Senegalene, une nouvelle acCtogCnine olkfinique mono-tktrahydrofuranique des graines d'Annona senegalensisl

Laboratoire de pharmacognosie, associe' au Centre national de la recherche scientifique, Faculte' de pharmacie, Utliversite' Paris-XI, 92290 ChBtenay-Malabry, France

DIEGO CORTES Laboratoire de pharmacognosie, Faculte' de tt~e'decine et pharmacie, Universite' de Rouen, 76800 Saint Etienne du Rouvry,

France et Departatnento de Farmacologia, Facultad de Farmacia, Universidad de Valencia, 46100 Burjasot (Valerzcia), Esparia

Requ le 17 dtcembre 1993

SEVSER SAHPAZ, ALAIN LAURENS, REYNALD HOCQUEMLLER, AND& CAW^ et DIEGO CORTES. Can. J. Chem. 72, 1533 (1994). Cinq acttogCnines cytotoxiques ont etC isoltes de l'extrait methanolique de graines d'Annona senegalensis. La premikre est

nouvelle et a CtC dtnommCe sCnCgalkne 1. Sa structure, dCterminCe par Ctude spectroscopique (2D-NMR, SMIC, SMFAB-Li) est caracttriste par la prtsence d'un systkme diol et l'insaturation de la chaine alkyle. Les quatre autres ont CtC identifikes ?I la molvizarine 2, l'asimicine 3, la rolliniastatine-2 4 et la squamocine 5. Une etude des relations structure-activitt du sCntgalkne et de ses dCrivCs a Ctt rCaliste.

SEVSER SAHPAZ, ALAIN LAURENS, REYNALD HOCQUEMLLER, AND& CAY^, and DIEGO CORTES. Can. J. Chem. 72, 1533 (1994). Using activity-directed fractionation, the chromatography of the bioactive methanol extract of Annorza senegalensis seeds led

to isolation of a new mono-tetrahydrofuranic y-lactone acetogenin characterized by the presence of a double bond on the alkyl chain, senegalene 1. Its structure was elucidated on the basis of spectroscopic (2D-NMR and MS) and chemical methods. Four known acetogenins have been also isolated: molvizarin 2, asimicin 3, rolliniastatin-2 4, and squarnocin 5. Comparative struc- ture-activity relationships were studied using senegalene 1 and its derivatives in KB and VERO cell lines in in vitro tests.

Introduction Resultats et discussion Le genre Annona (Annonaceae) est caractCrisC par la

prCsence d'acCtogCnines 2 forte activitt cytotoxique (1). Les acCtogCnines de sept espkces, A. bullata, A. cherimolia, A. den- sicoma, A. montana, A. muricata, A. reticulata et A. squamosa (2) ont fait pour le moment l'objet d7Ctudes approfondies. Annona senegalensis n'a jusqu'h prCsent fait l'objet d'aucune recherche dans ce domaine. Seule a CtC signalCe, dans les feuilles et les fruits, la prbence d'huile essentielle composCe de mono et de sesquiterpknes (3), dans les racines, de diterpknes de type kaurane (4) et dans les Ccorces de tiges, d'acides aminks (5). . ,

Dans le prCsent travail, nous dkcrivons l'isolement ?i partir des graines d'une nouvelle acCtogCnine olkfinique mono-tCtra- hydrofuranique (mono-THF), le sCnCgalkne 1, la dktermination de sa structure ainsi que l'Ctude de son activitk cytotoxique.

L'extrait mtthanolique (A) des graines d'A. senegalensis prisente une importante cytotoxicite sur le test sur larves d7Artemia salina (I), CLS0 : 2,5 x lo3 pg/mL. Le fractionne- ment de cet extrait a CtC guidC par ce test. (A), mis en solution dans du mCthanol aqueux (95 : 5), est soumis successivement 2 une extraction liquide-liquide par l'hexane et le dichloromB thane. L'extrait chloromCthylCnique (B) conserve I'activitC cytotoxique de l'extrait initial (A), CLS0 : 1,7 x pg/mL. Par chromatographie sur colonne de (B), cinq acCtogCnines sont isolCes, une nouvelle, le sCnCgalkne 1, et quatre connues, car- actCrisCes par la prCsence de trois hydroxyles alcooliques et par diffkrentes configurations au niveau du systkme bis-THF a,&'-dihydroxylC, identifikes par comparaison ?i des Cchantil- lons authentiques : la molvizarine 2 (6), l'asimicine 3 (7), la rolliniastatine-2 4 (8), et la squamocine 5 (9).

SCnCgalkne 1 : R ' = R ~ = H TCtraacCtyl-stntgalbne l a : R' = R2 = Ac 2-(35),29-(30)-Tetrahydro-stntgalbne l b : R' = R2 = H 2-(35),29-(30)-Tttrahydro-tttraacCty1-sMg&ne l c : R' = R2 = AC 12,13-Acttonide-sCnCgalkne Id : R' = H; R2 = acttonide 29,30-Epoxy-tCtraacCtyl-stntgalkne l e : R' = R2 = AC

1. Partie 25 dans la sCrie ccAcCtogtnines des Annonactes>>; pour la Le sknCgalkne est un a m o ~ h e , La]I3 +I6 (c = 0,21* partie 24, voir la rtfkrence 24. CHC1,). I1 prhente, sur le spectre de masse en ionisation

2. Auteur ?I qui adresser toute correspondance. chimique, un pic molCculaire h d z 623 [MH]' et j. m/z 640 [M +

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H3C 0 ,O n(cH2)nyy&,J, (CH2)5 CH3

thrko - trans - thr.40 - trans - Molvizarine 2 : R' = OH; R2 = H; n = 8; * (e'rythro) Asimicine 3 : R' = OH; R2 = H; n = 10; * (thre'o) Rolliniastatine-2 4 : R' = OH; R2 = H; n = 10; * (e'rythro) Squamocine 5 : R' = H; R2 = OH; n = 10; * (e'rythro)

NH,]' correspondant h une masse molCculaire de 622. Sa for- mule brute C37H6607, est dCduite du HRSMIC, [MH]' = 623,4908 (calculC pour C3,H6,07 = 623,4887).

L'existence de quatre hydroxyles est mise en Cvidence par l'observation d'une bande large h 3350 cm-I en IR, par les pertes successives de quatre molCcules d'eau h partir de [MH]', et par la prkparation du dCrivC tCtraacCtylC la .

Le spectre IR de 1 prCsente une bande B 1750 cm-', car- actiristique d'un carbonyle de y-lactone a,p-insaturke. Ceci est confirm6 par l'analyse des spectres ID-RMN ('H et 13c spin echo) et 2D-RMN ('H-'H Cosy 45 et 'H-',c XH Corr). Le spectre RMN 'H prksente un systkme de trois signaux h 6 7,18 (d, lH), 6 5,04 (dq, 1H) et 6 1,42 (d, 3H), corrClCs en RMN I3c avec trois carbones h 6 151,89 (C-35), 6 77,88 (C-36) et 6 18,84 (C-37), et deux autres signaux de carbones quaternaires h 6 174,57 (C-1) et 6 130,75 (C-2) caractkristiques d'une y-lactone a,p-insaturke (voir tableau 1). De plus, la prCsence d'un systkme ABX en RMN 'H h 6 2,50 (ddd, lH), 6 2,36 (dd, 1H) et 6 3,81 (m, IH), corrClC avec les rksonances respectivement h 6 32,97 et 6 69,48 en RMN I3c, prouve l'existence d'un OH en position 4, en p de la y-lactone (10).

Le spectre de RMN I3c montre deux autres signaux h 6 81,70 et 6 79,20 attribuCs aux carbones oxygCnCs d'un noyau mono- THF a-monohydroxylC (11). La corrClation de ceux-ci avec les multiplets h 6 3,81 et 6 3,90 en RMN 'H confirme cette hypothkse (tableau 1).

La position du systkme mono-THF a-hydroxylC et celle des deux autres hydroxyles restant sur la chaine hydrocarbonke sont dCterminCes par l'analyse des fragments de masse de 1, l a , l b et lc. Les fragmentations sur le SMIC de 1 h m/z 341 et 281, h m/ z 411 et h m/z 441, permettent de placer le cycle THF entre les carbones 17 et 20 et le groupe OH adjacent sur le carbone 21 (voir figure I), ce qui est confirm6 par l'examen des spectres de masse des dCrivCs l a , l b et lc.

L'emplacement du systkme diol sur les carbones 12 et 13 est mis en Cvidence par les fragments obtenus sur le SMIC (NH,) de 1 (m/z 269 et m/z 353) et de l a (m/z 353 et m/z 437). La prC- paration du dCrivC acCtonide I d (12) et l'obtention sur le SM de I d des fragments h m/z 339 (C-13lC-14), m/z 381 (C-16lC-17), m/z 451 (C-20lC-21) et m/z 481 (C-21lC-22), confirment la position du groupe diol sur la chaine hydrocarbonke. Un systkme mono-THF a-hydroxylC accompagnC d'un groupe- ment a-diol a dCjh CtC observC chez la gigantetrocine et la gigantriocine, acCtogCnines isolCes de Goniothalamus gigan- teus (1 1) et la 10,13-trans- 13,14-e'rythro-densicomacine et la 10,13-trans- 13,14-thre'o-densicomacine isolCes d'Annona den- sicoma (13). 11 semble que la 10,13-trans- 13,14-thre'o-densico- macine soit identique h la gigantetrocine. Mais par rapport h ces acCtogCnines, le sCnCgalkne prCsente une grande originalit6 like h la position du systkme diol entre le THF et la lactone.

Deux signaux en RMN 13c h 6 130,36 et 6 128,91 corrClCs

TABLEAU 1 . Correlation 'H-',c du senigalbne 1

Couplage en RMN 'H-',c (multiplicitCs spin echo)

2,36 dd 2.50 ddd 3,81 m 1,48 m 1,25-1,45 m 1,55 m 3,41 m 3,41 m 1,33 m 1,25-1,45 m 3,90 m 1,62, 1,95 m 3,81 m 3,41 m 1,25-1,45 m 1,55 m 2,19 m 5,35 m 2,01 m 1,25-1,45 m 1,25-1,45 m 0,86 t 7,18 d 5,04 dq 1,42 d

32,97 (CH,) 32,97 (CH,) 69,48 (CH) 3 7 8 (CHJ 29,15-29,57 (CH,) 33,21 (CH,) 74,06 ( c H ) ~ 74,20 ( c H ) ~ 35,27 (CH,) 25,87-29,57 (CH,) 79,20 (CH) 25,87-29,57 (CH,) 8 1,70 (CH) 73,54 ( c H ) ~ 29,15-29,57 (CH,) 25,87 (CH,) 29,57 (CH,) 130,36, 128,91 (CH) 27,06 (CH,) 22,48 (CH,) 3 1,69 (CHJ 13,92 (CH,) 15 1,89 (CH) 77,88 (CH) 18,84 (CH,)

"Constantes de couplage: J3a-3b = 15 HZ; r,c,,r = 8 HZ; J3H cis = 3 HZ; J3$b35 = 1 HZ; J35-36 = 1-5 HZ; J79-37 = 7.5 Hz.

'Ces deplacements chimiques ( C RMN) peuvent &tre inverses.

avec un multiplet vers 6 5,35 (2H) en RMN 'H correspondant 2 deux mCthines sp2, sont en faveur de la prCsence d'une double liaison de configuration cis sur la chaine du sCnCgalkne, ce qui est en accord avec les trois constantes de couplage mesurCes lors de l'irradiation sClective des protons B 6 2,19 et 6 2,01 : J = 10,6 Hz, S = 4,5 Hz et J" = 6 Hz.

L'existence d'un systkme olCfinique, en plus de l'insaturation de la lactone, est confirmCe par la prkparation des dCrivCs tCtrahydrogCnCs l b et l c obtenus par hydrogknation catalytique (14) du sCnCgalkne 1 et du tCtraacCtyl-sCnCgalkne l a . En effet on observe, d'une part la disparition des signaux correspon- dants aux doubles liaisons sur les spectres RMN 'H et 13c de l b et lc , d'autre part l'obtention des pics molCculaires augment& de quatre uma sur le SMIC. De plus, les fragments obtenus sur le SM FAB-Li (15, 16) du sCnCgalkne 1 et du tCtrahydro-sCnC- galkne lb , correspondant au pic molCculaire [M + Li]' (1 : m/z 629; l b : m/z 633), aux pics dus h la coupure C-3lC-4 (1 : m/z 5 17; l b : m/z 5 19) et h la coupure sur le noyau THF (1 : m/z 375 et 245; l b : m/z 377 et 247), sont en faveur d'une structure mono-THF, avec un systkme diol entre la y-lactone et le THF, et

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SAHPAZ ET AL.

]la r S-S' t-t' U-up 1," 1," v-v' x Y z

1 517 239 269-353 [299]-323 341-281 375 245 41 1-21 1 L4-4 1 1 525 579 l a - 281 353437 425-365 467-323 - - 537-253 609 [6931 747 l b 519 241 271-355 301-325 [343]-283 377 247 413-213 443 - -

l c 283 355439 427-367 469-325 - - 539-255 61 1 - -

[ ] : Fragments de faible intensite. 'SMFAB : m-NBA + LiCI.

FIG. 1. Fragmentations de 1, l a , l b et l c en spectromCtrie de masse.

n ZB -COz (CH& CH=CHZ m/' 661

Y

H H -H

1e : mlz 807 mlz 705

FIG. 2. Fragments de l e en SM.

un systkme olkfinique entre le THF et le CH3 terminal (voir figure 1, fragments I , , 1, et 1,).

La position de la double lkison sur la chaine entre le systbme THF (C17/C2,) et le mCthyle terminal (CH3-34) est confirmke, sur le SM de l b et lc , par l'obtention des fragments lactoniques augment& uniquemeit de deux uma tandis que la masse molCculaire est quant ?i elle augmentCe de quatre. Une fragmen- tation entre les carbones 27 et 28 et une autre entre les carbones 31 et 32 (1 : d z 525 et d z 579; l a : d z 693 et d z 747), per- mettent de placer la double liaison en 29-30. Ces fragments ne sont pas observCs sur les spectres de masse des dCrivCs tCtrahy- drogCnb l b et l c (voir figure 1).

La prCparation de 1'Cpoxyde du tCtraacCtyl-sCnCgalkne ( le) confirme la prksence de la double liaison ainsi que sa position en 29-30 sur la chaine (17). Le pic molCculaire de l e est aug- rnentC de 16 urna [MHIC d z 807 sur le SMIC. Des fragments caractCristiques de coupure au niveau de 1'Cpoxyde sont observCs (voir figure 2); le fragment ?i d z 705 peut Etre expli- quC par un mCcanisme similaire a celui proposC (18, 19).

La configuration relative de 1, au niveau du systkme THF a-hydroxylC (C-20lC-2 1 : thre'o) et diol (C-12lC- 13 : thre'o), est proposCe en fonction des dCplacements chimiques en RMN 13c

des-carbones concernCs rapport aux acC~ogCnines mono- THF de configurations relatives connues : solamine et corosso- lone (10, 20, 21), gigantetrocine et gigantriocine (11) et densi- comacines 1 et 2 (1 3).

Le sCnCgalkne constitue donc le quatrikme exernple dCcrit d'acCtogCnine possCdant une double liaison sur la chaine ali- phatique. Contrairement a la giganenine (22) qui posskde cette double liaison du cbtC lactonique, chez le sCnCgalkne la double liaison est situCe entre le THF et le mCthyle terminal comme dans la gigantetronenine et la gigantrionenine (23). Toutefois il differe trbs largement de ces dernikres par la position des dif-

TABLEAU 2. CytotoxicitC du sCnCgalbne et de ses dCrivCs sur lignCes cellulaires (CE50 pg/mL)

Produit KB VERO

SCnCgalbne 1 1,5 x 2 x lo-' TCtraacttyl-sCnCgalbne l a 3,5 lo-3 8 x lo-2 TCtrahydro-sCnCgalbne l b 1,6 x lo-' 0,25 Epoxy-tCtraactty1-sCnCgalbne l e 1,4 x 0,6 Vinblastine 1 o - ~ >3

fkrentes fonctions et surtout du groupement diol sur la chaine entre le THF et la lactone.

La cytotoxicitC du sCnCgalkne et de ses dCrivCs, CtudiCe sur ligntes cellulaires KB et VERO, est rapportCe dans le tableau 2. Le sCnCgalkne 1 (CE5, = 1,5 x lo4 pglmL) prCsente une activ- it6 importante sur cellules KB. La rkduction des doubles liai- sons diminue fortement cette activitC (CE,, = 1,6 x pgl mL). L'acCtylation des hydroxyles ( l a : CE5, = 3,5 x pgl mL) ou 1'Cpoxydation de la double liaison olkfinique ( l e : CE,, = 1,4 x pg1mL) diminue Cgalement llactivitC. La CE,, du sCnCgalkne est sensiblement plus ClCvCe sur KB que celle de la vinblastine utilisCe comme tCmoin.

Partie expkrimentale Mithodes ginirales

Les pouvoirs rotatoires ont CtC mesurCs 5 l'aide d'un polarimktre Schmidt-Haensch type Polartronic I. Les spectres ont CtC enregistrks sur les appareils suivants: UV, Unicam Sp 1800; IR, Perkin-Elmer type 257; RMN 'H et I3c, Bruker AC-200 a 200 MHz ('H) et 5 50 MHz (I3c); SMIC et SMIE, Nermag-Sidar; SMFAB, Kratos MS-80. Les chromatographies sur colonne ont CtC rCalisCes sur Kieselgel 60 (Merck 9385) ou 60 H (Merck 7736), les chromatographies analy- tiques sur couche mince (CCM) sur DC Alufolien Kieselgel60 F 254 (Merck 5554).

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1536 CAN. I. CHEM. VOL. 72, 1991

Mattriel vigttal Les graines dlAnnona senegalensis ont Ctt rCcoltCes en Juillet 1990

en Casamance (SCnCgal); un Cchantillon d'herbier est dCposC sous la rtfkrence AL 282 B la Facult6 mixte de MCdecine et de Pharmacie de Dakar.

Extraction et isolement des acitoghines L'extraction et le fractionnement des graines d'Annonn senegalensis

ont CtC guides par le test sur lawes de crevettes d'Artemia snlina (Brine Shrimp). Les graines sCchCes et broyCes (2,3 kg) sont traitCes par le methanol. Aprks evaporation, on obtient un rCsidu de 155,3 g qui a CtC ensuite repris par le methanol B chaud. Le fractionnement est effectuk dans un premier temps par partage liquide-liquide entre l'extrait mCth- anolique (A) (additionnC de 5% d'eau) et l'hexane. La solution hydromCthanolique est rCextraite ensuite par le dichloromtthane. La phase organique (B) (56,2 g) a CtC fractionnke par chromatographie flash (Cluant : CH2CI2/AcOEt/MeOH 10 : 9,5 : 0,5) pour donner cinq acCtogCnines : le sCnCgal6ne 1, la molvizarine 2, I'asimicine 3, la rolliniastatine-2 4 et la squamocine 5.

Stnigalbne 1 . C37H6607; M = 622; [a], +I6 (c 0,21, CHCI,). IR, v,,, cm-' (film): 3350,2840, 1750, 1450, 1310, 1050,748; HRSMIC, [MH]' = 623,4908 (calculC pour C,,H,,O, = 623,4887); SMIC (NH,), m/z: 640 [M + NH,]', 623 (100%) [MH]', 605 [MH - H20]', 587 [MH - 2H20]', 569 [MH - 3H20]', 551 [MH - 4H20]' (figure 1); RMN 'H et I3c : voir tableau 1.

Titraacityl-sintgalbr~e 1 a Par traitement de 1 (10 mg) avec anhydride acCtique - pyridine (2 :

I, temperature ambiante, 1 nuit), le produit l a (huileux) est obtenu quantitativement. C4,H7,0,,; RMN 'H (CDCI,), 6 : 0,87 (3H, t, CH,- 34), 1,17-1,70 (34H, m, H-5 B 11, H-22 228 et H-31 B 33), 1,40 (3H, d, CH,-37), 1,56-1,96 (lOH, 2m, H-I4 B 16 et H-18, 19), 2,02 (3H, s, OCOCH,-4), 2,09 (9H, s, OCOCH,-12, 13, 21), 2,53 (2H, m, H-3), 3,82 et 3,95 (2H, 2m, H-17, 20), 4,82 (3H, m, H-12, 13, 21), 5,O (lH, dq, H-36), 5,08 (IH, m, H-4), 5,32 (2H, td, H-29, 30), 7,06 (IH, d, H-35). SMFAB (NBA + EtOH), mdz : 790 [M + Na]', 731 [M - AcOH]', 671 [M - 2AcOH]+, 61 1 [M - ~AcOH]', 551 [M - 4AcOHI' (figure I).

2,35,29,30-Titrahydro-stntgnlbne l b Par reduction catalytique de 1 en solution mkthanolique (5 mg), par

Hz et 10% Pd/C B temperature ambiante et sous pression atmo- sphirique pendant 2 h, le produit l b est obtenu quantitativement. C,,H,,O,; SMIC (NH,), m/z : 644 [M + NH,]', 627 (100%) [MH]', 609 [M - H2OIC, 591 [M - 2H,O]', 573 [M - 3H20]', 555 [M - 4H20]' (figure 1).

2,35,29,30-Titrahydro-titraace'tyl-stk&alkne l c Par reduction catalytique de l a en solution mkthanolique (5 mg), par

Hz et 10% PdIC B temperature ambiante et sous pression atmo- sphCrique pendant 2 h, le produit l c est obtenu quantitativement. C4,H7801 ,; SMIC (NH,), m/z : 81 2 [M + NH,]', 795 (100%) [MH]', 735 [M - AcOH]', 675 [M - ~AcOH]', 615 [M - 3AcOH]', 555 [M - 4AcOHI' (figure 1).

12,13-Achonide-sinigalbne I d Le produit, 1 (36,2 mg), est trait6 avec 2,2-dimCthoxypropane

(9,l mg), acide p-tolutnesulfonique (traces) et benzkne (1 mL) sous reflux pendant 1 h. Aprks 1 h d'agitation 0.2 mg de K2C0, sont rajoutCs B froid. L'agitation est prolongee pendant 4 h. Le produit de rtaction, Id, est ensuite rkextrait par I'tther et lave d'abord par une solution de NaCl saturCe et ensuite par H20. Le rendement est de 80%. C,,H,,,O,; SMIC (NH,), m/z : 680 [M + NH,]', 663 [MH]', 644 [M - H20]', 626 [M - 2H20]+, 605 [MH - 581'.

29,30-Epoxy-tttraace'tyl-stntgalbne l e Le produit, l a (98 mg), est trait6 avec m-CPBA (73.5 mg) et chloro-

forme (12 mL) pendant 8 h B tempCrature ambiante. Le produit de rtac-

tion, le , est lave d'abord par une solution de 1 % de NaHCO, et ensuite par H20 et purifiC sur colonne de silice. C45H780,2; SMIC (NH,), m/z : 824 [M + NH,]', 807 [MH]', 746 [M - AcOH]', 686 [M - 2AcOY]+, 626 [M - 3AcOH]', 566 [M - 4AcOHI' (figure 2).

Molvizarine 2. C3,H6,07; M = 622; [a], +I0 (c 0,20, CHCI,). Iden- tifiee par analyse des donntes spectrales, SM, 'H et "C RMN (6), et comparaison B un Cchantillon authentique (co-CCM).

Asimicine 3. C,,H,,O,; M = 622; [a], + l l (c 0,22, CHCI,). Identi- fiCe par analyse des donnees spectrales, SM, 'H et I3c RMN, com- paraison aux donntes de la litttrature (1) et i un Cchantillon authentique (co-CCM).

Rolliniastntine-2 4 (= bullntacine). C37H6607; M = 622; [a], +15 (c 0,27, CHCI,) (litt. (8) [a], +5,3 (c 0,23, CHCI,)); (litt. bullatacin (1) [a],,, +14,7 (c 0,004, CHCI,)). IdentifiCe par analyse des donntes spectrales, SM, 'H et ',c RMN, et comparaison B un Cchantillon authentique (co-CCM).

Squarnocine 5. C,,H,,O,; M = 622; [a], +I4 (c 0,2, CHC1,) (litt. (1) [a], +I5 (C 1,7, MeOH)). IdentifiCe par analyse des donnCes spec- trales, SM, 'H et ',c RMN, comparaison aux donnees de la IittCrature et B un Cchantillon authentique (co-CCM).

1. J.K. Rupprecht, Y.-H. Hui et J.L. McLaughlin. J. Nat. Prod. 53, 237 (1990).

2. X.P. Fang, M.J. Rieser, Z.M. Gu, G.X. Zhao et J.L. McLaughlin. Phytochem. Anal. 4, 27 (1993).

3. 0 . Ekundayo et B.O. Oguntimein. Planta Med. 52,202 (1986). 4. M. Leboeuf, A. Cavt, P.K. Bhaumik, B. Mukherjee et R. Mukher-

jee. Phytochemistry, 21,2783 (1982). 5. D. Bamba, G. Balansard, C. Maillard, G. Dumtnil et A.

Gayte-Sorbier. Plant. Med. Phytother. 18, 36 (1984). 6. D. Cortes, S.H. Myint et R. Hocquemiller. Tetrahedron, 38, 8195

(1991). 7. J.K. Rupprecht, C.-J. Chang, J.M. Cassady et J.L. McLaughlin.

Heterocycles, 24, 1 197 (1986). 8. G.R. Pettit, R. Reissen, J.E. Leet, J. Polonsky, C.R. Smith, J.M.

Schmidt, C. Dufresne, D. Schanfelberger et C. Moretti. Heterocy- cles, 28, 2 12 (1989).

9. Y. Fujimoto, T. Eguchi, K. Kakinuma, N. Ikekawa, M. Sahai et Y.K. G u ~ t a . Chem. Pharm. Bull. 36.4802 (1988).

- i \ ,

10. D. Cortes, S.H. Myint, A. Laurens, R. Hocquemiller, M. Leboeuf et A. CavC. Can. J. Chem. 69,8 (1991).

11. X.P. Fang, J.K. Rupprecht, A. Alkofahi, Y.H. Hui, Y.M. Liu, D.L. Smith, K.V. Wood et J.L. McLaughlin. Heterocycles, 36, 11 (1991).

12. J.A. Musich et H. Rapoport. J. Am. Chem. Soc. 15,4865 (1978). 13. J.G. Yu, D.K. Ho, J.M. Cassady, L. Xu et C.-J. Chang. J. Org.

Chem. 57,6198 (1992). 14. D. Cortes, S.H. Myint, J.C. Harmange, S. Sahpaz et B. Figadhe.

Tetrahedron Lett. 33,5225 (1992). 15. 0 . LaprCvote, C. Girard, B.C. Das, T. Laugel, R. Roblot, M. Leb-

oeuf et A. CavC. Rapid Commun. Mass Spectrom. 6, 352 (1992). 16. 0. LaprCvote, C. Girard, B.C. Das, D. Cortes et A. CavC. Tetrahe-

dron Lett. 33,5237 (1992). 17. Y. Hashidoko, S. Tahara et J. Mizutani. Phytochemistry, 30, 3729

(1991). 18. N.J. Jensen et M.L. Gross. Mass Spectrom. Rev. 6,497 (1987). 19. 0 . LaprCvote, F. Roblot, R. Hocquemiller et A. CavC. Tetrahedron

Lett. 31,2283 (1990). 20. S.H. Myint, D. Cortes, A. Laurens, R. Hocquemiller, M. Leboeuf,

A. CavC, J. Cotte et A.M. QuCro. Phytochemistry, 30,3335 (1991). 21. J.C. Harmange, B. Figadkre et A. CavC. Tetrahedron Lett. 33,5749

(1992). 22. X.P. Fang, J.E. Anderson, D.L. Smith, K.V. Wood et J.L.

McLaughlin. Heterocycles, 34, 1075 (1992). 23. X.P. Fang, J.E. Anderson, D.L. Smith, J.L. McLaughlin et K.V.

Wood. J. Nat. Prod. 55, 1655 (1992). 24. D. Gromek, B. Figadkre, R. Hocquemiller, A. Cave et D. Cortes.

Tetrahedron, 49,5247 (1993).

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