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Technique d’antibiogrammedes Staphylocoques

(Staphylococcus aureus)

Dr H.TALI-MAAMAR – EHS MAOUCHEINSP – 12 AVRIL 2006

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Principaux caractères bactériologiques

Espèce type: S.aureusCocci à Gram positifAéro anaérobie facultatif, non exigeantCatalase +, oxydase –, O129 RCoagulase, dégradation du mannitol,

production d’hémolyse, novobiocine. Milieux sélectifs: Chapman, Baird Parker

3Culture sur milieu solide

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Infections communautaires et nosocomiales

Infections cutanéo-muqueuses (folliculite, furoncule, anthrax)

Septicémies Intoxications alimentaires Infections urinaires

• Pus divers• Hémoculture• Prélèvements nasaux• Prélèvements cutanés• Urines• LCR• Aliments

Pouvoir pathogène - Prélèvements

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Sensibilité aux antibiotiques

• 194…: apparition des premières souches de S.aureus résistantes à la pénicilline

• 196…: apparition des souches résistantes à la méthicilline

• 199… : Souches de sensibilité intermeédiaire à la vancomycine

• SARM et résistances associées aux aminosides, macrolides, fluoroquinolones.

• 200… :Plus récemment caractériseation de souches de SARM, virulentes, responsables d’infections communautaires.

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Antibiotiques à tester (Liste standardisée, spectre d’activité, disponibilité, indication clinique)

• Bêtalactamines:– Pénicilline G– Oxacilline

• Aminosides:– Amikacine (H)– Gentamicine

• Macrolides:– Erythromycine– Clindamycine– Pristinamycine

• Glycopeptides– Vancomycine (H)

• Autres:– Ofloxacine– Acide fusidique– Chloramphénicol– Tétracyclines– Cotrimoxazole – Fosfomycine (H)– Rifampicine

• Cefoxitine: pour rechercher la résistance à l’oxacilline

• Novobiocine: diagnostic

• Composé vibriostatique O129: diagnostic

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Test de sensibilité aux antibiotiques (Technique standardisée – normes NCCLS)

• Milieu: Mueller Hinton• Inoculum: 0,5 Mc

Farland• Disques

d’antibiotiques (cf liste)

• Interprétation: valeurs critiques

• Contrôle de qualité: S.aureus ATCC 25923

• Screening test à l’oxacilline

• Recherche de la PLP2a• Détermination de la CMI• Recherche de la

pénicillinase: en cas de problème d’interprétation à l’ATBgramme

• Recherche de la résistance aux glycopeptides.

Antibiogramme ppt dit Tests complémentaires

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Staphylocoques et bêtalactamines

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Phénotypes de résistance aux bêtalactamines

Mécanisme

Pénicilline G

Pénicilline A

Carbox/ Uréido

ATB + inhibiteur de bêtalactamase

Pénicilline M Céphalosporines

Carbapénèmes

Phénotype sauvage

S S S S

Pénicillinase R S S S

Modification de PLP2a

gène mecA

R R R R

BORSA

Pase hyperproduite

Souches borderline

R R R S

MODSA

Modif. PLP (non 2a)

Absence de Pase

S S r S

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Recherche de la méthicillino-résistance

Technique Contrôle de qualité

Observation

Test à la cefoxitine (30µg)

-Antibiogramme

-MH

-0,5 Mc Farland

S.aureus ATCC 25923 Normes NCCLS:

S.aureus: R si ≤ 19mm

SCN: R si ≤ 24mm

Screening test MRSA

-MH 4% NaCl

-Oxacilline à 6µg/ml

-0,5 Mc Farland

-Ensemencement / spot

S.aureus ATCC 29213

S.aureus ATCC 43300

S.aureus ATCC 43866

Test peu reproductible pour les SCN

Recherche de la PLP2a

-Agglutination Contrôle selon Kit Technique rapide, recommandée en cas de diagnostic d’urgence et ou d’infection grave.

CMI à l’oxacilline -MH 2% NaCl

-0,5 Mc Farland

S.aureus ATCC 29213 Technique de référence

Obligatoire pour la confirmation des SCN MetiR.

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Recherche des MRSA screening test

S.aureus ATCC 43300

S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43866

Souche à tester

Screening test

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Recherche des MRSA Recherche de la PLP2a

Souche MRSA + Souche MRSA -

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Staphylocoques et macrolides

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Phénotypes de résistance aux macrolides

Mécanisme Phénotype ErythroAzithromycine

Linco Clinda SA

(SB)

Pristina

Phénotype sauvage

Sensible S S S S S

Modification de la cible

MLSbi R S S S S

MLSbc R R R S S

Inactivation enzymatique

L S R s S S

LSa S s/R S R ?

Sa S S S S

(R)

?

Efflux LSa S S/I/R S/I/R R S/R

E R S S S S

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S.aureus MLSb inductible

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S.aureus MLSb constitutive

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Staphylocoques et aminosides

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Phénotypes de résistance aux aminosides

Phenotype MécanismeKanamycine

AmikacineTobramycine Gentamicine

Sauvage

Inactivation enzymatique

S S S

K R S S

KT R R S

KTG R R R

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Règles générales d’interprétation de l’antibiogramme

ANTIBIOTIQUES OBSERVATIONS

Bêtalactamines:

Pénicilline G

Oxacilline

Réponse valable pour: pénicilline A, carboxy et uréido-pénicilline

Résistance croisée à toutes les bêtalactamines

Macrolides:

Erythromycine

Clindamycine

Pristinamycine

Si phénotype MLSBi: résistance croisée avec azithromycine

Si phénotype MLSBc: résistance croisée avec azithromycine, spiramycine et lincosamides

Réponse valable pour la lincomycine *

Réponse valable pour les synergistines

Aminosides:

Amikacine

Gentamicine

Résistance d’expression faible in vitro, tenir compte du diamètre de la kanamycine

Résistance croisée à tous les aminosides utilisés en thérapeutique

Glycopeptides:

Vancomycine Tout diamètre <17mm est une indication à la CMI

*: Si phénotype L, résistance à la Lincomycine avec diminution de l’activité de la Clindamycine.