Exercice 2

1/ En prsence de phlorizine ou de sels de mercure, une cintique simple, de type y = ax est observe. Elle traduit une entre de glucose selon la loi de Fick, savoir une diffusion simple au travers de la bicouche phospholipidique de la membrane plasmique.

En absence de phlorizine ou de sels de mercure, et pour des concentrations leves de glucose, on retrouve une droite de mme pente. Par contre, la partie initiale de la courbe est diffrente.

L'entre du glucose fait donc intervenir deux mcanismes : - la diffusion simple voque prcdemment - et un autre processus mettant en jeu des protines puisqu'inhibe par la phlorizine (analogue de substrat ) ou les sels de mercure (agents dnaturants).

2/ La courbe C correspond la cintique d'entre du glucose grce aux seules permases. On peut dduire la courbe C en soustrayant la courbe gnrale (A) la composante diffusion simple traduite par la courbe B. Courbe C = Courbe A Courbe B

La cintique dentre du glucose est de type michaelienne ce qui suggre une liaison temporaire entre l'lment transport, le glucose, et le transporteur.

Son isomre, le L-glucose, ne prsente pas cette cintique

La fixation prsente une grande spcificit car seul le D-glucose est transport ainsi.

Lasymptote horizontale traduit la saturation des transporteurs (permase glucose).

3/ KmA = 1 mM (permase GLUT1) [en ralit autour de 1,5 mM] KmD = 5 mM (permase GLUT2) [en ralit autour de 20 mM] GLUT2 a une affinit bien plus faible pour le glucose que GLUT1

Lorsque le glucose sanguin passe de son niveau de base autour de 5 mM 10 mM environ aprs un repas, la vitesse de linflux de glucose double quasiment dans les hpatocytes (cellules exprimant GLUT2) alors quelle augmente seulement lgrement dans les rythrocytes (cellules exprimant GLUT1). Dans le foie le glucose en excs absorb dans les cellules est stock sous forme de glycogne.

Exercices 3: Etude exprimentale de la scrtion dans les acini pancratiques

Objectif: Montrer les diffrences de localisation des sites radioactifs en fonction du temps de chasse: 3, 7, 30 et 2h

Transport intracellulaire des protines scrtes par les cellules acineuses du pancras: mise en

vidence par autoradiographie

-Phase 1: . Portions de pancras incubes dans une solution contenant la leucine-3H (pulse) (acide amin radioactif) : dterminer les organites impliqus dans la biosynthse et lexocytose des protines . puis places dans un milieu non radioactif pendant un temps de chasse 3, 7, 30 et 2h (temps de chasse : aprs lincubation, temps durant lequel les cellules sont dans un milieu physio, autre que la solution contenant la leucine tritie)

-Phase 2 . Echantillions fixs au ttroxyde dosmium et inclus dans une rsine poxy

. Ralisation de coupes fines laide dun ultra-microtome

. Coupes recouvertes dune mulsion photographique

. Rvlation des prparations aprs 3 semaines dexposition en chambre noire

. Observation au MET

Lmulsion est constitue de cristaux de bromure dargent

Lisotope radioactive se dsintgre en mettant des rayonnements qui heurtent le cristal

dpt dargent

Les grains dargents (Ag) visibles sur les coupes minces indiquent les rgions o sont localises les chanes polypeptidiques contenant de la leucine radioactif, leucine qui a t incorpore pendant les 3 de pulse

Autoradiographie

a) Le milieu froid est le milieu non radioactif qui, de mme composition que le milieu radioactif, sert de rinage pour ce dernier et permet aux cellules en culture de survivre et poursuivre la mtabolisation du prcurseur. B) Outre lincubation en milieu radioactif et le temps de latence en milieu froid, les cellules seront successivement : -fixes dans un fixateur appropri conservant les ultrastructures -incluses dans une rsine -coupes trs finement (60 100 nm dpaisseur) avec un ultramicrotome. -les coupes seront alors recouvertes dune mulsion photographique -laisses en chambre noire pour que le rayonnement, trs lent, soit suffisant -dveloppes avec un rvlateur comme un film -et enfin observes au MET (Microscopie Eletronique Transmission)