Rev. Fr. T rans fus . H6mobio l . , 1992, 35, 183-191 183

MEMOIRE ORIGINAL

Les trousses de d6pistage des anticorps ant i -VHC :

r6sultats comparatifs

INTS Pads.

p a r A . M . C o u r o u c b

RESUME

Les r~sultats comparatffs entre les trousses de d~pistage des anti- corps anti-VHC ont montr~ la sup~riorit~ des tests de deuxi~me g~n~ra- tion par rapport aux tests de premiere g~n~ration puisque les anticorps anti-ClO0-3 ne sont ni aussi fid~les ni aussi durables que les anticorps anti-C33-C et anti-C22-3.

La comparaison des quatre trousses de deuxi~me g~n~ration com- mercialis~es (Ortho, Abbott, Pasteur, UBLOrganon) [aite sur le panel de la SFTS et sur 109 pr~l~vements de 18 patients pr~lev~s avant, pendant et apr~s une s~roconversion VHC a montr~ une bonne concordance pour la majorit~ des ~chantillons mais des differences sur des ~chantil- lons pr~sentant un iquemen t des anticorps contre Ia prot~ine C100-3 ou contre la prot~ine C33-C. Pour les 18 patients, trois divergences ont ~t~ observ~es avec ces quatre trousses : ces trois divergences concernaient trois des six s~roconversions of~ le premier anticorps f~ appara~tre ~tait l'anti-C33-C. Dans deux cas, la s~roconversion dtait reconnue plus tardivement par la trousse Ubi-Organon qu'avec les trois autres trous- ses et dans un autre cas, il s'agissait de la trousse Pasteur qui recon- naissait p lus tard la s~roconversion.

Pour les 15 autres patients, aucune difference n ' a ~t~ observde entre les quatre trousses quant ~ la d~tection de la s~roconversion, notam- ment lorsque I'anticorps anti-C22-3 ~tait un des premiers anticorps f~ appara~tre.

Tirds fz p a r t : A.M. Courouc6, INTS, 6, rue A.-Cabanel, 75015 Paris.

184 A.M. COUROUCE

SUMMARY

Anti-HCV antibodies screening assays : comparative results.

Comparative results between anti-HCV screening tests have shown better performances with 2nd generation tests than with 1st generation assays, since anti-ClO0-3 antibodies are less reliable and less durable than anti-C33c and anti-C22-3 antibodies.

Comparison between the four 2nd generation commercialized assays (Ortho, Abbott, Pasteur, Ubi-Organon) done on the hepatitis study group panel and on 109 samples from 18 patients collected before, during and after anti-HCV seroconversion, has shown similar results for most of the samples but some discordances on samples with isolated anti-ClO0-3 or anti-C33 c antibodies.

For the 18 patients, 3 discordances were observed between the four assays. These three discordances concerned 3 of the 6 seroconversions with anti-C33-c as the first detectable antibody. In two cases, Ubi- Organon assay did not recognize the seroconversion as early as the 3 other assays ; in another case, it was the Pasteur assay which answered later than the other assays.

As for the 15 other patients, no difference was observed between the four assays, in particular when anti-C22-3 was one ,9[ the first detectable antibodies.

La pr6sentat ion de cette 6tude compara t ive a compor t6 trois part ies : une compara i son des t rousses de d6pistage Abbott et Ortho de premibre et de deuxibme g6n6rations sur 10 090 donneurs de sang, une compara i - son des quatre trousses de deuxibme g6n6ration agr66es par le LNS en 1991 (Abbott, Diagnostics Pasteur, Ortho et Ubi-Organon) d ' une par t sur le panel de la SFTS et d ' au t r e par t sur des 6chantillons de patients en phase de s6roconversion anti-VHC.

Les deux premi6res part ies de cette 6tude ont 6t6 faites en collabora- tion avec le groupe de travail ,~ H6pati tes virales ,~.

ETUDE MULTICENTRIQUE CHEZ 10 090 DONNEURS DE SANG

Les m~mes 6chantillons de 10 090 donneurs de sang collect6s et 6tudi6s par les CTS du groupe de travail ,, H6pati tes virales ,, ont pour l ' instant 6t6 test6s par quatre trousses de d6pistage des anticorps anti- VHC, Abbott et Ortho de p remiere et de deuxi~me g6n6rations. Tous l e s 6chantillons positifs reproduct ibles par au moins une des quatre trousses ont &6 rassembl6s dans deux laboratoires pou r effectuer les tests de conf i rmat ion ou de deuxi~me intention : CRTS de Nancy pour les tests Abbott (neutralisation et test compl6menta i re) et I ' INTS pour les tests Riba-1 et Riba-2 d 'Or tho-Chiron [1].

TROUSSES DE DEPISTAGE 185

Cette 6rode 6tant pr6sent6e en d6tail dans un article s6par6 [2], nous ne donnerons ici que l 'essentiel des r6sultats.

Sur ces 10 090 donneurs, les tests de deuxibme g6n6ration ont permis de d6tecter 20 ~t 27 donneurs confirm6s (c) ou ind6termin6s (I) par Riba qui n '6taient pas d6pist6s par les tests de premi6re g6n6ration.

Abbott Ortho

D6pistage Riba D6pistage Riba

C + I C + I 1 re g6n6ration 57 35 53 31 2 e g6n6ration 85 55 82 58

Star les 105 6chantillons positifs par au moins une des deux techni- ques de deuxibme g6n6ration, 62 6taient positifs simultan6ment par les deux techniques et neuf de ces 62 (14 %) 6taient n6gatifs par Riba, 23 6taient positifs settlement par le test Abbott et 21 d 'ent re eux (91%)J 6taient n6gatifs par Riba, 20 6taient positifs seulement par le test Ortho et 15 d 'ent re eux (75 %) 6taient n6gatifs par Riba.

Le tableau Ipr6sente ces r6sultats ainsi que ceux obtenus avec le test compl6mentaire ou supplemental assay (SA) d'Abbott.

I1 apparait que pour les deux tests, Riba et test compl6mentaire, les r6sultats sont tr6s similaires pour les 62 6chantiUons positifs simultan6- ment avec les deux techniques de d6pistage et pour les 20 6chantillons

Tableau I

10 090 donneurs de sang. Etude groupe h~patites virales SFTS. Tests de 2 ~ g~n~ration.

Depistage

RIBA

R6actif

Indeterm.

N6gatif

Non fait

S . A .

2 b

l b

A + O + A+ O- A - O+

62

RIBA S.A.

39 34

14 18

9 6

0 4

23

RIBA S.A.

0 1

2 17

21 4

0 1

20

RIBA S.A.

1 1

4 1

15 17

0 1

S.A. = Supplementa l assay (Abbott)

A = A b b o t t ; O = O r t h o

186 A.M. COUROUCE

positifs seulement par Ortho. Par contre, sur les 23 6chantillons positifs un iquement par Abbott, set t lement quatre sont n6gatifs pa r le test compl6menta i re (21 sont n6gatifs par Riba), ce qui mon t re que ce test n ' a p p o r t e pas une beaucoup plus grande sp6cificit6 que le test de d6pistage.

La plus grande divergence entre le test Riba et les tests de d6pistage concerne un 6chantillon class6 ,, r6actif ~ en raison d ' tme faible r6activit6 (1 croix) star les prot6ines C100-3 et C22. Cet 6chantillon dormait un rappor t de 0,9 avec Abbott et de 1,2 avec Ortho. I1 6tait n6gatif avec le test compl6menta i re Abbott. Des quatre 6chantillons ,, ind6termin6s ,, par Riba pa rmi les 20 6chantillons Ortho positif et Abbott n6gatif, deux sore positifs par le test compl6menta i re , Fun sur les prot6ines structurales seulement, l ' au t re sur les deux billes. Des deux 6chantillons ,, ind6termi- n6s ,, par Riba pa rmi les 23 6chantillons Abbott posifif et Ortho n6gatif, il s 'agi t d ' une faible r6activit6 star la prot6ine C 33-C et ces deux 6chantillons sont positifs par le test compl6menta i re .

Des 40 6chanfillons ~, r6actifs ,, par Riba, 17 donnent une r6activit6 sur les 4 prot6ines, 11 sur 3 prot6ines et 12 sur 2 prot6ines. Les 40 6chantillons reconnaissent la prot6ine C22-3, 37 (90 %) r6agissent sur la prot6ine C33-c, 31 (75 %) sur la prot6ine C100-3 et 17 (40 %) sur la prot6ine 5-1-1. Un seul de ces 40 6chantillons est n6gatif par le test compl6mentai re .

Quant aux 20 6chantillons ,~ ind6termin6s ,, pa r Riba, 4 sont n6gatifs par le test compl6mentai re . Parmi ces 20, 11 (55 %) r6agissent isol6ment sur la prot6ine C22-3, 3, 4 et 1 r6agissent respect ivement sur les prot6ines C33-C, C100-3 et 5-1-1. L ' un d ' en t re eux r6agit sur la SOD.

En conclusion, star ces 10 090 donneurs , 40 6taient r6actifs par Riba et 20 6taient ind6termin6s, soit une pr6valence de 0,60 %.

Star les 105 d6pistages positifs par au moins une technique, 99 6chantillons ont 6t6 6tudi6s par les deux tests de deuxibme intention et 73 concordances ont 6t6 observ6es (51 6chantillons positifs et 22 n6gatifs). Parmi les 26 divergences, 21 6taient dues ~t un test compl6menta i re positif et un test Riba n6gatif et 5 ~t la situation inverse dont 4 6chantiUons ~, ind6termin6s ,~. Si 1'on consid6re que le test compl6menta i re Abbott est tr6s p roche du test de d6pistage, on peut conclure que ces deux tests de d6pistage de deuxibme g6n6ration donnent des r6sultats trbs similaires.

L ' un et l 'autre , par l ' appor t des prot6ines structurales C22-3 et non structurales C33-C repr6sentent un progrbs par r appor t aux tests de premibre gbn6ration et assurent en cons6quence tree meilleure s6curit6 transfusionnelle.

P A N E L ANTI-VHC D E LA S F T S

Ce panel compos6 de 40 6chantillons a 6t6 constitu6 au CRTS de Nancy dans le laboratoire de C. Janot. Ces 6chantillons ont 6t6 s61ection- n6s avec les tests Ortho et Abbott. Ce panel est compos6 de 18 6chantil-

TROUSSES DE DEPISTAGE 187

lons ,< r6actifs ,, pa r Riba, de 11 << ind6termin6s ,,, de quatre dilutions d ' un positif et de sept n6gatifs. Parmi les 18 6chantillons confirm6s, huit r6agissent sur les quatre prot6ines, cinq sur trois et cinq sur deux prot6ines dora quatre sur les prot6ines C33-C et C22-3. Ces 18 6chanfil- lons reconnaissent la prot6ine C22-3 et sont positifs sur les deux billes du test comp16mentaire d 'Abbott .

Parmi les 11 ind6termin6s, quatre r6agissent isol6ment sur la pro- t6ine C22-3 et sont positifs avec ]es prot6ines structurales du test Abbott, un r6agit isol6ment sur ]a prot6ine C33c et est positif avec les prot6ines non structurales du test Abbott, quatre r6agissent isol6ment sur la prot6ine C100-3 et un seLL est positif avec le test Abbott (bille non structurale) et deux r6agissant s imul tan6ment sur la prot6ine C100-3 et la SOD sont n6gatifs avec le test compl6menta i re d 'Abbott .

Ce panel a 6t6 6tudi6 par plusieurs laboratoires du groupe ,, H6patites virales ,, avec diverses trousses de d6pistage. SeLLs les r6sLLtats obtenus avec ]es quatre trousses de deuxi6me g6n6ration, Abbott, Ortho, D- Pasteur [3] et Organon-Ubi [4] agr66es par le LNS seront pr6sent6s ici et sont rassemb16s dans ]es t ab l eaux H et III.

Les quatre tests fournissent un r6sLLtat positif sur les 18 6chantillons confirm6s et star les quatre 6chantillons pr6sentant une rbaction isol6e sur ]a prot6ine C22-3. Pour les sept autres 6chantillons << ind6termin6s ~,, les tests Abbott et Ortho fournissent des r6sLLtats positifs sur cinq et six 6chantillons respect ivement et les tests Pasteur et Organon ne reconnais- sent aucun de ces sept 6chantillons.

Parmi ces sept 6chantillons, deux sont des faux positifs dus ~ une r6action sur ]a SOD et cinq sont des r6actions isol6es sur la prot6ine C33c ou C100-3 dont nous ne connaissons pas au jourd 'hui ]a signification.

Les r6sLLtats de quatre dilutions (dn 1/10 au 1/500) d ' un 6chantillon sont pr6sent6s dans le tab leau I I I et exprim6s par le rappor t D.O de l '6chantillon divis6e pa r la valeur seuil.

Tableau II

Panel anti-HCV SFTS. Positi# et inddtermin~s, tests de 2 ~ g~n~ration.

Trousse

confirm6s

ind6termin6s

i c 22 e 33

41 c 100

~. " S O D "

18

11

4

1

4

2

Ortho D.Pasteur Organon UBI

18 18 18

4

1

3

2

Abbott

18

4 4

1 0

3 0

1 0

N0mbre de r6sultats positifs

188 A.M. COUROUCE

Tableau I I I

Panel anti-HCV SFTS. Dilutions d' un ~chantilIon.

Numero Dilution Ortho

40 1/10 >6.6

11 1/100 >6.6

12 1/200 4.0

6 1/500 1.6

Abbott

>4.6

2,4

1,3

0,9

D.Pasteur

8.0

4.8

2.6

1.3

Organon UBI

6.2

1.1

0.7

0.4

R6sultats exprim6s par le rapport D.O. 6chantillon / valeur seuil

Les tests Ortho et D-Pasteur donnent un r6sultat positif sur |es quatre dilutions, le test Abbott est douteux sur la dilution la plus 61ev6e et le test Organon ne reconnak que les denx premi6res dilutions.

Ces r6sultats obtenus sur un seul 6chantiUon ne permettent pas de conclure sur la sensibilit6 respective de ces quatre tests. Cependant, la dilution du 1/500 donnait un signal sur la C22-3 par Riba et 6tait positive (rapport 1,24) sur les prot6ines structurales du test compl6mentaire d'Abbott.

Les sept 6chantillons n6gatifs donnent un r6sultat n6gatif avec les quatre trousses.

En conclusion, pour les 36 6chantillons non dilu6s de ce panel, les r6sultats sont concordants avec les quatre trousses pour 30 6chantillons et discordants pour six.

Pour deux de ces six (r6action positive sur la SOD) les r6sultats n6gatifs obtenns par D-Pasteur qui n'utilise pas la SOD pour la fusion des prot6ines et par Organon qui utilise des peptides correspondent aux r6sultats attendus. Quant aux quatre autres, de nouvelles 6tudes avec des tests utilisant des prot6ines diff6rentes sont n6cessaires pour conclure.

SEROCONVERSIONS ANTI.VHC

Cent neuf pr616vements de 18 patients, collect6s avant, pendant et aprbs une s6roconversion anti-VHC ont 6t6 6tudi6s avec les quatre trousses de d6pistage de deuxibme g6n6ration cit6es dans le chapitre pr6c6dent ainsi qu'avec les trousses Abbott et Ortho de premiere g6n6ra- tion.

I1 s'agissait de 13 patients h6modialys6s et de cinq patients transfus6s pour chirurgie ou maladies h6matologiques. La date de la transfusion

TROUSSES DE DEPISTAGE 189

contaminante a 6t6 authentifi6e par une enqu6te chez les donneurs, chez cinq patients dont deux h6modialys6s e t a 6t6 suppos6e 6tre la date de l 'op6rat ion pour les deux patients chirurgicaux restants.

Ces patients ont 6t6 class6s en trois cat6gories suivant que l 'ant icorps anti-C22-3 e t / o u l 'ant icorps anti-C33c 6tait le p remier anticorps ~ appa- raitre au m o m e n t de la s6roconversion. Pour six patients off le p remier pr61~vement positif r6agissait ~ la fois sur les prot6ines C22-3 et C33-c et pour les six autres off l ' ant icorps anti-C22-3 apparaissait avant l 'ant icorps anti-C33c, aucune diff6rence entre les quatre trousses de d6pistage n ' a 6t6 observ6e. Un exemple est donn6 darts le tableau IV.

Tableau IV

MAU... H~modialys~. Anti.HCV.

Date A L T

20.10.87

30.11.87

04.05.88

08.03.89

ELISA

2 6me g6n6ration

Ortho Abb Past Org

92 0.28 0.41 0.15 0.17

400 6.30 3.67 2.29 10.40

89 6.30 4.24 5.77 13.60

32 6.30 4.24 5.78 13,60

RIBA

C5-1-1 C100-3 C-33 C22-3

0 0 0 0

0 0 0 3

0 0 3 4

0 0 4 4

Pour six autres patients off l 'ant icorps anti-C33c 6tait d6tect6 avant l 'ant icorps anti-C22-3, trois concordances et trois divergences entre les quatre trousses ont 6t6 not6es. Pour les trois cas off une divergence a 6t6 observ6e, la t rousse de D-Pasteur dans un cas (Tabl. V) et la t rousse d 'Organon-Ubi darts deux cas (un exemple dans le tableau V1) reconnais- saient plus ta rd ivement la s6roconversion VHC que les trois autres trousses.

Des prot6ines cod6es pa r la r6gion NS3 sont cependant pr6sentes dans ces quatre t rousses : C33c pour Ortho et Abbott, 4091-1 pour D-Pasteur et un peptide pou r Organon.

Ces divergences mon t ren t que les sgquences choisies pour la pr6pa- rat ion de ces prot6ines ne sont pas identiques et que si ces s6quences se recouvrent par t ie l lement - ce que nous savons pour C33c et 409 1-1 - elles ne pe rmet ten t pas de dgtecter de la m&me mani6re une r6ponse i m m u n e / t une infection pa r le VHC.

Chez ces 18 patients, les tests Abbott et Ortho ont donn6 des r6sultats identiques et n ' on t jamais 6t6 pris en dgfaut par les deux autres tests.

190 A . M . C O U R O U C E

Tableau V DEC... H~modialys~. Anti-HCV.

Date

27.08.80

27.10.80

05.12.80

17.12.80

27.05.81

25.12.81

ELISA 2 6me ~16n6ration

Ortlto Abb Past Org

0.62 0.57 0.32 0.07

6.30 1.09 ~ D . 2 7 2.34

6.30 6.23

6.30 2.30 0 , 2 5 6.00

2.16

6.30 4.24 5.81 10.90

C5-1-1

RIBA

C100-3 C-33 C22-3

0 0 0 0

1 0 3 O

1 0 3 0

1 0 3 0

1 2 3 0

2 2 4 4

Tableau VI Receveur d'une unitd anti-HCV positive Ie 20 f~vrier 1989.

Date Jours 1 g6n. Ortho.

12.01.89 -39 0.09

12.05.89 + 81 0.26

06.06.89! +106 0.27

17.01.90 i +330 6.45

20,03,90 +390 2.19

122.01.91 + 700 2.45

ELISA 2 6me g6n6ration

Ortho Abb Past Org

0.69 0.44 0.12 0.09

6.65 4.24 5.98 6.14

6.65 5.70 6.38

6.65 5.97 13.6

RIBA

C5-1-1 C100-3 C-33 C22-3

0 0 0 0

0 0 2 0

0 0 2 0

2 0 4 0

1 0 2 4

1 0 2 4

I1 est cependant possible que les tests de D-Pasteur e t / o u d 'Organon soient les premiers ~ d6tecter certaines autres s6roconversions.

Plusieurs pr61bvements de trois autres patients avec une 616vation des transaminases de faible ampleur et de courte dur6e, qui pourrai t 6tre attribu6e par certaines 6quipes/~ une h6pafite non-A non-B, sont rest6s n6gatifs avec ces quatre tests de d6pistage. I1 doit tr~s vraisemblablement s'agir d ' un d6sordre biologique sans rapport avec une infection virale.

TROUSSES DE DEPISTAGE 191

C O N C L U S I O N

Les moyens de d6pistage des porteurs d 'ant icorps dirig6s contre le virus de l 'h6patite C se diversifient. I1 existe beaucoup d 'antres tests qui n 'ont pu 6tre pr6sent6s ici, qui pourraient r6soudre les cas litigieux que nous ne savons pas classer dans les vrais ou les faux positifs comme les r6acfivit6s isol6es sur la C33c ou sur la C100-3.

Cependant, comme nous ne connaissons pas les s6quences exactes des diff6rentes prot6ines pr6sentes dans tontes ces trousses, il est aujour- d 'hui extr6mement difficile de faire des comparaisons rationnelles et d '6mettre des hypotheses quant aux 6pitopes n6cessaires ~t un d6pistage fiable.

Les enseignements principaux des trois 6tudes pr6sent6es ici sont la grande sup6riorit6 des tests de deuxibme g6n6ration par rapport aux tests ne compor tan t que la prot6ine C100-3, la similitude des tests Abbott et Ortho, l'int6r6t de la prot6ine de s t ruc tu re qui permet un diagnostic pr6coce et durable, la r6ponse : ~ a n i m e de touttes les trousses de d6pistage lorsque ces anticorps dirig6s contre la prot6ine du core du virus sont pr6sents, les divergences entre les trousses en cas de r6acfivit6 isol6e sur la prot6ine C100-3 ainsi que sur la prot6ine C33c, le retard de certaines trousses dans la reconnaissance d 'une s6roconversion ne d6butant pas par une r6activit6 sur les prot6ines du core.

R E M E R C I E M E N T S . -- Nous tenons h remercier N. LE MARREC et A. GIRAULT pour leur assistance technique et logistique et bien entendu, le groupe de travail ,, H6patites virales ,, sans lequel les deux premi6res parties de cette 6tude n'auralent pu 6tre r6alis6es.

REFERENCES

[1] COUROUCI~ A.M., JANOT C. and the Hepatitis Study Group of the French Society of Blood Transfusion. - Recombinant Immunoblot Assay First and Second Generations on 732 Blood Donors Reactive for Antibodies to Hepati- tis C Virus by ELISA. Vox Sang, 1991, 61, 177-180.

[2] JANOT C., COUROUCE A.M. et le Groupe de Travail ~< H6patites Virales ~,. - Etude analytique des trousses de d6pistage et de confirmation des anticorps anti-HVC Abbott et Ortho. Rev. Fr. Transfus. H~mobiol., 1992, 35, 171-182.

[3] PAYNE J., AUBRIT F., SANJUAN A. et al. The Detection of Anti HCV Antibodies with the New Monolisa Anti HCV Test, Sanofi-Diagnostics Pasteur. Third International Symposium on HCV, Strasbourg 16-17 Sept. 1991, Abstract B67.

[4] VAN DER VEN E.T., SCHNEEBERGER P.M., VAN HATTUM J., VAN DIJK W.C. - Comparison of Assays using Synthetic or Recombinant Hepatitis C Virus (HCV) Epitopes. Third International Symposium on HCV, Strasbourg 16-17 Sept. 1991, Abstract B68.