UNIVERSITE KASDI MERBAH-OUARGLA

Facult des Sciences de la Nature et de la Vie

Dpartement des Sciences Biologiques

Mmoire :

MASTER ACADEMIQUE

Prsent par :

RAMDANE Iman

BOUKARANA Iman Khaoula

Thme :

Soutenu publiquement

Le : 31/05/2016

Devant le jury :

M. SLIMANI Nour eddine M.C.B Prsident UKMOuargla

M. AZIB Salim M.A.A. Promoteur UKMOuargla

Melle SALHI Nesrine M.C.A Examinateur UKMOuargla

Anne Universitaire : 2015/2016

Domaine : Sciences de la Nature et de la Vie

Filire: Sciences Biologiques

Spcialit : Biotechnologie vgtale

Slection des souches rhizobiennes efficientes,

autochtones de la rgion de Ghardaa, nodulant la

luzerne (Medicago sativa L.)

Ddicaces

Nous ddions ce travail :

Nos trs chers parents que nous aimons le plus au monde

Pour leur encouragement illimit, et pour leurs sacrifices normes.

Aucun mot ne serait suffisant pour les remercier.

QuALLAH les protge et les garde.

A nos surs et frres pour leurs soutiens

A toutes nos familles

A nos amis en souvenirs des bons moments passs ensemble

Merci tous et toutes.

BOUKARANA imane et

RAMDANE imane.

Remerciements

Nous voulons exprimer par ces quelques lignes de remerciements notre gratitude envers

tous ceux en qui par leur prsence, leur soutien, leur disponibilit et leurs conseils, nous avons

eu courage daccomplir ce projet.

Nous commenons par remercier M. AZIB Salim qui nous a fait lhonneur dtre notre

encadreur. Nous le remercions profondment pour son encouragement continu et aussi dtre

toujours la pour nous aider et nous guider retrouver le bon chemin par sa sagesse et ses

prcieux conseils.

Nous adressons nos remerciements galement aux membres de jury pour nous avoir fait

lhonneur dexaminer et dvaluer notre travail : M. SLIMANI Nour eddine; prsident du jury

et Mlle. SALHI Nesrinr; examinatrice de ce travail.

Nous noublions pas dadresser nos vifs remerciements au responsable du laboratoire de

microbiologie pour son aide ainsi que toutes les quipes du laboratoire de contrle de qualit

des produits alimentaires(Ouargla).

Nous tenons remercier toute lquipe de lANRH, Agence national des ressources hydrique.

Ouargla.

Nous tenons remercier galement, M. El-haddad djillali, doctorant en cologie des

systmes vectoriels, facult des sciences, Universit Mhamed bougurra. Boumerdes.

Un grand merci Mme Boukarana wafa, doctorante en microbiologie. Alger. Et mme

Dr- babeziz, laboratoire danalyse mdical (Ouargla). Et Mlle. Zoubida, surveillance gnrale

du paramdical, Ouargla.

Nous remercions galement, M. BOUMAAKAL (TASS), technicien suprieur de la

sant, et aussi Dr Dada moussa, chef de laboratoire central, hpital Mohamed boudiaf.

Ouargla.

Nous oublier toutes les quipes des laboratoires pdagogiques de luniversit Kasdi

Merbah, Ouargla.

Liste des abrviations

GA Acides gibbrellique

AIA Acide-indole-actique

PG Polygalacturonase

ADN Acide dsoxyribonuclique

ADNr Acide Dsoxyribonuclique ribosomique

ATP Adnosine Triphosphate

CCIR Cellule corticale infecte par les rhizobactries

CCS Cellule corticale racinaire saine

DO Densit optique

H3O+Cl

- Acide Chlorhydrique

LCO Lipochitinooligosaccharides

INRA Institut national de la recherche agronomique

N2 azote gazeux

N2O Oxyde dazote

NA Nodule actif

NaCl Chlorure de sodium

NH3 Ammoniac

NH4+ Ammonium

NIA Nodule inactif

NO2- Nitrite

NO3- Nitrate

Nod nodulation

G Ghardaa

% Pourcentage

pH Potentiel hydrique

PS Partie souterraine

PA Partie arienne

S Sinorhizobium

Gx Grossissement

S.R Souche rfrence

tr/mn Tour par minute

YMA Yeast Manitol Agar

YMB Yeast Manitol Broth

m Micromtre

oC degr Celsius

L. Line

mM millimole

cm centimtre

g Gramme

l Littre

SNV Science de nature et de la vie

BNL Bactries nodulant les lgumineuses

CA-S.F.M Comit de lantibiogramme de la Socit Franaise de la

Microbiologie

T Tmoin

L Microlitre

FAO Organisation des Nations Unies pour lalimentation et

lagriculture

r Coefficient de corrlation

mm millimtre

Liste des tableaux

Tableau 1. Stades physiologiques de la luzerne. ........................................................................ 9

Tableau 2. Espces de Sinorhizobium ...................................................................................... 11

Tableau 3. Les principales diffrences entre les types de nodule indtermin et dtermine. 16

Tableau 4. Liste des antibiotiques utiliss dans notre tude ..................................................... 26

Tableau 5. Corrlation entre la nodulation et les diffrents paramtres tudis ....................... 33

Tableau 6. Croissance des souches sur milieu solide 0mM dNaCl. ..................................... 35

Tableau 7. Croissance des souches sur milieu solide 40mM dNaCl. ................................... 35

Tableau 8. Croissance des souches sur milieu solide 80Mm dNaCl. ................................... 36

Tableau 9. Croissance des souches sur milieu solide 160mM dNaCl. ................................. 37

Tableau 10. Croissance des souches sur milieu solide 320mM dNaCl. ............................... 38

Tableau 11. Croissance des souches sur milieu solide 640mM dNaCl. ............................... 39

Tableau 12. Croissance des souches sur milieu solide 1280mM dNaCl. ............................. 40

Tableau 13. Croissance des souches sur milieu solide T = 4C ............................................ 42

Tableau 14. Croissance des souches sur milieu solide T = 28C .......................................... 43

Tableau 15. Croissance des souches sur milieu solide T = 37C .......................................... 43

Tableau 16. Croissance des souches sur milieu solide T = 45C .......................................... 44

Tableau 17. Croissance des souches sur milieu solide pH = 4 .............................................. 45

Tableau 18. Croissance des souches sur milieu solide au pH= 5 ............................................. 46

Tableau 19. Croissance des souches sur milieu solide au pH= 6. ............................................ 47

Tableau 20. Croissance des souches sur milieu solide au pH= 6.8 .......................................... 48

Tableau 21. Croissance des souches sur milieu solide au pH= 8 ............................................. 49

Tableau 22. Croissance des souches sur milieu solide au pH= 9 ............................................. 50

Tableau 23.Slection les souches les plus efficientes par rapport aux paramtres tudies. ... 54

Liste des figures

Figure 1. Cycle de lazote .......................................................................................................... .3

Figure 2. Fixation symbiotique de lazote atmosphrique ......................................................... 5

Figure 3. Formation dun nodule induit par rhizobium ............................................................ 15

Figure 4. Architecture de nodule dtermin et indtermine. .................................................. 16

Figure 5. Description du dispositif exprimentale. .................................................................. 20

Figure 6. Effet des souches sur la croissance des parties ariennes. ........................................ 27

Figure 7. Effet des souches sur la croissance de la partie souterraine. ..................................... 28

Figure 8. Biomasse sche arienne (g/plante) de la luzerne. .................................................... 29

Figure 9. Biomasse sche racinaire (g/plante) de la luzerne. ................................................... 30

Figure 10. Leffet des souches bactriennes sur le nombre des nodules. ................................. 31

Figure 11. Nombre des nodules actifs en fonction des diffrentes souches examines. .......... 32

Figure 12. Effet de la salinit sur la croissance des souches 0mM. ....................................... 34

Figure 13. Effet de la salinit sur la croissance des souches 40Mm. ..................................... 35

Figure 14. Effet de la salinit sur la croissance des souches 80mM dNaCl. ........................ 36

Figure 15. Effet de la salinit sur la croissance des souches 160Mm. ................................... 37

Figure 16. Effet de la salinit sur la croissance des souches 320Mm. ................................... 38

Figure 17. Effet de la salinit sur la croissance des souches 640mM. ................................... 39

Figure 18. Effet de la salinit sur la croissance des souches 1280mM. ................................. 40

Figure 19. Effet de la temprature sur la croissance des souches 4C. ................................. 41

Figure 20. Effet de la temprature sur la croissance des souches 28C. ............................... 42

Figure 21. Effet de la temprature sur la croissance des souches 37C. ............................... 43

Figure 22. Effet de la temprature sur la croissance des souches 45C. ............................... 44

Figure 23. E