エクソソーム2019 - Microsoft...ExoQuick-LP 11...

フナコシニュースフナフナコシニュコシニュコシースース

p.6 回収・精製

p.17 検出・確認

p.21 機能解析

p.35 受託サービス

Exosome

2019No.6847/15

2019エクソソーム

●慶應義塾大学森本先生 p.7

●九州大学大学院上原先生 p.9

ExoQuickシリーズ製品レビュー

エクソソーム研究　mini まとめ

＊文献によってサイズは諸説あり

テトラスパニンインテグリン接着分子

MHCⅠ，MHCⅡ免疫関連分子

タンパク質膜輸送

核酸

酵素 GAPDH，PK，ATPase，PGK，Enolase

細胞骨格タンパク質

Actin，Tubulin，Cofilin， Profilin，Myosin，Vimentin，Fibronectin，Moesin

シグナル分子 EGFR，HIF-1α，CDC42，PI3K，ARF1

MVB構成分子 Alix，Tsg101，Clathrin，Ubiquitin

シャペロン HSP70，HSP90，HSP60，HSC70

DNA

miRNA mRNA

脂質ラフト

CD9，CD63，CD81

エクソソームとはエンドソーム由来の細胞外小胞（EV）エクソソームには様々な分子が含まれている微小小胞体

Microvesicles● サイズ：100～1,000 nm＊

● 由来：細胞膜● マーカー：インテグリンなど

＊

細胞膜

初期エンドソーム

リソソームゴルジ体

多胞性エンドソーム

エクソソーム（エキソソーム）Exosomes

● サイズ：30～150 nm＊

● 由来：細胞内の多胞体● マーカー：CD9, CD63, CD81 など

拡大図

［参考文献：PMID 25288114］


エクソソームは細胞間の情報伝達を行っているエクソソームが関わる生理機能・イベント

● 細胞の代謝・シグナル伝達● 細胞の発生・再生● 細胞接着● がん進行・がん転移

など

エクソソームは疾患と関連する

エクソソームはリキッドバイオプシーのマーカーとして期待されている

例 1 　ニューロンから分泌されたエクソソームは，スフィンゴ糖脂質を介してアミロイド β（Aβ）を捕捉し，これをミクログリアに運んで分解に導く。このAβ 除去の促進によるアルツハイマー病治療への応用が期待されている。


例 1 　腎細胞がんのスニチニブ耐性を促進するlncRNA の一種である lncARSR は，エクソソームに取り込まれ，他の細胞へスニチニブ耐性を伝播する。そのため，lncARSR は診断および治療法選択のためのマーカーとして期待されている。


例 2 　前立腺がんの細胞内およびエクソソームに含まれる miRNA のレベルは，がん細胞がドセタキセル耐性であるかを判断するためのバイオマーカーとして期待されている。


例 2 　乳がん細胞が分泌するエクソソームには，miR-181c が含まれている。この miRNA が血液脳関門の破壊を引き起こし，乳がんの脳転移を促進する。


Aβ

スフィンゴ糖脂質

エクソソーム

疾病の診断試料の回収解析

涙

尿，精液

血清，血漿

唾液

脳脊髄液

細胞外スペース（血液，脳脊髄液など）

エクソソーム産生細胞エクソソーム受容細胞

1. 膜融合2. エンドサイトーシス3. レセプターを介した結合

1

2

3


miR-181c

エクソソーム

RNA など

エクソソーム

フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news試薬 TEL 03- 5684-1620 FAX 03-5684- 1775

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掲載品はすべて研究用です

2

エクソソーム研究　mini まとめ

エクソソームは治療薬としても期待されている

エクソソーム

Autologous exosomes

Delivery

Exogenous exosomes

siRNA やタンパク質などを導入してエクソソームを改変

エクソソーム関連文献は急速に増えているのね！

エクソソーム研究における実験の流れ

血清，血漿，細胞培養上清，尿，精液，脳脊髄液，唾液，涙，腹水

一般的に広く用いられている方法。多量の試料を処理できる。

短時間で簡便にエクソソームを単離できる。特別な装置は不要。

タンパク質の混入が少なく構造的なダメージが少ない。

エクソソームマーカーに対する抗体を使用し，高純度なエクソソームを単離できる。

電子顕微鏡，NanoSight など

ウェスタンブロット，ELISA

次世代シークエンス解析，質量分析，メタボローム解析

エクソソームの動態イメージング，細胞への添加実験など

網羅的に細胞外小胞を回収

エクソソームマーカー特異的に回収

エクソソームの生理機能・作用機序の解析 p.25～26，34

バイオマーカーの探索・解析 p.21～24，35～36

小胞のエクソソームマーカーを確認 p.17～20

小胞のサイズ・形状などを確認 p.27，37

フローサイトメトリー免疫沈降法 p.15

クロマトグラフィー法 p.12，14，16

ポリマー沈殿法 p.6～11

超遠心法 p.13

改変したエクソソームを細胞に導入する p.28，30～33

試料の回収

エクソソームの回収・精製

エクソソームの検出・確認

エクソソームの機能解析

〈PubMed 調べ〉

1970

2500

2000

1500

1000

500

01980 1990 2000 2010 2020

エクソソームに関する

文献数

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3

目次

組織・細胞培養液／尿／髄液用ExoQuick-TC 8

血清・腹水用ExoQuick 10

血漿用［フィブリン低減可能］ExoQuick Plasma Prep 11

組織・細胞培養液／尿／髄液用［GMP グレード］ExoQuick-CG 11

血清・血漿用［リポタンパク質低減可能］ExoQuick-LP 11

尿試料用エクソソーム回収・調製キットExo-Urine EV Isolation Kit 12

密度勾配遠心法によるエクソソーム単離を効率化する試薬ExoMAX Opti Enhancer 13

エクソソームを自然落下により精製するカラムEVSecond 14

エクソソームをビーズで捕捉し，フローサイトメーターにより精製するキットExo-Flow Capture Kit 15

エクソソームをビーズで捕捉し，免疫沈降により精製するキットExo-Flow Exosome IP Kit 15

グラム陰性菌の外膜小胞を単離するキットExoBacteria OMV Isolation Kit 16

細胞培養液からのエクソソーム回収に最適なエクソソーム除去済み FBSExo-FBS Exosome-Depleted FBS 17

サイズ排除クロマトグラフィー法

超遠心法


フローサイトメトリー

免疫沈降法

イオン交換クロマトグラフィー法

エクソソームの検出・確認ウェスタンブロットに使用できるエクソソームマーカー抗体Exosome Antibody 17

エクソソーム量を推定するキット 18

エクソソーム表面の CD9/CD63/CD81 を検出し，エクソソーム量を推定する ELISA キットExoELISA 18

エクソソーム表面の CD63/CD81 を検出し，エクソソーム量を短時間で推定する ELISA キットExoELISA-ULTRA 19

エクソソームに含まれる AChE の活性を測定し，エクソソーム量を推定するキット［比色法］EXOCET Exosome Quantitation Kit 19

エクソソームに含まれる AChE の活性を測定し，エクソソーム量を推定するキット［蛍光法］FluoroCet Exosome Quantitation Kit 19

エクソソームを検出する抗体アレイExo-Check 20

ニューロン由来エクソソームを検出する抗体アレイExo-Check Neuro 20

オススメ

オススメ

エクソソームの回収・精製エクソソーム回収試薬 ExoQuick シリーズ 6

血清・血漿用［アルブミン，Ig 低減可能］ExoQuick ULTRA 6

組織・細胞培養液用［アルブミン，Ig 低減可能］ExoQuick-TC ULTRA 8

ポリマー法

オススメ

オススメ

慶應義塾大学医学部生理学教室

森本悟特任助教

九州大学大学院歯学研究院分子口腔解剖学分野

上原範久助教

ユーザーレビューユーザーレビュー

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エクソソームの機能解析実験エクソソーム DNA を精製するキットXCF Exosome DNA Isolation Kit 21

エクソソーム RNA の精製から，cDNA 合成までを行えるキットSeraMir Exosome RNA Amplification Kit 22

RNA-Seq 用 miRNA ライブラリー作製用キットTailorMix miRNA Sample Preparation Kit 23

増幅産物にバイアスがかかりにくい RNA ライブラリー作製用逆転写酵素TGIRT-Ⅲ 24

エクソソーム膜表面タンパク質を，磁気ビーズにより単離するキットExoMS Surface Protein Capture Kit 24

エクソソーム膜表面タンパク質と蛍光分子の融合タンパク質を発現させる試薬Exosome Cyto-Tracer 25

エクソソーム内 mRNA／エクソソーム内タンパク質／エクソソーム膜を蛍光標識するキットExoGlow EV Labeling Kit 26

エクソソームを蛍光標識し，蛍光 NTA で粒子径などを測定するキットExoGlow-NTA Fluorescent Labeling Kit 27

エクソソームの膜内コンポーネントを蛍光標識し，フローサイトメーターにより解析するキットExoFlow-ONE EV Labeling Kit 27

目的タンパク質を内包したエクソソームを産生するシステムXPack Protein Packaging System 28

エクソソームに miRNA を導入するシステムXMIR Exosome miRNA Packaging System 30

細胞へのエクソソーム導入効率を向上させる試薬EV-Entry System for Exosome Delivery 32

目的タンパク質をエクソソーム表面に提示させるシステムXStamp Exosome Targeting System 33

in vivo でエクソソームを蛍光標識するキットExoGlow-Vivo EV Labeling Kit（Near IR） 34

細胞株／生体試料由来のエクソソーム精製エクソソーム 35

エクソソームDNAの解析

エクソソームRNAの解析

エクソソームRNAの次世代シークエンス

エクソソームRNAの次世代シークエンス

エクソソーム膜タンパク質の質量分析

エクソソームのモニタリング

エクソソームのモニタリング

粒子径・粒度分布の測定

粒子径の測定

エクソソームタンパク質の機能解析

エクソソームRNAの機能解析

エクソソームを核酸・タンパク質導入ツールとして利用

指向性を持たせたDDSツールとして利用

NEW エクソソームのモニタリング

アッセイのスタンダード用／機能解析／マーカー探索

受託サービスエクソソームの膜タンパク質・総タンパク質の質量分析サービスExosome Proteomics Service 35

エクソソーム RNA の次世代シークエンス解析サービスExo-NGS〈Exosomal RNA Sequencing Service〉 36

エクソソームの粒子径・粒度分布を分析するサービスNanoSight エクソソーム分析受託サービス 37

エクソソーム糖鎖解析受託サービス 37

免疫染色実験ガイド 2019-2020　発刊のお知らせ 38

ATCC® 製品のエクソソーム研究における使用例 39

ATCC® 製品取り扱い案内 40

ATCC® 製品ご依頼方法 40

研究室のフナコさん 25

NEW

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi news試薬 TEL 03 -5684 -1620

reagent@funako

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受託 TEL 03-5684-1645

jutaku@funako

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5

NOTE※本紙に記載されている価格は，2019 年 7 月 15 日現在です。表示価格に，消費税等は含まれていま

せん。一部価格が予告なく変更される場合がありますので，あらかじめご了承下さい。※本紙に掲載されている製品は研究用です。医薬品，診断用医薬品，食品，食品検査等の用途には使

用できません。※ 印の製品は，「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律

（通称：カルタヘナ法）」使用規制対象となりますので，ご使用に際しては規制に則し，適切にお取り扱い下さい。

※ 印の製品は，取り扱いに厳重な注意を要する製品であり，ご購入時に「使用目的確約書」が必要になります。ご注文の際は，「使用目的確約書」に直筆でご記入の上，販売店経由で当社までお送り下さい。確約書受領後に製品を発送させていただきます。また，これらの製品をご購入後は，鍵の掛かる場所での保管をお願いいたします。

※ 印の製品は,「毒物及び劇物取締法」に基づく医薬用外毒劇物です。法規制に従って，保管，廃棄等して下さい。

※ 印の製品は，毒性があるため，取り扱いに注意または厳重な注意が必要です。製品は，鍵の掛かる場所に保管して下さい。添付されているデータシートや商品ラベルをよくお読み下さい。

※ 印の製品には安全にご利用いただくための警告ラベルが貼られています。表示に従って安全対策を実施して下さい。

※ 印は，液体窒素中での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到着後，直ちに液体窒素中で保存して下さい。

※ 印は，－80℃ での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到着後，直ちに－80℃ のフリーザー等に保存して下さい。

※#以下の英数字は，商品コードを示します。※外観・仕様は改善のため，予告なく変更することがあります。※R&D Systems はテクネコーポレイションの登録商標です。

使用に当たっては同社の許可が必要な場合があります。※記載されている会社および商品名は，各社の商標または登録商標です。※本紙には各メーカーから提供された画像・図表が掲載されています。なお，画像・図表の著作権は

各メーカーが保有しています。※ご注文の際は，［品名，メーカー，商品コード，包装，数量］をお知らせ下さい。

ポリマー法

使用文献多数！エクソソームを簡単に回収できるポリマー試薬

ExoQuick シリーズ

Webページ番号検索4337

エクソソームを沈殿させる試薬 ExoQuickには，血清・腹水用の ExoQuick

（p.10）と，それ以外の生体液用のExoQuick-TC（p.8）があります。この 2 つの試薬を基本とし，「夾雑物を低減させるための試薬・カラム」も含んだ様々なキットを取り揃えています。

米国特許取得：US9, 005, 888 B2

810 以上

使

用文献多数！

3 p.8組織・細胞培養液／尿／髄液用ExoQuick-TC

6 p.11組織・細胞培養液／尿／髄液用ExoQuick-CG GMP グレード

2 p.8組織・細胞培養液用アルブミン，Ig 低減可能

ExoQuick-TC ULTRA

4 p.10血清・腹水用ExoQuick

5 p.11血漿用フィブリン低減可能

ExoQuick Plasma Prep

7 p.11血清・血漿用リポタンパク質低減可能

ExoQuick-LP

1 p.6血清・血漿用アルブミン，Ig 低減可能

ExoQuick ULTRA

製品ラインナップ（各製品の詳細はp.6～p.11 をご覧下さい）

血清からの回収

A社製品 ExoQuick

A 社製品 ExoQuick-TC

A 社製品

エクソソーム数

4.5×108

4.0×108

3.5×108

3.0×108

2.5×108

2.0×108

エクソソーム数

7.0×108

6.6×1086.8×108

6.2×1086.4×108

6.0×108

5.8×108

5.6×108

ExoQuick

A 社製品 ExoQuick-TC

細胞培養液からの回収

ExoQuick / ExoQuick-TC と A 社製品を用いて，ヒト血清または細胞培養液からエクソソームを回収し，CD63 ELISA Kit（p.18 参照）を用いてエクソソーム数を測定した。ExoQuick / ExoQuick-TC の方が，エクソソームの収量が多いことがわかる。上図試料：ヒト血清（500 μl）下図試料： PC-3 前立腺がん細胞を 7 日間培養した細胞培養液

（エクソソーム除去 FBS（Exo-FBS，p.17 参照）を含む DMEM 培地を使用）

血清・血漿用エクソソーム回収試薬ExoQuick ULTRA1

Webページ番号検索67903アルブミン，Ig 低減可能

オススメ

血清・血漿から純度の高いエクソソームを回収できます。回収したエクソソームは NGS，MS 解析に使用できます。

キット内容

● ExoQuick exosome precipitation solution（2 ml）● Purification column（20 columns）● Collection tube（20 tubes）● 2 ml Eppendorf tube（20 tubes）● Buffer A / B（5 ml / 30ml）

製品の添加量

試　料試料の量 ExoQuick の量

血清・血漿 250 μl 67 μl

［メーカー：SBI］

品　名商品コード包　装価格（￥）

ExoQuick ULTRA EQULTRA-20A-1 1 kit 90,000 SBI460190

操作方法概略

3,000×g，15分間

細胞，デブリなど上清

上清ペレット

上清を新しいチューブに移す

Buffer B

Buffer A

Buffer B

転倒混和

タンパク質の濃度を測定洗浄済みのカラム

カラムに試料を添加

転倒混和，室温，5分間

インキュベート，4℃，30分間

1,000×g，30秒間

3,000×g，室温または 4℃，10分間

上清をピペットで吸引除去

試料

ExoQuick添加

エクソソーム

※詳細は製品データシートよりご確認下さい。

フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news試薬　　TEL 03- 5684-1620　FAX 03-5684- 1775　

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6

回

収・精

製

慶應義塾大学医学部生理学教室

森本悟特任助教

岡野栄之教授（左），森本悟特任助教（右）

1. 背景当研究室（岡野栄之教授）では，疾患特異的 iPS 細胞技術を用いて，様々な神経変性疾患や精神疾患の病態解明ならびに創薬研究を精力的に行っている。特に，私たちのグループでは，根治療法の存在しない神経難病である筋萎縮性側索硬化症（ALS）を主たるテーマとし，病態に関わる新たなバイオマーカーを見つけるべく体液中エクソソーム（マイクロパーティクル）に着目した。体液中には脳や脊髄から放出されるエクソソームも含まれており，この小さな粒子から病気のサインや状態を知ることができるのではないかと期待している。

2. 使用結果エクソソームの分離精製には，これまで超遠心法（分画超遠心分離法）がスタンダードな方法として用いられてきた。しかしながら，①プロセスに時間がかかる，②大量のサンプルを同時に処理することが難しい，③超遠心機が必要，といった問題点があった。私たちは，疾患研究のために多くのサンプルから効率よく迅速にエクソソームを抽出したいと考え，ExoQuick ULTRA を使い始めた。本キットは，サンプルと試薬を混合することでエクソソームを沈殿させ，更にカラム精製を組み合わせることで，体液中の余分なタンパク質の混入を低減しつつ，通常の遠心機のみで簡便かつ比較的短時間にエクソソームを得ることができる利点がある。実際に，ヒトの血液から脳や脊髄由来の臓器特異的エクソソームを抽出し，ナノ粒子解析システムで計測した結果を示す（図 1 ）。比較的均質なマイクロパーティクルを濃縮できたことが確認でき，さらに血液以外の試料についても同様に信頼性のある濃縮結果を得られている。

以上から，エクソソームを分離精製する際に，従来からの超遠心法は使用実績の高い優れた方法ではあるが，多くの試料を扱う場合や，簡便に夾雑物の少ない高純度なエクソソームを得たい場合に，本キットの使用をお勧めしたい。

122

448592615

Size（nm）

2.0

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

1.5

1.0

0.5

0

Concentration（particles/ml）

図 1. ExoQuick ULTRA による血液由来エクソソーム純化後の，ナノ粒子解析システムを用いた測定結果を示す。比較的均質なマイクロパーティクルのピークを認める。

ユーザーレビュー使用例

各エクソソーム回収法による精製度の違いA：各方法でエクソソームを回収し，CBB 染色によりタンパク質量を確認した。B：各方法でエクソソームを回収し，ウェスタンブロットによりエクソソーム

マーカーや夾雑タンパク質を半定量した。本製品で回収したエクソソームには夾雑タンパク質が少ないことがわかる。

各エクソソーム回収法による収量の違い各方法で血清から EV を回収し，蛍光 NTA（蛍光ナノ粒子トラッキング解析法）により EV 粒子数を測定した。

使用した血清または血清タンパク質の量当たりの粒子数をグラフ化した。

透過電子顕微鏡（TEM）像ExoQuick ULTRA を用いて，ヒト血清から調製したエクソソームを，透過電子顕微鏡

（TEM）により観察した。典型的な EV の形態を有する複数の粒子が観察できる。

250 kDa

15 kDa

25 kDa

50 kDa

100 kDa

SBI 社従来品

ExoQuick ULTRA

他社製品

超遠心法

CD9

CD81

SBI 社従来品

ExoQuick ULTRA

他社製品

超遠心法

Hsp70

Albumin

IgGH

A． B．

血清

血清タンパク質

超遠心法

他社製品

ExoQuick ULTRA

0 800600400200

720.0

1.7

113.8

Particles / ml serum （×1011）

超遠心法

他社製品

ExoQuick ULTRA

0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0

10.0

3.8

3.5

Particles / mg protein （×1010）


FAX 03 -5684 -1775

reagent@funako

shi.co.jp


7

回

収・精

製

組織・細胞培養液用エクソソーム回収試薬ExoQuick-TC ULTRA2

Webページ番号検索67903アルブミン，Ig 低減可能

オススメ

ExoQuick-TC（右記）と夾雑物除去用カラムなどがセットになった，エクソソーム回収用キットです。純度の高いエクソソームを簡便かつ高収率で回収できます。回収したエクソソームは NGS，MS 解析に使用できます。

組織・細胞培養液／尿／髄液用エクソソーム回収試薬ExoQuick-TC3


● �ExoQuick-TC exosome precipitation solution（10 ml または 50 ml）

製品の添加量

試　料試料の量 ExoQuick-TC の量

組織・細胞培養液

5�ml�/�10�ml 1�ml�/�2�ml尿

髄　液



ExoQuick-TC サンプルEXOTC10A-1 10�ml 59,000 SBI999182

EXOTC50A-1 50�ml 198,000 SBI045010


3,000×g，15分間


上清ペレット

ペレット


転倒混和

インキュベート，4℃，12時間以上

残存溶液

1,500×g，室温または 4℃，5分間

ペレット以外の残存する溶液をピペットで吸引除去

任意のバッファー　100～500μl

1,500×g，室温または 4℃，30分間


ExoQuick-TC添加

エクソソーム


サンプル �マークの製品は小包装の無料サンプル品をご用意しています。ご希望の方は当社テクニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。

サンプルあり

● ExoQuick-TC exosome precipitation solution（20 ml）● Purification�column（20�columns）● Collection�tube（20�tubes）● 2�ml�Eppendorf�tube（20�tubes）● Buffer�A�/�B（5�ml�/�30ml）

製品の添加量

試　料試料の量 ExoQuick-TC の量

組織・細胞培養液 5�ml 1�ml



SBI460191 ExoQuick-TC ULTRA EQULTRA-20TC-1 1�kit 90,000

使用例�

キット内容�

キット内容�

操作方法概略�

エクソソームの収量の比較ExoQuick�ULTRA シリーズ�および他社製品によりそれぞれ細胞培養液（TC）または血清（Serum）から調製したエクソソームを，ExoGlow-NTA�Fluorescent�Labeling�Kit（p.27 参照）で蛍光標識後，fNTA 法（蛍光ナノ粒子トラッキング解析法）で計数し，用いたタンパク質の量当たりでグラフにした。

エクソソームの収量および夾雑アルブミン，IgG 量の比較各回収法によりそれぞれ調製したエクソソームを，エクソソームに特異的なマーカーである CD63 量と，夾雑物質であるアルブミン量をウェスタンブロッティングにより比較した。ExoQuick-TC ULTRAを用いた場合は最も CD63 量が多い一方で，夾雑物のアルブミン量は最も少ないことがわかる。

他社製品（TC）

ExoQuick-TC ULTRA（TC）

他社製品（Serum）

ExoQuick ULTRA（Serum）

0 1 2 3 4

EVs/mg Protein

1×1010

Albmin

CD63

ExoQuick-TC ULTRA

従来品

他社製品

超遠心法

組織・細胞培養液／尿／髄液からエクソソームを回収できる試薬です。

※RNA およびタンパク質の解析を行う場合，試料量を 10�ml にすることをおすすめします。


[email protected]


8

回

収・精

製

九州大学大学院歯学研究院分子口腔解剖学分野

上原範久助教

ExoQuick-TC を用いた乳癌細胞培養上清からの細胞外小胞の回収と miRNA 精製

1. 背景細胞外小胞はほとんどの細胞から分泌されており，小胞表面分子や内包される情報伝達物質の伝播を介して細胞間コミュニケーションを仲介する。そのサイズや形成過程の違いから，エクソソーム（粒子径 30～150 nm），マイクロベシクル（粒子径 100～1,000 nm）などに分類される。近年，エクソソームの伝播を介した様々な疾患の病態プロセスへの関与が明らかとなり，その機能解析を含め，内包されるmiRNA の疾患マーカーへの応用が注目されている。本稿では，ExoQuick-TCを用いた骨転移性乳癌細胞培養液中の細胞外小胞の回収と，アレイ解析に向けたmiRNA精製の一例を紹介する。

2. 方法マウス由来乳癌細胞は，100 mmディッシュで 10％エクソソームフリー FBS を含むDMEM培地を用いて，48時間培養を行った。細胞培養液を 3,000 g で 15 分間遠心した後，上清を 0.22 μm フィルターで濾過し，ExoQuick-TC Exosome Precipitation Solution を加え，添付のプロトコールに準じて細胞外小胞の回収を行った。得られた細胞外小胞は，NanoSight LM10 を用いて粒度分布を測定し，透過電子顕微鏡による形態観察を行った。細胞外小胞画分より抽出したタンパク質およびRNAの品質は，それぞれウェスタンブロット法および Experion System（Bio-Rad 社）により確認した。

4. まとめ細胞外小胞を単離する方法として超遠心法がスタンダードとされているが，それが困難である場合，他の方法を選択しなければならない。現在，様々な細胞外小胞を回収する試薬・キットがある中，目的に合わせた回収方法を選択することが重要である。今回我々が用いた ExoQuick-TCは，回収過程における煩雑な操作は必要とせず，一般的な実験機器のみで培養液中の細胞外小胞を簡便かつ短時間に回収することが可能であった。また，miRNA アレイ解析を行うための十分な純度と収量のRNAを得ることができた。

ユーザーレビュー

3. 結果回収した細胞外小胞の粒度分布を解析した結果，マイクロベシクルとされる大きさの小胞も確認されたが，エクソソームが多く含まれていた（平均粒子径 134.3 nm，図 1A ）。また，透過電子顕微鏡による細胞外小胞の形態観察を行ったところ，球状の形態が保持されていることが分かった（図 1B ）。細胞外小胞画分よりタンパク質を抽出し，ウェスタンブロット法によりエクソソームマーカー発現の検出を行った結果，CD9および CD63 のバンドが確認された（図 2 ）。以上の結果から，ExoQuick-TCを用いて回収した細胞外小胞画分には，エクソソームが濃縮されていることが確認された。miRNAeasy（QIAGEN 社）を用いて RNAの精製を行ったところ，小分子 RNA 領域にピークが認められ，rRNA などの混入はみられなかった（図 3 ）。

Size （nm）

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000

Concentration （particles/ml）

（E9）

0

1

2

3

4

5

6

7

（A）（B）

100 nm

CD63

CD9

Cell lysate (10 µg/lane) EVs (1 µg/lane)

Cancer Cell 1 2 3 41 2 3 4

図 1. 粒度分布と透過電子顕微鏡画像A：得られた細胞外小胞の多くがエクソソームの粒子径とされる 30～150 nmの範囲のものであった。

B：透過電子顕微鏡を用いた細胞外小胞の観察像（新潟大学大学院医歯学総合研究科顕微解剖学分野三上剛和准教授との共同研究）。

図 2. エクソソームマーカー発現解析乳癌細胞（1～4）の各ライセートとそれぞれの培養上清から ExoQuick-TC を用いて回収した細胞外小胞タンパク質は，CD9 抗体（#EXOAB-CD9A-1，p.17 参照），CD63 抗体（#EXOAB-CD63A-1，p.17 参照）を用いてウェスタンブロット法を行った。

図 3. 細胞外小胞からの RNA 解析Experion System（Bio-Rad社）により細胞外小胞から抽出したRNAの解析を行った。小分子 RNA（～25 塩基長）にシグナルのピークが見られる。rRNA（矢印）のシグナルは見られなかった。

Sample Intensity (FU)

2500

Lower

2000

1500

1000

500

0

25 200

500

1000

2000 size

(nt)4000

6000

16S 28S


FAX 03 -5684 -1775

reagent@funako

shi.co.jp


9

回

収・精

製

血清・腹水用エクソソーム回収試薬ExoQuick4

Web ページ番号検索4337

● �ExoQuick exosome precipitation solution（5 ml または 20 ml）

製品の添加量

試　料試料の量 ExoQuick の量

血清・腹水 250�μl 63�μl



SBI040510ExoQuick サンプル

EXOQ5A-1 5�ml 59,000

SBI042010 EXOQ20A-1 20�ml 191,000

使用例�

操作方法概略�キット内容�

腹水 1

エクソソームタンパク質 (mg/ml)

クロマトグラフィー

抗体結合磁気ビーズ

超遠心法

ExoQuick2.0

1.6

1.2

0.8

0.4

0.0腹水 2 腹水 3

腹水からのエクソソーム回収例

クロマトグラフィー

1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3

抗体結合磁気ビーズ

腹水からのエクソソーム回収例

腹水試料

PLAP

超遠心法 ExoQuick

各方法で腹水試料からエクソソームを回収し，ウェスタンブロットによりマーカータンパク質である胎盤性アルカリホスファターゼ（Placental�Alkaline�Phosphatase,�PLAP）を検出した。画像提供：Dr.�Douglas�Taylor,�Exosome�Sciences,�Inc.

サンプル �マークの製品は小包装の無料サンプル品をご用意しています。ご希望の方は当社テクニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。

サンプルあり

血清，腹水

3,000×g，15分間


上清ペレット

ペレット


転倒混和

インキュベート，4℃

残存溶液

1,500×g，5分間（室温または 4℃）

ペレット以外の残存する溶液をピペットで吸引除去

PBS 100～500μl実験用途に適したバッファーに溶解

1,500×g，30分間（室温または 4℃）


血清：30分間インキュベート腹水：12時間以上インキュベート

ExoQuick 添加

エクソソーム


System Biosciences 社製品の使用文献はウェブサイトで調べることができます

https://www.systembio.com/resources/product-citations/　

SBI Products in the Literature

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フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news試

薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

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nt@

funa

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回

収・精

製

血清・血漿用エクソソーム回収試薬ExoQuick-LP7

Webページ番号検索4337リポタンパク質低減可能

血清，血漿中のリポタンパク質中には miRNA が含まれていることが分かっています。回収したエクソソームにリポタンパク質が混入してしまうと，エクソソーム由来miRNA と思って解析したものが，実はリポタンパク質由来 miRNA であることがあります。本製品はあらかじめ試料中のリポタンパク質を除去し，エクソソームを回収するためのキットです。

● ExoQuick exosome precipitation solution（1 ml）● Pre-cleaning reagent A / B（25 μl each）● Magnetic bead solution（500 μl）● Wash buffer（50 ml）



ExoQuick-LP EXOLP5A-1 1 kit 82,000 SBI998567

使用例

キット内容

血清からエクソソームを回収する際に，本製品に付属の Pre-cleaning reagent を使用して前処理すると，リポタンパク質の混入を低減できることが分かる。

各製品の詳細は，フナコシWebのタブからかんたんに検索できます！

↓ココを選択！

検索各記事右上のWebページ番号を入力SEARCH

Webページ番号検索

未処理血清

ExoQuickペレット

ExoQuick上清

ExoQuick-LPペレット

ExoQuick-LP上清

（HDLに含まれるタンパク質）

（LDLに含まれるタンパク質）

未処理血清

ExoQuickペレット

ExoQuick上清

ExoQuick-LPペレット

ExoQuick-LP上清

血漿用エクソソーム回収試薬ExoQuick Plasma Prep5

Webページ番号検索4337フィブリン低減可能

製品の添加量

血漿中フィブリンやフィブリノーゲンはエクソソームの収率に影響を及ぼします。本製品はあらかじめ試料中のフィブリノーゲンを凝固させて除去し，エクソソームを回収するためのキットです。

● ExoQuick exosome precipitation solution（5 ml）● Thrombin liquid suspension, 611 U/ml（500 μl）

試　料試料の量 Thrombin の量

血　漿 500 μl 4 μl



SBI041510 ExoQuick Plasma Prep EXOQ5TM-1 1 kit 134,000

組織・細胞培養液／尿／髄液用エクソソーム回収試薬ExoQuick-CG6

Webページ番号検索4337GMP グレード

● ExoQuick-CG exosome precipitation solutioncGMP-Grade（50 ml）

製品の添加量

試　料試料の量 ExoQuick-CG の量


5 ml / 10 ml 1.6 ml / 3.3 ml尿

髄　液



SBI998302 ExoQuick-CG EXOCG50A-1 50 ml 191,000

※RNA およびタンパク質の解析を行う場合，試料量を 10 ml にすることをおすすめします。

キット内容

キット内容

@Funakoshi_CoLtd

フナコシ株式会社　5 月 23 日こんにちは！

天気が良いのは嬉しいことですが，5 月にしてはちょっと暑すぎ

30℃ を超える地域もあるらしく，早くも夏が到来したかのようですね

こまめな水分補給と冷たい # スイーツが欠かせません！

# 夏日

フォローして下さい♪

フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news試薬　　TEL 03 -5684 -1620　

FAX 03 -5684 -1775　

reagent@funako

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回

収・精

製

尿試料からのエクソソーム回収・調製用キット

Exo-Urine EV Isolation Kit


独自の可溶化バッファーと，サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）レジンの組み合わせにより，尿試料からエクソソームなどの細胞外小胞（EV）を高い再現性・高純度・高収量で回収・調製できるキットです。


特　長�●�新鮮（採取後 4時間以内）・凍結いずれの尿試料からも同等の純度・収量で EVが得られます。

●�1 時間以内に 10試料から調製を行えます。

尿中には糖タンパク質 Tamm-Horsfall�Protein（THP，ウロモジュリン）が高濃度で存在するため，尿試料からエクソソームを調製する場合，THP混入およびエクソソーム収量の減少が問題となります。本キットは，独自の可溶化バッファーと SECレジンを組み合わせることで，THPおよびその他の尿由来タンパク質を含まない高純度な EVを回収できます。また，ポリマー沈殿法や超遠心法で用いる量の 1/10 量である，わずか 1.5�ml の尿試料から高収量で EVが得られます。

参考文献：Huebner,�A.�R.,�et�al.,�Adv.�Exp.�Med.�Biol.,�845,�43～58�（2015）.�［PMID:�25355568］

ここがすごい

使用例�

ウェスタンブロッティングによる EVの解析複数の健常ドナーから得た尿試料をプールし，－20℃で 3週間凍結保存した後，EV 調製を行った。その後，ウェスタンブロッティングで解析を行った。A社製品，超遠心法，ポリマー沈殿法の各手法は 15�ml，本製品は 1.5�ml の尿試料から調製した。試料量が 10 倍異なるが，本製品で調製した EV は各種 EV マーカーのレベルが高く，THPがほとんど含まれていないことが分かる。

なお，超遠心法，ポリマー沈殿法で調製した EVでは，AQP2のレベルが高くなっているが，これは EV 由来ではない可溶性 AQP2 の持込み（キャリーオーバー）の可能性が報告されている。

参考文献：Kodaka,�K.,�et�al.,�J.�Clin.�Exp.�Nephrol.,�3�（1）,�06�（2018）.

健常ドナー 3人から得た新鮮な尿試料をプールし，4℃で記載の時間保冷した後，EV調製を行った。その後，ウェスタンブロッティングで解析を行った。A：�本製品は 1.5�ml，A 社製品は 15�ml の尿試料から調製した。試料量が 10 倍異なるが，本製品で調製した EV の方が，EV マーカーである CD63 のレベルが高かった。なお，いずれの製品から調製した EV も，尿中糖タンパク質である THP のレベルは低かった。

B：�本製品で調製した EV は，CD63 の他にも EV マーカーである AQP2，TSG101，HSP70 のレベルがそれぞれ高いことが示された。

タンパク質量の測定による EV収量の比較上図の各方法で調製した EVについてタンパク質の量をQubit�protein�assay（Thermo�Fisher�Scientific 社）で測定し，超遠心法で得られた量を 1として相対的に示した。本製品で調製した EVの収量が，他の方法より極めて高いことが分かる。

本製品

A社製品

超遠心法

ポリマー沈殿法

THP

CD63

CD81

CD9

AQP2

HSP70

Extracellular protein

Transmembrane proteins with

extracellular domains

Transmembrane protein

Cytoplasmic protein

本製品

A社製品

超遠心法

ポリマー沈殿法

0EV yield normalized to ultracentrifugation

2 4 6 8

0.6x

0.7x

1.0x

7.4x

本製品

本製品

本製品

A社製品

A社製品

THP

CD63

2 hrs 4 hrs 6 hrs

A. 本製品

2 hrs 4 hrs 6 hrs

AQP2

TSG101

HSP70

B.

キット内容�●�Disposable�empty�gravity�isolation�column●�Exo-Urine�isolation�resin●�Equilibration�buffer●�Reagent�A，B品　　名

メーカー商品コード包装 / 価格（￥）Exo-Urine EV Isolation KitSBI EXOU100A-1 1�kit�/ 85,000 SBI434010

■新鮮尿試料からの EV 調製■凍結尿試料からの EV 調製

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi news試

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- 568

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製

密度勾配遠心法によるエクソソーム単離を効率化する試薬

ExoMAX Opti Enhancer

Web ページ番号検索65563超遠心法

一般的なショ糖を用いた密度勾配遠心法によりエクソソームを単離する場合，低速～超遠心分離を複数ステップ行う必要があります。しかし，ExoMAX Opti Enhancer を用いることによりこの操作を短縮でき，さらにエクソソームの収率を上げることができます。※OptiPrepTM は，Abbott Diagnostics Technologies 社の登録商標です。

画像提供：Dr. Fatah Kashanchi, George Mason University.

特　長使用例

● ウイルスやタンパク質凝集物を含む試料からのエクソソームの分離に有用です。

● 高収率であるため，少量の試料からエクソソームを回収できます。

細胞培養液から単離したエクソソームのウェスタンブロット像

品　　名メーカー商品コード包装 / 価格（￥）

ExoMAX Opti Enhancer ReagentSBI434200 SBI EXOMAX12A-1 12 reactions 1 kit （120 ml） / 67,000SBI434210 SBI EXOMAX24A-1 24 reactions 1 kit （240 ml） / 101,000

使用回数は，1 回につき 10 ml 使用した時の回数です。

TSG101

ExoMAX Opti Enhancer

Standard Workflow

TSG101

TSG101（エクソソームマーカー）

一般的なショ糖／OptiPrepTM を用いた密度勾配遠心法によるワークフロー

ExoMAX Opti Enhancer を試料と等量添加し，一晩インキュベートする

遠心分離の操作を短縮できます！

エクソソームの収率が上がります！

75,000 g（75分～一晩）

エクソソームを含有した沈降物を再懸濁し，密度勾配をかける

上清を除去する

4 5

Standard Opti Workflow ExoMAX Opti Enhancer

6 7

CD63

4 5 6 7

CD63

ExoMAX Opti Enhancerのワークフロー

上清

細胞デブリ

試料

300 g（10分）

2,000 g（10分）

10,000～20,000 g（30分）

100,000～200,000 g（＞70分）

上清を除去する

試料

3,000 g（30分）

1,500 g（30分）

上清

生細胞

上清

死細胞

上清

細胞デブリ


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


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回

収・精

製

エクソソームを自然落下により精製するカラム

EVSecond※EVSecond: Extracellular Vesicle Isolation by Size Exclusion Chromatography on Drip Column

Web ページ番号検索65503サイズ排除クロマトグラフィー法

EVSecond

EVSecond L70

血清・血漿・細胞培養上清などの試料から，自然落下でエクソソームを高純度精製するサイズ排除クロマトグラフィーカラムです。超遠心を行わずPBSで溶出を行うため，構造へのダメージがなく，精製したエクソソームは幅広いアプリケーションに使用できます。

ヒト血清からのエクソソームの単離ヒト血清 200 μl から，EVSecond または EVSecond L70 を用いて 100 μl ずつ各溶出フラクションを回収した。いずれのカラムを用いても溶出のピークフラクションでアルブミンや IgG などの血清タンパク質とエクソソームが効果的に分離されており，高純度のエクソソームが得られたことが分かる。

赤：抗 CD9-抗 CD9 サンドイッチ ELISA によるエクソソーム溶出位置の確認青：Bradford 法による血清フリータンパク質の溶出位置の確認

データご提供：公益社団法人がん研究会　植田幸嗣先生● ゲルろ過により精製を行います。タンパク質よりも構造の大

きいエクソソームが先に溶出します。● 超遠心法やポリマー沈殿法に比べて，高純度のエクソソーム

が単離できます。● 特定エクソソームの表面抗原に対する抗体を用いたアフィニ

ティー精製法とは異なり，表面抗原のプロファイルの影響を受けないため，バイアスの少ないエクソソームが得られます。

● フリー RNA／タンパク質を効果的に除去できるため，網羅的 miRNA 解析や高感度プロテオーム解析に適しています。

● EVSecond L70 は，混和時間がより短く，また室温下で操作できるように改良されています。

従来法との比較各方法によって精製されたエクソソームを LC/MS で分析を行い，同定されたタンパク質の細胞内局在を示した。EVSecond は，フリータンパク質（Secreted）の割合が少なく，精製度が高い手法であることが分かる。

品　名 EVSecond EVSecond L70

操作環境低温室室温

使用前の転倒混和数時間数分程度

試料量 50～700 μl 50～1,500 μl

ブロッキング後の洗浄操作 PBS 700 μl×6 回 PBS 1,500 μl×3 回

1. 充填剤をよく混和してスタンドに設置し，保存液を捨てる。

2. FBS＊でブロッキングし，その後 PBS で洗浄する。

3. 血清，血漿などの試料＊をロードする。

4. PBS を適量流し，エクソソーム溶出画分を回収する。＊0.22 μm フィルター処理済みのものを使用して下さい。※初回は抗 CD9-抗 CD63 サンドイッチ ELISA や，抗 CD9 ウェスタン

ブロットなどでエクソソームが溶出しているフラクションを確認して下さい。


EVSecondGLI 501021390 10 pieces / 44,000 GLI000152GLI 501021392 25 pieces / 98,000 GLI000153受注発注品。

EVSecond L70GLI 501021395 10 pieces / 58,000 GLI000395

Others7％

Cytosol32％

Nucleus12％

Membrane10％Secreted

56％

Others15％

Cytosol41％

Nucleus14％

Membrane18％

Secreted12％

Others4％ Cytosol

22％

Nucleus9％

Membrane16％

Secreted33％

EVSecond抗体アフィニティー精製密度勾配超遠心法

特　長

操作方法概略

ショ糖勾配超遠心法と比較して，純度と回収量は？デモを実施したお客様の評価では，純度・回収量ともにショ糖勾配超遠心法より良好だったとのコメントをいただいています。

エクソソームの大きさに制限はありますか？40～100 nm 程度であれば問題ありません。実験的に 100 nm 程度のエクソソームの回収を NanoSight により確認しています。原理的には 200 nm 程度のエクソソームの分離精製も可能と考えられます。

血清，血漿以外にも使えますか？使用できますが，CSF（脳脊髄液）や培養上清などのエクソソーム濃度の低い試料は事前に濃縮する必要があります。

ブロッキングに使用する FBS 由来のエクソソームの影響はありませんか？プロトコル通り PBS をカラムに通液することにより，FBS 由来のエクソソームが検出されないことを確認しています。

ウェブに F A Q あります



GL-SPE EXO Fraction RackGLI 501050450 1 set / 147,000 GLI000206

● 通液や抽出液のフラクション回収が簡単に行えます。

● レバー操作で回収用チューブの切換が可能です。

● 高さ調整をすることで，EVSecondと EVSecond L70 の両方で使用可能です。

関連製品 EVSecond 専用ラック

EVSecond L70 EVSecond

カラムスタンド

回収用ラックホルダー

回収用ラック

● サイズ：約 300W×300D×150～190H mm


薬　

　TE

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- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

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回

収・精

製

フローサイトメトリーによるエクソソーム精製

Exo-Flow Capture Kit

Web ページ番号検索7892フローサイトメトリー

免疫沈降法

表面マーカー抗体を結合させた磁気ビーズにエクソソームを結合させ，フローサイトメーターで精製するキットです。

Outer core hydrophilic

polymer surface

Biotin-conjugatedCapture Antibody

Covalentlycross-linkedstreptavidin

Iron magnetitecentral layer

Exo-Flow Beads

SBI 社が検証済みの抗体または

お手持ちのビオチン標識抗体

を結合させてから使用します


Exo-Flow Multifunctional Magnetic StandSBI EXOFLOW700A-1 1 kit / 60,000 SBI998586

横置き：1.5 ml チューブ 12 本を収納可能縦置き：15 ml チューブ 2 本／50 ml チューブ 1 本を収容可能

■別売り磁気スタンド

CD81 Beads + Exo-FITC NO Exosomes

CD81 Beads + Exo-FITCPLUS Exosomes

CD81 Beads + Exo-FITCPLUS Exosomes

250K

200K

150K

100K

50K

0 100 101 102 103 104 105

FSC-H

FITC-A

1.4% FITC Positive

250K 100

80

60

40

20

0

200K

150K

100K

50K

0100 101 102 103 104 105

FSC-H

FITC-A100 101 102 103 104 105

FITC-A

100% FITCPositive C

ount


Exo-Flow Capture Kit（10 tests）SBI998592 SBI EXOFLOW100A-1 CD9 1 kit / 87,000SBI998317 SBI EXOFLOW610A-1 CD14 1 kit / 87,000SBI998591 SBI EXOFLOW200A-1 CD31 1 kit / 87,000SBI042101 SBI EXOFLOW210A-1 CD44 1 kit / 87,000SBI998590 SBI EXOFLOW300A-1 CD63 1 kit / 87,000SBI998316 SBI EXOFLOW620A-1 CD68 1 kit / 87,000SBI998295 SBI EXOFLOW660A-1 CD73 1 kit / 87,000SBI998589 SBI EXOFLOW400A-1 CD81 1 kit / 87,000SBI998315 SBI EXOFLOW630A-1 EpCAM 1 kit / 87,000SBI998588 SBI EXOFLOW500A-1 Rab5b 1 kit / 87,000SBI998587 SBI EXOFLOW600A-1 HLA-G 1 kit / 87,000

Tetraspanin Combo Kit（10 tests）SBI998571 SBI EXOFLOW150A-1 1 kit / 131,000

Basic Exo-Flow Kit（100 tests）SBI998307 SBI CSFLOWBASICA-1 1 kit / 147,000

● Streptavidin magnetic beads● Biotinylated capture antibody＊

● Bead wash buffer　　　 ● Exosome stain buffer● Exo-FITC universal exosome stain● Exosome elution buffer

＊Tetraspanin Combo Kit には，CD9 抗体，CD63 抗体，CD81 抗体が付属します。Basic Exo-Flow Kit には抗体は付属しません。

※別途，磁気スタンド（#EXOFLOW700A-1）が必要です。

使用例

キット内容

操作方法概略

FITC FITC

FITCフローサイトメトリー染色

試料

エクソソーム

磁気ビーズ

溶出

※血清などの試料からのエクソソーム回収には ExoQuick（p.10 参照）がおすすめです。

免疫沈降によるエクソソーム精製

Exo-Flow Exosome IP Kit

Web ページ番号検索8514免疫沈降法

血清またはエクソソーム試料から目的の表面マーカーを持つエクソソームを精製するキットです。表面マーカー抗体を結合させた磁気ビーズにエクソソームを結合させ，免疫沈降により精製します。

HEK293 細胞培養液から回収したエクソソームまたは血清から，本製品を用いてエクソソームを免疫沈降した後，ウェスタンブロットを行った。CD63 陽性エクソソームおよび CD9 陽性エクソソームが免疫沈降し，精製できたことが分かる。


Exo-Flow32 IP Kit （32 reactions）SBI EXOFLOW32A-CD9 CD9 1 kit / 101,000 SBI998529SBI EXOFLOW32A-CD63 CD63 1 kit / 101,000 SBI998527SBI EXOFLOW32A-CD81 CD81 1 kit / 101,000 SBI998525

Exo-Flow96 IP Kit （96 reactions）SBI EXOFLOW96A-CD9 CD9 1 kit / 268,000 SBI998528SBI EXOFLOW96A-CD63 CD63 1 kit / 268,000 SBI998526SBI EXOFLOW96A-CD81 CD81 1 kit / 268,000 SBI998524


Exo-FlowMag96 〈96-well Plate Magnet〉SBI EXOFLOWMAG-1 1 kit / 110,000 SBI998530

■別売り磁気プレート

※別途，磁気プレート（#EXOFLOWMAG-1）が必要です。

293 media

CD9 CD63 CD9 CD63 Capture Ab

Detection Ab CD63

( ～ 50 kDa)

Detection AbCD9

( ～ 25 kDa)

Serum (direct)

使用例

特　長

● キットには試料からエクソソームを免疫沈降し，精製するために必要な試薬がすべて含まれています。

● 血清，血漿試料に直接ビーズを添加し，免疫沈降させることができます。

● 精製したエクソソームは，RNA やタンパク質などのバイオマーカーの機能解析に使用できます。

● 細胞培養液，尿，脳脊髄液中のエクソソームを精製したい場合は，あらかじめ試料中のエクソソームを濃縮しておくことをおすすめします＊。

＊細胞培養液などの試料からのエクソソーム回収には ExoQuick-TC（p.8 参照）がおすすめです。


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


15

回

収・精

製

グラム陰性菌の外膜小胞を単離するキット

ExoBacteria OMV Isolation Kit

Web ページ番号検索68058イオン交換クロマトグラフィー法

E. coli や P. putida などのグラム陰性菌の培養液から，外膜小胞（Outer Membrane Vesicles，OMV）を単離するキットです。

●OMV単離用に開発されたユニークな製品です。●超遠心法に匹敵する純度・収量で，沈殿操作を用いずに重力式（自然落下式）カラムにより単離できます。

●1 時間以内にOMVを単離できます。●得られたOMVは，細菌間の情報伝達研究，感染症の発症機序研究，改変OMVを用いたワクチン開発，がん治療，免疫応答の調節などの研究に有用です。

●培養液 30ml からのOMV単離を 20回行うのに十分な量の試薬とカラム類がキットに含まれています。

●OMVbindingresin●Bindingbuffer●Elutionbuffer●Gravityflowcolumn●Columnstopper●Columncap※別途，吸引フィルター（0.45μmおよび 0.22μm），カラム用ラック（静置用，回転撹拌用）が必要です。

本製品または超遠心法で単離した E. coli 由来 OMV の比較A：蛍光NTA（蛍光ナノ粒子トラッキング解析法）によるOMVの粒度分布の比較本製品の方が，粒子径分布が狭く，より均一なOMVを得られる。

B：収量比較本製品では，超遠心法の約 20倍の収量でOMVを得られる。

C：収量とキャリーオーバータンパク質量の比較ウェスタンブロッティングにより，OMV のマーカーとして GroEL（左図），キャリーオーバータンパク質のマーカーとして Flagellin（右図）を検出した。本製品は超遠心法と比べてOMVの収量が高く，キャリーオーバータンパク質の量が少ないことが分かる。

100 nm 100 nm

OMV タンパク質凝集体

本製品で回収したOMV 超遠心法で回収したOMV

本製品超遠心法

濃度（particles/ml）

粒子径（nm）

本製品

超遠心法

0.5×1080 1.0×108 1.5×108

Particles/μg protein

1.38×108

0.0657×10820×


ExoBacteria OMV Isolation Kit for E. coli and other Gram-Negative Bacteria（20 reactions）

SBI411000 SBI EXOBAC100A-1 1kit/ 85,000

A. 粒度分布

B. 収量

C. キャリーオーバータンパク質量

特　長使用例

キット内容本製品

超遠心法

本製品

超遠心法

GroEL Flagellin

外膜小胞（OMV）とはOMV はグラム陰性菌の外膜から放出される膜小胞で，細胞間コミュニケーションや宿主細胞への物質輸送などの機能を有しています。近年ではOMV をワクチンのプラットフォームとして利用しようとする研究も進められています。

M E M O


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


16

回

収・精

製

細胞培養液からエクソソームを回収したい時にはこちらの FBS を！

Exo-FBS Exosome-Depleted FBS


FBS には，ウシ由来のエクソソームが含まれています。培養細胞を用いてエクソソーム研究を行う場合に，FBS 由来エクソソームがバックグラウンドを上昇させる原因となります。本製品はウシ由来エクソソームを除去しており，細胞培養液からのエクソソーム回収への影響が抑えられています。

●CD63 陽性のエクソソームが除去されていることと，ウシ由来miRNAが検出限界以下であることを確認しています。

●多くの種類の細胞が，通常の FBS と同様に増殖します。●使用法は通常の FBS と同様に，DMEMや RPMI などの培地に 10％添加するだけです。

●非働化済みの製品もあります。

通常の FBS および Exo-FBS から RNA を抽出し，定量的 RT-PCR により 12 種類のウシ由来miRNAの有無を確認した。


Exosome-Depleted FBS, Exo-FBSSBI EXO-FBS-50A-1 50ml/ 33,000 SBI998647SBI EXO-FBS-250A-1 250ml/ 140,000 SBI998646

Exosome-Depleted FBS, Exo-FBS, Heat InactivatedSBI EXO-FBSHI-50A-1 50ml/ 35,000 SBI998643SBI EXO-FBSHI-250A-1 250ml/ 142,000 SBI998642加熱処理（65℃，15分間）により非働化済み。

NanoSightLM10（Malvern 社）を用いて，エクソソームサイズの粒子を測定した。本製品ではエクソソームがほとんど除去されていることが分かる。

200 以上

使

用文献多数！

相対的強度（Au）

Exo-FBS

粒子サイズ（nm）

0 200100

通常のFBS

本製品

エクソソーム

相対的強度（Au）

通常の FBS

0 100

粒子サイズ（nm）

200

特　長qPCR増幅カーブ

相対的発現量

相対的発現量

1

10

100

1,000

10,000

1

10

100

1,000

10,000

miR-15b

miR-21

miR-23a

miR-23b

miR-25

miR-30c

miR-34c-3p

miR-92a

miR-93

miR-99b

miR-122

miR-122a-5p

miR-15b

miR-21

miR-23a

miR-23b

miR-25

miR-30c

miR-34c-3p

miR-92a

miR-93

miR-99b

miR-122

miR-122a-5p

通常の FBS

通常の FBS

Exo-FBS

Exo-FBS

ウシ由来miRNA検出されず

エクソソームマーカー抗体

Exosome Antibody


試料からエクソソームを回収できたか，ウェスタンブロットで確認するための抗体です。

●ヒト，マウス由来エクソソームに交差します。●製品には検出用二次抗体として HRP 標識抗ウサギ Ig ヤギポリクローナル抗体（5μl）も含まれています。

●免疫動物：Rabbit-Polyclonal

特　長

［メーカー：SBI］一般的なエクソソームマーカー

マーカー分子商品コード包　装価格（￥）SBI999272 CD9 EXOAB-CD9A-1 25μl 29,000SBI999274 CD63 EXOAB-CD63A-1 25μl 29,000SBI999273 CD81 EXOAB-CD81A-1 25μl 29,000SBI999271 HSP70 EXOAB-Hsp70A-1 25μl 29,000SBI998405 ALIX EXOAB-ALIX-1 25μl 29,000SBI998409 ANXA5 EXOAB-ANXA5-1 25μl 29,000SBI998408 TSG101 EXOAB-TSG101-1 25μl 29,000SBI998404 FLOT-1 EXOAB-FLOT1-1 25μl 29,000

組織特異的なエクソソームマーカーマーカー分子商品コード包　装価格（￥）

SBI998403 CXCR4 EXOAB-CXCR4-1 25μl 29,000SBI998407 EpCam EXOAB-EPCAM1-1 25μl 29,000SBI998406 Vimentin EXOAB-VMTN-1 25μl 29,000

抗体ラインナップ

セット内容●抗 CD63抗体（25μl）● 抗 CD9抗体（25μl）● 抗 CD81抗体（25μl）● 抗 HSP70 抗体（25μl）● HRP 標識抗ウサギ Igヤギポリクローナル抗体（5μl×4）

試料：血清由来エクソソーム

［メーカー：SBI］商品コード包　装価格（￥）

EXOAB-KIT-1 1kit 98,000 SBI999270

kDa

55

70

35

25

100CD63

（～53 kDa）

分子量マーカー

CD9

（～28 kDa）

CD81

（～26 kDa）

HSP70

（53～70 kDa）

抗体のセット品（ExoAB Antibody Kit）


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


17

回

収・精

製

検

出・確

認

エクソソーム量を推定するキット

Web ページ番号検索下記参照

エクソソーム表面のタンパク質量またはエクソソーム中のAChE 活性を測定し，エクソソーム量を推定するキットです。キットには，NanoSight により粒子数をキャリブレーション済みのエクソソームが含まれています。

測定対象 CD9 / CD63 / CD81 のタンパク質量

CD63 / CD81 のタンパク質量エクソソーム中の AChE 活性

検出方法比色比色蛍光

測定波長 450 nm 405 nm 励起 530～570 nm蛍光 590～600 nm

操作時間 24 時間 4 時間 20 分 1 時間

測定に必要な試料量（タンパク質量）＞500 μg 1～200 μg 50 μg ＜1 μg

交差性 Human / Mouse / Rat

CD63 Kit： Human / Mouse / Rat

CD81 Kit： Human

Human / Mouse / Rat

1 ExoELISAp.18 2 ExoELISA-ULTRA

p.19 3 EXOCETp.19 4 FluoroCet

p.19

エクソソーム量を推定するダイレクト ELISA キットExoELISA CD9 / CD63 / CD811


特　長操作方法概略

キット内容

● 試料から抽出したエクソソーム＊をプレートに結合させ，エクソソーム表面のテトラスパニンを抗体により検出し，エクソソーム量を推定します。

● NanoSight により粒子数をキャリブレーション済みのエクソソームが含まれています。

＊試料からのエクソソームの回収には ExoQuick（p.10 参照）またはExoQuick-TC（p.8 参照）がおすすめです。

HRP

TMB 基質

一次抗体

HRP標識二次抗体

エクソソーム由来タンパク質

1. �試料をプレートに加え，37℃ で 2 時間から一晩（推奨）インキュベートして固定化する。

2.一次抗体，HRP 標識二次抗体を加える。3. TMB ELISA substrate を加え，反応停

止後に吸光度を測定する。

● Primary antibody（キットにより異なります）● HRP-conjugated secondary antibody● ExoELISA protein standard● Blocking buffer● Exosome binding buffer● Wash buffer● TMB ELISA substrate● Stop buffer● ELISA plate

※受注発注品


ExoELISA ELISA Kit（96 reactions）SBI EXOEL-CD9A-1 CD9 1 kit / 126,000 SBI999267SBI EXOEL-CD63A-1 CD63 1 kit / 126,000 SBI999269SBI EXOEL-CD81A-1 CD81 1 kit / 126,000 SBI999268

使用例

吸光度

エクソソーム粒子数0 5×109 1×1010 1.5×1010

y=6E-11x+ 0.092R2 = 0.992

1

0

0.8

0.6

0.4

0.2

CD9

y=5E-11x + 0.117R2 = 0.971

吸光度

エクソソーム粒子数0 5×109 1×1010 1.5×1010

1

0

0.8

0.6

0.4

0.2

CD63

y=7E-11x+ 0.124R2 = 0.993

吸光度

エクソソーム粒子数0 5×109 1×1010 1.5×1010

1

0

0.8

1.2

0.6

0.4

0.2

CD81

64

使

用文献多数！


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


18

検

出・確

認

わずか 4 時間でエクソソーム量を推定するダイレクト ELISA キットExoELISA-ULTRA CD63 / CD812


オススメ

特　長� 操作方法概略�●�試料から抽出したエクソソームをプレートに結合させ，エクソソーム表面のテトラスパニンを抗体により検出し，エクソソーム量を推定します。

●�NanoSight により粒子数をキャリブレーション済みのエクソ�ソームが含まれています。

●�ExoELISA-ULTRAの操作時間はわずか 4時間です。

0 1×1010 2×1010 3×1010 4×1010 5×10100

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

エクソソーム粒子数

ExoELISA-ULTRA CD63 Standard Curve

吸光度

1. �試料をプレートに加え，37℃で 1時間インキュベートして固定化する。

2. �一次抗体，HRP標識二次抗体を加える。3. �TMB�ELISA�substrate を加え，反応停止後に吸光度を測定する。

HRP

TMB 基質

一次抗体

HRP標識二次抗体

エクソソーム由来タンパク質


ExoELISA-ULTRA ELISA Kit（96 reactions）SBI EXEL-ULTRA-CD63-1 1�kit�/ 112,000 SBI998296SBI EXEL-ULTRA-CD81-1 1�kit�/ 112,000 SBI434100キット内容：Primary�antibody（キットにより異なります），HRP-conjugated�secondary�antibody，ExoELISA-ULTRA�protein�standard，Blocking�buffer，Coating�buffer，Wash�buffer，TMB�ELISA�substrate，Stop�buffer，ELISA�plate

エクソソーム量を AChE 活性により推定するキットEXOCET Exosome Quantitation Kit

3 エクソソーム量を AChE 活性により高感度に推定するキットFluoroCet Exosome Quantitation Kit

4

Web ページ番号検索53137 Web ページ番号検索64841

エクソソーム中のアセチルコリンエステラーゼ活性を測定することにより，エクソソーム量を推定します。

エクソソーム中のアセチルコリンエステラーゼ活性を測定することにより，エクソソーム量を推定します。

20分比色法

●�NanoSight により粒子数をキャリブレーション済みのエクソソームが含まれてい�ます。

0 2×109 4×109 6×109 8×109 1×1010 1.2×1010 1.4×1010


EXOCET Standard Curve1.6

1.4

1.2

1

0.8

0.6

0.4

0.2

0

吸光度

y＝0.0012x＋0.0176R2＝0.9976

蛍光法

よ

り高感度！

60分

●�NanoSight により粒子数をキャリブレーション済みのエクソソームが含まれています。

10,000

9,000

8,000

7,000

6,000

5,000

4,000

3,000

2,000

1,000

0


相対蛍光強度

0 5×107 1×108 1.5×108 2.0×108 2.5×108

FluoroCet Standard Curve

y＝419.2x＋306.95R2＝0.9992

23

使

用文献多数！

特　長�特　長�


EXOCET Exosome Quantitation Kit（96 reactions）SBI998447 SBI EXOCET96A-1 1�kit�/ 80,000

キット内容：Exosome�lysis�buffer，EXOCET�buffer�A�/�B，EXOCET�standard，96�well�assay�plate（12×8�strips），PBS-B�buffer


FluoroCet Exosome Quantitation Kit（96 reactions）SBI FCET96A-1 1�kit�/ 114,000 SBI998299キット内容：Exosome�lysis�buffer，FluoroCet�buffer�A�/�B，FluoroCet�standard，Opaque�96�well�plate，Detection�reagent，Reaction�buffer，Acetylcholine�chloride

オススメ


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


19

検

出・確

認

試料：正常ヒト血清プールから回収したエクソソーム

エクソソームを検出する抗体アレイ

Exo-Check


エクソソームの回収が適切に行われたかを確認できます。半定量的な検出が可能です。

●Standard-array では 11 種類，Mini-array では 5 種類のエクソソームマーカーを検出することができます。

●各マーカー抗体がメンブレンにスポットされています。


Exo-Check Exosome Antibody Array, NeuroSBI EXORAY500A-4 Standard 4tests/ 108,000 SBI704500SBI EXORAY500A-8 Standard 8tests/ 187,000 SBI704501SBI EXORAY510A-4 Mini 4tests/ 71,000 SBI704510SBI EXORAY510A-8 Mini 8tests/ 122,000 SBI704511

試料：ヒト血清由来 EV（細胞外小胞）

試料：ヒト血清由来 EV（細胞外小胞）

ニューロン由来エクソソームマーカー

一般的なエクソソームマーカー

細胞内成分のコンタミネーションの指標

Blank Positive control

CD 63 L1CAM

CD 9 NCAM1

CD 81 ENO2

TSG101 MAPT

CANX GRIA1

ICAM1 PLP1

A

1

2

3

4

5

6

7

B

Blank Positive control

CD 81 L1CAM

TSG101 ENO2

CANX MAPT

A

1

2

3

4

B

Standard-array

Mini-array

ニューロン由来エクソソームを検出する抗体アレイ

Exo-Check Neuro


ニューロン特異的なエクソソームマーカーと，一般的なエクソソームマーカーを，同時に検出できる抗体アレイです。

キット内容●Lysisbuffer●Labelingreagent●Column●Columnbuffer●Blockingbuffer●Washbuffer●Detectionbuffer●Membrane※別途，HRP化学発光試薬が必要です。

エクソソームマーカー検出用のスポット

ポジティブコントロール用のスポット

●Lysisbuffer ● Blockingbuffer●Labelingreagent ● Washbuffer●Column ● Detectionbuffer●Columnbuffer ● Membrane※別途，HRP化学発光試薬が必要です。

化学発光検出用試薬の

添加

標識済みエクソソームライセート

エクソソームマーカー抗体

メンブレン

Label

化学発光検出用試薬の

添加

標識済みエクソソームライセートLabe

l


Exo-Check Antibody ArraySBI704200 SBI EXORAY200A-4 4 membranes 4tests/ 83,000SBI704210 SBI EXORAY210A-8 8 membranes 8tests/ 157,000

測定原理

キット内容

特　長

アレイマップ

1 3 52 4 6

Positivecontrol FLOT-1 ALIXGM130 ICAM CD81A

CD63 ANXA5 BlankEpCam TSG101 PositivecontrolB

一般的なエクソソームマーカー

細胞内成分のコンタミネーションの指標

※受注発注品


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


20

検

出・確

認


品　名 XCF Exosome DNA Isolation Kit XCF COMPLETE Exosome & cfDNA Isolation Kit

出発試料精製済みエクソソーム血清，血漿

試料量 500 μl（5～11×1012 particles/ml） 500 μl

精製対象エクソソーム DNA エクソソーム DNA および cfDNA

キット内容

・DNA binding buffer・Concentrated wash buffer・Elution buffer・Spin column（20 columns）・Collection tube（20 tubes）

・DNA binding buffer・Concentrated wash buffer・Elution buffer・Spin column（40 columns）・Collection tube（40 tubes）・Reagent A・ExoQuick 6 ml（p.10 参照）

SBI232000 商品コード XCF200A-1　　 XCF100A-1　　

SBI231000 包装／価格（￥） 20 tests / 57,000 20 tests / 101,000

ヒト血清からエクソソーム DNA（A）および cfDNA（B）を精製した例

ヒトアルブミンおよび重鎖 IgG のキャリーオーバーの検証本製品（#XCF100A-1）で処理した試料では，各タンパク質のキャリーオーバーが著しく少ないことがわかる。

血清，血漿

脂質

上清

遠心分離

ExoQuick（p.10 参照）を添加

前処理

スピンカラム

DNAbindingbuffer

ペレット

cfDNA

エクソソーム

DNA RNA 代謝産物タンパク質

A．120

100

80

60

40

20

35 100 200 300

Base pairs

Exosomal DNA（150～225 bp）

全回収率：142 ng濃度：2.84 ng/μIA260/280：1.52

400 600 1,000 3,000 10,380

Fluorescence units

B．

120

100

80

60

40

20

35 100 200 300

Base pairs

cfDNA（150～225 bp）

全回収率：91 ng濃度：1.82 ng/μIA260/280：1.19

400 600 1,000 10,380

Fluorescence units

エクソソーム DNA を精製するキット

XCF Exosome DNA Isolation Kit


アルブミンや IgG などの夾雑タンパク質を最小限に抑えて DNA を精製できます。得られた DNA は，qPCR や次世代シークエンシングに使用できます。COMPLETE Kit（#XCF100A-1）はエクソソーム DNA だけでなく，セルフリー DNA（cfDNA）も精製できます。

操作方法概略（COMPLETE Kit）使用例（COMPLETE Kit）

血漿

血清

血漿

血清

Albumin（67 kDa）

IgG（50 kDa）

未処理 XCF Kit 使用


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


21

解

析


出発試料

キット内容

商品コード包　装価格（￥）❶エクソソーム抽出試薬

❷RNA精製用カラム・試薬

❸cDNA合成・増幅試薬

❹380種類の

miRNAプライマー

血清・腹水 ExoQuick ● ● － RA800A-1 1 kit 146,000 SBI800100

細胞培養液・尿 ExoQuick-TC ● ● － RA800TC-1 1 kit 103,000 SBI999140

血清・腹水 ExoQuick ● －－ RA806A-1 1 kit 85,000 SBI806100

細胞培養液・尿 ExoQuick-TC ● －－ RA806TC-1 1 kit 85,000 SBI806110

－－ ● －－ RA808A-1 1 kit 60,000 SBI999098

血清・腹水 ExoQuick ● ● Human RA820A-1 1 kit 210,000 SBI820100

細胞培養液・尿 ExoQuick-TC ● ● Human RA820TC-1 1 kit 264,000 SBI999149

血清・腹水 ExoQuick ● ● Mouse RA821A-1 1 kit 210,000 SBI821100

細胞培養液・尿 ExoQuick-TC ● ● Mouse RA821TC-1 1 kit 264,000 SBI999139

血清・腹水 ExoQuick ● ● Rat RA822A-1 1 kit 210,000 SBI498220

細胞培養液・尿 ExoQuick-TC ● ● Rat RA822TC-1 1 kit 264,000 SBI498221

ポリアデニル化

逆転写

一本鎖cDNA（定量的PCRへ）

二本鎖cDNA

AAAAAAAAAA

AAAAAAAAAAswitchアダプター

アダプタープライマー

switch+タグ

CCC

T7CCC

T7

CCC

GGG

CCC

AAAAAAAAAA

プライマー

GGG

PAP

RT

Taq

血清

上清

エクソソームのペレット

（p.10 参照）

miRNAの解析

エクソソームの回収 RNAの精製

cDNA合成

フェノールを使用する方法よりも高純度の small RNAを精製できます。

RNAリガーゼを使用しないため，アダプター配列の重複結合によるアーティファクトが生じません。

血清試料から本製品（右）またはフェノールを使用した従来法（左）によりRNA を調製し，380 種類のヒト miRNA について発現プロファイリングを行った。本製品を使用した例では，より理想的な結果が得られている。

エクソソーム RNA の精製から，cDNA 合成までを行える

SeraMir Exosome RNA Amplification Kit


エクソソーム内の RNA を精製した後，定量的 RT-PCR 用の一本鎖 cDNA および T7 in vitro 転写用の二本鎖 cDNAを合成できるキットです。


[email protected]


22

解

析

キット名TailorMix miRNA Sample Preparation Kit V2

超高感度

TailorMix Gel-Free miRNA Sample Preparation Kit

PAGE ゲル精製不要

検証済みの試料エクソソーム，ホルマリン固定パラフィン包埋組織（FFPE），血清，全血，組織，HITS-CLIP 由来 RNA

Input total RNA 推奨 10 ng 以上推奨 150 ng 以上

ライブラリー精製方法

PAGE 精製独自の RNA 抽出ツールを用いた簡便な精製が可能です。

磁気ビーズによる精製PAGE 精製と比べ，短時間での精製が可能です。

キット内容

・Reagent set for library preparation・TailorMag purification beads・Index primer set＊

・Gel cutter tool・Gel breaker tube

・Reagent set for library preparation・TailorMag purification beads・Index primer set＊

RNA-Seq 用 miRNA ライブラリー調製キット

TailorMix miRNA Sample Preparation Kit

TailorMix Gel-Free検索64865

TailorMix miRNA V2検索64864

次世代 RNA-Seq 用 miRNA ライブラリーを構築する試薬がすべて含まれたキットです。illumina 社の次世代シークエンスプラットフォームに対応しています。

※いずれの製品も，別売品の RNA 精製用磁気ビーズスタンドが必要です（下記参照）。＊Barcode Set により内容が異なります。詳細は Web をご覧下さい。

②ライブラリー精製


miRNA や mRNA の次世代シークエンス用ライブラリー構築キットに特化したメーカーである SeqMatic 社についてご紹介しています。

［メーカー：SQM］

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シークエンステクノロジーの最先端


miRNA Sample Preparation Kit, V2, TailorMix （12 reactions）SQM TM-302-12A Barcode Set A 1 kit / 309,000 SQM413020SQM TM-302-12B Barcode Set B 1 kit / 309,000 SQM413021SQM TM-302-12C Barcode Set C 1 kit / 309,000 SQM413022SQM TM-302-12D Barcode Set D 1 kit / 309,000 SQM413023

miRNA Sample Preparation Kit, Gel-Free, TailorMix （12 reactions）SQM TM-400-12A Barcode Set A 1 kit / 309,000 SQM414000SQM TM-400-12B Barcode Set B 1 kit / 309,000 SQM414001SQM TM-400-12C Barcode Set C 1 kit / 309,000 SQM414002SQM TM-400-12D Barcode Set D 1 kit / 309,000 SQM414003


TailorMag 12 PCR tube Magnetic Stand （Version 2）SQM TM-710 1 piece / 81,000 SQM317100

■別売品

RNA 精製用の磁気ビーズスタンド（0.2 ml PCR チューブ用）

③ライブラリーのバリデーション

miRNA V2 Kit を用いて調製したヒト腎臓組織由来 total RNA の BioAnalyzer による解析結果

操作方法概略使用例

①ライブラリー作製

アダプター付加

アダプター付加

cDNA合成

PCR

Library 構築

P

Clustering Primer Clustering PrimerSequencing Primer Sequencing PrimermiRNA

Barcode

P3’5’

5’ 3’

5’ 3’

3’ 5’

3’ 5’

OH

Gel cutter tool（左）， Gel breaker tube（右）

10 ng の RNA 試料からもライブラリー精製できる

高い純度と収量

1 μg の Total RNA からライブラリーを調製した。


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


23

解

析

TGIRT-Ⅲによる Template Switching 活性miRNA や tRNA，snoRNA のような poly（A）tail がない RNA のcDNA ライブラリーを構築する場合，逆転写反応前に共通のアダプター配列を RNA の末端に導入する必要があります（Template switching）。従来は T4 ligase がアダプターの付加に用いられていますが，アダプター付加の段階にバイアスが生じることが問題視されています。TGIRT-Ⅲは逆転写反応の際に，RNA アダプターとDNA プライマーのハイブリッドプライマーを用いることにより，別途 RNA アダプターを付加する反応を必要とせずに，cDNA の 5’ 末端にアダプターを付加することができます（下図参照）。

①

5’ 3’Blocker

RNA/DNA hybrid

cDNA

N＝A 25％T 25％C 25％G 25％

adapter

DNAプライマーの 3’側に 1塩基だけヌクレオチドが突出している。

3’

3’ 5’

5’

TGIRT-ⅢTGIRT-Ⅲ

TGIRT-Ⅲ

Target RNA

②

③④

RNA-seq adapter

N DNA primer3’OH

cDNAが合成される。

3’ 5’5’

N

5’5’

N

プライマーの 3’側の突出した1塩基に Target RNAがアニーリングする。

3’

M E M O

アプリケーション例

● 統合的な鎖特異的トランスクリプトーム解析● RNA-seq （エクソソーム由来 RNA，細胞由来 RNA，

血漿中 RNA，細胞外 RNA の解析）● snRNA の網羅的ライブラリー構築● RNA 構造マッピング● 一般的な RT-PCR や qRT-PCR品　　名

メーカー商品コード包装 / 価格（￥）TGIRT-Ⅲ Enzyme

IGX190600 IGX TGIRT10 10 reactions 10 μl / 44,000IGX190610 IGX TGIRT50 50 reactions 50 μl / 139,000


TGIRT Template-Switching RNA-seq Kit, Version 2IGX101900 IGX kTGIRT-10 10 tests 1 kit / 44,000IGX101910 IGX kTGIRT-25 25 tests 1 kit / 123,000

illumina 社の RNA-seq 用に最適化されたキット。キット内容：TGIRT-Ⅲ Enzyme，Primer mix，Reaction buffer，DTT

TGIRT を含む RNA-seq のライブラリー構築用のキットです。

※反応バッファーは添付されていません。別途調製が必要です。

NGS 用 RNA ライブラリーをバイアスなしに構築できる逆転写酵素

TGIRT-Ⅲ


エクソソーム由来 RNA などから，illumina 社の次世代シークエンス（NGS）プラットフォームに対応したライブラリーを作成できます。

エクソソームの膜表面タンパク質を単離するキット

ExoMS Surface Protein Capture Kit


エクソソームから，膜表面タンパク質および膜介在性タンパク質を，迅速に単離するキットです。得られた膜タンパク質は，LC/MS 解析に使用できます。

● 膜タンパク質をビオチン標識した後，磁気ビーズを用いて単離を行います。

● 操作時間：5 時間● 血清・血漿から回収したエクソソーム用のキットと，組織培養

液・体液から回収したエクソソーム用のキットがあります。※キットには磁気スタンドは付属しません。別途ご用意下さい。


ExoMS Surface Protein Capture Kit（Serum/Plasma EVs）SBI EXOMS100A-4 4 reactions 1 kit / 101,000 SBI421000SBI EXOMS101A-8 8 reactions 1 kit / 177,000 SBI421010

ExoMS Surface Protein Capture Kit（Tissue Culture EVs）SBI EXOMS110A-4 4 reactions 1 kit / 101,000 SBI421102SBI EXOMS111A-8 8 reactions 1 kit / 177,000 SBI421110

エクソソームから，総タンパク質を回収するキットです。得られた総タンパク質は LC/MS 解析に使用できます。品　　名

メーカー商品コード包装 / 価格（￥）ExoMS Total Protein Capture Kit （8 reactions）

SBI EXOMS120A-8 1 kit / 72,000 SBI421200キット内容：Purification buffer，Purification resin in the tube，Mass spectrometry gel loading buffer

本製品は，ヒト血清由来の細胞外小胞（EV）から膜タンパク質を単離する際に生じるキャリーオーバーを低減できる。

標準的な単離法

■アポリポタンパク質■フィブロネクチン■IgG■血清アルブミン

本製品

Amount Relative to Identified Proteins (%)

特　長

使用例

従来法では，精製後の試料に膜タンパク質以外のタンパク質（アルブミンや IgG など）の持ち込み（キャリーオーバー）が生じることがあります。本製品は独自のアフィニティレジンを使用することにより，不要なタンパク質の持ち込みを低減させることができます。そのため，今まで見落とされていた少量のバイオマーカーの発見に有用です。

ここがすごい

関連製品

関連製品


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


24

解

析

エクソソームのトラッキングに最適

Exosome Cyto-Tracer


Web に動画あり

エクソソーム膜表面タンパク質（CD9/CD63/CD81）と蛍光分子（GFP/RFP）の融合タンパク質を発現させる製品です。細胞内のエクソソームを蛍光によりモニタリングできます。

●エクソソームの局在や動態，機能解析に最適です。●初代培養細胞，がん細胞，幹細胞などのエクソソームを標識できます。

●トランスフェクションやウイルスへのパッケージングにも使用可能です。初代培養細胞，がん細胞，幹細胞などを用いて，GFP/RFP 融合トレーサータンパク質を安定的に発現する細胞株を構築できます。

●プロモーター：CMV（Cytomegalovirus）●レンチウイルス粒子にパッケージング済みの製品もあります。※製品にトランスフェクション試薬は付属しません。

CD63

エクソソーム

蛍光

特　長


融合タグ蛍　光商品コード包　装価格（￥）

SBI491220CD9

GFP CYTO122-PA-1 10μg 107,000

SBI491230 RFP CYTO123-PA-1 10μg 107,000

SBI491200CD63

GFP CYTO120-PA-1 10μg 107,000

SBI999420 RFP CYTO120R-PA-1 10μg 107,000

SBI999418CD81

GFP CYTO124-PA-1 10μg 107,000

SBI999416 RFP CYTO125-PA-1 10μg 107,000

保存：［メーカー：SBI］

融合タグ蛍　光商品コード包　装価格（￥）

SBI491223CD9

GFP CYTO122-VA-1 2vials 124,000

SBI491233 RFP CYTO123-VA-1 2vials 124,000

SBI491203CD63


SBI491204 RFP CYTO120R-VA-1 2vials 125,000

SBI491240CD81


SBI491250 RFP CYTO125-VA-1 2vials 124,000

Lentivectorフォーマット

レンチウイルス粒子フォーマット＊

Web に，CD63-GFP 発現H9C2細胞（緑色）からDsRed発現内皮細胞（赤色）へエクソソームが輸送される動画があります。

使用例

Cyto-Tracer とはGFP/RFP 融合トレーサータンパク質を発現させるベクターです。Cyto-Tracer を細胞内に導入すれば，化学染色することなく，標的器官を蛍光顕微鏡でリアルタイムに観察できます。※エクソソーム以外のオルガネラ標的用 Cyto-Tracer は Web ページ番号：4541 をご覧下さい。

M E M O

pCT ベクター（Lentivector）

蛍

光

次回につづく ©樹庵じゅあん

＊印の製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用者確認書が必要です。ご注文の際は，Web ページ番

号：65846 に掲載の「ウイルスベクター関連製品ご使用者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法）」および所属組織における安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のウェブサイトをご覧下さい（http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html）。

ご購入時のご注意


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


25

解

析

エクソソームを蛍光標識するキット

ExoGlow EV Labeling Kit


蛍光

mRNA

エクソソーム

①エクソソーム内の mRNA を蛍光標識するキットExoGlow-RNA EV Labeling Kit

●細胞外小胞（EV）内のmRNAを特異的に標識できるRNAプローブを使用します。●キット内容：RNAprobe，Incubationbuffer

蛍光像明視野重ね合わせ像

蛍光強度（A.U.）

左図：ExoGlow-RNAで標識したHEK293T 細胞由来の EVをHEK293T 細胞に添加し，EVの取り込みを観察した。右図：HEK293T 細胞から totalRNAを抽出し，ExoGlow-RNAで標識した。次に，磁気ビーズを使用して，totalRNAからmRNAを除去した。

mRNAに対して特異性の高い標識ができたことが分かる。

蛍光

エクソソーム

③エクソソーム膜を蛍光標識するキットExoGlow-Membrane EV Labeling Kit

●インタクトな細胞外小胞（EV）を特異的に標識できる標識色素を使用します。●キット内容：Labelingdye，Reactionbuffer


ExoGlow-Membrane で標識したHEK293T 細胞由来のEVをHEK293T細胞に添加し，EVの取り込みを観察した。

蛍光

エクソソーム

タンパク質

②エクソソーム内のタンパク質を蛍光標識するキットExoGlow-Protein EV Labeling Kit

●細胞外小胞（EV）に取り込まれると，蛍光を生じる標識色素を使用します。●キット内容：Labelingdye，ExoQuick–TC


ExoGlow-Protein で標識したHEK293T 細胞由来の EV を HEK293T 細胞に添加し，EVの取り込みを観察した。


蛍光標識する対象品　名励起

（nm）蛍光

（nm）推奨する

レーザー波長（nm）商品コード包　装価格（￥）

①mRNA ExoGlow-RNAEVLabelingKit 485 537 488 EXOGR800A-1 1kit 95,000 SBI478000

②タンパク質ExoGlow-ProteinEVLabelingKit（Red） 573 588 561 EXOGP100A-1 1kit 57,000 SBI451000ExoGlow-ProteinEVLabelingKit（Green） 511 525 488 EXOGP300A-1 1kit 57,000 SBI453000ExoGlow-ProteinEVLabelingKit（Blue） 403 454 405 EXOGP400A-1 1kit 57,000 SBI454000

③膜 ExoGlow-MembraneEVLabelingKit 465 635 488 EXOGM600A-1 1kit 57,000 SBI426000

※いずれの製品も，あらかじめ試料からエクソソームを抽出する必要があります。


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


26

解

析

本製品で EV を蛍光標識する利点

蛍光を用いないNTA

すべての粒子が検出される

蛍光標識 EVのみが検出される

蛍光NTA

蛍光標識 EV

タンパク質凝集物などの未標識粒子

Laser

蛍光を用いない従来法 NTA（ナノ粒子トラッキング解析法）では，膜フラグメント，タンパク質凝集物，そのほかのバックグラウンドとなる粒子によるデータも取得してしまいます。インタクトな EV 膜に特異的に結合する‘ExoGlow-NTA Dye’（本製品に付属）で標識した EV を蛍光 NTA で測定すれば，非特異的な結果が排除でき，シグナル／ノイズ比の高いデータを得ることができます。

エクソソームなどの細胞外小胞（EV）の膜内コンポーネントを蛍光標識するキットです。通常のフローサイトメーターによる解析のほかに，イメージングフローサイトメーターを用いた解析にも使用できます。

● キットに含まれる Size reference beads は，生体内粒子と同様の屈折率と散乱パターンを示します。そのため，より正確な粒子径の測定に有用です。

● 膜表面タンパク質に対する蛍光標識抗体と組み合わせた解析も可能です。

● 1 キットあたり，タンパク質量 200～500 μg 相当のエクソソームを 25 回標識できます。

蛍光色素名励起／蛍光（nm）

推奨するレーザー波長

（nm）商品コード

Topaz Blue 403／454 405 EXOF400A-1

Emerald Green 511／525 488 EXOF300A-1

Citrine Yellow 542／556 532 EXOF500A-1

Ruby Red 573／588 561 EXOF100A-1

Garnet Far Red 628／643 633 EXOF200A-1

● ExoFlow-ONE dye● Size reference beads● ExoQuick-TC reagent品　　名

メーカー商品コード包装 / 価格（￥）ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry

SBI EXOF400A-1 Topaz Blue 1 kit / 72,000 SBI434000SBI EXOF300A-1 Emerald Green 1 kit / 72,000 SBI433000SBI EXOF500A-1 Citrine Yellow 1 kit / 72,000 SBI435000SBI EXOF100A-1 Ruby Red 1 kit / 72,000 SBI431000SBI EXOF200A-1 Garnet Far Red 1 kit / 72,000 SBI432000

● Reaction buffer と EV 試料を混合し，インキュベートするだけで標識できます。

● NanoSight（Malvern 社）用のキットと ZetaView®

（Microtrac 社）用のキットがあります。

EV の粒度分布の比較（NanoSight を使用）ExoQuick

Column-based

7.6% EVs

14.3% EVs37.0% EVs

Ultracentrifugation+Wash

蛍光NTANTA

蛍光NTANTA

蛍光NTANTA

Concentration (particle/mL)



Size (nm)

Size (nm) Size (nm)

1.4E+12

1.2E+12

1E+12

8E+11

6E+11

4E+11

2E+11

0

6.00E+07

0.00E+00

1.00E+07

2.00E+07

3.00E+07

4.00E+07

5.00E+07

1.20E+08

0.00E+00

0 900100 200 300 400 500 600 700 800

0 100 200 300 400 500 600 700 800 0 900100 200 300 400 500 600 700 800

2.00E+07

4.00E+07

6.00E+07

8.00E+07

1.00E+08

蛍光を用いない NTA の場合はEV 濃度を大きく見積もりすぎてしまう可能性があります

蛍光

エクソソーム

細胞外小胞の粒子径などのより正確な測定に

ExoGlow-NTA Fluorescent Labeling Kit


エクソソームなどの細胞外小胞（EV）を蛍光標識する製品です。本製品で蛍光標識した EV を，蛍光 NTA で解析することにより，EV の粒子径や粒度分布を，より正確に測定できます。

エクソソームの FCM 用蛍光標識キット

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit



ExoGlow-NTA Fluorescent Labeling KitSBI392000 SBI EXONTA200A-1 for Malvern NanoSight 1 kit / 71,000SBI391100 SBI EXONTA110A-1 for Particle Metrix ZetaView 1 kit / 71,000

使用回数：10 reactions

NanoSight を用いた受託サービスも承ります（p.37 参照）。

特　長

特　長

使用例

キット内容


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


27

解

析

操作目的タンパク質を取り込んだエクソソームを作製する

細胞内

拡大図

XPack

目的

タンパク質

細胞外

● XPackはエクソソーム膜の内側を標的とするペプチド配列です。● �XPackタグを付加させたタンパク質はエクソソーム内に取り込まれます。

目的・�同定したエクソソーム中のタンパク質の�機能解析・�DDS のためのタンパク質の導入

AmpR

pUC ORI

SV40 ORⅠSV40 poly-A

3’ΔLTRWPRE

EF1αMCS

XPack tag

MSCVCMV or

cPPT

RSV 5’LTR

XPackLentivectors

XPAK510PA-1 (CMV)XPAK710PA-1 (MSCV)

MCS5’-XhoⅠBamHⅠNotⅠEcoRⅠNheⅠPstⅠ- 3’

① Lentivector のベクターマップ

＊これらの製品は XPack に含まれません。別途ご用意下さい。製品の詳細はWebをご覧下さい。　PureFection：Webページ番号 4205　pPack�Packaging�Mix：Webページ番号 3267

製品ラインナップ


SBI145100SBI147100SBI145300SBI147300SBI145310SBI145320SBI147320

SBI145302SBI147301

SBI145322SBI147321

SBI145301

SBI145321

エクソソームに�取り込ませるもの

① Lentivector②レンチウイルス粒子＊ ③安定細胞株HEK293保存：　保存：　

商品コード包装／価格（￥）商品コード包装／価格（￥）商品コード包装／価格（￥）

目的タンパク質CMV XPAK510PA-1 10�μg�/�126,000

－－－－－－MSCV XPAK710PA-1 10�μg�/�126,000

GFPCMV XPAK530PA-1 10�μg�/�131,000 CMV XPAK530VA-1 1�vial�/�131,000 CMV XPAK530CL-1 1�vial�/�227,000MSCV XPAK730PA-1 10�μg�/�131,000 MSCV XPAK730VA-1 1�vial�/�131,000

RFP CMV XPAK531PA-1 10�μg�/�131,000 －－－－－－

LuciferaseCMV XPAK532PA-1 10�μg�/�131,000 CMV XPAK532VA-1 1�vial�/�131,000 CMV XPAK532CL-1 1�vial�/�227,000MSCV XPAK732PA-1 10�μg�/�131,000 MSCV XPAK732VA-1 1�vial�/�131,000

�CMVプロモーター：ほとんどの細胞株用　　MSCVプロモーター：造血細胞／幹細胞用

pPACKPackaging Mix＊

293TNProducer Cells

トランスフェクション効率が低い細胞ではレンチウイルス粒子でのトランスダクションがお勧めです

②ウイルス粒子

③エクソソームを産生する細胞株

①Lentivector

Lentivector

（p.29 参照）

Pseudoviral Particles

Concentrate Virus

PEG─ ＊itウイルス濃縮試薬

Cell CultureMedium ContainingViral Particles

トランスフェクション試薬PureFection＊

＊印の製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用者確認書が必要です。ご注文の際は，Web ページ番号：65846 に掲載の「ウイルスベクター関連製品ご使用者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担当

者にお渡し下さい。なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法）」および所属組織における安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のウェブサイトをご覧下さい。http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html

ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意

目的タンパク質を内包したエクソソームを産生するシステム

XPack Protein Packaging System


製品フォーマット（いずれかをお選び下さい）�

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi news試薬 TEL 03- 5684-1620 FAX 03-5684- 1775

[email protected]


28

解

析

XPack-GFP をエクソソームに取り込ませた例使用した製品：Lentivector（#XPAK530PA-1）エクソソームに取り込ませたもの：XPack-GFPエクソソームを産生させた細胞：HEK293 細胞

A：HEK293 細胞の蛍光顕微鏡観察像B：�HEK293 細胞からエクソソームを回収・ウェスタンブロット解析C：BのエクソソームをHEK293 細胞に取り込ませた

XPack-GFP localizationpattern during packing

XPack exosome Western blotControlexosomes

XPack-GFPexosomes

CETP

GFP

Target cell delivery of XPack-GFP

Fluorescence target cell images Target cell lysate Western blots+ Controlexosomes

+ Untagged GFP exosome

+ XPack-tagGFP exosomes

GAPDH

GFP

A

C

B

XPack-Luciferase をエクソソームに取り込ませた例使用した製品：Lentivector（#XPAK532PA-1）エクソソームに取り込ませたもの：XPack-Luciferaseエクソソームを産生させた細胞：HEK293 細胞

A：回収したエクソソームにおけるルシフェラーゼ活性B：Aのエクソソームを取り込ませたHEK293 細胞におけるルシフェラーゼ活性

任意のタンパク質（細胞周期阻害因子 CDKN1B）をエクソソームに取り込ませた例

エクソソームに取り込ませたもの：XPack-CDKN1Bエクソソームを産生させた細胞：HEK293 細胞

XPack-CDKN1B を内包したエクソソームをHEK293 細胞に添加した。エクソソームを取り込んだ細胞において，細胞増殖率が低下した。

XPack-Luciferaseexosome luminescence

Luminescence of target recipient cellstreated with XPack-Luc exosomes

Controlexosomes

XPack-Lucexosomes

Untreatedcells

Cells + HEKexosomes

Cells + XPack-Lucexosomes

Luminescence (RLU)

Luminescence (RLU) Control + XPack-Luc

A B

■ HEK293 Exosomes ■ XPack-CDKN1B Exosomes

細胞増殖率（MTTアッセイ）

5μg Exosomes 50μg Exosomes 100μg Exosomes

1

0.8

0.6

0.4

0.2

0

使用例�

簡便・高効率なウイルス濃縮試薬PEG-it・�レンチウイルスやレトロウイルスのポリエチレングリコール（PEG）沈殿による濃縮を簡便に行える試薬です。・�濃縮したレンチウイルスを，凍結融解ダメージから保護します。


Virus Precipitation Solution （5×）, PEG-it サンプルSBI LV810A-1 100�ml�/ 57,000 SBI681010SBI LV825A-1 250�ml�/ 123,000 SBI682510

本製品を用い，MSCV-GFP-T2A-RFP 発現カセットをパッケージングしたウイルスを濃縮した。濃縮したウイルス粒子を1～4回凍結融解し，HepG2細胞に導入した。本製品を用いて濃縮したウイルス粒子は，複数回の凍結融解を行っても，細胞への導入効率に大きな影響を与えていないことが分かる。

ウイルス導入細胞の蛍光観察像

ウイルス力価の測定結果

Phase

RFP

GFP

1st Thaw 2nd Thaw 3rd Thaw 4th Thaw

1.00E+001.00E+011.00E+021.00E+031.00E+041.00E+051.00E+061.00E+071.00E+081.00E+091.00E+10

HepG2 1stthaw（0.2）

HepG2 2ndthaw（0.2）

HepG2 3rdthaw（0.2）

HEpG2 4ththaw（0.2）

1.74E＋09 1.76E＋09 1.13E＋09 1.04E＋09

ウイルス力価（IFU/ml）

Titer

HEPG2

ウイルス産生細胞ウイルス粒子を含む培養上清

細胞に導入可能な濃縮されたウイルス

細胞に導入

PEG-it

操作方法概略�

使用例�

サンプル �マークの製品は，無料サンプルのご用意があります。ご希望の方は当社テクニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。

サンプルあり

�

�Web ページ番号

検索3160

470

使

用文献多数！

こちらもオススメ

エクソソーム導入効率が UP!細胞への

EV-Entry System for Exosome Delivery詳細は p.32 をご覧下さい。


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


29

解

析

操作エクソソームにmiRNAを取り込ませる

RNA XMotif

製品は RNAそのものまたはレンチベクター

エクソソーム

● �XMotifはエクソソームに取り込まれる small RNAから同定された配列です。

● �XMotifと連結させたRNAは，エクソソーム内に取り込まれます。

目的・同定したエクソソームmiRNAの機能を解析・DDSのための核酸分子を導入・エクソソーム受容細胞にRNAi を起こす

保存： � ［メーカー：SBI］

RNAの種類商品コード包　装価格（￥）anti-miRNA-1-3p AXMIR-1 10�tests 66,000 SBI998392

anti-miRNA-21-5p AXMIR-21 10�tests 66,000 SBI998391

anti-miRNA-29a-3p AXMIR-29a 10�tests 66,000 SBI998390






anti-miRNA-125b-5p AXMIR-125b 10�tests 66,000 SBI998384





anti-miRNA-200c-3p AXMIR-200c 10�tests 66,000 SBI998379

anti-miRNA-203a-3p AXMIR-203 10�tests 66,000 SBI998378


anti-miRNA-219a-5p AXMIR-219 10�tests 66,000 SBI998376





anti-miRNA-let7a-5p AXMIR-let7a 10�tests 66,000 SBI998393

保存： � ［メーカー：SBI］

RNAの種類商品コード包　装価格（￥）miRNA-1-3p XMIR-1 10�tests 66,000 SBI998369

miRNA-10a-5p XMIR-10a 10�tests 66,000 SBI998314

miRNA-21-5p XMIR-21 10�tests 66,000 SBI998354







miRNA-125b-5p XMIR-125b 10�tests 66,000 SBI998362






miRNA-200c-3p XMIR-200c 10�tests 66,000 SBI998357

miRNA-203a-3p XMIR-203 10�tests 66,000 SBI998356


miRNA-219a-5p XMIR-219 10�tests 66,000 SBI998353






miRNA-let7a-5p XMIR-let7a 10�tests 66,000 SBI998370

Texas-Red XMIR-POS 10�tests 66,000 SBI998371

ポジティブコントロールとしてお使いいただけます

取り込ませるRNA 製品フォーマット製品のシリーズ名miRNA RNA�oligo XMIR

アンチセンスmiRNA RNA�oligo AXMIRmiRNA Lentivector XMIRXpress

＊これらの製品はXMIRXpress に含まれません。別途，ご用意下さい。製品の詳細はWebをご覧下さい。　PureFection：Webページ番号 4205　pPack�Packaging�Mix：Webページ番号 3267

①RNA oligo

RNA oligo をトランスフェクションする

②Lentivector

Lentivector

（p.29 参照）

Pseudoviral Particles

Concentrate Virus

pPACKPackaging Mix＊

トランスフェクション試薬PureFection＊

293TNProducer Cells

PEG─ ＊itウイルス濃縮試薬

Cell CultureMedium ContainingViral Particles

目的の実験に使用する

エクソソームの回収miRNAを取り込んだ

エクソソームが産生される

目的の実験に使用する

RNAを取り込んだエクソソーム

トランスフェクション効率が低い細胞ではレンチウイルス粒子でのトランスダクションがお勧めです

エクソソームに miRNA を導入するシステム

XMIR Exosome miRNA Packaging System



XMIR の製品ラインナップ RNA oligo

AXMIR の製品ラインナップ RNA oligo


[email protected]


30

解

析


RNAの種類商品コード包　装価格（￥）SBI998346 miRNA-1-3p XMIRXP-1 10 μg 106,000SBI998311 miRNA-10a-5p XMIRXP-10a 10 μg 106,000SBI998345 miRNA-21-5p XMIRXP-21 10 μg 106,000SBI998344 miRNA-29a-3p XMIRXP-29a 10 μg 106,000SBI998319 miRNA-29b-3p XMIRXP-29b 10 μg 106,000SBI998343 miRNA-31-5p XMIRXP-31 10 μg 106,000SBI998342 miRNA-34a-5p XMIRXP-34a 10 μg 106,000SBI998341 miRNA-122-5p XMIRXP-122 10 μg 106,000SBI998340 miRNA-124a-3p XMIRXP-124a 10 μg 106,000SBI998339 miRNA-125a-5p XMIRXP-125a 10 μg 106,000SBI998338 miRNA-125b-5p XMIRXP-125b 10 μg 106,000SBI998310 miRNA-127-3p XMIRXP-127 10 μg 106,000SBI998337 miRNA-145-5p XMIRXP-145 10 μg 106,000SBI998336 miRNA-146a-5p XMIRXP-146a 10 μg 106,000SBI998335 miRNA-150-5p XMIRXP-150 10 μg 106,000SBI998334 miRNA-155-5p XMIRXP-155 10 μg 106,000SBI998333 miRNA-200c-3p XMIRXP-200c 10 μg 106,000SBI998332 miRNA-203a-3p XMIRXP-203 10 μg 106,000SBI998331 miRNA-205-5p XMIRXP-205 10 μg 106,000SBI998330 miRNA-219a-5p XMIRXP-219 10 μg 106,000SBI998329 miRNA-221-3p XMIRXP-221 10 μg 106,000SBI998328 miRNA-222-3p XMIRXP-222 10 μg 106,000SBI998327 miRNA-223-3p XMIRXP-223 10 μg 106,000SBI998326 miRNA-224-5p XMIRXP-224 10 μg 106,000SBI998309 miRNA-486-5p XMIRXP-486 10 μg 106,000SBI998347 miRNA-let7a-5p XMIRXP-let7a 10 μg 106,000

XMIRXpress の製品ラインナップ Lentivector

● 任意の RNA をエクソソームに取り込ませたい場合は，クローニングベクター（#XMIRXP-Vect）をご使用下さい。

● 特定の RNA をターゲティングしない，コントロール用ベクター（#XMIRXP-NT）もあります。



SBI998348 XMIRXpress Cloning Lentivector with XMotif XMIRXP-Vect 10 tests 106,000

SBI998308XMIRXpress Lentivector Non-targeting miRNA with XMotif

XMIRXP-NT 10 μg 106,000

#XMIR-21：miRNA-21-5p＋XMotif の RNA オリゴ#AXMIR-21：anti-miRNA-21-5p＋XMotif の RNA オリゴ

#XMIR-21 または #AXMIR-21 を取り込ませたエクソソームを HEK293 細胞に添加した。#XMIR-21 により PDCD4 のタンパク質量が減少し，#AXMIR-21 により PDCD4 のタンパク質量が増加した。

HEK293 細胞にポジティブコントロール用の RNA オリゴ #XMIR-POS（Texas-Red＋XMotif）をトランスフェクションし，産生したエクソソームを回収した。このエクソソームを HEK293 細胞に添加し，4 時間後に蛍光顕微鏡により観察した。

#XMIR-1：miRNA-1-3p＋XMotif の RNA オリゴ#XMIR-122：miRNA-122-5p＋XMotif の RNA オリゴMEF2A：miR-1 の標的遺伝子RIMS1：miR-122 の標的遺伝子

#XMIR-1 または #XMIR-122 を取り込ませたエクソソームを，ルシフェラーゼ遺伝子の3’UTR に各 miRNA の標的遺伝子を組み込んだ HEK293 レポーター細胞に添加した。その後，ルシフェラーゼアッセイを行った。エクソソームの取り込みにより，ルシフェラーゼ活性が下方制御された。

Luciferase Activity in Target Cells

Untreated HEK293

HEK293＋NT Exos

HEK293＋

XMIR-21 Exos

HEK293＋

AXMIR-21 Exos

UntreatedHEK293

HEK293＋NT Exos

HEK293＋XMIR-21 Exos

HEK293＋AXMIR-21 Exos

Densitometric analysis of western blot

使用例

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi news試薬　　TEL 03 -5684 -1620　

FAX 03 -5684 -1775　

reagent@funako

shi.co.jp


31

解

析

細胞へのエクソソーム導入効率を向上させ，さらにエクソソームから細胞質中への積み荷（RNA やタンパク質）の放出も増加させます。


EV-Entry SystemSBI EVEN105A-1 5 tests / 40,000 SBI421051SBI EVEN110A-1 10 tests / 76,000 SBI421101

エクソソームを細胞に添加した例（エクソソーム添加後 18 時間）

エクソソームの積み荷：内在性タンパク質（ExoGlow-Protein Green でエクソソーム内タンパク質を蛍光標識済み）

受容細胞：HEK293 細胞

コントロールと比べ，本製品を使用したほうが，エクソソームの取り込みも積み荷の放出も多いことが分かる。

Luciferse タンパク質を導入したエクソソームを細胞に添加した例（エクソソーム添加後 18 時間）

エクソソーム産生細胞：HEK293 細胞エクソソームの積み荷：XPack-Luciferase（p.28 参照）受容細胞：HEK293 細胞

コントロールと比べ，本製品を使用したほうが，受容細胞におけるルシフェラーゼ活性が高いことが分かる。

核酸を導入したエクソソームを細胞に添加した例（エクソソーム添加後 18 時間）

エクソソーム産生細胞：HEK293 細胞エクソソームの積み荷：Texas Red 標識 siRNA（#XMIR-POS，p.30 参照）受容細胞：HEK293 細胞

コントロールと比べ，本製品を使用したほうが，エクソソームの取り込みが多いことが分かる。

● EV-Entry reagent A● EV-Entry reagent B

エクソソーム受容細胞のエクソソームの取り込みを促進

エクソソーム

EV-Entry

取り込まれたエクソソームから積み荷（RNAやタンパク質）が放出されるのを促進

エクソソーム受容細胞

細胞外細胞内

2 種類の試薬とエクソソーム懸濁液を混合し，室温下で 45 分間インキュベートさせた後，細胞に添加します。

Untreated + EV-Entry Reagent

Exosomes alone Exosomes + EV-Entry

Label Exosomes with ExoGlow-Protein Green

XPack-Luc untreatedexosomes

Luciferase activity in recipient cells

0

2

4

6

8

10

12

XPack-Luc exosomes+ EV-Entry

Untreated + EV-Entry Reagent

Exosomes alone Exosomes + EV-Entry

Efficiently deliver RNAs torecipient cells using EV-Entry

Exo-Fect Exosomes with TexasRed labeled siRNA

細胞へのエクソソーム導入効率を向上させる試薬

EV-Entry System for Exosome Delivery


使用例

キット内容


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


32

解

析

操作目的タンパク質（リガンド）をエクソソーム表面に提示させる

XStamp

目的

タンパク質

細胞内

拡大図

細胞外エクソソーム

● �XStampはエクソソーム表面に局在するタンパク質MFG-E8 のC1C2ドメインです。

● �XStampタグと融合させたタンパク質（リガンド）はエクソソーム表面に提示されます。

MFG-E8

タンパク質やRNA

CD9，CD63，CD81など

MFG-E8 はエクソソーム表面に局在する

目的エクソソームを標的細胞に効率よく輸送させる

細胞外細胞内

エクソソーム

リガンドレセプター

エクソソームを受容する細胞（標的細胞）

Ligand MCS XStampMSCV

EF1

pA

PuroReplicationAmpR 3’LTR

SS

5’LTR

#XSTP710PA-1

①任意の配列を組み込める Lentivector（#XSTP710PA-1）

リガンドの種類標的となる細胞商品コードMotilin 消化管細胞 XSTP720PA-1NCAM 神経系細胞 XSTP721PA-1BHP1 脳細胞 XSTP722PA-1GE11 がん細胞 XSTP723PA-1Her2 乳がん細胞 XSTP724PA-1

CD40L/CD154 抗原提示細胞 XSTP725PA-1IL-2 免疫細胞 XSTP726PA-1

②特定のリガンドを発現させるための Lentivector

XStampと Exo-Fect を組み合わせて使用した例使用した製品：#XSTP720PA-1エクソソーム表面に提示させたリガンド：MotilinMotilin の標的：Motilin レセプターを発現している細胞（消化管細胞）エクソソームを産生させた細胞：HEK293 細胞

Motilin 提示エクソソームに，トランスフェクション試薬 Exo-Fect を用いて Texas-Red 標識 siRNA を導入した後，各細胞に添加した。細胞におけるエクソソームの取り込みを，蛍光により確認した。MDA-MB-231 細胞と比べ，HT-29 細胞においてエクソソームの取り込みがより多いことが観察された。

XStampと XPack（p.28 参照）を組み合わせて使用した例使用した製品： #XSTP721PA-1（提示リガンド：NCAM）および #XPAK530PA-1（内包：GFP） #XSTP722PA-1（提示リガンド：BHP1）および #XPAK530PA-1（内包：GFP）エクソソームを産生させた細胞：マウス間葉系幹細胞

XStamp レンチベクターと GFP パッケージング用 XPack レンチベクターをマウス間葉系幹細胞にトランスフェクションし，リガンドを提示しかつGFP を取り込ませたエクソソームを産生させた。このエクソソームをマウス神経芽細胞腫Neuro�2a 細胞に添加し，エクソソームの取り込みを蛍光により確認した。


XStamp Cloning and Expression LentivectorSBI XSTP710PA-1 10�μg�/ 126,000 SBI277100

XStamp Exsosome Targeting VectorSBI XSTP720PA-1 Motilin 10�μg�/ 131,000 SBI277200SBI XSTP721PA-1 NCAM 10�μg�/ 131,000 SBI277210SBI XSTP722PA-1 BHP1 10�μg�/ 131,000 SBI277220SBI XSTP723PA-1 GE11 10�μg�/ 131,000 SBI277230SBI XSTP724PA-1 Her2 10�μg�/ 131,000 SBI277240SBI XSTP725PA-1 CD40L/CD154 10�μg�/ 131,000 SBI277250SBI XSTP726PA-1 IL-2 10�μg�/ 131,000 SBI277260

（Motilin レセプターを発現していない）（Motilin レセプターを発現している）

目的タンパク質をエクソソーム表面に提示させるシステム

XStamp Exosome Targeting System



使用例�


薬　

　TEL 03 -5684 -1620　

FAX

03 -5684 -1775　 reagent@

funakoshi.co

.jp


33

解

析

in vivo でエクソソームを検出するキット

ExoGlow-Vivo EV Labeling Kit（Near IR）NEW


エクソソームなどの細胞外小胞（EV）を蛍光標識して実験動物に導入し，in vivo における生体内分布や動態を観察するキットです。※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

特　長�●�本製品は近赤外（NIR）で蛍光を放出する非親油性色素を用い，これまで自家蛍光の影響で高くなるバックグラウンドにより困難だった，細胞や実験動物の生体内 EV を可視化できます。

●�ExoQuick 製品（p.8 参照），超遠心分離およびカラムにより単離したエクソソームを使用できます。

●�標識に要する時間は 1時間以内です。●�測定波長：励起 784�nm／蛍光 806�nm


ExoGlow-Vivo EV Labeling Kit （Near IR）, 12 reactions NEW

SBI EXOGV900A-1 1�kit�/ 95,000 SBI419000キット内容：Labeling�dye，ExoQuick-TC（p.8 参照）

※Qubit（Thermo�Fisher�Scientific 社）または BCA�assay で定量した 250�μg のタンパク質を含む試料と，DMSO�25�µl に溶解したLabeling�dye�2�µl を混合した場合，12回標識が可能です。

使用例�

生体内での EVトラッキング，EVの生体内分布，�動態研究が可能

A：�ExoQuick-TC（p.8 参照）を用いて単離した HEK293 細胞由来の EV を Labeling�dye で標識し，出生後4日目のC57BL6マウスに浅測頭静脈を介して静脈内投与した。

B：�A の処理から 24 時間後に解剖したところ，肝臓および腎臓において標識 EV の選択的な蓄積が見られた。

使用機器：IVIS�In�Vivo�Imaging�System（PerkinElmer 社）画像提供：�Gareth�Willis,�Ph.D.,�Harvard�Medical�School�and�Boston�Children’s�

Hospital.

その他の適用・改変 EVの標的特異性の評価・臓器移動研究における EVの追跡・�EV 分離法の違いによる，生体内分布や EV性能評価に不可欠なパラメーターへの影響の比較・薬剤などの運搬体としての EVの ADME研究

低いバックグラウンド

A：�ヒト間葉系幹細胞由来の EVを Labeling�dye で標識し，未結合色素を超遠心分離および洗浄によって除去した。標識 EV を，出生 4日後の FVB マウスに浅測頭静脈を介して静脈内投与した。Control には洗浄段階の上清（遊離色素）を用いた。

B：�A の処理から 24 時間後に解剖したところ，標識 EV が特定の臓器に優先的に蓄積している一方で，遊離色素由来のバックグラウンドが極めて低いことが確認された。

使用機器：IVIS�In�Vivo�Imaging�System（PerkinElmer 社）画像提供：�Gareth�Willis,�Ph.D.,�Harvard�Medical�School�and�Boston�Children’s�

Hospital.


薬　

　TE

L 03

- 568

4-16

20　

FAX

03-

5684

- 177

5　 r

eage

nt@

funa

kosh

i.co

.jp


34

解

析

●エクソソームのスタンダード●機能分析●バイオマーカーの評価


細胞株商品コード包　装価格（￥）

SBI071000 MCF-7 EXOP-100A-1 50μg 71,000

SBI071050 MDA-MB-231 EXOP-105A-1 50μg 71,000

SBI071150 PC-3 EXOP-115A-1 50μg 71,000

SBI071200 A549 EXOP-120A-1 50μg 71,000

SBI071250 H841 EXOP-125A-1 50μg 71,000

SBI071300 H196 EXOP-130A-1 50μg 71,000

SBI071350 DMS114 EXOP-135A-1 50μg 71,000

■がん細胞株由来エクソソーム



SBI071400 PCS-500-011 EXOP-140A-1 50μg 91,000

SBI071450 PCS-500-012 EXOP-145A-1 50μg 91,000

■間葉系幹細胞株由来エクソソーム



SBI071100 HEK293 EXOP-110A-1 50μg 71,000

■汎用的な細胞株由来エクソソーム


試　料商品コード包　装価格（￥）

SBI075000 血清 EXOP-500A-1 25μg 63,000

SBI075100 唾液 EXOP-510A-1 25μg 63,000

SBI075200 尿 EXOP-520A-1 25μg 72,000

SBI075300 脳脊髄液 EXOP-530A-1 25μg 91,000

■正常ヒト生体試料（プール）由来エクソソーム



SBI071500 BC-3 EXOP-150A-1 50μg 91,000

SBI071550 JurkatCloneE6-1 EXOP-155A-1 50μg 91,000

SBI071600 JM1 EXOP-160A-1 50μg 91,000

SBI071650 RAWS264.7 EXOP-165A-1 50μg 91,000

SBI072000 JAWSⅡ EXOP-200A-1 50μg 91,000

■免疫関連細胞株由来エクソソーム

包装：50μg（＞1×106FrozenExosomes）




精製エクソソーム


Shaving

Complete

Intact exosomes

Intact exosomesComplete exosomepeptide library

Shaved exosomesShaved exosomepeptide library

エクソソームの膜タンパク質・総タンパク質の質量分析サービス

Exosome Proteomics Service


エクソソームのタンパク質・ペプチド（Complete）のバイオマーカー探索に有用なMS分析受託サービスです。

使用例

精製後のエクソソームは，ウェスタンブロッティングによりエクソソームマーカーを確認済みです。また，NanoSight（Malvern 社）により粒度分布を確認済みです。

●本サービスには，お預かりした試料からエクソソームを精製するステップも含まれます。

●ヒト，マウス，ラットの試料にて多数の実績があります。その他の生物種由来の試料については，お問い合わせ下さい。

●Rawデータと解析結果をお届けします。

詳細は当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。※別途，輸送費を申し受けます。


エクソソームタンパク質の含有量は，由来する細胞の種類によって異なります。一般的なエクソソームにおいては，上図のような表層および内部共通タンパク質の観察やMSデータによる同定が可能です。

mRNAHSP90

CD9

Tetraspanins

CD63

CD81

CD82

Signaltransduction

HSP70

MHCIImmunoregulatormolecules

Membranetrafficking

Enzymes

Annexins

Rabs

Lipid rafts

Cholesterol

Flotillins

MHCII

CD86

Alix

EGFR

EBV LMP1EBV LMP2AHSV gBHIV NefGag

Vaccina glycoproteinsHCV glycoproteinsEBV gp350

CDC42ARF1Pl3K

MUC1G proteins

B catenin

Syntenin14-3-3

TSG101ClathrinUbiquitin galectin9

HSP60

Heat shockproteins

MVB biogenesis

Viral proteins

GAPDHEnolasePKATPasePGK1GAPDH

HSC70

Actin

EzrinVimentin

Moesin

TalinMyosinPerlecanKeratins Cofilin

TubulinsRadixin

Fibronectin

Cytoskeletal proteins

Advillin

miRNA

RNAs

vmiRNA

試料＊必要試料量

血清，血漿，腹水 0.5～1ml

細胞培養上清（無血清），尿，脳脊髄液 5～10ml

＊その他の試料については，お問い合わせ下さい。

特　長

ご提供いただく試料の目安

ご注文方法／価格

エクソソームから切り取った表面（Shaving）および全てのペプチドライブラリー（Complete）の模式図

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi news試薬　　TEL 03 -5684 -1620　

FAX 03 -5684 -1775　

reagent@funako

shi.co.jp

受託　　TEL 03-5684-1645　

FAX 03-5684-6539　

jutaku@funako

shi.co.jp


35

解

析

受

託

illumina 社の次世代シークエンサー（MiSeq / HiSeq）を利用し，エクソソーム RNA 関連バイオマーカーの同定を行う受託サービスです。

●血清，尿などに含まれる新規エクソソーム RNA の同定，モデル細胞システムや動物体液に含まれるエクソソーム中のバイオマーカー存在分布などの分析を，迅速に行います。

●本サービスにより得られたデータは，クラウドベースのUCSCGenomeBrowser でご覧いただけます。

●試料を送付していただくだけで，解析まで完了したデータを納品いたします。

試　料必要量

血清

500μl～1ml血漿

腹水

試　料必要量

尿

5ml～10ml髄液

細胞培養液（無血清）

※上記以外の試料については，お問い合わせ下さい。

詳細は当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。［メーカー：SBI］

Antisense to repeat elementsAntisense to ncRNAsRefSeq intronsAntisense to intronsSINEsscaRNAUnannotatedTandem repeatsrRNAmiRNAlncRNAtRNA-likeRfam ncRNA

Serum Exosomes

Send your sample

Isolate exosomes

Purify small RNAs

Build and QC the library

Perform NGS

QC the reads

Deliver data

1.解析したい試料を SBI 社へお送り下さい

2.SBI 社が解析を行いデータを納品します

エクソソーム RNA の次世代シークエンス解析サービス

Exo-NGS〈Exosomal RNA Sequencing Service〉


特　長解析データ例

お客様にご提供いただく試料の目安サービスのワークフロー


解析データの品質の高さに自信があります

他社SBI

少量のRNAからNGSを行い品質の高いデータを得るためには，ライブラリー調製が重要です。標準的な方法で調製した RNA ライブラリーは，アダプターダイマーのバンドとエクソソーム RNA のバンドとのオーバーラップが生じ，アダプター配列の混入が起きやすいという問題がありました。SBI 社は独自の手法で，アダプター配列とエクソソーム RNAとを分離します（上図）。そのため，より少ない RNA 試料からより多くのシークエンスリードを得ることができ，有用なデータの割合を高めることが可能になります（左図）。

他社 SBI 他社

132～156 132144

SBI

ここがすごい

フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news受託　　TEL 03-5684-1645　FAX 03-5684-6539　

[email protected]


36

受

託

エクソソームの粒子径などを分析NanoSight エクソソーム分析

受託サービス


●NTA または蛍光NTAのいずれかをお選びいただきます。●測定可能な生体試料：血清，尿，細胞培養上清（無血清），脳脊髄液など＊

＊その他の試料についてはお問い合わせ下さい。

エクソソーム粒子の撮影ブラウン運動で動いているエクソソーム粒子をレーザー光散乱法で撮影した。

生体試料または単離・精製済みのエクソソームについて，NTA（ナノ粒子トラッキング解析）または蛍光 NTAを行います。※蛍光NTAについてはp.27 の ExoGlow-NTAをご覧下さい。

詳細は当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。［メーカー：SBI］

特　長


納　品

エクソソーム糖鎖解析受託サービス


エクソソームに存在する糖成分を解析する受託サービスです。

●エクソソームを構成する単糖の解析●エクソソームに存在する糖鎖の解析※解析に使用するエクソソームは，「お客様ご自身に抽出いただく場合」と「エクソソーム抽出を医化学創薬株式会社で実施する場合」の 2通りから選択可能です。医化学創薬株式会社で実施する場合は，市販キット（SystemBiosciences 社）を使用いたします。

詳細は当社受託・特注品担当までお問合せ下さい。［メーカー：MCP］

受託サービス内容


●解析データ：平均粒子経，モード経，濃度の解析データ●撮影動画（wmvfile）


メーカーインタビュー Vol.34：

System Biosciences（SBI）社SystemBiosciences 社は，エクソソーム研究やゲノム編集などに関するユニークで革新的なツールと受託サービスを提供しているメーカーです。今回は，エクソソーム研究に革新をもたらしたExoQuickシリーズについてお話を伺いました。

2010 年，私たちはエクソソームを回収するポリマー試薬ExoQuickを開発しました。当時，エクソソーム研究はまだ発展初期で，エクソソームの回収は困難でした。私たちはその状況を打開すべく，「エクソソームをより簡単な操作で回収する」というビジョンを掲げて，ExoQuickを開発・発売しました。ExoQuick（および ExoQuick-TC）は，現在に至るまでに 800 を超える文献で使用され，私たちはエクソソーム研究に大きく貢献してきたと自負しています。

ExoQuick発表後，お客様から「エクソソーム中の因子を高感度に検出するアプリケーション（例えばNGS，MS解析）に使用できる，高純度なエクソソームを回収したい」というリクエストを，毎日のように受けていました。そこで「ExoQuickと同等のエクソソーム収量」「より純度の高いエクソソームの回収」「シンプルな操作性」をすべてかなえる ExoQuick ULTRA/ExoQuick-TC ULTRAの発表に至りました。私たちの開発した ExoQuick ULTRAシリーズは，夾雑タンパク質を低減することができるため，得られたエクソソームはNGS，MS解析にお勧めです。

エクソソーム研究におけるイノベーターの 1 人として，私たちはこれからもエクソソーム研究を推進するための革新的ツールの開発に尽力し続けます。

フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news受託 TEL 03-5684-1645

FAX 03-5684-6539

jutaku@funako

shi.co.jp


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受

託

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フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi news


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フナコシでは，認証済み細胞株や微生物などの高品質な生物学的材料を幅広く取り揃える，ATCC® の製品を取り扱っています。

詳細はp.40 をご覧下さい。

使用例　各種がん細胞から回収したエクソソームのがん研究への適用


PERMEATE

RETANTATE50 KDa

TSG101

PC-3HCT116

MDA-MB-231

A 549U87 MGLNCaP

Flotillin-1

CD9

CD81

CD6330 KDa

LF cells + MDA-MB-231 Exosomes

LF cells + HCT 116 Exosomes

LF cells + PC-3 Exosomes

LF cells + LF Exosomes

A B

Number of colonies

LF + MDA-MB-231 Exo

LF + PC3 Exo

LF + HCT 116 Exo

LF + LF Exo

HCT 116 + HCT 116 Exo

HCT 116 cells only

LF cells only

150

100

50

0

＊＊＊＊＊＊

＊＊＊

25114

1832

3778

25

113

1836

3754

25

2342

7603

15

［FU］

10

5

0

［FU］

0

2

4

8

6

12

10

［FU］

0

2

4

8

6

12

14

10

18

16

14

25 200 500 1000 2000 4000 ［nt］ 25 200 500 1000 2000 4000 ［nt］ 25 200 500 1000 2000 4000 ［nt］

PC-3 MDA-MB-231 HCT-116

Tangential flow filtration（TFF）を用いて，細胞培養液からエクソソームを大量に回収した。

精製エクソソーム（タンパク質 10 μg 相当）をウェスタンブロットにより解析した。さまざまながん細胞株から精製したエクソソームは異なるマーカータンパク質を発現していた。

がん細胞由来エクソソームの総RNAのサイズ分布Agilent Bioanalyzer RNA 6000 Pico KitTM を用いて各がん細胞由来のエクソソームに含まれる RNA を解析した。ほとんどのエクソソームは small RNA（20～200 nt）だけでなく，微量の rRNA（1386 および 3754 付近のピーク）も含んでいた。

ヒト初代肺線維芽細胞の足場非依存的な成長アッセイ各細胞がん株から精製したエクソソーム（タンパク質 100 μg/ml 相当）をヒト初代肺線維芽細胞に導入し，軟寒天コロニー形成アッセイを行った。A：クリスタルバイオレット染色した細胞。スケールバー：400 μmB：コロニー形成数。MDA-MB-231，PC-3：＊＊＊p＜0.0006，HCT116：＊＊＊p＜0.0003，LF：p＜0.010参考文献： Siddhartha Paul, et al., Development and characterization of cancer cell line exosomes as reference standards in cancer research.　　　　　Poster presented at: AACR Annual Meeting, 2019, March 29～Apr 3, Atlanta, Georgia.

ATCC® のWebサイトで，使用例についての紹介動画をご覧いただけます！動画の詳細およびその他の使用例についてはフナコシWebをご覧下さい。

フナコシニュース2019年 7月 15日号（No.684）funakoshi newsATCC

®に関して TEL 03-5684-1645

FAX 03-5684-6539 atcc@

funakoshi.co.jp


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ATCC® 製品取扱いのご案内［メーカー：ACC］

ATCC® は，認証済み細胞株や微生物などの高品質な生物学的材料を幅広く取り揃え，提供しています。

細胞株ヒト由来 4,000 種の貴重な細胞株を含め，150以上の異なる動物種の細胞株をご提供します。

ヒト初代細胞高品質な初代細胞を培養に必要な培地，試薬および関連情報とともに提供します。

疾患モデル細胞hTERT 不死化細胞や，CRISPR-Cas9 によるゲノム編集済み細胞など，がんや感染症，遺伝性疾患研究に有用な疾患モデル細胞を提供します。

微生物細菌，ウイルス，酵母，菌類，原生動物，核酸など，世界最大級のコレクションを誇ります。細胞叢スタンダードや合成核酸などのラインナップもあります。

受託サービスATCC® の誇る細胞株／微生物株コレクションおよびこれまで培ってきた専門知識と最新技術を駆使して，お客様の研究のお手伝いをします。

ご依頼方法

1. ATCC® Web サイトまたはフナコシ Web サイトでご希望の製品をお探し下さい。

2. 専用の分譲依頼書または当社 Web サイトのオンラインオーダーフォームでご依頼下さい。

3. ご依頼の内容をフナコシにて確認の上， ATCC® へ手配いたします。

4. 製品をお客様に直送いたします。

詳細は Web へWeb ページ番号

検索68657

ATCC® 製品分譲は初回のご依頼に先立ち，MTA（Material Transfer Agreement）にご同意・ご署名いただくと共に，New Account Application（BSL1・BSL2・BSL3 のいずれか）を提出し，ユーザー登録をしていただく必要がございます（2 回目以降のご依頼時は，フナコシでユーザー登録の有無を確認させていただきます）。※MTA および New Account Application 未提出の場合は分譲をご依頼いただくことはできません。※ご依頼は New Account Application でお名前をご登録いただいた方のみに制限されます。

ご依頼にあたっての注意事項

※ご依頼方法（MTA および New Account Application の提出など）についての詳細は，当社 ATCC® 製品担当（Tel：03-5684-1645，e-mail：[email protected]）までお問い合わせ下さい。

※製品についての詳細は，当社試薬担当（Tel：03-5684-1620，e-mail：reagent ＠ funakoshi.co.jp）までお問い合わせ下さい。

© 2019 American Type Cluture Collection. The ATCC trademark and trade name, and any other trademarks listed in this publication are trademarks owned by the American Type Cluture Collection unless indicated otherwise.


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フナコシニュース 2019 年 7 月 15 日号（No.684）funakoshi newsAT

CC®

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684-

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フナコシ株式会社　〒113-0033　東京都文京区本郷2丁目9番7号https://www.funakoshi.co.jp/　e-mail : info＠funakoshi.co.jp

e-mail : [email protected]

e-mail : reagent＠funakoshi.co.jp試薬に関して : Tel.03-5684-1620　　Fax.03-5684-1775

ATCCに関して : Tel.03-5684-1645　　Fax.03-5684-6539

販売店

※本紙に記載されている価格は，2019年 7月15日現在です。 FUN-6558（ 2019.7, № 684 ）

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