Recherche et dénombrement d’Escherichia coli par la méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

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Présenté par : FADI Ayman Recherche et dénombrement d’Escherichia coli Méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

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Présenté par : FADI Ayman

Recherche et dénombrement d’Escherichia coli Méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)

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PLAN

INTRODUCTION

GENERALITES

PRINCIPE DU NPP

REFERENCES NORMATIVES

DOMAINE D’APPLICATION

MODE OPERATOIRE

EXPRESSION DES RESULTATS

CONCLUSION

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INTRODUCTION

La présence des microorganismes dans l’eau peut constituer un danger pour le consommateur, il est donc nécessaire de mettre en place des voies et moyens pour détecter les microorganismes présents dans l’eau. Les méthodes de détection sont utilisées soit pour dénombrer, soit pour déceler la présence d’un microorganisme spécifique (E. coli par ex).

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INTRODUCTION

Le dénombrement de ces microorganismes se fait soit par la méthode de filtration sur membrane soit par la méthode du nombre le plus probable. Cette dernière se base sur une estimation statistique du nombre des microorganismes supposés distribués dans l’eau d’une manière aléatoire.

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GENERALITES

Définitions:Npp :  Indice basé sur les lois statistiques qui représente le nombre évalué de micro organismes présents dans 100 ml d'eau (par exemple coliformes)E. coli: c’est une bactérie coliforme, lactose +, oxydase -, en plus, elle produit du gaz à partir du mannitol ainsi que de l’indole à partir du tryptophane.Milieu de culture : C’est une préparation au sein de laquelle des micro-organismes peuvent se multiplier. Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme étudié.

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PRINCIPE DU NPP

Les prises d’essais de l’échantillon d’eau sont ensemencées dans un milieu de

culture liquide conçu pour permettre la croissance d’un microorganisme ou de

groupe de microorganismes.

La croissance se traduit par l’apparition d’un trouble du milieu et une

production du gaz, éventuellement, une modification visible.

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REFERENCES NORMATIVES

Référence normative : NM ISO-9308-2

But : La recherche et le dénombrement des Escherichia Coli et des bactéries

coliformes présentes dans tous les types d’eau. Cette méthode consiste a

calculer le nombre le plus probable des microorganismes par culture dans un

milieu liquide dans une série de tubes.

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DOMAINE D’APPLICATION

Cette méthode peut être appliquée à tous les types d’eau, même ceux contenant une quantité appréciable de particules en suspension

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MODE OPERATOIRE

Matériel:• Incubateur• Tubes à essais• Pipettes• Autoclave• Vortex• Cloches de Durham

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MODE OPERATOIRE

Milieux de culture Bouillon au lauryl-sulfate .

Bouillon EC

L’indole

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MODE OPERATOIRE

Réactifs Réactif de KOVACS

Le réactif de KOVACS est destiné à la mise en évidence de la production d’indole à partir du Tryptophane par les bactéries qui possèdent une tryptophanase.

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MODE OPERATOIRERéalisation des essais

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Réalisation des essais TEST CONFIRMATIF

MODE OPERATOIREColiformes fécaux

EC medium

Dénombrement des tubes positifs trouble + gaz

Indole

44°C+ 0.5 °C/24H

Lecture sur la table de Mac graddyNombre le plus probable (NPP) /100 mL

44°C+ 0.5 °C/24H

Addition de réactif Kovacs

Coloration rose Choix des triplets

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EXPRESSION DES RÉSULTATS Exemple :Echantillon sur milieux simple concentration(1ml)………….:3 tubes (+)Dilution au 1/10………………………………………………………………:3 tubes (+)Dilution au 1/100………………………………………………………….…:2 tubes (+)Dilution au 1/1000…………………………………………………………..:1 tube (+)Dilution au 1/10 000………………………………………………..………:0 tube (+)

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EXPRESSION DES RÉSULTATS Lire la valeur du NPP dans la table de Mac Grady et en déduire la concentration des bactéries dans l’échantillon :

•choix de la dilution : 10-1

•Détermination du NPP : regroupement choisi = 321 dans la table de Mac Grady le NPP correspondant à 321 est 15.•Calcul :

FdV

NPPNensemencé

mLcoliformesN /10.5,1150101

15 21

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CONCLUSION Le mauvais côté de cette méthode est

le temps assez long pour la réalisation des tests aussi que les différents milieux de cultures qui nécessite.

La méthode NPP est l’un des méthodes les plus précises en terme de résultats pour le dénombrement des bactéries.