REPUBLIQUE ALGERIENNE DE DEMOCRATIQUE ET POPULAIAREMINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE MOUHEMED KHIDER- BISKRAFACULTE DES SCIENCES EXACTE ET DES SCIENCES DE LA NATURE

ET DE LA VIEDEPARTEMENTDE DE SCIENCE DE LA NATURE

ET DE LA VIE Option: biochimie et biologie moléculaire - Master 1

Module : culture cellulaire

TECHNIQUE DU CLONAGE MOLECULAIRE

Présenté par: - Hattouche Nour el-houda. - Hiouani Samia.

*ANNEE UNIVERSITAIRE 2011/2012*

Sommaire

*Introduction *Mecanisme du clonage -clonage par plasmide. -clonage par phage. *Definition du clonage *Example clonage phagique *Principe du clonage *A quoi sert le clonage *Quelque definitions * l’utilisation du clonage

*Conclusion

Introduction La biotechnologie moderne, fondée sur la manipulation de

l’ADN ,permet de modifier et /ou d’analyser des gènes de

manière spécifique .

Elle permet aussi de les transférer entre des organismes

aussi distincts que des bactéries ,les plantes et les animaux.

Elle se base sur le génie génétique ,qui regroupe les

techniques permettant de manipuler l’ADN in vitro ,on peut

ainsi fabriquer de l’ADN recombinant, une molécules d’ADN

contenant des séquences nucléotidiques provenant d’au moins

deux sources différentes.

Parmi ces techniques , on a la technique de clonage

moléculaire .à quoi sert cette technique ?

Définition Terme issu du grec klôn : rejeton. Le terme clonage est

l'opération qui à partir de cellules isolées, permet d'obtenir

une

lignée (plusieurs cellules similaires appelées clones) dérivant

d'un seul ancêtre.

Lorsque les scientifiques parlent de clonage génétique, ils ne

pensent pas à la reproduction d'un organisme mais plutôt à

celle d'un gènes spécifique. Le clonage génétique est un

élément du génie génétique.

Le principe du clonage:

Le principe du clonage est simple. Il consiste à insérer

un segment d'ADN étranger dans une petite molécule

capable de se répliquer de façon autonome. Ce type de

molécule d'ADN est appelé un vecteur de clonage. Un

vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien.

L'ADN du plasmide est coupé par une enzyme de

restriction et lié in vitro au fragment d'ADN étranger

coupé par la même enzyme de restriction ou une

enzyme qui donne des extrémités compatibles.

Lorsqu'un transformant stable a été obtenu, la

séquence est dite clonée.

quelques definitions :

• Les enzymes de restriction :

Sont une sorte de ciseaux moléculaires

servant à couper l'ADN en des sites bien

précis, Ces enzymes sont des

endonucléases ; elles possèdent donc un

site actif d’hydrolyse de l’ADN, mais aussi

un site de reconnaissance de la séquence

cible, aussi appelée site de restriction

• Notion d’ADN recombinant:

Il s’agit d’un ADN hybride obtenu au

laboratoire par la combinaison de deux ADN

appartenant àdeux espèces diffèrentes.

• Notion de vecteurs :

On appelle vecteur l’ADN dans lequel on

insère le fragement d’ADN à ètudier.l’ADN

insère est appelè insert ou ADN ètranger ou

ADN exogène.cette sèquence nuclèotidique

est capable de s’auto-rèpliquer.

• Notion de clone 

Le clone correspend à un grand nombre de molècules

ou de cellules identiques provenant d’un seul

ancètre(cellule ou molècule).l’opèration qui consiste à

obtenir ce grand nombre de cellules ou de molècules

s’appele le clonage.

• Les banques d’ADN complèmentaire (CADN)

Les ADN complementaires(ou CADN)proviennent des

mARN et donc ne possèdent pas d’intron.Apartir d’un

même type de cellules.on prèpare les mARN totaux de ces

cellules puis les CADN correspondants.ces derniers insèrès

dans des vecteurs constituent une banque de CADN.

• L’ADN ligase :

Sont des enzymes qui sontcapables de reconstituer la

liaisonphosphoester.  

Mecanisme du clonage:

• Isolement de l’ADN à partir des plasmides

des bactéries et de l’ADN de cellules

humaines.

• Action de l’enzyme de restriction.

• Action de la ligase.

• Réintroduction des plasmides dans les

bactéries.

• Identification des plasmides recombinés.

A quoi sert le clonage?

L’utilisation du clonage

Production des vaccins

Déterminant antigénique introduction du gène

correspondant dans les cellules procaryotes ou

eucaryotes protéines vaccinantes.

Exemple: protéine vaccinante contre la rage et

l’hépatite B.

Le gène recombiné provient de l’agent pathogène et

code l’antigène responsable de l’immunisation

protectrice.

Production d’hormones

La synthèse chimique de l’insuline humaine étant

trop chère et classiquement extraite de pancréas de

bovins et porcins.

A partir de 1983, de l’insuline humaine produite

par culture d’Escherichia coli a commencé à être

vendue en pharmacie d’autres hormones ont été

également produit par génie génétique tel que :

l’hormone de croissance, GRF (Growth hormon

Releasing Factor) des expériences ouvrent des

perspectives intéressantes pour l’augmentation de

production laitière bovine en utilisant ce facteur.

Applications :

Par exemple on peut utiliser le

clonage bactérien pour préparer une

sonde moléculaire dans la méthode de

Southern, pour produire certaines

protéines (médicaments, polymérases)

ou encore pour rechercher un gène

dans le génome (clonage positionnel).

ConclusionLe clonage est un mode de reproduction

permettant la copie d'une cellule ou d'un

individu (son clone) à partir de son ADN. Sauf

erreur ou mutation lors du recopiage, le

clone est génétiquement identique à

l'original: il a même ADN.

Dans la nature, certaines espèces non

sexuées comme les bactéries utilise le

clonage pour se reproduire. En laboratoire,

on l'expérimente sur des espèces sexuées.