeruginosa et modeacutereacute en preacutesence des
espegraveces Bacillus subtilis Bacillus pumilus Staphylococus aureus Streptococcus faecalis
Candida albicans De mecircme lrsquoextrait de Cleome droserifolia a prouveacute un effet modeacutereacute avec
Bacillus subtilis Proteus vulgaris et un effet antibacteacuterien plus important avec des zones
drsquoinhibition qui varient entre 11 agrave 20 mm contre les espegraveces bacteacuteriennes Staphylococcus
aureus Escherichia coli Candida Albicans Microsporum canis Trichophyton
mentagrophytes (Khafagi amp Dewedar 2000)
Plusieurs travaux ont signaleacute que Carabica possegravede des proprieacuteteacutes anti-
inflammatoires Bouriche et ses collaborateurs (2005) ont deacutemontreacute que lrsquoextrait des feuilles
de C arabica preacutesente un effet anti-inflammatoire comparable agrave celui de la quercetine et la
rutine Ainsi lrsquoextrait eacutethanolique de Cleome rutidosperma eacutetait testeacute pour son effet anti-
inflammatoire contre un agent irritant Cette activiteacute est confirmeacutee par la capaciteacute de lrsquoextrait
agrave reacuteduire lrsquoœdegraveme local sur la patte du rat (Bose et al 2007)
A ce stade on pourrait postuler que lrsquoactiviteacute cicatrisante de lrsquoextrait hydroalcoolique
de Cleome arabica pourrait ecirctre associeacutee en partie agrave son pouvoir antioxydant antibacteacuterien et
anti-inflammatoire Il serait utile de proceacuteder agrave une eacutevaluation plus complegravete de Cleome
arabica notamment sur son effet sur la production de collagegravene
Conclusion geacuteneacuterale
116
Conclusion geacuteneacuterale
LrsquoAlgeacuterie preacutesente un patrimoine veacutegeacutetal important par sa richesse et sa biodiversiteacute
dans les reacutegions cocirctiegraveres les massifs montagneux les hauts-plateaux la steppe et les oasis
sahariennes Cette richesse floristique est consideacuterable et comporte des milliers drsquoespegraveces de
plantes qui preacutesentent divers inteacuterecircts meacutedicinales et autres Les plantes meacutedicinales font
lrsquoobjet de recherche scientifique soutenue en vue de les valoriser comme source de
substances naturelles bioactives
Cette eacutetude srsquoinscrit dans une double perspective de deacuteveloppement eacuteconomique et de
gestion durable des ressources naturelles Le thegraveme srsquointeacuteresse particuliegraverement agrave une espegravece
deacutesertique du genre Cleome qui est menaceacutee du fait du changement climatique que subit
notre pays ces derniegraveres anneacutees Cette plante srsquoappelle Cleome arabica connue sous
lrsquoappellation locale de laquo Natten raquo Malgreacute son importance dans lrsquoeacutecosystegraveme ougrave elle eacutevolue
elle demeure insuffisamment eacutetudieacutee agrave la fois sur le plan phytochimique et
pharmacologiques
Le but ultime de cette eacutetude est drsquoapprofondir les connaissances sur cette plante
importante Deux objectifs speacutecifiques sont fixeacutes
- Caracteacuterisation quantitative du contenu en composeacutes pheacutenoliques (pheacutenols totaux
flavonoiumldes tanins) dont les diffeacuterentes parties de la plante (feuilles graines et
racines) compleacuteteacutee par une analyse HPLCDADMS
- Evaluation in vivo et in vitro des activiteacutes biologiques (antioxydante analgeacutesique
cicatrisante) et potentiel toxique (toxiciteacute aigue cytotoxiciteacutes)
Sur le volet chimique lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique des trois parties de Carabica est marqueacute par la preacutesence des flavonoides
principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et
isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines
principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les
racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Sur le plan quantitatif lrsquoanalyse par HPLCDADMS a reacuteveacuteleacute que lrsquoextrait des feuilles
preacutesente un contenu relativement plus important notamment en flavonoiumldes par rapport agrave
celui des extraits des graines et racines Ceci conforte les reacutesultats du dosage
Conclusion geacuteneacuterale
117
spectrophotomeacutetrique qui a reacuteveacuteleacute un taux eacuteleveacute en pheacutenols totaux et en flavonoiumldes de
lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des racines et des graines
Notre eacutetude a permis drsquoeacutetablir le profil en composeacutes pheacutenoliques des parties
veacutegeacutetatives (graines et racines) de Cleome arabica non auparavant eacutetudieacutees
Sur le volet biologique lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro
(DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) montre un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait
des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines Ceci pourrait ecirctre justifieacute par la
preacutesence dans les feuilles drsquoun contenu relativement important en composeacutes
pheacutenoliques comme il a eacuteteacute reacuteveacuteleacute auparavant par les analyses phytochimiques Une
correacutelation positive a eacuteteacute deacutemontreacutee entre les contenus en pheacutenols totaux et flavonoiumldes des
diffeacuterentes parties (feuilles graines et racines) de la plante et leur pouvoir antioxydant
respectifs
Lrsquoeacutevaluation par les trois tests de douleur tail flick (ED50 29184mgKg PC) plaque
chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) a montreacute
que lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de Cleome arabica possegravede un pouvoir
analgeacutesique dose-deacutependant qui se manifeste par un meacutecanisme central etou peacuteripheacuterique
Lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne srsquoest reacuteveacuteleacute eacutegalement doueacute drsquoune activiteacute
cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de
lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade
commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Sur le volet toxiciteacute les essais de toxiciteacute aigue pratiqueacutes par deux voies
drsquoadministration (per os IP) agrave diffeacuterentes doses ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de
la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute chez les rats aux doses maximales
prescrites
Drsquoautre part le test de larves de crevettes Artemia salina agrave diffeacuterentes doses (1 05
025 01 mgml) montre une mortaliteacute eacuteleveacutee dans tous les lots traiteacutes par les extraits des
diffeacuterentes parties de la plante notamment par celui des graines Les DL50 obtenues pour les
extraits des graines racines et feuilles sont 8531 22855 24266 microgml respectivement
Pour sa part le test drsquoheacutemolyse pratiqueacute agrave diffeacuterentes doses (1 5 10 20 mgml) a
montreacute eacutegalement que lrsquoextrait des graines possegravede le pouvoir heacutemolytique le plus eacuteleveacute
Conclusion geacuteneacuterale
118
compareacute aux deux autres extraits des feuilles et des racines avec des DL50 eacutegales agrave 41
167 3883mgml respectivement Toutefois les valeurs des DL50 reflegravetent une activiteacute
heacutemolytique faible La preacutesence des saponines reacuteveacuteleacutees lors screening preacuteliminaire pourrait
ecirctre associeacutees agrave lrsquoeffet heacutemolytique observeacute
En conclusion
Sur le volet chimique les analyses faites restent partielles et ne reflegravetent pas la totaliteacute
du profil chimique de la plante agrave part les composeacutes pheacutenoliques objet de cette eacutetude les
autres classes de produits naturels comme les steacuteroides et triterpegravenes reporteacutes auparavant
dans lrsquoespegravece demeurent insuffisamment caracteacuteriseacutes Ces composeacutes pourraient ecirctre associeacutes
aux activiteacutes eacutetudieacutees dans ce travail
Sur le volet biologique lrsquoeffet antioxydant pourrait ecirctre lrsquoun des meacutecanismes
expliquant lrsquoeffet analgeacutesique observeacute chez Cleome arabica Cette plante contient des
antioxydants comme les flavonoiumldes en lrsquooccurrence les flavonols qui peuvent preacutevenir la
douleur musculaire en acceacuteleacuterant le processus de reacuteparation des tissus au niveau moleacuteculaire
(Gonzalez-Gallego et al 2010 De maniegravere speacutecifique les flavonoides inhibent lrsquoenzyme
NOS responsable de la synthegravese de lrsquooxyde nitrique qui est deacuteclencheur chimique de
lrsquoinflammation
De mecircme lrsquoeffet antioxydant des extraits de Carabica peut contribuer au processus
de la cicatrisation Lrsquoajout des antioxydants dans le traitement des brucirclures entraine une
ameacutelioration du pheacutenomegravene de la cicatrisation (reacuteduction de lrsquoincidence de lrsquoinfection de la
plaie et du temps de gueacuterison) Ceci est ducirc agrave lrsquoinhibition de la production des EOR
notamment par les flavonoiumldes Cette derniegravere peut srsquoeffectuer directement par formation de
complexe inhibiteur-enzyme etou par pieacutegeage directe de ces moleacutecules (Sahib et al 2010)
Notre eacutevaluation chez lrsquoanimal a permis de mettre en eacutevidence une activiteacute
analgeacutesique et cicatrisante qui conforte certaines utilisations traditionnelles connues de la
plante entant que cicatrisant et remegravede contre la douleur
La nature des moleacutecules impliqueacutees dans les activiteacutes observeacutees meacuteritent drsquoecirctre
exploreacutees Ceci pourrait ecirctre reacutealiseacute gracircce agrave une approche de fractionnement bioguideacute Les
moleacutecules actives identifieacutees pourront par la suite ecirctre reacuteeacutevalueacutees et eacuteventuellement moduleacutees
par rapport agrave leurs reacuteponses biologiques et toxicologiques
Conclusion geacuteneacuterale
119
Lrsquoabsence de toxiciteacute agrave court terme apregraves administration chez le rat (pos IP) de
lrsquoextrait de la partie aeacuterienne de Carabica associeacutee au faible pouvoir heacutemolytique donnent
des indications favorables agrave lrsquoinnocuiteacute de la plante Toutefois des eacutetudes de toxiciteacute plus
large (sub-chronique chronique effet mutagegravene reprotoxiciteacute etc) doivent ecirctre faites pour
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Reacutesumeacute
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica a fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et
pharmacologique dont lrsquoobjectif ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique
menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi
une extraction hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs
activiteacutes antioxydante antalgique et cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des
diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines
compleacuteteacutee par une analyse chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers
examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des feuilles sont les plus riches en ces
composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et drsquoautre part que
les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine
keampfeacuterol et isorhamnetine) Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans
les extraits des graines principalement les acides ferulique para-hydroxybenzoique
et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides tricaffeoylquinique
gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et
Phosphomolybdenum) a montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des
feuilles compareacute agrave ceux des graines et des racines avec une correacutelation positive vis-agrave-
vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50
29184mgKg PC) plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion
(ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le
cas de plaies drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica
srsquoest montreacute significativement plus important que la pommade commercialiseacutee
(Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait
hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses
maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux
flavonoiumldes bioactiviteacute toxiciteacute
Abstract
Abstract
Cleome arabica ssp arabica a threatened desert plant has been subjected to the
phytochemical and pharmacological screening
Hydroalcoholic extracts from different parts (leaves seeds and roots) of C arabica
have been tested for their antioxidant analgesic and wound healing activities as well
as their toxic potential
Quantitative evaluation of the total phenols flavonoids and anthocyanidins contents
of the different extracts were made and completed with chromatographic
HPLCDADSM analysis The obtained results revealed that leaves extract was
characterized by a highly content in phenolic compounds compared to other extracts
Hydroalcoholic extract of the three parts of plant were marked by the presence of
flavonoids specially of flavonols type (quercetin keampferol and isorhamnetin)
Phenolic acids content is marked by the presence in the seeds extract of ferulic acid
para-hydroxybenzoic acid and para-coumaric acid and in the roots extract of
tricaffeoylquinic gallic ferulic and vanillic acids
Evaluation of antioxidant effect made by the three in vitro tests (DPPH FRAP and
Phosphomolybdenum) showed a highly antioxidant activity of the leaves extract
compared to those of seeds and roots A direct correlation was found between phenol
total and flavonoids contents and antioxidant activity
The effectives doses obtained by three pain tests namely tail flick hot plate and
acetic acid test were 29184mgKg 84853mgKg and 68352mgKg respectively
Analgesic activity of the aerial part of C arabica was found to be dose- dependent
The Hydroalcoholic extract displayed on excision and thermal healing activities
wounds The wound healing effect of Carabica was significantly more important
than that of a commercial ointment used as a positive control (Cicatrylreg)
Toxicity assays (acute toxicity and hemolytic effect) have showed that
Hydroalcoholic extract of aerial part of C arabica is safe at the maximal described
doses
Key words Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS total phenols
flavonoids bioactivity toxicity assays
الملخص
ملخص ال
قذ ازذ Cleome arabica ssp arabica أجزيذ ذ اىذراسخ عي جزخ غجيخ رجذ في اىصذزاء
اىشبغ اىسن ىلاىاىعبدح ىلامسذح)ثذراسخ رزميجب اىنييبئي ىيسزخيص اىنذىي خصبئصب اىجيىجيخ
( ثبلإظبفخ إى رقيي درجخ اىسيخاىزئب اىجزح
اىزذبىيو اىفيزميبئيخ اىنيخ ثاسطخ اىطزق اىطيفيخ نذ رقذيز ميخ اىفيلاد اىفلافيذاد اىجدح في
ذ اىذراسخ دعذ Cleome arabica اىجذر اىجذر ىيجزخاىسزخيص اىنذىي ىنو الأراق
اىزي نذ رذذيذ ع اىفلافيذاد اىجدح في HPLC DADMSثطزيقخ اىزذييو اىنزبرؼزافي
quercetine keampferol) ديش ثيذ جد ع أسبسي اىفلافه مو اىسزخيصبد
isorhamnetine) دط )مذىل ر اصجبد جد ادبض فيىيخ رذذيذ عب في مو سزخيص اىجذر
ferulic para-hydroxybenzoic para-coumaric ) دط) اىجذرtricaffeoylquinic gallic
ferulic vanillic )
ثضلاس اخزجبراد C arabica اىجذر اىجذرالأراقدراسخ اىشبغ اىعبد ىلأمسذح ىسزخيص مو
(DPPH FRAP Phosphomolybdenum) نذ إصجبد ا اىسزخيص اىنذىي ىلأراق ى قذرح
ذ اىخبصيخ ىب علاقخ جبشزح ع ميخ اىفيلاد عبدح ىلأمسذح عبىيخ ثبىقبرخ ع اىسزخيصي الآخزي
اىفلافيذاد اىجدح في اىسزخيصبد
اخزجبر ؼز اىذيوثضلاس غزق (ثذ اىجذر) C arabicaر رقيي قذرح رسني الأى ىسزخيص اىجزخ
قذر اىززميز قذ أظزد اىزبئج أ اسزلاك سزخيص اىجزخ قبدر عي رخفيف الأى ثصفخ عزجزح الاىزاء
68352 اىيدخ اىسبخخمػ لاخزجبر ػ84853 اىذيولاخزجبر ؼز مػغ 29184ة (ED50)اىفعبه
خزجبر الاىزاءمػ لاػ
اىزجبرة اىزي أجزيذ قذ أظزد زبئج ىزقيي قذرر عي اىزئب اىجزحاخزجز ثطزق خزيفخفس اىسزخيص
ثبىقبرخ ثز يذع جيذ ىيجزحاه عي جيذ الأرت ا ذا اىسزخيص ى قذرح فعبىخ عي اىزئب
Cicatrylreg
ارعخ ا سزخيص اىجزخ عي سز رجبرة اىسيخ الاخزجبر الاذلاىي عي اىنزيبد اىذزاء
Carabica ؼيز سب اجو أعي اىززميزاد اىسزعيخ
اىفلافيذاد اىفيلاد Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS يةحتاالمف الكلمات
رجبرة اىسيخ اىشبغ اىجيىجي
Nom Madi
Preacutenom Aicha
Date de soutenance 31 01 2018
Titre Caracteacuterisation phytochimique et eacutevaluation des activiteacutes biologiques de Cleome arabica
Nature du diplocircme Thegravese doctorat en sciences Option biotechnologie veacutegeacutetale
Reacutesumeacute
Cleome arabica ssp arabica fait lrsquoobjet drsquoune eacutetude phytochimique et pharmacologique dont lrsquoobjectif
ultime est la valorisation de cette espegravece deacutesertique menaceacutee
Les diffeacuterentes parties veacutegeacutetatives (feuilles graines et racines) de C arabica ont subi une extraction
hydroalcoolique Les extraits preacutepareacutes ont eacuteteacute eacutevalueacutes pour leurs activiteacutes antioxydante antalgique et
cicatrisante ainsi que leur potentiel toxique
En parallegravele une eacutevaluation quantitative a eacuteteacute faite du contenu des extraits des diffeacuterentes parties
veacutegeacutetatives en pheacutenols totaux flavonoiumldes et anthocyanidines compleacuteteacutee par une analyse
chromatographique (HPLCDADMS) Ces derniers examens ont reacuteveacuteleacute drsquoune part que les extraits des
feuilles sont les plus riches en ces composeacutes pheacutenoliques par rapport aux autres parties de la plante et
drsquoautre part que les extraits hydroalcooliques des trois parties sont marqueacutes par la preacutesence des
flavonoiumldes principalement du type flavonol agrave diverses geacutenines (quercetine keampfeacuterol et isorhamnetine)
Des acides pheacutenols ont eacutegalement eacuteteacute identifieacutes dans les extraits des graines principalement les acides
ferulique para-hydroxybenzoique et para-coumarique et dans les racines des deacuteriveacutes des acides
tricaffeoylquinique gallique ferulique et de lacide vanillique
Lrsquoeacutevaluation du potentiel antioxydant par les trois tests in vitro (DPPH FRAP et Phosphomolybdenum) a
montreacute un pouvoir antioxydant important de lrsquoextrait des feuilles compareacute agrave ceux des graines et des
racines avec une correacutelation positive vis-agrave-vis de leurs contenus en pheacutenols totaux et flavonoides
Les doses effectives obtenues par les trois tests de douleur sont pour tail flick (ED50 29184mgKg PC)
plaque chauffante (ED50 84853mgKg PC) et test de torsion (ED50 68352mgKg PC) Lrsquoeffet
analgeacutesique de lrsquoextrait hydroalcoolique de la partie aeacuterienne de C arabica srsquoest reacuteveacuteleacute dose-deacutependant
Ce mecircme extrait est doueacute eacutegalement drsquoune activiteacute cicatrisante chez le lapin dans le cas de plaies
drsquoexcision et thermique Cet effet cicatrisant de lrsquoextrait de C arabica srsquoest montreacute significativement plus
important que la pommade commercialiseacutee (Cicatrylreg) utiliseacutee comme teacutemoin
Les essais de toxiciteacute (toxiciteacute aigue effet heacutemolytique) ont montreacute que lrsquoextrait hydroalcoolique de la
partie aeacuterienne de C arabica est deacutenoueacute de toxiciteacute aux doses maximales prescrites
Mots cleacutes Cleome arabica ssp arabica HPLCDADMS pheacutenols totaux flavonoiumldes bioactiviteacute
toxiciteacute
Laboratoire de recherche Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie Institut des sciences Veacuteteacuterinaires
Universiteacute Constantine 1 Algeacuterie
Jury
Preacutesident KHELIFI DOUADI Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
Encadreur BELKHIRI ABDELMALIK Prof Universiteacute Salah Boubnider Constantine 3
Examinateurs
AKKAL SALAH Prof Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1
YAHIA ABDELOUAHEB Prof Centre Universitaire Abdelhafid Boussouf Mila
ZELLAGUI AMAR Prof Universiteacute Larbi Ben Mrsquohidi Oum El Bouaghi
MOUAS TOUMA NARDJES MCA Universiteacute Des Fregraveres Mentouri Constantine1