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Les réponses macro et micro-circulatoires et la production de NO
hépatique induits par le choc septique chez la souris.
Edouard LEROY L3 (S6) Licence Sciences et Technologies
mention Biologie, parcours PhysiologieUE « conduite de projet »
Maître de stage : Jeanne-Marie Bonnet-Garin1
Tuteur universitaire : Robert Bonvallet2
2UCBLBatiment Raphael Dubois 43 Boulevard du 11 NOVEMBRE 1918 69622 VILLEURBANNE CEDEX
1ENVLlaboratoire de Physiologie,INSERM ERI 22 : Agressions vasculaires et réponses tissulaires.1,avenue Bourgelat69280 Marcy l'Etoile
• Sepsis = réponse systémique à une infection bactérienne, endotoxique ou fongique
• Choc septique = défaillance circulatoire aiguë• Pronostic vital = sombre : hypotension général et baisse de la
perfusion des organes résistantes aux solutés de remplissage et aux dérivés adrénergiques
• Monoxyde d’azote (NO) impliqué :– 3 NO synthases dont 1 inductible. La NOS inductible s’active lors
du sepsis– Perrella et al. : TGF-β permettrait de diminuer les effets délétère
du NO• Etude sur les effets du TGF-β (thèse en cours de rédaction)
– Première partie : réponses marcro et micro-circulatoires et la production de NO hépatique induites par le choc septique chez la souris, provoqué par une administration de LPS
Problématique - contexte théorique :
Hypothèses :• L’administration de lipopolysaccharides (LPS), endotoxines de
bactéries à Gram négatif, provoque un sepsis puis un choc septique.
• Le sepsis puis le choc septique provoque une diminution du débit.
• La cinétique de la chute de débit n’est pas la même au niveau de la circulation générale et de la perfusion tissulaire.
• La production de NO hépatique augmente après l’administration de LPS.
Méthodes
Procédure chirurgicale
– Induction : richesse du mélange à 2%– Entretien : richesse du mélange à 0,6%
Anesthésie : Isoflurane/O2
Installation
Préparation chirurgicale :
Laparotomie
– Dilacérer le péritoine – Installer la sonde débitmétrique
Appareillage de l’animal :
Induction du choc septique
• Administration de LPS (QSP 0,1 mL) : – G1 (n=3) : 60 mg/kg– G2 (n=2) : 80 mg/kg– G3 (n=3) : 100 mg/kg
• Administration de sérum physiologique (NaCl 9‰) :– G0 (n=4) : 0,1 mL
Paramètre enregistré :
Le débit aortique
Tests statistiques :
• Kruskal-Wallis : test d’identité non paramétrique (pour plus de 2 échantillons)
• Mann-Whitney : test d’identité non paramétrique (pour 2 échantillons)
Résultats :
•Durée de la survie des animaux•Évolution du débit aortique en fonction du
temps après administration du produit (sérum physiologique ou LPS)
Durée de la survie des animaux après administration de LPS
Temps (min) Grpe (dose reçue)
42 G1 (60 mg/kg) 72 G1 (60 mg/kg) 107 G1 (60 mg/kg) 74 G2 (80 mg/kg) 61 G2 (80 mg/kg) 41 G3 (100 mg/kg) 54 G3 (100 mg/kg) 97 G3 (100 mg/kg)
Figure 1. Tableau présentant les durées de survie des animaux après l’administrationde LPS et en fonction de la dose de reçue.
G1 : 74 min ± 9G2 : 68 min ± 7G3 : 64 min ± 17
Résultats présentés : moyennes ± SEM (Standard Error of the Mean = écart type ÷ racine carré de l’effectif)
Réponse macro-circulatoire à l’administration de LPS
**
*
Discussion
• Modèle animale :– L’anesthésie :
• est induite rapidement• provoque un faible biais (12 % ± 7 de diminution
observée dans le groupe témoin)– Les effets du LPS sont observés rapidement– Le coût initial et d’entretien est faible– Il est possible d’obtenir des animaux
transgéniques pour effectuer des investigations plus poussées sur la voie du TGF-β
• Intérêt des lipopolysaccharides :– Effets systémiques rapides– Effets durables entrainant la mort de l’animal
•Choix anesthésique :–Induction avec une richesse du mélange
Isoflurane/02 à 2 %–Entretien avec une richesse du mélange
Isoflurane/02 à 0,6 %
=> Richesse plus faible que dans la littérature (sans diminuer le confort de l’animal) permet de diminuer le biais dû aux effets de l’Isoflurane
Avancées et perspectives• Avancées :–Intérêt du modèle murin confirmé–Intérêt du LPS confirmé–Protocole anesthésique affiné• Perspectives :
– Résultats, en parallèle, de la perfusion hépatique– Résultats de la production de NO hépatique–Utilisation de souris KO pour le TGF-β dans certains
tissus– Test d’un médicament (Tamoxifène®) activateur de la
voie du TGF-β
Amélioration du pronostic vital des patients en état de choc septique
MERCI DE VOTRE ATTENTION