Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...
Transcript of Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...
Reacutepublique Algeacuterienne Deacutemocratique et Populaire
Ministegravere de lrsquoEnseignement Supeacuterieur et de la Recherche Scientifique
UNIVERSITE ABDERRAHMANE MIRA BEJAIA
Faculteacute des Sciences de la Nature et de la Vie
Deacutepartement de Biologie Physico-Chimique
Meacutemoire
Preacutesenteacute par Melle BOULKROUNE NABILA
En vue de lrsquoobtention du Diplocircme de Master en Biologie
Option Biochimie Appliqueacutee
Thegraveme
Devant le jury
Preacutesident Melle TAHIRI O MAA
Promotrice Mme AMIR H MAB
Examinatrices Melle ADRAR S MAB
Melle ZEMOURI S MAB
Anneacutee universitaire 20112012
Etude de l rsquoactiviteacute antioxydante d rsquoune plante
meacutedicinale laquoMatricaria pubescensraquo effets de la
dureacutee et du solvant drsquoextraction
Remerciements
Avant tout jrsquoexprime mes remerciements agrave Dieu de mrsquoavoir donneacute le
courage et la force drsquoaller au bout afin de terminer ce travail et pour sa
bienveillance
Ma profonde gratitude va agrave ma promotrice Mme Amir H pour
lrsquohonneur qursquoelle mrsquoa fait drsquoavoir accepteacutee de mrsquoencadrer pour ses
preacutecieux conseils ses orientations pour toute son aide et surtout pour
sa gentillesse
Je tiens agrave remercier les membres du jury pour lrsquohonneur qursquoils mrsquoont
accordeacute en jugeant ce travail notamment
Melle Tahiri O qui mrsquoa fait lrsquohonneur par sa preacutesence en qualiteacute de
preacutesidente de jury
Melle AdraRr S et Melle Zemouri S pour avoir accepteacute drsquoexaminer ce
travail
Enfin jrsquoexprime ma gratitude agrave tous ceux qui ont contribueacute de preacutes ou
de loin agrave lrsquoeacutelaboration de ce travail
Deacutedicaces
Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en
signe de respect et de remerciement
A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu
nuits et jours durant tout mon parcours
A vous tregraves chers parents je vous dis merci
A mon cher fregravere Houssem
A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma
A mes cousins et cousines
A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip
A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba
A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception
laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo
hellipNABILAhellip
Liste des abreacuteviations
DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
EAG eacutequivalant acide gallique
EAT eacutequivalant acide tannique
EQ eacutequivalant querceacutetine
h heure
Min minute
MS matiegravere segraveche
N nuit drsquoincubation
Liste des figures
Figure Titre Page
1Photo de Matricaria pubescens
5
2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12
3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15
4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16
5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17
6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29
9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29
10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des
extraits de Matricaria pubescens36
15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
esg
10
0g
MS
)
a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
0
02
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30mn
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gM
S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Tan
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(g1
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gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
d e
a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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b
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Tan
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sab
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(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Po
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alai
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Wei S Chen R Liao M Tu N Zhou H and Lin Y 2010 Antioxidant condensedtannins from Machilus pauhoi leaves Journal of Medicinal Plants Research 5(5) pp799
Wang S Dusting GJ May CNet Woodman OL 2004 3prime4prime-dihydroxyflavonol reduces infarct size and injury associated with myocardial ischaemia and reperfusion insheep British Journal of Pharmacology142443-452
Wchilt M and Anton R 2003 Plante theacuterapeutique (Tradition pratique officinalescience et theacuterapeutique) 2eacuteme Ed Tec Et Doc Paris 200-202
X
Xie D-Y et Dixon RA 2005 Proanthocyanidin biosynthesis-still more questions than
answers Phytochemistry 66 2127-2144
Y
Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and
cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936
Z
Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161
Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Remerciements
Avant tout jrsquoexprime mes remerciements agrave Dieu de mrsquoavoir donneacute le
courage et la force drsquoaller au bout afin de terminer ce travail et pour sa
bienveillance
Ma profonde gratitude va agrave ma promotrice Mme Amir H pour
lrsquohonneur qursquoelle mrsquoa fait drsquoavoir accepteacutee de mrsquoencadrer pour ses
preacutecieux conseils ses orientations pour toute son aide et surtout pour
sa gentillesse
Je tiens agrave remercier les membres du jury pour lrsquohonneur qursquoils mrsquoont
accordeacute en jugeant ce travail notamment
Melle Tahiri O qui mrsquoa fait lrsquohonneur par sa preacutesence en qualiteacute de
preacutesidente de jury
Melle AdraRr S et Melle Zemouri S pour avoir accepteacute drsquoexaminer ce
travail
Enfin jrsquoexprime ma gratitude agrave tous ceux qui ont contribueacute de preacutes ou
de loin agrave lrsquoeacutelaboration de ce travail
Deacutedicaces
Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en
signe de respect et de remerciement
A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu
nuits et jours durant tout mon parcours
A vous tregraves chers parents je vous dis merci
A mon cher fregravere Houssem
A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma
A mes cousins et cousines
A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip
A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba
A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception
laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo
hellipNABILAhellip
Liste des abreacuteviations
DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
EAG eacutequivalant acide gallique
EAT eacutequivalant acide tannique
EQ eacutequivalant querceacutetine
h heure
Min minute
MS matiegravere segraveche
N nuit drsquoincubation
Liste des figures
Figure Titre Page
1Photo de Matricaria pubescens
5
2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12
3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15
4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16
5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17
6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29
9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29
10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des
extraits de Matricaria pubescens36
15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
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b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
0
01
02
03
04
05
06
07
08
30min
Tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
b
0
01
02
03
04
05
06
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08
Tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
02
04
06
08
1
12
14
30mn
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
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b
0
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Po
uvo
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cteu
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10
0g)
Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
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100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
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70
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Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
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Po
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cteu
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10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
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- annexespdf
-
Deacutedicaces
Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en
signe de respect et de remerciement
A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu
nuits et jours durant tout mon parcours
A vous tregraves chers parents je vous dis merci
A mon cher fregravere Houssem
A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma
A mes cousins et cousines
A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip
A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba
A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception
laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo
hellipNABILAhellip
Liste des abreacuteviations
DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
EAG eacutequivalant acide gallique
EAT eacutequivalant acide tannique
EQ eacutequivalant querceacutetine
h heure
Min minute
MS matiegravere segraveche
N nuit drsquoincubation
Liste des figures
Figure Titre Page
1Photo de Matricaria pubescens
5
2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12
3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15
4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16
5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17
6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29
9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29
10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des
extraits de Matricaria pubescens36
15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
esg
10
0g
MS
)
a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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(g1
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
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a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Po
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Y
Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and
cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936
Z
Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161
Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Liste des abreacuteviations
DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
EAG eacutequivalant acide gallique
EAT eacutequivalant acide tannique
EQ eacutequivalant querceacutetine
h heure
Min minute
MS matiegravere segraveche
N nuit drsquoincubation
Liste des figures
Figure Titre Page
1Photo de Matricaria pubescens
5
2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12
3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15
4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16
5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17
6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29
9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29
10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des
extraits de Matricaria pubescens36
15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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seacutes
(g1
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gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
02
04
06
08
1
12
14
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irreacute
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cteu
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10
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10
0g)
Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
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alai
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b
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alai
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Liste des figures
Figure Titre Page
1Photo de Matricaria pubescens
5
2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12
3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15
4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16
5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17
6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26
8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29
9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29
10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32
12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34
14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des
extraits de Matricaria pubescens36
15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
esg
10
0g
MS
)
a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
0
02
04
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30mn
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Fla
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g1
00
gM
S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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(g1
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gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
d e
a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Tan
ins
hyd
roly
sab
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(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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10
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Po
uvo
iran
tira
dic
alai
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
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ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
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Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
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ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
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30min 1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Liste des tableaux
Tableau Titre Page
1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6
2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9
3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10
4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11
5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
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oseacute
sp
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oli
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10
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MS
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a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
0
02
04
06
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30mn
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von
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S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
0
02
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30min
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ins
con
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2
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
d e
a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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02
03
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Tan
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(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
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30mn
Po
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b
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Po
uvo
iran
tira
dic
alai
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
Reacutefeacuterence bibliographique
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
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- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
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- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
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- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Sommaire
Introduction 1
Chapitre 1 synthegravese bibliographique
I Classification et description de Matricaria pubescens 3
I 1 Noms communs 3
I 2 Classification 3
I 3 Description morphologique 4
I 4 Reacutepartition geacuteographique 5
I 5 Habitat 5
I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6
II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7
II1 les composeacutes pheacutenoliques 7
II11 Deacutefinition 8
II12 Classification 8
II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9
II1 2 2 Les flavonoiumldes 11
II12 3 Les tannins 14
II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15
II131Cheacutelation des meacutetaux 16
II132Neutralisation des radicaux libres 16
II133Inhibition drsquoenzymes 18
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18
II2Les huiles essentielles 18
II21Deacutefinition 18
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
esg
10
0g
MS
)
a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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(g1
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
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a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Po
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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answers Phytochemistry 66 2127-2144
Y
Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and
cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936
Z
Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161
Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
I Mateacuteriels et meacutethodes 20
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20
I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20
I12 Broyage et tamisage 20
I2 Preacuteparation des extraits 20
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20
I22Effet du solvant drsquoextraction 20
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21
I32Dosage des flavonoiumldes 21
I33Dosage des tannins 22
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22
I1Pouvoir reacuteducteur 22
II2Pouvoir antiradicalaire 23
III Etude statistique 24
Chapitre 3 Reacutesultats et discussions
I Reacutesultats et discussions 24
I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24
I2Les flavonoiumldes 28
I3Les tannins 30
I31Les tannins condenseacutes 30
I32Les tannins hydrolysables 33
II Activiteacute antioxydante 35
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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MS
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
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g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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seacutes
(g1
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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ins
hyd
roly
sab
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g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
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a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
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70
80
90
100
Po
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iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
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de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
II1 Pouvoir reacuteducteur 35
II2 Pouvoir antiradicalaire 38
Conclusion 42
Reacutefeacuterences bibliographiques 44
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
d e
a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
0
01
02
03
04
05
06
07
08
30min
Tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
b
0
01
02
03
04
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06
07
08
Tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
02
04
06
08
1
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14
30mn
Po
uvo
irreacute
du
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10
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b
0
02
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Po
uvo
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du
cteu
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10
0g)
Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
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S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
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06
08
1
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14
16
18
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0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
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nin
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nd
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10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
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02
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04
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06
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0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
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- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
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- liste des tableauxpdf
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- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Introduction
1
Introduction
Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres
possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans
divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture
Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante
demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation
rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales
folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les
composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)
Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine
traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)
Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies
cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le
vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont
de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques
et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain
drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)
Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante
srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but
lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de
nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent
contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers
repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans
la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)
Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des
techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et
al 2006)
Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine
traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et
septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
esg
10
0g
MS
)
a
0
05
1
15
2
25
3
30mn
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
0
02
04
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30mn
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oid
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MS
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Fla
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g1
00
gM
S)
Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
b
g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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seacutes
(g1
00
gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
d e
a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Tan
ins
hyd
roly
sab
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(g1
00
g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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10
0g)
Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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20
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Po
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Po
uvo
iran
tira
dic
alai
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)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Introduction
2
traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute
antioxydante de cette plante meacutedicinale
Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions
drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et
lrsquoactiviteacute antioxydante
La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese
bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants
La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes
Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes
dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune
nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)
meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))
Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les
flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes
La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en
utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
0
05
1
15
2
25
3
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
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10
0g
MS
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a
0
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Co
mp
oseacute
sp
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oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
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30min 1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Black Tea Moleacutecules 12484-496
V
Valko M Rhodes CJ Moncola J Izakovic M Mazura M 2006 Free radicals metalsand antioxydants in oxidative stress-induced cancer Chemico-Biological Interactions160 1-40
Vukovc-Gacic N Nikcevic S Beric-Bjedov T Knezenvic-Vukcevic J and Simic D2006 Antimutageni effect of essentiel oil of sage (Salvia officinalis L) and itsmonoterpeacutenes against UV-inducted mutation in Echerichia coli and sacchrmyceescerevisiae Food and Chimical Toxicology 44 1730-1738
Reacutefeacuterence bibliographique
54
W
Wei S Chen R Liao M Tu N Zhou H and Lin Y 2010 Antioxidant condensedtannins from Machilus pauhoi leaves Journal of Medicinal Plants Research 5(5) pp799
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Wchilt M and Anton R 2003 Plante theacuterapeutique (Tradition pratique officinalescience et theacuterapeutique) 2eacuteme Ed Tec Et Doc Paris 200-202
X
Xie D-Y et Dixon RA 2005 Proanthocyanidin biosynthesis-still more questions than
answers Phytochemistry 66 2127-2144
Y
Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and
cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936
Z
Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161
Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
3
La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter
certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de
parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de
plantes (Wichtl et Anton 2003)
Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps
les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont
eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)
Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces
(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur
confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui
est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude
I Classification et description de Matricaria pubescens
I1Noms communs
Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin
Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu
En arabe Guertoufa Ouazouaza
En targui Ainesnis
En anglais Hairy camomille
En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean
Cooperation 2005)
I2Classification
Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des
asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des
plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui
sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria
compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
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c
b
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1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
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30min 1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
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37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
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60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
4
La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite
Regravegne veacutegeacutetal
Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)
Sous-embranchement angiospermes
Classe dicotyleacutedones
Sous-classe meacutetachlamydeacutees
Ordre campanales (astrales)
Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)
Genre Matricaria
Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)
I3Description morphologique
Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur
meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par
- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure
- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes
- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les
autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement
couvertes de poils
- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux
- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus
largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute
tout autour
- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses
- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au
sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute
- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et
presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et
al 1963)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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MS
)
Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
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g
c
Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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(g1
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gM
S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
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a a
Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
e
c
a
d
Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
c
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
5
La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au
centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation
2005) (figure 1)
Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation
2005)
I4 Reacutepartition geacuteographique
Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara
septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt
Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara
central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac
Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)
Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord
Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la
Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord
I5 Habitat
Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen
des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
e
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MS
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
d
b
1h 2h 4h
f
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g
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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seacutes
(g1
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gM
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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g)
Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
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a
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
6
dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for
Meacutediterranean Cooperation 2005)
I6Utilisation de Matricaria pubescens
Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la
meacutedecine traditionnelle et autre
- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est
recommandeacutee pour lrsquootite
- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique
(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)
- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes
cytotoxiques (Maiza et al 2011)
- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion
- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour
aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente
eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres
(Chehma 2006)
- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la
preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes
apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)
Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria
pubescens
Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)
Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation
rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau
Un verre agrave theacute matin et soir
eacuteruptiondentaire
Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
c
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
cd
30min 1h 2h 4h
d
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a
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
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g
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
- page de garde nabilapdf
- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
- liste des tableauxpdf
- Sommairepdf
- introduction nabila finalpdf
- PARTIE BIBLIOGR nabila finalpdf
- materiel finalpdf
- discussion nabila finalpdf
- conclusionfinalpdf
- references biolio finalpdf
- glossaire nabilapdf
- annexespdf
-
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
7
II Composition biochimique de Matricaria pubescens
Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes
substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les
flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)
II1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice
qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement
(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la
preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine
preacuteventive (Ksouri et al 2007)
matricaire
dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume
Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins
dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau
Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs
asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo
La prise orale est preacuteconiseacutee
Maladieimmunitaire(allergie)
Deacutecoction ou infusion Prise orale
Fiegravevre oupiqure descorpion
Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait
Prise orale
Infectionoculaire
Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes
Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
8
II11Deacutefinition
Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est
difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence
drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes
hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes
avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques
tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols
(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies
- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux
acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993
Croteau et al 2002)
- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur
variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18
anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina
2002)
- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes
drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton
2009)
II12Classification
Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)
qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave
des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute
drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces
moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre
meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)
Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000
Macheix et al 2006
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
9
II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes
Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant
de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et
al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques
les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)
a)Acides hydroxybenzoiumlques
Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs
aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent
ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al
2006 Bruneton 2008)
Squelettes carboneacutes Classes Exemples
C6 Pheacutenols simples Catheacutechol
C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique
C6-C3 Acide hydroxycinnamique
Coumarines
Acide cafeacuteique
scopoleacuteines
C6-C4 Naphtoquinones Juglone
C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole
C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-
cyanidinediadzeacuteine
(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles
(C6-C3) n lignines
(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (
esteacuterifieacutes en
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono
cafeacuteyl malique)
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec
de glucose (Bruneton 2008)
par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Acides hydroxybenzoiumlques
R1
acide
parahydroxybenzoiumlqueH
acide protocateacutechique H
acide vanillique H
acide gallique H
acide syringique H
acide salicylique OH
acide gentisique OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
10
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix
b) Acides hydroxycinnamiques
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C
de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl
Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide
lithospermique) (Bruneton 2008)
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether
se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)
Acides hydroxybenzoiumlques
R2 R3 R4 Formule
H OH H
OH OH H
OCH3 OH H
OH OH OH
OCH3 OH OCH3
OH H H H
OH H H OH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)
Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive
) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent
tartrique feacuteruloyl-tartrique et
que) et depside (acide rosmarinique et
Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la
ester de glucose ou eacutether
Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques
la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
II122Les flavonoiumldes
a)Deacutefinition
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
b) Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R1
acide paracoumarique H
acide cafeacuteique OH
acide feacuterulique OCH
acide sinapique OCH
E-aneacutethole H
acide 3 4-
dimeacutethoxycinnamiqueOCH
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
11
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)
Structure et classification des flavonoiumldes
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Acides hydroxycinnamiques
R2 R3 Formule
OH H
OH H
OCH3 OH H
OCH3 OH OCH3
OCH3 H
OCH3 OCH3 H
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)
Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une
tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont
consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend
lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores
flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine
biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
12
quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A
et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)
Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)
Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules
selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta
2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les
plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols
flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de
chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles
aromatiques A et B (Heim et al 2002)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
13
Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe
(Heim et al 2002)2
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
14
II123Les tannins
Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation
solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)
La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des
complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les
polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En
raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees
les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)
a) Tannins hydrolysables
Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose
sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le
groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe
des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)
Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose
ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik
2002)
b) Tannins condenseacutes
Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou
de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash
carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al
2004)
Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines
quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
15
Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable
(Labieniec et al 2003)
II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques
Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute
antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions
radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres
lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese
drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al
2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le
nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de
glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des
composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le
degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards
et al 2005)
Acide tannique
Acide galliqueAcide ellagique
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
16
II131Cheacutelation des meacutetaux
Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions
physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des
cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la
catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils
sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du
peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)
H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)
Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les
flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell
2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions
meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B
3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du
cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)
Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes
(Pietta 2000)
II132Neutralisation des radicaux libres
Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les
reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-
Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
17
Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de
reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-
oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire
neacutecessite
bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des
flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute
bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de
la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl
bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire
maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006
Sokol-Letowska et al 2007)
Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute
anti-radicalaire (Soobrattee 2005)
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
18
Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les
radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute
entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et
protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)
II133Inhibition drsquoenzymes
Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes
enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques
impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme
lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui
catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et
al 2004)
II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins
Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-
radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et
dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la
position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)
Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres
lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors
formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation
lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi
2003)
II2Les huiles essentielles
II21Deacutefinition
Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants
obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie
alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges
complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi
exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe
des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du
pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement
Chapitre 1 Synthegravese bibliographique
19
renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants
non volatils (Bruneton 1999)
Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les
preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination
et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)
(Richter 1993)
II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles
La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est
maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est
porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et
al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)
Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette
activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires
par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des
radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005
Vukovic-Gacic et al 2006)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
20
I Mateacuteriels et meacutethodes
I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal
I11 Matiegravere veacutegeacutetale
La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud
wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute
agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les
moleacutecules sensibles agrave la chaleur
I12 Broyage et tamisage
Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur
eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute
conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour
utilisation ulteacuterieure
I2Preacuteparation des extraits
La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des
composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction
I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de
Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau
distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoextraction
Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave
lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges
sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I22Effet du solvant drsquoextraction
Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant
quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et
100) et eacutethanol (50 et 100)
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
21
Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant
drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique
Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les
extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC
I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques
I31Dosage des polypheacutenols totaux
I311Principe
Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide
phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du
Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene
(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est
proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-
Gayon et al 1982)
I312Mode opeacuteratoire
La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al
(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml
du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium
(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La
concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de
matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de
lrsquoacide gallique (annexe)
I32Dosage des flavonoiumldes
I321 Principe
Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des
complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon
1968)
I322Mode opeacuteratoire
La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la
meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
22
volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn
Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche
agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
I33Dosage des tannins
I331Principe
Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes
polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols
(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le
chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)
I332Mode opeacuteratoire
Dosage des tannins condenseacutes
Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par
Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70
dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C
pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
Dosage des tannins hydrolysables
Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman
(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est
meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)
Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en
gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe
drsquoeacutetalonnage (annexe)
II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante
II1Pouvoir reacuteducteur
II11Principe
Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave
reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
23
reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait
(Chung et al 2006)
II12Mode opeacuteratoire
Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj
(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml
de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml
drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant
10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml
du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont
exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir
drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)
II2Pouvoir antiradicalaire
II21principe
Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur
drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration
native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons
ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune
(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration
deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents
(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)
II22 Mode opeacuteratoire
Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus
(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave
517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le
pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule
suivante
AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)
AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)
scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100
Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes
24
III Etude statistique
Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique
des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la
comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005
Reacutesultats et discussions
24
I Reacutesultats et discussions
I1 Les composeacutes pheacutenoliques
Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel
veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes
extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)
Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la
deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur
lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest
rapporteacute dans la bibliographie
Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme
solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante
Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction
indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue
apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues
respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les
teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min
drsquoextraction respectivement (figure 6)
Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux
drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g
Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes
pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue
apregraves 1h drsquoextraction
Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave
8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative
Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des
composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps
drsquoextraction
Reacutesultats et discussions
25
Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la
prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour
diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)
Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques
drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee
(Druzynska et al 2007)
Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct
et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non
seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al
2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol
du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes
pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)
Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de
Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau
lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et
lrsquoeacutethanol 100
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire
montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus
eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau
le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en
composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement
Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone
100
Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs
sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer
par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs
Figure 6 Effet de la dureacutee
des extraits
Figure 7 Effet du solvant drsquo
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
26
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
es extraits aqueux de Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques
extraits de Matricaria pubescens
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
b
d
g
c
b
cc
1h 2h 4h
Reacutesultats et discussions
composeacutes pheacutenoliques
composeacutes pheacutenoliques des
portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
f
c
2h+1N
Reacutesultats et discussions
27
Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de
certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia
argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le
meacutethanol comme solvant drsquoextraction
Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant
drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50
(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude
sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le
meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS
Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction
de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee
Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes
pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de
faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les
glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques
glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)
Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne
peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges
alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides
pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant
drsquoextraction (Cazes 2005)
Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee
en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans
le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)
Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la
creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)
Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela
est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la
varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la
diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du
dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
Reacutesultats et discussions
28
La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute
et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant
ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines
polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et
al 1996)
I2Les flavonoiumldes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la
plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits
obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des
teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)
De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes
pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs
(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)
Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune
maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant
avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100
le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088
082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue
avec lrsquoeau
Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave
partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave
100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS
Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des
flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs
autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)
Figure 8 Effet de la dureacutee
Figure 9 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
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Reacutesultats et discussions
29
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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1h 2h 4h
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Reacutesultats et discussions
flavonoiumldes des extraits
flavonoiumldes des extraits de
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
bc
2h+1N
de
Reacutesultats et discussions
30
Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria
varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure
extraction par rapport agrave drsquoautres solvants
La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la
liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)
I3Les tannins
I31Les tannins condenseacutes
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)
Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins
condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus
une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et
321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30
minutes drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au
meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100
(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont
obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes
des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de
la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50
gt eau gt eacutethanol 50
Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques
(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes
avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par
laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes
qui peuvent interfeacuterer dans le dosage
Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol
50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus
Reacutesultats et discussions
31
eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est
constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est
obtenues avec lrsquoaceacutetone pur
Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins
condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du
meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent
acide tanniqueg de MS
Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que
lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en
tannins
Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature
ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines
comprises entre (1et 8g100g MS)
Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs
non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage
Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes
agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend
solubles dans les solvants moins polaires
Figure 10 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 11 Effet du solvant drsquo
-Nd Non deacutetecteacutes
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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(g1
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S)
Reacutesultats et discussions
32
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits aqueux de Matricaria pubescens
u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
be d
1h 2h 4h
Nd Nd
f
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Reacutesultats et discussions
tannins condenseacutes des
tannins condenseacutes des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+n
b
Reacutesultats et discussions
33
I32Tannins hydrolysables
Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives
(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)
Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur
la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures
preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs
allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee
apregraves 30 minutes drsquoextraction
La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la
dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon
significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de
composeacutes
Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50
preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits
preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau
preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La
teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)
Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir
de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100
gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50
Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant
lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins
comprises entre 005 et 017 g100g
Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait
plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum
en tannins
Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes
appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et
275 g drsquoacide gallique 100g
Figure 12 Effet de la dureacutee
extraits
Figure 13 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
a
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Reacutesultats et discussions
34
ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits aqueux de Matricaria pubescens
du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables
extraits de Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents
b
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30min 1h 2h 4h
d
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Reacutesultats et discussions
tannins hydrolysables des
tannins hydrolysables des
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
e
2h+N
bc
Reacutesultats et discussions
35
Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en
tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade
On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La
nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables
II Activiteacute antioxydante
II1 Pouvoir reacuteducteur
Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave
reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute
comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)
Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves
2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide
ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs
reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement
Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30
minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide
ascorbique100g)
Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le
solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide
ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible
(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les
reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits
purs
Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute
antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur
le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)
Figure 14 Effet de la dureacutee
Figure 15 Effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
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Reacutesultats et discussions
36
la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits
Matricaria pubescens
ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
a b b
30mn 1h 2h 4h 2h+N
a
d e
g
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Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de
sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
f
Reacutesultats et discussions
37
Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des
extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)
reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le
cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves
faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des
bonnes capaciteacutes reacuteductrices
Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents
solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins
condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation
neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)
Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la
nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les
interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non
pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant
II 2 Pouvoir antiradicalaire
Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux
libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette
efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration
indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux
2004)
Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit
drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus
faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)
Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences
Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute
antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est
Reacutesultats et discussions
38
obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le
meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont
preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et
8469 respectivement
Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al
(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits
eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur
eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)
Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute
que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur
srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines
cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et
autres polypheacutenols agrave partir des cellules
Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre
expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute
agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de
lrsquoactiviteacute antioxydante
Figure 16 Effet de la dureacutee
Figure 17 effet du solvant
-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so
a
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
30mn
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Po
uvo
iran
tira
dic
alai
re(
)
Reacutesultats et discussions
39
de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens
effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
Matricaria pubescens
Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)
b b bc
30mn 1h 2h 4h
ad e d
Reacutesultats et discussions
drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux
sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de
nt significativement diffeacuterents (altbltc)
c
2h+N
cf
Reacutesultats et discussions
40
Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le
solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits
La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la
nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire
Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne
correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en
composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne
correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable
est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes
pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire
les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne
En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en
utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation
lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)
flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible
correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les
composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute
de pieacuteger les radicaux libres
La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et
al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la
structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur
le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements
donneurs de protons)
Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en
polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en
polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes
pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que
lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure
Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute
antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil
Reacutesultats et discussions
41
existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction
entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)
Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait
sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute
antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en
composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)
Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute
antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees
drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation
de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent
lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068
(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la
matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres
Conclusion
42
Conclusion
La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants
(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante
meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur
extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination
de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus
Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la
dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction
alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction
Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits
preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)
La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est
obtenue apregraves 1heure drsquoextraction
Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins
des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins
condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins
hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus
faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30
minutes drsquoextraction
Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant
utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes
pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes
concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace
Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction
preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune
nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus
faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes
Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement
selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait
Conclusion
43
meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus
eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100
Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le
pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et
les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins
condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue
avec les flavonoiumldes
Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits
preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles
correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins
hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les
teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles
Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le
pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire
Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo
bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants
drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions
bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en
eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et
cytotoxique
bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes
bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En
drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique
en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates
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Glossaire
La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit
Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales
Glossaire botanique
Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine
Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont
eacutegalement pennatiseacutequeacute
Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un
reacuteceptacle
Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux
Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant
androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee
Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles
Oblongue plus long que large
Obtuse qui manque de finesse borneacute
Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)
Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes
Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec
Glossaire meacutedicale
Dermatose maladie de la peau
Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses
Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide
Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf
Otite inflammation de lrsquooreille
Rhumatisme inflammation des articulations
Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique
Annexes
Preacuteparation des solutions
Tampon phosphate
-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee
-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66
Courbes drsquoeacutetalonnage
Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des
polypheacutenols totaux
y = 7773xRsup2 = 0997
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 005 01 015 02 025
abso
rban
ceagrave
740
nm
concentration en mgml
Annexes
Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes
Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins
condenseacutes
y = 2753xRsup2 = 0996
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
1
0 0005 001 0015 002 0025 003 0035
abor
banc
eagrave
410
nm
concentration en mgml
y = 1679xRsup2 = 0994
0
02
04
06
08
1
12
0 001 002 003 004 005 006 007
Ab
sorb
ance
agrave5
00
nm
Concentraction en mgml
Annexes
Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins
hydrolysables
Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir
reacuteducteur
y = 5245xRsup2 = 0988
0
01
02
03
04
05
06
0 002 004 006 008 01 012
Ab
sorb
ance
agrave6
60
nm
Concentration en mgml
y = 1532xRsup2 = 0998
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
0 02 04 06 08 1 12
Abs
orba
nce
agrave70
0nm
Concentration en mgml
Annexes
Courbes de correacutelation
a b
c d
Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques
(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de
Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 080
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 0051
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g
MS
)Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 059
0
01
02
03
04
05
06
07
08
09
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r= 095
0
02
04
06
08
0 02 04 06 08 1 12 14
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables
(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 073
0
05
1
15
2
25
3
0 02 04 06 08 1 12 14
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r =0070
0
02
04
06
08
1
12
0 02 04 06 08 1 12 14
Fla
von
oid
es(g
10
0g)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r = 038
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 05 1 15
Tan
ins
con
den
seacutes
(g1
00
gM
S
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
r=024
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 02 04 06 08 1 12 14
tan
ins
hyd
roly
sab
les
(g1
00
gM
S)
Pouvoir reacuteducteur (g100g)
Annexes
a b
c d
Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes
pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des
extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction
r = 070
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
pouvoir antiradicalaire ()
r = 0037
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 059
836
838
84
842
844
846
848
85
852
854
0 2 4 6
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 083
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
aprime bprime
cprime dprime
Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes
pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)
des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r = 041
0
05
1
15
2
25
3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Co
mp
oseacute
sp
heacuten
oli
qu
es(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r=039
0
02
04
06
08
1
12
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F
lavo
no
ides
(g1
00
gM
S)
Pouvoir antiradicalaire ()
r = 033
0
02
04
06
08
1
12
14
16
18
2
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sco
nd
enseacute
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
r= 010
0
01
02
03
04
05
06
07
08
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tan
nin
sh
ydro
lysa
ble
s(g
10
0g
MS
)
Pouvoir antiradicalaire ()
Annexes
Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction
Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits
de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction
r= 078
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
r =068
0
02
04
06
08
1
12
14
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Po
uvo
irreacute
du
cteu
r(g
10
0g)
activiteacute antiradicalaire ()
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- Remerciementpdf
- deacutedicacespdf
- liste des abreacuteviations corrigeacuteepdf
- liste des figurespdf
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