GROUPE III Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe...
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GROUPE III
Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe Le Gros, Laurent
Esnault, Boris Guédel, Ciprian Davidescu.
I. Transformation
Objectifs : ajout du plasmide contenant le gène GFP à une bactérie.
bactérie
Gène codant pour la GFP
ADN plasmidiqueGène de résistance à la Kanamycine
II. Ensemencement
Objectifs : culture de bactéries transformées et non transformées.
L'échantillon T absence de colonies sur milieu avec Kana.
Ne correspond pas au témoin.
Conclusion : problème au niveau de la transformation.
Transformation des bactéries à refaire.
Témoins Échantillons
T+K+ IPTG
T
NT+K
NT
Deuxième culture bactérienne
NT+K
Témoins Echantillons
NT
T+IPTG
T+IPTG+K T+IPTG
T+K
Conclusion : expérience réussie.
Les bactéries que nous souhaitions transformer se sont développées dans un milieu avec kanamycine, elles ont incorporé le plasmide : transformation réussie.
Objectifs : récupération du plasmide présent dans les bactéries transformées.
III. Isolation et purification du plasmide
IV. Double digestion
Objectifs : séparation du gène GFP de l’ADN plasmidique.
On effectue cette séparation grâce aux enzymes Hind III
et Bam H1.
gène de résistance à la Kanamycine
V. Électrophorèse
Objectifs : vérification de la présence du gène de la GFP dans le plasmide et du fonctionnement des enzymes.
Principes: Le gel d’agarose permet de différencier les fragments d’ADN selon leur taille.
Résultats de la première l’électrophorèse
Marqueur de poids moléculaire
Plasmide digéré Plasmide non digéré Bactéries non transformées
Résultats de la seconde électrophorèse
Marqueur de poids moléculaire
Simple digestion avec Hind III
Simple digestion avec Bam H1
Double digestion
H H HB B B B
HB HBHBHB
Gène GFP