Techniques d’études en

Techniques d’études en biologie RAPPELS

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Cours 1 : Culture cellulaire

- Pr Chevallier -

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Techniques d'études en biologie

A) Les milieux commerciaux de base sont composés de sels, AA, vitamines et sucres.

B) Le sérum de veau fœtal permet la survie à court terme des cellules.

C) Il existe 4 systèmes de culture différents selon le type de cellules à cultiver.

D) Pour passer d’1 culture secondaire à une culture primaire il faut faire un « repiquage».

E) Aucune des propositions ci-dessus n’est exacte

QCM 1 : CONCERNANT LES PROPOSITIONS SUIVANTES, QUELLES SONT LA OU LES PROPOSITIONS EXACTES ?

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Nécessaires à tous types cellulaires.

Permettent la survie à court terme.

Sels : Na, Cl, K, P, Mg

Oligo-élément : fer, zinc

Sucres en C6

AA : arginine, cystéine, glutamine

Vitamines : Vit B, biotine, Acide Folique, nicotinamine


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Faux, survie à long terme :

- agent mitogène

- protecteur physique et chimique

/!\ le sérum a aussi des inconvénients :

- Composition mal déterminée, variabilité des sérums

- Difficulté d’approvisionnement

- Présence de virus, pathogène, immunoglobulines…


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- Culture en suspension : ne nécessitant pas de facteur

d’attachement = sang

- Culture sur 1 support : nécessitant des facteurs d’attachement = fibroblastes

- Culture en milieu semi-solide : nécessitant une configuration en 3D = cellules sanguines de la moelle osseuse

- Culture en milieu semi-solide sur assise nourricière : besoin de 3D + de facteurs produits pas d’autres cellules = cellule de la moelle osseuse


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D) Pour passer d’une culture secondaire à une culture primaire il faut faire un « repiquage».

Faux, c’est l’inverse : on repique la culture primaire pour produire une culture secondaire


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D) Pour passer d’une culture secondaire à une culture primaire il faut faire un « repiquage».

E) Aucune des propositions ci-dessus n’est exacte


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Obtention des cellules pérennes :

- Spontanément

- Prélèvement de tumeur

- Fusion cellulaire : hybridome

- Virus transformant (SV40, EBV), chimie, physique

Culture cellulaire et pérennisation

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A) Température de 37°C

B) 95% de CO2

C) 5% d'humidité

D) pH entre 7,2 et 7,4

E) Tampon HEPES

QCM 2 : CONCERNANT LES CULTURES DE CELLULES HUMAINES, QUELLES SONT LES CONDITIONS ADEQUATES ?

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A) Température de 37°C

B) 95% de CO2 : Faux, 5% de CO2, permet la croissance cellulaire

C) 5% d'humidité : Faux, 95% d'humidité (environnement presque saturé en humidité)

D) pH entre 7,2 et 7,4

E) Tampon HEPES: vrai, permet de contrôler le pH

QCM 2 : CONCERNANT LES CULTURES DE CELLULES HUMAINES, QUELLES SONT LES CONDITIONS ADEQUATES ?

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La cryoconservation utilise des agents cryoprotecteurs tels que ….. .

Elle permet de descendre rapidement à une température de …. °C.

Les cellules sont conservées dans de l'…. …. à ….°C.

La décongélation se fait en mettant les cellules dans un bain-marie à … °C. Il faut être …. (rapide/lent) car les agents protecteurs sont …. à température ambiante.

QCM 3 : COMPLETEZ LE TEXTE

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La cryoconservation utilise des agents cryoprotecteurs tels que le DMSO, le glycérol . Ils empêchent la formation de cristaux.

Elle permet de descendre rapidement à une température de -80 °C.

Les cellules sont conservées dans de l'azote liquide à -196°C.

La décongélation se fait en mettant les cellules dans un bain-marie à 37 °C. Il faut être rapide car les agents protecteurs sont toxiques à température ambiante.

QCM 3 : COMPLETEZ LE TEXTE

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QCM 4 : QUELLES SONT LES DIFFERENTES METHODES POUR INSERER UN GENE DANS UNE CELLULE EUCARYOTE ?

Nuage de mots

-

-

-

-

-

-

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QCM 4 : QUELLES SONT LES DIFFERENTES METHODES POUR INSERER UN GENE DANS UNE CELLULE EUCARYOTE ?

- Injection par virus modifié

- Injection du plasmide par micropipette

- ADN associé à des liposomes : les liposomes se fixent aux plasmides et fusionnent avec la membrane plasmique

- Précipitation au phosphate de calcium

-Complexe AND-DEAE Dextran

- Electroporation : pulse électrique crée un pore par lequel rentre le plasmide

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Transfection Transitoire

Utilisation d’un plasmide avec le gène d'intérêt

Expression du gène pendant quelques jours

Expression de la protéine après 24-48 heures et disparait après 72-96 heures

Perte du plasmide au cours des divisions cellulaires

Transfection Stable

Utilisation d'1 plasmide avec le gène d'intérêt + gène de résistance à l'ATB

Ajout d'1 ATB qui tue toutes les cellules ne présentant pas le gène de résistance

Expression permanente du gène et de la protéine

Transfection

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Cours 2 : Les anticorps monoclonaux

- Pr Chevallier -

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Techniques d'étude en biologie


A) Les régions variables d’un anticorps correspondent aux sites antigéniques

B) Le fragment Fc correspond aux sites antigéniques

C) Pour immuniser une souris, on injecte des LB et on répète l'injection 15 jours après.

D) Pour pérenniser des LB récupérés chez une souris, on les fusionne avec des myélomes humains.

E) Aucune des proposition n'est exacte.

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QCM 5: CONCERNANT LES PROPOSITIONS SUIVANTES, QUELLES SONT LA OU LES PROPOSITIONS EXACTES ?

A) Les régions variables d’un anticorps correspondent aux sites antigéniques.

B) Le fragment Fc correspond aux sites antigéniques.

Faux, le fragment Fc correspond au domaine d'activation du complément.

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C) Pour immuniser une souris, on injecte des LB.

Faux, on injecte la protéine contre laquelle on veut que la souris s'immunise. L'immunisation consiste ensuite à ce que la souris produise des LB contre cette protéine


Faux, on les fusionne avec des myélomes de souris ! Cela évite les problèmes de différence entre espèce.


A) Les régions variables d’un anticorps correspondent aux sites antigéniques

B) Le fragment Fc correspond aux sites antigéniques

C) Pour immuniser une souris, on injecte des LB et on répète l'injection 15 jours après.


E) Aucune des proposition n'est exacte.

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Voie normale

- Bloquée par l'aminoptérine

Voie de derivation

- Utilise l'enzyme thymidine kinase (TK)

- La TK est muté dans les myélomes → non fonctionnelle

Voie de synthèse des nucléotides

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Fusion LB + myélome sans facteur de croissance et avec

aminoptérine :

LB seuls = mort (car 0 facteur de croissance)

Myélome seuls = mort (car 0 voie de dérivation)

Myélome + LB = survie car voie de dérivation des LB + croissance

sans facteur des myélomes


A) Les anticorps monoclonaux reconnaissent un seul antigène mais plusieurs épitopes différents.

B) La méthode directe du marquage nécessite un anticorps primaire dirigé contre une protéine, et un anticorps secondaire couplé à un fluorochrome.

C) Le cytomètre de flux contient un système fluidique, un système optique et un système biologique.

D) On peut utiliser les anticorps pour séparer les cellules exprimant un antigène des autres cellules.

E) Le dosage ELISA permet l'identification d’une protéine soluble.

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A) Les anticorps monoclonaux reconnaissent un seul

antigène mais plusieurs épitopes différents.

Faux : les Ac monoclonaux reconnaissent un seul type d'épitope sur l'antigène

Les Ac polyclonaux, reconnaissent plusieurs épitopes différents sur l'antigène

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B) La méthode directe du marquage nécessite un anticorps primaire dirigé contre une protéine, et un anticorps secondaire couplé à un fluorochrome.

Faux, c'est la définition de la méthode indirecte de marquage

Méthode directe : anticorps couplé à un fluorochrome et mis en contact avec l’antigène cellulaire.

Méthode indirecte : anticorps secondaire couplé à un fluorochrome et mis en contact avec le complexe anticorps primaire-antigène cellulaire.

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C) Le cytomètre de flux contient un système fluidique, un système optique et un système biologique.

Faux :

- Un sytème fluidique : permet d'introduire les cellules

- un système optique : excitation des cellules par un laser

- Un système informatique : conversion des signaux optiques en signaux électroniques

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D) On peut utiliser les anticorps pour séparer les cellules exprimant un antigène des autres cellules.

Vrai, séparation cellulaire par différentes techniques :

- déplétion par le complément : lyse des cellules avec l'Ag

- séparation par "panning" : les Ac séquestrent les cellules avec l'Ag

- Tri par cytométrie de flux : marquage par Ac fluos

- Tri magnétique : l'Ac retient les cellules par l'aimant

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E) Le dosage ELISA permet l'identification d'1 protéine soluble.

Le substrat est chromogène, lorsqu'il se lie à l'enzyme il devient coloré.

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Cours 3 : Introduction aux techniques d'histologie et

de cytologie

- Mme Libouban -

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Techniques d'étude en biologie

QCM 7 : REMETTEZ DANS L'ORDRE LES 5 ÉTAPES DE PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS BIOLOGIQUES

• Fixation

• Prélèvement

• Inclusion

• Coloration

• Coupe

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QCM 7 : REMETTEZ DANS L'ORDRE LES 5 ÉTAPES DE PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS BIOLOGIQUES

1) Prélèvement :• biospie ou ...ectomie = histologique

• Ponction, frottis ou brossage = cytologique

2) Fixation : permet la conservation, prévient

l'autolyse et immobilise les molécules in situ

3) Inclusion : en résine

4) Coupe : au microtome ou couteau pour objet dur (os)

5) Coloration

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QCM 7 : RELIEZ LES NOMS DE COLORATIONS AUX CONSTITUANTS QU'ELLES COLORENT.

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Cytoplasme

Frottis sanguin ou cellules

cytocentrifugées

Membranes basales

Collagène

Noyaux

PASFrottis vaginal ou cervico-

vaginal

Hématoxyline

Fuchsine, Eosine

Coloration de May-Grunwald-Giemsa

Coloration de

Papanicolaou

Vert Lumière, Bleu de méthylène, Jaune safran

QCM 7 : RELIEZ LES NOMS DE COLORATIONS AUX CONSTITUANTS QU'ELLES COLORENT.

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Cytoplasme

Frottis sanguin ou cellules

cytocentrifugées

Membranes basales

Collagène

Noyaux

PASFrottis vaginal ou cervico-

vaginal

Hématoxyline

Fuchsine, Eosine

Coloration de May-Grunwald-Giemsa

Coloration de

Papanicolaou

Vert Lumière, Bleu de méthylène, Jaune safran

Les Transports à travers la membrane biologiqueTRANSPORT SANS MOUVEMENTS

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Transport Passif

La diffusion facilitée utilise des ....................... Elle se fait dans le

sens................................ et ne consomme pas d’énergie. Elle

augmente la ...............et............de transport par rapport à la

diffusion simple.

La diffusion facilitée concerne des molécules de …....................et

des molécules non ….................(molécules ….................) .

Deux grands groupes de protéines membranaires permettent la

diffusion facilitée :

- …................................................

- …................................................

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Transport PassifCompléter le texte suivant :

La diffusion facilitée utilise des protéines membranaires. Elle se

fait dans le sens d’un gradient de concentration et ne consomme

pas d’énergie. Elle augmente la vitesse et la sélectivité de

transport par rapport à la diffusion simple.

La diffusion facilitée concerne des molécules de grosses tailles et

des molécules non liposolubles (molécules polaires) .

Deux grands groupes de protéines membranaires permettent la

diffusion facilitée :

- Les perméases transporteuses

- Les protéines canal (conductines)

Transport Actif

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Transport couplé à une ATPase :

▪ ATPases FO-F1 (mitochondries)

▪ ATPases de type P ou pompes

cationiques

▪ Pompe Na+/K+

▪ H+ ATPases des lysosomes

et endosomes

▪ Ca2+ du réticulum

endoplasmique

▪ Transporteurs ABC +++ :

▪ Canal Chlore

▪ Protéines de type MDR

Transport couplé à la

dissolution d'un gradient :

▪ Symport :

▪ 2Na+/glucose (SGLT1)

▪ Symport H+/saccharose

▪ Antiport :

▪ H+/Na+

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QCM 8 : CONCERNANT LE TRANSPORT PASSIF, PARMIS LES PROPOSITIONS SUIVANTES, QUELLES SONT LA OU LES PROPOSITIONS EXACTES ?

A) Les aquaporines sont présentes uniquement chez les

hommes

B) Le Transporteur MDR1 fait partie des canaux

ioniques

C) Les perméases changent de conformation sous

l'action du ligand

D)GLUT1 est une perméase ubiquitaire assurant la

diffusion facilitée du glucose du milieu intracellulaire

vers le milieu extracellulaire.

E) Toutes les propositions sont fausses

A) Les aquaporines sont présentes uniquement chez l'homme

Les Aquaporines sont présentes dans tous les règnes du vivant. Les AQP sont des tétramères de 4 sous-unités identiques.

Les monomères d'aquaporine sont formés de 6 hélices, et de 5 boucles inter hélices.

On retrouve aussi des séquences hydophobes (boucle B et E) qui jouent un rôle dans la sélectivité de l'eau.

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B) Le Transporteur MDR1 fait partie des canaux

ioniques

Le transporteur MDR1 est un canal chlore, il fait

partie des transporteurs ABC.

Les canaux ioniques sont les canaux Na+, K+ et

Ca2+.

C) Les perméases changent de conformation sous l'action du ligand

La perméase sert de récepteur et de transporteur. Elle joue le rôle de navette entre les deux faces d'une membrane.

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D) GLUT1 est une perméase ubiquitaire assurant la diffusion facilitée du glucose du milieu intracellulaire vers le milieu extracellulaire.

GLUT1 est une perméase ubiquitaire, elle assure la diffusion du milieu EC vers le milieu IC.

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A) Les aquaporines sont présentes uniquement chez les

hommes

B) Le Transporteur MDR1 fait partie des canaux ioniques

C) Les perméases changent de conformation sous l'action

du ligand

D) GLUT1 est une perméase ubiquitaire assurant la

diffusion facilitée du glucose du milieu intracellulaire

vers le milieu extracellulaire.


Les Transports à travers la membrane biologiques

TRANSPORT AVEC MOUVEMENTS

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Endocytose du cholestérol :

Exemple d'endocytose spécifique :

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Endocytose de la transferrine :

La transferrine est la principale protéine de transport du fer circulant plasmatique.

IMPORTANT :

Recyclage des récepteurs + apotransferrine = seulement le Fe3

+ est libérée.

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Endocytose non spécifique :

- concerne les petites molécules capturées non spécifiquement

- dissoute dans le MEC ou piégée par le glycocalyx (revêtement sur la surface de la cellule formé par les sucres portés par les glycoprotéines et les glycolipides)

La pinocytose

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La phagocytose

Elle concerne les grosses particules.

3 types de cellules phagocytaires : les

macrophages, les neutrophiles et les

cellules dendritiques.

Rôle : défense contre les infections et les

micro-organismes ainsi que l'élimination des

cellules mortes par apoptose.

Les meilleurs déclencheurs : les anticorps.

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QCM 9 : CONCERNANT L'ENDOCYTOSE, PARMI LES PROPOSITIONS SUIVANTES, QUELLES SONT LA OU LES PROPOSITIONS EXACTES ?

A)L'adaptine 2 est un complexe protéique qui

comportent 3 chaines lourdes et 3 chaines légères

B) La clathrine est un complexe protéique formé de 4

sous-unités

C) Le recyclage des récepteurs se fait grâce à une

diminution du PH

D)L'apotransferrine est la principale protéine de

transport du fer circulant plasmatique


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A) L'adaptine 2 est un complexe protéique qui comport

3 chaines lourdes et 3 chaines légères

L'adaptine 2 est un complexe protéique formé de 4

sous-unités, permettant la polymérisation de la

clathrine.

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B) La clathrine est un complexe protéine formée de 4

sous-unités

FAUX, c'est l'adaptine 2.

La clathrine est un complexe protéine formée de 3

chaines lourdes et de 3 chaines légères. Une sous-unité

de clathrine se nomme un triskélion.

Grace à l'adaptine 2 = formation d'un manteau de

clathrine au niveau de la membrane.

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diminution du PH

Le recyclage des récepteurs se fait au niveau du

CURL. La cellule est très économe et va regrouper

ses récepteurs pour émettre une vésicule chargée en

récepteurs, qui vont pouvoir être réutilisés.

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D) L'apotransferrine est la principale protéine de


C'est la transferrine.

Elle comporte deux sites de fixation de l'ion

ferrique (Fe3+).

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A) L'adaptine 2 est un complexe protéique qui

comportent 3 chaines lourdes et 3 chaines légère

B) La clathrine est un complexe protéine formée de 4

sous-unités


diminution du PH

D) L'apotransferrine est la principale protéine de



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QCM 10: CONCERNANT LES TRANSPORTS AU TRAVERS DES MEMBRANES, PARMIS LES PROPOSITIONS SUIVANTES, QUELLES SONT LA OU LES PROPOSITIONS EXACTES ?

A) L’osmose est un transport actif qui consomme de

l’énergie

B)Le poids moléculaire est un facteur de régulation

de la diffusion simple

C) La Na+/K+ ATPase consomme 50% de l’ATP

cellulaire

D)SGLT1 est un Co-transport (antiport)

E) Toutes les propositions suivantes sont fausses

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A) L’osmose est un transport actif qui consomme de

l’énergie

L’osmose est un transport passif.

Elle correspond à la diffusion passive de l’eau : Malgré

l’hydrophobicité de la membrane plasmique, une

certaine diffusion membranaire existe selon un

gradient de concentration pour l’eau et des petites

molécules non chargées

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B) Le poids moléculaire est un facteur de régulation de

la diffusion simple

Les 5 facteurs régulant la diffusion simple :

1) La liposolubilité (= hydrophobicité)

2) Le poids moléculaire : la molécule doit avoir un PM < 1 kDa.

3) L’ionisation

4) La surface d’échange

5) L’épaisseur de la membrane. (peu d’influence)

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cellulaire

La pompe Na+/K+ consomme 25% ATP cellulaire.

Elle permet le maintien du gradient de

concentration Na+/K+ de part est d’autre de la

membrane.

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D) SGLT1 est un Co-transport (antiport)

SGLT1 est le Co-transport 2Na+/glucose = symport

Présent au pôle apical des entérocytes.

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A) L’osmose est un transport actif qui

consomme de l’énergie

B)Le poids moléculaire est un facteur de

régulation de la diffusion simple


cellulaire

D)SGLT1 est un Co-transport (antiport)

E) Toutes les propositions suivantes sont

fausses

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