Biochimie mdicale

L'examen clinique comporte les signes cliniques et les examens complmentaires. Dans l'examen complmentaire: on fait l'examen biochimique (analyses biochimiques et hmolytiques"hmogramme", enzymologie clinique).

Le programme de la biochimie mdicale

1/ les prlvements 2/ les analyses biochimiques 3/ les mthodes de l'analyse biochimique 4/ l'exploration du fonction du foie 5/ l'exploration du rein 6/ le mtabolisme glucidique et les fonctions pancratiques 7/ le pancras exocrine et les fonctions intestinales 8/ l'exploration de l'quilibre hydrominrale 9/ l'exploration de l'quilibre acido-basique 10/ l'quilibre minrale et le parathyrode 11/ l'exploration de la thyrode12/ " " surrnale 13/ l'enzymologie clinique 14/ l'panchement et l'analyses des fluides.

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LES PRELEVEMENTS

Introduction : Le prlvement constitue la premire tape d'une analyse biochimique, la bonne ralisation du prlvement conditionne en grande partie la validit du rsultat. Il faut considrer q'un prlvement doit tre fait pour confirmer un diagnostique,il est donc prcd d'un examen clinique complet. La nature du matriel prlever est dtermin par le type du substance qu l'on cherche doser. Ces substances sont nombreuses, les plus importants sont:- Les produits du mtabolisme: glucose, cratinine, l'ure, acides gras libres, cholestrol, la bilirubine, les corps ctoniques.- Les lectrolytes: Na+, Ca++, K+- Les oligo-lments:zinc, cuivre. - Les hormones: adrnaline, strogne, androgne, - Les enzymes: transaminase, phosphatase Les analyses les plus courantes portent sur le sang, l'urine; le praticien pourra prlever d'autres liquides tel que le lait, le LCR, le liquide d'panchement ainsi que les fragments tissulaires.A- Prlvement du sang:1- le sang: Le prlvement sanguin s'agit habituellement du sang veineux ou du sang capillaire. Le sang artriel n'est que exceptionnellement utilis pour la mesure duPH et gaz du sang.a) Le prlvement veineux : Est le prlvement le plus utilis car est plus facile raliser chez les grandes animaux, la technique habituelle consiste recueillir directement le sang dans untube essai ou un flacon contenant une quantit suffisante d'anticoagulant pour le volume du sang dsir (Chez les bovins: veine jugulaire, caudale, Le chat : larcolte du sang dans la veine jugulaire peut tre difficile cause de la taille des vaisseaux, dans ce cas on peut rcolter un chantillon du sang sur la veine de l'oreille. b) Le sang des capillaires: Peut tre au niveau des extrmits par piques de coussinet plantaire ou de pavillon de l'oreille, il reprsente un mlange du sang artriel et veineux, il convient surtout pour les analyses cytologiques du sang "ralisation d'un frottis pour le dosage rapide par des bandelettes de certains substances tel que l'ure, le glucose ainsi que la ralisation de micro hmatocrite, le taux de l'hmatocrite renseigne surtout en cas d'anmie, dshydratation.

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2- L'utilisation du prlvement sanguin :a) l'influence du jene : De nombreux dosages biochimiques ne sont pas modifis aprs un repas lger par contre le glucose et les lipides totaux sont modifis par ingestion alimentaire, de plus tout repas riche en graisse crant une hyperlipidmie peut gner la ralisation d'un dosage calorimtrique. Le prlvement doit tre effectu sur un animal calme et mentionn par une contention efficace en effet l'excitation, la peur, l'exercice physique modifient certaines valeurs telles que l'acide lactique, le glucose et l'adrnaline. De plus une ponction veineuse difficile sur animal qui se dbatte peut favoriser l'hmolyse par un afflux des thrombocytes"coagulation".b) le choix de srum"sang sans fibrinogne": Il est obtenue en laissant coaguler le sang compltement ou mieux on centrifugele prlvement et des que le caillot commence former " du 15au 30min, selon les espces. Le srum ne contient pas fibrinogne, cette protine participe l'laboration du caillot. Le srum sera essentiellement pour l'lectrophorse, le dosage enzymatique ainsique le dosage de la bilirubine. c) le choix du plasma:Il est obtenu en centrifugeant le sang prlev sur anticoagulant, le caillot ne se forme pas. Le plasma correspond au srum au quel on rajoute le fibrinogne, il est de ce fait prfrentiel au grands nombres d'analyses ex: les hormones, les fibrinognes, glutamine transfrase, phosphatase alcaline, cratine kinase. 3- Le matriel pour recueillir du sang: a) Matriel de la ponction: On utilise soit des seringues en verre ou en plastique usage unique dont la taille est choisie en fonction de volume qui l'on dsire prlever. On utilise une aiguille dont le calibre est dtermin en fonction du vaisseau ponctionner et de la seringue choisie, en effet une aiguille trs fine monte sur une grosse seringue entrane une aspiration difficile et par la suite une hmolyse de sang prlev. Soit: systme de tube sous vide est plus utilis chez les grands animauxDans tous les cas: il faut disposer d'un matriel strile et sec, un dfaut d'asepsiepeut entraner d'une part l'inoculation des germes pathognes de l'animal et d'autre part une contamination du prlvement modifiant divers paramtres.b) Matriel de dsinfection :Il permet d'intervenir sur une zone cutane dpourvue de sueur,on utilise une tendeuse ou une paire de ciseaux pour couper les poils afin de dgager le lieu du prlvement puis on le dsinfecte localement.c) Matriel de stockage: Sert recueillir le prlvement et doit donc satisfaire en mme temps conditions de strilisation que le matriel de ponction.

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Sa nature est conditionne par le type du prlvement, pour une analyse de srum, le sang est recueillie dans un tube simple strile "tube sec".Pour une analyse du plasma, on utilise un tube avec anticoagulant (l'hparine, le TDA.) d) Les anticoagulants complexant le calcium:Les oxalates: Les oxalates de sodium, lithium et le potassium inhibent la coagulation par fixation du calcium, il faut 0,01ml d'une solution d'oxalate de sodium 200mg /ml du solution du sang. Si les tubes contenants des oxalates doivent tre sch, il faut utiliser une temprature infrieure 80C afin d'viter la perte de pouvoir anticoagulant par dcomposition. En prsence d'oxalate l'eau des globules rouges vient dilu le plasma crant une erreur de dilution d'environ 5% y compris sur l'hmatocrite , forte concentration les oxalates provoquent une hmolyse, d'autre par il ne permet pasle dosage de ca++ ni celui des cations correspondants aux produits utilises (sodium, lithium ou potasium).Les citrates:Utiliss a la concentration de 5mg/ml de sang, il fixe galement le ca++, il prsente les mmes inconvnients que les oxalates. Le florure de Sodium (Na+) : Est utilis beaucoup plus comme inhibiteur de la glycolyse, son pouvoir anticoagulant est faible, il faut gnralement l'associer l'oxalate, il ne permet pas le dosage de l'ure par l'urase. EDTA: l'thylne diamine ttra actique : Il complexe le calcium et inhibe la coagulation, la concentration de 1mg/ml du sang ,il empche le dosage des phosphatases, il conserve trs bien la forme des cellules sanguines et il sera rserv en priorit pour l'hmatologie.L'hparine: est un mucopolysaccharide anticoagulant par l'inhibition de la transformation de la prothrombine en thrombine et de la conversion de fibrinogne en fibrine, il ne fixe pas le calcium, il est utilis la concentration de 0,5mg/ml du sang. Les solutions d'hparine peuvent tre chauff 100C pendant 30 min, ils prsentent peu d'inconvnients sauf pour le dosage des phosphatases acides.4) La conservation du prlvement:Le sang total ne peut tre stock plus de 4heurs mme 4C, au del il y a dbutd'hmolyse et dgradation du glucose. Le plasma et le srum peuvent tre conservs la temprature de laboratoire pendant 4heurs et le devient pendant 24heurs; au-del de 24heurs, il faut congeler ou lyophiliser l'chantillon afin d'inhiber la pousse bactrienne dans l'chantillon qui doit tre conserv plus de 24h, il faut ajouter le streptomycine 1mg/10ml du sang.La conservation d'chantillon congel ne modifie pas la concentration des molcules de faibles poids molculaire sauf le glucose, ni celle des enzymes sauf la phosphatase alcaline.

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B- Le prlvement des urines: L'urine constitue le produit final d'un processus physiologique complexe dlicatement quilibr. De nombreux mcanismes physiologiques ou pathologiques peuvent avoir une influence sur ces composants.L'urine est modifie non seulement par les maladies qui atteignent les reins maisencore par de nombreux troubles extra rnaux en provoquant des modifications qui peuvent avoir une signification du diagnostic. 1/Matriel du prlvement:L'urine est mise lors de la miction, peut tre contamin par les scrtions des voies urinaires basses. Afin d'obtenir un chantillon d'urine plus reprsentatif, il est plus intressant d'aller recueillir l'urine dans la vessie du moyen d'une sonde introduite le long del'urtre. La nature de la sonde varie selon la taille, le sexe de l'animal.Chez le mle: l'urtre est long et inflchi, on utilise une sonde simple et souple en caoutchouc ou en plastique. Chez la femelle: l'urtre est trs court et rectiligne, dans ce cas on utilise une sonde rigide et mtallique. Le sondage urinaire est plus ou moins facile raliser selon les particularits anatomiques de chaque espce animale. 2/Le matriel de stockage:Le prlvement sera recueilli dans un flacon strile pour viter d'introduire des germes exognes, le flacon sera bouch pour viter l'vaporation qui modifierait la densit urinaire et la concentration des diffrentes substances prsentes. On ne recueillie pas les premires gouttes d'urine qui pourrait tre souills. En autre, il est conseill de recueillir si possible la totalit du contenu vsical afin de prlever ensuite un chantillon qui sera plus homogne. En cas d'obstacle urtral empchant le cathtrisme (le sondage), on peut