Procédure Salmonella sellesITU et ECBU 1mardi 11 avril 2023 ITU et ECBU 1

Salmonella dans les selles

Salmonella dans les selles

Procédure Salmonella selles 2mardi 11 avril 2023 ITU et ECBU 2

Jour 1

Les Salmonella ne sont pas détectables dans les selles immédiatement.

Il faut :– Réaliser l’isolement sur milieu sélectif idoine

c’est-à-dire mettant en évidence des colonies « suspectes »

– Réaliser, pour les trouver en cas de faible concentration, un enrichissement

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Caractères biochimiques des Salmonella :

• Glucides : lactose, saccharose et salicine -

• H2S en général +

• Uréase -

D’autres caractères sont utilisés dans les milieux chromogènes et XLD (p 167)

1. Jour 1 : isolement

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SS

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Hektoen

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Rambach

Chromogène bleu vert (-galactosidase)

Substrat acidifiant : propylène glycol

Indicateur de pH : RN

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Il consiste à augmenter la proportion relative des Salmonella dans un mélange pour augmenter la probabilité de trouver des colonies suspectes sur un isolement.

Supposons que l’on ait 1 Salmonella pour 100 000 000 de coliformes

Supposons que les Coliformes soient inhibés à 99 %

Alors

Au départ : 1 Salmonella pour 100 000 000 de coliformes

Après 1 génération : 1 Salmonella pour 1 000 000 de coliformes

Après 2 générations : 1 Salmonella pour 10 000 de coliformes

Après 3 générations : 1 Salmonella pour 100 de coliformes

Après 4 générations : 1 Salmonella pour 1 de coliforme

2. Jour 1 : enrichissement

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On utilise donc des inhibiteurs nombreux et des molécules qui favorisent les Salmonella ou défavorisent les autres, en particulier les Coliformes.

Les milieux sont :

• bouillon lactosé au sélénite

• bouillon de Müller Kauffman au tétrathionate et desoxycholate

• bouillon de Rappaport (haute concentration en magnésium et vert malachite)

Il existe des techniques utilisant des Ig anti Salmonella pour fixer les Salmonella du milieu sur un support solide à partir duquel l'enrichissement est effectué.

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Jour 21. Examen des isolements :

• repérage des colonies suspectes,

• réalisation du test Uréase rapide pour éliminer de l’étude les bactéries Uréase + comme : ………………

On place une colonie dans un faible volume de milieu Urée Tryptophane et on incube 2 à 3 h. L’opération est répétée sur 4 autres colonies suspectes si cela est possible.

• lecture des UT :

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1. Examen des isolements :

• Pour les Uréase - ensemencement d’une galerie (miniaturisée… comme API20E) : reprendre la totalité du UT dans 5 mL d’eau physiologique). L’urée ne gène pas puisque la bactérie est uréase - !

• Incuber.

2. À partir des enrichissements :

• Réaliser un isolement sur milieu sélectif de Salmonella (certains laboratoires ne le feront que si l’isolement primitif n’a rien donné). Toutes les opérations faites ensuite sur ce milieu sont les mêmes que celles décrites ci-dessus).

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Jour 3• lire la galerie,

• Si Salmonella est identifiée : Sérogrouper

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Merci de votre attention !!!!

Réalisé par Jean-Noël Joffinaoût 2006

Au laboratoire de SAINT BRICE !Critiques : jnjoffin@wanadoo.fr

Bilan … au tableau !