Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

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République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique UNIVERSITE ABDERRAHMANE MIRA BEJAIA Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie Département de Biologie Physico-Chimique Mémoire Présenté par : M elle BOULKROUNE NABILA En vue de l’obtention du Diplôme de Master en Biologie Option : Biochimie Appliquée Thème Devant le jury : Président : Melle TAHIRI O. MAA Promotrice : Mme AMIR H. MAB Examinatrices : Melle ADRAR S. MAB Melle ZEMOURI S. MAB Année universitaire : 2011/2012 Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale «Matricaria pubescens» : effets de la durée et du solvant d’extraction.

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Reacutepublique Algeacuterienne Deacutemocratique et Populaire

Ministegravere de lrsquoEnseignement Supeacuterieur et de la Recherche Scientifique

UNIVERSITE ABDERRAHMANE MIRA BEJAIA

Faculteacute des Sciences de la Nature et de la Vie

Deacutepartement de Biologie Physico-Chimique

Meacutemoire

Preacutesenteacute par Melle BOULKROUNE NABILA

En vue de lrsquoobtention du Diplocircme de Master en Biologie

Option Biochimie Appliqueacutee

Thegraveme

Devant le jury

Preacutesident Melle TAHIRI O MAA

Promotrice Mme AMIR H MAB

Examinatrices Melle ADRAR S MAB

Melle ZEMOURI S MAB

Anneacutee universitaire 20112012

Etude de l rsquoactiviteacute antioxydante d rsquoune plante

meacutedicinale laquoMatricaria pubescensraquo effets de la

dureacutee et du solvant drsquoextraction

Remerciements

Avant tout jrsquoexprime mes remerciements agrave Dieu de mrsquoavoir donneacute le

courage et la force drsquoaller au bout afin de terminer ce travail et pour sa

bienveillance

Ma profonde gratitude va agrave ma promotrice Mme Amir H pour

lrsquohonneur qursquoelle mrsquoa fait drsquoavoir accepteacutee de mrsquoencadrer pour ses

preacutecieux conseils ses orientations pour toute son aide et surtout pour

sa gentillesse

Je tiens agrave remercier les membres du jury pour lrsquohonneur qursquoils mrsquoont

accordeacute en jugeant ce travail notamment

Melle Tahiri O qui mrsquoa fait lrsquohonneur par sa preacutesence en qualiteacute de

preacutesidente de jury

Melle AdraRr S et Melle Zemouri S pour avoir accepteacute drsquoexaminer ce

travail

Enfin jrsquoexprime ma gratitude agrave tous ceux qui ont contribueacute de preacutes ou

de loin agrave lrsquoeacutelaboration de ce travail

Deacutedicaces

Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en

signe de respect et de remerciement

A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu

nuits et jours durant tout mon parcours

A vous tregraves chers parents je vous dis merci

A mon cher fregravere Houssem

A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma

A mes cousins et cousines

A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip

A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba

A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception

laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo

hellipNABILAhellip

Liste des abreacuteviations

DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EAG eacutequivalant acide gallique

EAT eacutequivalant acide tannique

EQ eacutequivalant querceacutetine

h heure

Min minute

MS matiegravere segraveche

N nuit drsquoincubation

Liste des figures

Figure Titre Page

1Photo de Matricaria pubescens

5

2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12

3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15

4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16

5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17

6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29

9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29

10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des

extraits de Matricaria pubescens36

15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

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Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

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2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Valko M Rhodes CJ Moncola J Izakovic M Mazura M 2006 Free radicals metalsand antioxydants in oxidative stress-induced cancer Chemico-Biological Interactions160 1-40

Vukovc-Gacic N Nikcevic S Beric-Bjedov T Knezenvic-Vukcevic J and Simic D2006 Antimutageni effect of essentiel oil of sage (Salvia officinalis L) and itsmonoterpeacutenes against UV-inducted mutation in Echerichia coli and sacchrmyceescerevisiae Food and Chimical Toxicology 44 1730-1738

Reacutefeacuterence bibliographique

54

W

Wei S Chen R Liao M Tu N Zhou H and Lin Y 2010 Antioxidant condensedtannins from Machilus pauhoi leaves Journal of Medicinal Plants Research 5(5) pp799

Wang S Dusting GJ May CNet Woodman OL 2004 3prime4prime-dihydroxyflavonol reduces infarct size and injury associated with myocardial ischaemia and reperfusion insheep British Journal of Pharmacology142443-452

Wchilt M and Anton R 2003 Plante theacuterapeutique (Tradition pratique officinalescience et theacuterapeutique) 2eacuteme Ed Tec Et Doc Paris 200-202

X

Xie D-Y et Dixon RA 2005 Proanthocyanidin biosynthesis-still more questions than

answers Phytochemistry 66 2127-2144

Y

Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and

cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936

Z

Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161

Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

  • page de garde nabilapdf
  • Remerciementpdf
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  • annexespdf
Page 2: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Remerciements

Avant tout jrsquoexprime mes remerciements agrave Dieu de mrsquoavoir donneacute le

courage et la force drsquoaller au bout afin de terminer ce travail et pour sa

bienveillance

Ma profonde gratitude va agrave ma promotrice Mme Amir H pour

lrsquohonneur qursquoelle mrsquoa fait drsquoavoir accepteacutee de mrsquoencadrer pour ses

preacutecieux conseils ses orientations pour toute son aide et surtout pour

sa gentillesse

Je tiens agrave remercier les membres du jury pour lrsquohonneur qursquoils mrsquoont

accordeacute en jugeant ce travail notamment

Melle Tahiri O qui mrsquoa fait lrsquohonneur par sa preacutesence en qualiteacute de

preacutesidente de jury

Melle AdraRr S et Melle Zemouri S pour avoir accepteacute drsquoexaminer ce

travail

Enfin jrsquoexprime ma gratitude agrave tous ceux qui ont contribueacute de preacutes ou

de loin agrave lrsquoeacutelaboration de ce travail

Deacutedicaces

Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en

signe de respect et de remerciement

A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu

nuits et jours durant tout mon parcours

A vous tregraves chers parents je vous dis merci

A mon cher fregravere Houssem

A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma

A mes cousins et cousines

A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip

A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba

A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception

laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo

hellipNABILAhellip

Liste des abreacuteviations

DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EAG eacutequivalant acide gallique

EAT eacutequivalant acide tannique

EQ eacutequivalant querceacutetine

h heure

Min minute

MS matiegravere segraveche

N nuit drsquoincubation

Liste des figures

Figure Titre Page

1Photo de Matricaria pubescens

5

2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12

3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15

4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16

5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17

6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29

9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29

10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des

extraits de Matricaria pubescens36

15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

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2

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30mn

Co

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10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

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30mn

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

05

06

07

08

30min

Tan

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hyd

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sab

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(g1

00

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b

0

01

02

03

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07

08

Tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

12

14

30mn

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10

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10

0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

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60

70

80

90

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 3: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Deacutedicaces

Au terme de toutes ces anneacutees drsquoeacutetude Je deacutedie ce modeste travail en

signe de respect et de remerciement

A ceux qui ont donneacute un sens agrave mon existence qui mrsquoont soutenu

nuits et jours durant tout mon parcours

A vous tregraves chers parents je vous dis merci

A mon cher fregravere Houssem

A mes chegraveres sœurs Ghania et Asma

A mes cousins et cousines

A tous mes chegraveres amis warda Fayccedilalhellip

A mes copines de chambres Souhila faroudja katiba

A toute la promotion Biochimie Appliqueacutee 2012 sans exception

laquo Que Dieux nous guide tout au long de notre vie raquo

hellipNABILAhellip

Liste des abreacuteviations

DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EAG eacutequivalant acide gallique

EAT eacutequivalant acide tannique

EQ eacutequivalant querceacutetine

h heure

Min minute

MS matiegravere segraveche

N nuit drsquoincubation

Liste des figures

Figure Titre Page

1Photo de Matricaria pubescens

5

2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12

3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15

4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16

5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17

6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29

9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29

10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des

extraits de Matricaria pubescens36

15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

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1

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S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

d e

a a

Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

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20

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Wang S Dusting GJ May CNet Woodman OL 2004 3prime4prime-dihydroxyflavonol reduces infarct size and injury associated with myocardial ischaemia and reperfusion insheep British Journal of Pharmacology142443-452

Wchilt M and Anton R 2003 Plante theacuterapeutique (Tradition pratique officinalescience et theacuterapeutique) 2eacuteme Ed Tec Et Doc Paris 200-202

X

Xie D-Y et Dixon RA 2005 Proanthocyanidin biosynthesis-still more questions than

answers Phytochemistry 66 2127-2144

Y

Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and

cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936

Z

Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161

Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 4: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Liste des abreacuteviations

DPPH radical 22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl

EAG eacutequivalant acide gallique

EAT eacutequivalant acide tannique

EQ eacutequivalant querceacutetine

h heure

Min minute

MS matiegravere segraveche

N nuit drsquoincubation

Liste des figures

Figure Titre Page

1Photo de Matricaria pubescens

5

2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12

3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15

4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16

5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17

6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29

9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29

10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des

extraits de Matricaria pubescens36

15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

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30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

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10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

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30mn

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

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30min

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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ins

hyd

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sab

les

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S)

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0

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02

03

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05

06

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Tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

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1

12

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30mn

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10

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Liste des figures

Figure Titre Page

1Photo de Matricaria pubescens

5

2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes 12

3Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tanninhydrolysable 15

4Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par lesflavonoiumldes 16

5Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenantdans leur activiteacute anti-radicalaire 17

6Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

7Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutespheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens 26

8Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldesdes extraits de Matricaria pubescens 29

9Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes desextraits de Matricaria pubescens 29

10Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

11Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninscondenseacutes des extraits de Matricaria pubescens 32

12Effet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

13Effet du solvant drsquoextraction sur la teneur en tanninshydrolysables des extraits de Matricaria pubescens 34

14Effet de la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des

extraits de Matricaria pubescens36

15Effet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur desextraits de Matricaria pubescens 36

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

0

02

04

06

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30mn

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g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

04

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1

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16

18

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seacutes

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00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

d e

a a

Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

05

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02

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04

05

06

07

08

Tan

ins

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roly

sab

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00

g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 6: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

16Effet de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

17effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire desextraits de Matricaria pubescens 39

Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

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c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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1h 2h 4h

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c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

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Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

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2h+N

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Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

b

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

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1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Liste des tableaux

Tableau Titre Page

1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens 6

2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques 9

3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques 10

4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques 11

5Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifsde chaque classe 13

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

0

02

04

06

08

1

12

30mn

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)

a

0

02

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08

1

12

Fla

von

oid

es(

g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

30min

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00

gM

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04

06

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14

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18

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Tan

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seacutes

(g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

d e

a a

Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

05

06

07

08

30min

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hyd

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00

gM

S)

b

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08

Tan

ins

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sab

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(g1

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

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30mn

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0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

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70

80

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30mn

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

Reacutefeacuterence bibliographique

44

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 8: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Sommaire

Introduction 1

Chapitre 1 synthegravese bibliographique

I Classification et description de Matricaria pubescens 3

I 1 Noms communs 3

I 2 Classification 3

I 3 Description morphologique 4

I 4 Reacutepartition geacuteographique 5

I 5 Habitat 5

I 6 Utilisation de Matricaria pubescens 6

II Composition biochimique de Matricaria pubescens 7

II1 les composeacutes pheacutenoliques 7

II11 Deacutefinition 8

II12 Classification 8

II1 21 Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes 9

II1 2 2 Les flavonoiumldes 11

II12 3 Les tannins 14

II13proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques 15

II131Cheacutelation des meacutetaux 16

II132Neutralisation des radicaux libres 16

II133Inhibition drsquoenzymes 18

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins 18

II2Les huiles essentielles 18

II21Deacutefinition 18

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles 19

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

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3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

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b

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c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

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e

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Vukovc-Gacic N Nikcevic S Beric-Bjedov T Knezenvic-Vukcevic J and Simic D2006 Antimutageni effect of essentiel oil of sage (Salvia officinalis L) and itsmonoterpeacutenes against UV-inducted mutation in Echerichia coli and sacchrmyceescerevisiae Food and Chimical Toxicology 44 1730-1738

Reacutefeacuterence bibliographique

54

W

Wei S Chen R Liao M Tu N Zhou H and Lin Y 2010 Antioxidant condensedtannins from Machilus pauhoi leaves Journal of Medicinal Plants Research 5(5) pp799

Wang S Dusting GJ May CNet Woodman OL 2004 3prime4prime-dihydroxyflavonol reduces infarct size and injury associated with myocardial ischaemia and reperfusion insheep British Journal of Pharmacology142443-452

Wchilt M and Anton R 2003 Plante theacuterapeutique (Tradition pratique officinalescience et theacuterapeutique) 2eacuteme Ed Tec Et Doc Paris 200-202

X

Xie D-Y et Dixon RA 2005 Proanthocyanidin biosynthesis-still more questions than

answers Phytochemistry 66 2127-2144

Y

Yoo K M Lee C H Lee H Moon B et Lee C Y 2008 Relative antioxidant and

cytoprotective activities of common herbs Food Chemistry106 929-936

Z

Yizhong Caia Qiong Luob Mei Sunc Et Harold Corkea 2003 Antioxidant activityand phenolic compounds of 112 traditional Chinese medicinal plants associated withanticancer Life Sciences 742160-2161

Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 9: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

I Mateacuteriels et meacutethodes 20

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal 20

I11 Matiegravere veacutegeacutetale 20

I12 Broyage et tamisage 20

I2 Preacuteparation des extraits 20

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction 20

I22Effet du solvant drsquoextraction 20

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques 21

I32Dosage des flavonoiumldes 21

I33Dosage des tannins 22

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante 22

I1Pouvoir reacuteducteur 22

II2Pouvoir antiradicalaire 23

III Etude statistique 24

Chapitre 3 Reacutesultats et discussions

I Reacutesultats et discussions 24

I1 Les composeacutes pheacutenoliques 24

I2Les flavonoiumldes 28

I3Les tannins 30

I31Les tannins condenseacutes 30

I32Les tannins hydrolysables 33

II Activiteacute antioxydante 35

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

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MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

12

14

30mn

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

b

0

02

04

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1

12

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Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

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alai

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b

0

10

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90

100

Po

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iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

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07

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0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 10: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

II1 Pouvoir reacuteducteur 35

II2 Pouvoir antiradicalaire 38

Conclusion 42

Reacutefeacuterences bibliographiques 44

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

0

02

04

06

08

1

12

30mn

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)

a

0

02

04

06

08

1

12

Fla

von

oid

es(

g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

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30min

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gM

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2

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seacutes

(g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

d e

a a

Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

05

06

07

08

30min

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hyd

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gM

S)

b

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08

Tan

ins

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

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30mn

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10

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

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70

80

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30mn

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

Reacutefeacuterence bibliographique

44

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 11: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Introduction

1

Introduction

Un grand nombre de plantes aromatiques meacutedicinales des plantes eacutepices et autres

possegravedent des proprieacuteteacutes biologiques tregraves inteacuteressantes qui trouvent application dans

divers domaines en savoir en meacutedecine pharmacie cosmeacutetologie et agriculture

Cependant lrsquoeacutevaluation des proprieacuteteacutes phytotheacuterapeutiques comme antioxydante

demeure une tache inteacuteressante et utile en particulier pour les plantes drsquoune utilisation

rare ou moins freacutequentes ou non connu dans la meacutedecine et les traditions meacutedicinales

folkloriques Ces plantes repreacutesentent une nouvelle source de composeacutes actifs tels les

composeacutes pheacutenoliques (Mohammedi 2005)

Actuellement environs 60 agrave 80 de la population utilisent la meacutedecine

traditionnelle pour le traitement des pathologies (Libman et al 2005)

Les radicaux libres et les espegraveces drsquooxygegravene ont eacuteteacute associeacutes agrave des maladies

cardiovasculaires et inflammatoires et mecircme interviennent dans le cancer et le

vieillissement Des efforts visant agrave compenser les dommages causeacutes par ces espegraveces sont

de plus en plus reconnus comme une base pour des nouvelles approches theacuterapeutiques

et dans le domaine de la meacutedecine preacuteventive les antioxydants connaissent un regain

drsquointeacuterecirct (Isren et al 2001)

Le deacuteveloppement de nouveaux antioxydants drsquoune bonne capaciteacute antioxydante

srsquoavegravere indispensable pour lutter contre les pheacutenomegravenes drsquooxydations Dans ce but

lrsquoinvestigation des plantes repreacutesente un potentiel inestimable pour la deacutecouverte de

nouvelles substances agrave caractegravere antioxydant si lrsquoon considegravere que ces plantes peuvent

contenir des centaines voire des milliers de meacutetabolites secondaires Ces derniers

repreacutesenteacutes actuellement par 100 000 substances identifieacutees pourraient ecirctre utiliseacutes dans

la preacutevention de certaines maladies (Cowan 1999)

Les eacutetudes portant sur lrsquoactiviteacute antioxydante sont baseacutees sur lrsquoameacutelioration des

techniques drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques agrave partir des produits naturels (Jerez et

al 2006)

Matricaria pubescens est une plante meacutedicinale tregraves utiliseacutee en meacutedecine

traditionnelle en Algeacuterie et notamment par les populations du Sahara central et

septentrional (maiza et al 2011) Bien que relativement abondantes et tregraves utiliseacutee

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

1

15

2

25

3

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

esg

10

0g

MS

)

a

0

05

1

15

2

25

3

30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

0

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30mn

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g1

00

gM

S)

Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

02

04

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1

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gM

S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

d e

a a

Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

01

02

03

04

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05

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07

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Tan

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

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20

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Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 12: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Introduction

2

traditionnellement en Algeacuterie peu de travaux ont porteacute sur lrsquoeacutetude de lrsquoactiviteacute

antioxydante de cette plante meacutedicinale

Selon Naczk et Shahidi (2004) Druynska et al (2007) les conditions

drsquoextraction ont un effet sur les teneurs des extraits en substances antioxydantes et

lrsquoactiviteacute antioxydante

La preacutesente eacutetude comprend deux parties principales la premiegravere est une synthegravese

bibliographique comportant une description de la matricaire et des antioxydants

La deuxiegraveme partie de ce travail est une eacutetude expeacuterimentale ougrave sont preacutesenteacutes

Les extractions des antioxydants de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes

dureacutees drsquoextraction (30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune

nuit dincubation) en utilisant plusieurs solvants (eau aceacutetone (50 et 100)

meacutethanol (50 et 100) et eacutethanol (50 et 100))

Le dosage de quelques substances antioxydantes dont les polypheacutenols les

flavonoiumldes les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes

La deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits de la matricaire en

utilisant deux meacutethodes pouvoir reacuteducteur et activiteacute anti-radicalaire

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

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MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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1h 2h 4h

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c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

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Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

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2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

b

0

10

20

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60

70

80

90

100

Po

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iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 13: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

3

La phytotheacuterapie est une discipline allopathique destineacutee agrave preacutevenir et agrave traiter

certains troubles fonctionnels etou certains eacutetats pathologique au moyen de plantes de

parties de plantes (feuilles fleurs racines fruits et graines) ou de preacuteparations agrave base de

plantes (Wichtl et Anton 2003)

Les remegravedes naturels et surtout les plantes meacutedicinales ont eacuteteacute pendant longtemps

les principaux voire les unique recours pour soigner les pathologies Ces plantes sont

eacutegalement la matiegravere premiegravere pour la meacutedecine moderne (Ould el hadj et al 2003)

Les ressources veacutegeacutetales du Sahara constituent une flore drsquoenviron 500 espegraveces

(Maiza et al 1993) Certaines possegravedent des proprieacuteteacutes pharmacologiques qui leur

confegraverent un inteacuterecirct meacutedicinal Parmi ces espegraveces on trouve Matricaria pubescens qui

est tregraves utiliseacutee par les habitants du Sahara et qui fait lrsquoobjet de notre eacutetude

I Classification et description de Matricaria pubescens

I1Noms communs

Le nom scientifique du Matricaire Matricaria pubescens deacuterive du latin

Matricaria deacutesignant matrice Pubescens signifiant velu

En arabe Guertoufa Ouazouaza

En targui Ainesnis

En anglais Hairy camomille

En franccedilais Pubescente de camomille (IUCN Centre for Meacutediterranean

Cooperation 2005)

I2Classification

Parmi les milliers de plantes meacutedicinales recenseacutees agrave ce jour la famille des

asteacuteraceacutees dont fait partie Matricaria pubescens (Ould el hadj et al 2003) est lune des

plus grandes familles des angiospermes avec environ 1100 genres et 25000 espegraveces qui

sont reacuteparties dans pratiquement toutes les reacutegions du globe Le genre Matricaria

compte environ 700 espegraveces (Hammoud 2009)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

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c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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1h 2h 4h

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c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

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Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

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2h+N

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Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

b

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

4

La classification de Matricaria pubescens est donneacutee comme suite

Regravegne veacutegeacutetal

Embranchement phaneacuterogames (permaphytes)

Sous-embranchement angiospermes

Classe dicotyleacutedones

Sous-classe meacutetachlamydeacutees

Ordre campanales (astrales)

Famille composeacutees (asteacuteraceacutees)

Genre Matricaria

Espegravece Matricaria pubescens (Grisvard et Chaudin 1964)

I3Description morphologique

Matricaria pubescens est une petite plante annuelle de 10 agrave 20 cm drsquohauteur

meacutesotheacuterophyte caracteacuteriseacutee par

- Une racine pivotante fortement ramifieacutee dans la partie supeacuterieure

- Une tige ramifieacutee strieacutee et couverte de poils plats eacutetaleacutes

- Des feuilles primordiales peacutetioleacutees entiegraveres ou sub-entieacuteres et allongeacutees Les

autres sont toutes caulinaires uni-ou bipennatiseacutequeacutees plus ou moins denseacutement

couvertes de poils

- Des capitules tregraves petits de 5 agrave 7 mm et isoleacutes agrave lrsquoextreacutemiteacute des rameaux

- Des eacutecailles du peacutericline sur au moins trois rangs vertes de plus en plus

largement scarieuses de lrsquoexteacuterieur vers lrsquointeacuterieur et marqueacutees de brun fonceacute

tout autour

- Des eacutecailles du reacuteceptacle oblongues scarieuses et obtuses

- Des fleurs externes neutres ou femelles agrave grandes ligules blanches sinueacutees au

sommet les internes sont hermaphrodites ou steacuteriles jaunes agrave tube aileacute

- Des fruits de petits akegravenes lineacuteoleacutes agrave pappus scarieux blanc plus long qursquoeux et

presque aussi long que les fleurs tubuleuses caduc (Negravegre 1962 Quezel et

al 1963)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

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30mn

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10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

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b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Tan

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g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

d

e

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

12

14

30mn

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

b

0

02

04

06

08

1

12

14

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

b

0

10

20

30

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70

80

90

100

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

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0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

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08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

5

La plante entiegravere agrave un parfum tregraves agreacuteable la floraison a lieu le printemps au

centre et au nord du Sahara algeacuterienne (IUCN Center for Meacutediterrenean Cooperation

2005) (figure 1)

Figure 1 Photo de Matricaria pubescens (IUCN Center for Meacutediterranean Cooperation

2005)

I4 Reacutepartition geacuteographique

Au niveau local (Sahara Algeacuterien) cette plante est commune dans tout le Sahara

septentrional correspondant aux reacutegions de Biskra Figuig El oued Touggourt

Colomb-Beacutechar Ghardaia El golea Ouargla Beni Abbegraves et dans le Sahara

central qui comprend les reacutegions de Adrar Tamanghasset Djanet Fort-polignac

Fort-flatters Timimoun In salah (Ozenda 1991)

Au niveau reacutegional lrsquoAfrique du nord

Au niveau global selon les critegraveres de lrsquoUICN (lrsquoUnion Internationale pour la

Conservation de la Nature) cette matricaire est endeacutemique en Afrique du nord

I5 Habitat

Matricaria pubescens prospegravere en conditions de deacutesert avec 100 mm au moyen

des preacutecipitations de Pluit par anneacutee On la trouve toujours dans les oueds non-salins

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

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30mn

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

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10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

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02

04

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30mn

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00

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

0

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gM

S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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f

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

cd

30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

d

Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

12

14

30mn

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

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b

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1

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cteu

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10

0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

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tira

dic

alai

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b

0

10

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100

Po

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iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Page 16: Etude de l ’activité antioxydante d ’une plante médicinale ...

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

6

dans les sols sableacutes et de temps en temps sur les sols caillouteux (IUCN Centre for

Meacutediterranean Cooperation 2005)

I6Utilisation de Matricaria pubescens

Elle nest pas rapporteacutee en tant que toxique par les nomades Tregraves utiliseacutee dans la

meacutedecine traditionnelle et autre

- Au Maroc dans Tafilalet et Fegraves la deacutecoction de Matricaria pubescens est

recommandeacutee pour lrsquootite

- Un massage par son huile est utile en cas de rhumatisme la neacutevralgie et la sciatique

(IUCN Centre for Meacutediterranean Cooperation 2005)

- Matricaria pubescens a des proprieacuteteacutes anti-inflammatoire antimicrobiennes

cytotoxiques (Maiza et al 2011)

- Elle est utiliseacutee en infusion pour faciliter la digestion

- Elle est tregraves reacuteputeacutee pour ses qualiteacutes aromatiques est surtout utiliseacutee pour

aromatiser les soupes particuliegraverement durant le moi de Ramadhan Elle preacutesente

eacutegalement un inteacuterecirct pastoral puisqursquoelle est surtout brouteacutee par les chegravevres

(Chehma 2006)

- La matricaire est aussi largement utiliseacutee dans le Sahara comme filtre dans la

preacuteparation du beurre local et dans les preacuteparations fortifiantes et reconstituantes

apregraves accouchement ou longue maladie (Ouchikh et Serier 2004)

Le tableau suivant reacutecapitule les diffeacuterentes maladies traiteacutees par Matricaria

pubescens

Tableau 1 Utilisations traditionnelles de Matricaria pubescens (Maiza et al 1995)

Maladies Preacuteparation Modaliteacutes drsquoutilisation

rhumatisme Une deacutecoction agrave raison drsquounepoigneacutee de capitule et defeuille pour une theacuteiegravere etdemie drsquoeau

Un verre agrave theacute matin et soir

eacuteruptiondentaire

Pas de preacuteparation Frottement de la prise enfleacutee de lagencive avec un capitule de la

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

e

0

05

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30mn

Co

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sp

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10

0g

MS

)

Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

d

g

c

b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

c

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04

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30mn

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

d

b

1h 2h 4h

f

b

g

c

Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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30min

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Tan

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S)

Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

Nd Nd

f

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+n

b

Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

g)

Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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30min 1h 2h 4h

d

e

c

a

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

02

04

06

08

1

12

14

30mn

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

b

0

02

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1

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14

Po

uvo

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du

cteu

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10

0g)

Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

uvo

iran

tira

dic

alai

re(

)

b

0

10

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70

80

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100

Po

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iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

7

II Composition biochimique de Matricaria pubescens

Les matricaires sont des plantes aromatiques preacutesentant globalement les mecircmes

substances curatives agrave des proportions diffeacuterentes dont les principales sont les

flavonoiumldes et les huiles essentiels (Maiza et al 2011)

II1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les polypheacutenols suscitent actuellement beaucoup drsquointeacuterecirct en raison du beacuteneacutefice

qursquoil pourraient apporter en termes de preacutevention des maladies lieacutees au vieillissement

(Hennebelle et al 2004) Par conseacutequent lrsquointeacuterecirct augmente consideacuterablement quant agrave la

preacutesence drsquoantioxydant naturels Il sont utiliseacutes en industrie alimentaire et en meacutedecine

preacuteventive (Ksouri et al 2007)

matricaire

dermatose Un deacutecocteacute preacutepareacute commeindiqueacute preacuteceacutedemment dansles proportions mais en grandvolume

Indiqueacute comme bain corporel Lepatient doit rester en contact de lapreacuteparation pendant une dizaine deminute au moins

dysmeacutenorrheacutee La matricaire les clous degirofles la rue (Rutatuberculata) la cannelle et leZygophyllum sont seacutecheacutes puispulveacuteriseacutes et meacutelangeacutes agrave parteacutegale Une poigneacutee de lamixture est utiliseacutee pourpreacuteparer une deacutecoction avecune theacuteiegravere drsquoeau

Un verre de theacute de la deacutecoction dupremier jour menstruation pendanttrois cycles conseacutecutifs

asthme Deacutecocteacute additionneacute de beurrelocal ou laquodrsquohanraquo

La prise orale est preacuteconiseacutee

Maladieimmunitaire(allergie)

Deacutecoction ou infusion Prise orale

Fiegravevre oupiqure descorpion

Les capitules de matricairesont bouillis dans de lrsquoeau oudu lait

Prise orale

Infectionoculaire

Les capitules sont trempeacutesdans de lrsquoeau chaude puiseacutecraseacutes

Le liquide utiliseacute comme lavementpour les yeux par instillation

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

8

II11Deacutefinition

Les composeacutes pheacutenoliques forment un tregraves vaste ensemble de substance qursquoil est

difficile de deacutefinir Lrsquoeacuteleacutement structural fondamental qui les caracteacuterise est la preacutesence

drsquoau moins un noyau benzeacutenique auquel est directement lieacute un ou plusieurs groupes

hydroxyles libre ou engageacute (Bruneton 2008) Les polypheacutenols peuvent ecirctre conjugueacutes

avec un ou plusieurs reacutesidu(s) glucidique(s) ou ecirctre lieacutes agrave drsquoautres composeacutes chimiques

tels que des acides carboxyliques des amines des lipides ou avec drsquoautres pheacutenols

(Martin et Andriantsitohaina 2002) Ils sont syntheacutetiseacutes agrave partir de trois voies

- Celle de lrsquoacide shikimique qui conduit apregraves transformation et deacutesamination aux

acides cinnamiques preacutecurseurs de la majoriteacutes des acides pheacutenoliques (Richter 1993

Croteau et al 2002)

- Celle issue de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave des poly β-coesters (polyaceacutetates) de longueur

variable menant par cyclisation agrave des composeacutes polycycliques tels que les dihydroxy-18

anthraquinones ou les naphtoquinones (Richter 1993 Martin et Andriantsitohaina

2002)

- Celle issue du shikimate et de lrsquoaceacutetate qui conduit agrave lrsquoeacutelaboration de composeacutes

drsquoorigine mixte (flavonoiumldes lato sensu stilbegravenes pyrones xanthones etchellip) (Bruneton

2009)

II12Classification

Les composeacutes pheacutenoliques peuvent ecirctre regroupeacutes en de nombreuses classes (tableau 2)

qui se diffeacuterencient drsquoabord par la complexiteacute du squelette de base allant drsquoun simple C6 agrave

des formes tregraves polymeacuteriseacutees ensuite par le degreacute de modification du squelette (degreacute

drsquooxydation drsquohydroxylation de meacutethylation ) et par les liaisons possibles de ces

moleacutecules de base avec drsquoautre moleacutecules (glucides lipides proteacuteines ou autre

meacutetabolites secondaires) (Macheix et al 2006)

Tableau 2 Principales classes des composeacutes pheacutenoliques (Harbone et Williams 2000

Macheix et al 2006

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

9

II121Les pheacutenols simples et leurs deacuteriveacutes

Les formes pheacutenoliques les plus simples preacutesentent des structures chimiques allant

de simples pheacutenols en C6 aux flavonoiumldes en C15 et agrave des moleacutecules proches (Macheix et

al 2006)Cette classe de composeacutes englobe les deacuteriveacutes des acides hydroxybenzoiumlques

les deacuteriveacutes des acides hydroxycinnamiques et les coumarines (Ribeacutereau-Gayon 1968)

a)Acides hydroxybenzoiumlques

Ils ont une formule de C6-C1 deacuteriveacute de lrsquoacide benzoiumlque sont tregraves communs

aussi bien sous forme libre que combineacutes agrave lrsquoeacutetat drsquoesters ou drsquoheacuteteacuterosides Ils peuvent

ecirctre des eacuteleacutements constitutifs des tannins hydrolysables (tableau 3) (Macheix et al

2006 Bruneton 2008)

Squelettes carboneacutes Classes Exemples

C6 Pheacutenols simples Catheacutechol

C6-C1 Acide hydroxybenzoique Ρ-hydroxybenzoique

C6-C3 Acide hydroxycinnamique

Coumarines

Acide cafeacuteique

scopoleacuteines

C6-C4 Naphtoquinones Juglone

C6-C2-C6 Stilbegravenes Reacutesveacuteratrole

C6-C3-C6 Flavonoides isoflavonoides Querceacutetine-

cyanidinediadzeacuteine

(C6-C3)2 Lignanes Pinoreacutesinoles

(C6-C3) n lignines

(C6-C3-C6) n Tannins condenseacutes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau 3 Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (

esteacuterifieacutes en

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono

cafeacuteyl malique)

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacuteni

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec

de glucose (Bruneton 2008)

par cyclisation interne de la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Acides hydroxybenzoiumlques

R1

acide

parahydroxybenzoiumlqueH

acide protocateacutechique H

acide vanillique H

acide gallique H

acide syringique H

acide salicylique OH

acide gentisique OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

10

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix

b) Acides hydroxycinnamiques

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C

de celle de lrsquoacide cinnamique (tableau 4) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

Ester drsquoalcool aliphatique (acide mono- et dicofeyl-tartrique feacuteruloyl

Ester de lrsquoacide quinine (acide chlorogeacutenique) et depside (acide

lithospermique) (Bruneton 2008)

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

tyramine ou de la putrescine) ou combineacutes avec des glucides ester de glucose ou eacutether

se (Bruneton 2008) Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

deacuterivent aussi des acides hydroxycinnamiques (Macheix et 2006)

Acides hydroxybenzoiumlques

R2 R3 R4 Formule

H OH H

OH OH H

OCH3 OH H

OH OH OH

OCH3 OH OCH3

OH H H H

OH H H OH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxybenzoiques (Macheix et al 2006)

Ils repreacutesentent une classe tregraves importante dont la structure de base (C6-C3) deacuterive

) Les acides hydroxycinnamiques sont souvent

tartrique feacuteruloyl-tartrique et

que) et depside (acide rosmarinique et

Ils peuvent ecirctre inclus dans des structures en amides (deacuteriveacutes de la spermidine de la

ester de glucose ou eacutether

Les coumarines deacuterivent des acides hydroxycinnamiques

la chaine lateacuterale et certaines formes complexes Les stilbenes

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Tableau4 Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

II122Les flavonoiumldes

a)Deacutefinition

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

comme son nom lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

b) Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R1

acide paracoumarique H

acide cafeacuteique OH

acide feacuterulique OCH

acide sinapique OCH

E-aneacutethole H

acide 3 4-

dimeacutethoxycinnamiqueOCH

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

11

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe c

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

(Bruneton 1999 Harborne et Williams 2000)

Structure et classification des flavonoiumldes

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Acides hydroxycinnamiques

R2 R3 Formule

OH H

OH H

OCH3 OH H

OCH3 OH OCH3

OCH3 H

OCH3 OCH3 H

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

Principales structures des acides hydroxycinnamiques (Macheix et al 2006)

Le terme flavonoiumlde provenant du latin flavus signifiant jaune deacutesigne une

tregraves large gamme de composeacutes naturels appartenant agrave la famille des polypheacutenols Ils sont

consideacutereacutes comme des pigments quasi universels des veacutegeacutetaux Ce groupe comprend

lrsquoindique des composeacutes jaunes mais aussi drsquoautres couleurs ou incolores

flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

De nos jours plus de 8000 flavonoiumldes ont eacuteteacute identifieacutes Ils ont une origine

biosyntheacutetique commune et par conseacutequent possegravedent tous un mecircme squelette de base agrave

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

12

quinze atomes de carbones constitueacute de deux uniteacutes aromatiques deux cycles en C6 (A

et B) relieacutes par un heacuteteacuterocycle en C3 (figure 2) (Bruneton 1999 Pietta 2000)

Figure 2 Structure geacuteneacuterale du noyau des flavonoiumldes (Heim et al 2002)

Structuralement les flavonoiumldes se reacutepartissent en plusieurs classes de moleacutecules

selon le degreacute drsquooxydation et la nature des substituants porteacutes sur le cycle C (Pietta

2000) 14 groups diffeacuterents ont eacuteteacute identifieacutes dont six groupes sont particuliegraverement les

plus reacutepandus et les mieux caracteacuteriseacutes flavones isoflavones flavanones flavanols

flavonols anthocyanidines (Heim et al 2002 Hendrich 2006) Les composeacutes de

chaque classe se distinguent entre eux par le nombre la position et la nature des

substituants (groupements hydroxyles meacutethoxyles et autres ) sur les deux cycles

aromatiques A et B (Heim et al 2002)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

13

Tableau 5 Structure chimique de certains flavonoiumldes repreacutesentatifs de chaque classe

(Heim et al 2002)2

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

14

II123Les tannins

Les tannins sont des composeacutes pheacutenoliques agrave haut degreacute de polymeacuterisation

solubles dans lrsquoeau de poids moleacuteculaire eacuteleveacute (500 et 3000 Dalton) (Naczk et al 1994)

La caracteacuteristique la plus deacuteterminante des tanins est leur capaciteacute agrave former des

complexes (par preacutecipitation) avec les polymegraveres naturels comme les proteacuteines les

polysaccharides et les mineacuteraux (Garro-Galvez et al 1997 Rubanza et al 2005) En

raison de leur structure et de leurs proprieacuteteacutes chimiques deux classes sont distingueacutees

les tannins hydrolysables et les tannins condenseacutes (Schaenberg et Hess 2007)

a) Tannins hydrolysables

Ce sont des esters de glucose (figure 3) crsquoest-agrave-dire un noyau central de glucose

sur lequel se fixent au moyen drsquoune liaison ester des acides lrsquoacide gallique pour le

groupe des gallotannins et lrsquoacide hexahydroxydipheacutenique ou ellagique pour le groupe

des ellagitannins (Guignard 1979 Derbel et Ghedira 2005)

Leur hydrolyse par des acides des bases ou certains enzymes libegravere le glucose

ainsi que les acides gallique ou pheacutenoliques lieacutes (Khanababaee et Ree 2001 Bennik

2002)

b) Tannins condenseacutes

Les tannins condenseacutes sont des oligomegraveres ou des polymegraveres de flavane-3-ols ou

de flavane-34-diols deacuteriveacutes de la cateacutechine lieacutes entre eux par des liaisons carbone ndash

carbone le plus souvent 4-6 appeleacutes tannins flavaniques ou cateacutechiques (Manach et al

2004)

Les tannins condenseacutes ou proanthocyanidines produisent des anthocyanidines

quand ils sont chauffeacutes en milieu acide (Reed 1995 Cheynier 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

15

Figure 3 Structure des acides galliques et ellagique et drsquoun tannin hydrolysable

(Labieniec et al 2003)

II13Proprieacuteteacutes antioxydantes des composeacutes pheacutenoliques

Grace agrave leur diversiteacute structurale les composeacutes pheacutenoliques exercent une activiteacute

antioxydante via plusieurs meacutecanismes et agissent agrave diffeacuterents niveaux des reacuteactions

radicalaires par la cheacutelation des meacutetaux de transition la neutralisation des radicaux libres

lrsquoinhibition drsquoenzymes geacuteneacuteratrice de radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese

drsquoenzymes antioxydantes (Cotelle et al 1995 Bors et al 1997 Grassmann et al

2002 Su et al 2007) Cette activiteacute est largement lieacutee agrave leur structure agrave savoir le

nombre et la position des groupements hydroxyles et le degreacute de meacutethylation de

glycosylation et de polymeacuterisation (Heim et al 2002) Lrsquoactiviteacute antioxydante des

composeacutes pheacutenoliques augmente avec le degreacute de polymeacuterisation et diminue avec le

degreacute de meacutethylation et de glycosylation au niveau des groupements hydroxyles (Robards

et al 2005)

Acide tannique

Acide galliqueAcide ellagique

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

16

II131Cheacutelation des meacutetaux

Les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu2+) sont essentiels pour certaines fonctions

physiologiques Ils peuvent ecirctre soit des constituants des heacutemoproteacuteines soit des

cofacteurs des diffeacuterentes enzymes du systegraveme de deacutefense antioxydant Fe pour la

catalase (Goudable et Favier 1997) Cu et Zn pour la superoxyde dismutase Mais ils

sont aussi responsables de la production du radical hydroxyle par la reacuteduction du

peroxyde drsquohydrogegravene selon la reacuteaction de Fenton (Cottelle 2001)

H2O2 + Fe2+ (Cu+) OHdeg + OH- + Fe3+ (Cu2+)

Cette reacuteaction peut ecirctre inhibeacutee par les composeacutes pheacutenoliques notamment les

flavonoiumldes sont consideacutereacutes comme de bons cheacutelateurs de ces ions meacutetalliques (Halliwell

2007) Ils sont connus pour leur capaciteacute agrave former des complexes stables avec les ions

meacutetalliques gracircce agrave leurs fonctions cateacutechols 3`-hydroxyl 4`-hydroxyl sur le cycle B

3-hydroxyl et 4-oxo de lrsquoheacuteteacuteroxyle C et 4-oxo et 5-hydroxy de lrsquoheacuteteacuterocycle C et du

cycle A respectivement (figure 4) (pietta 2000 Heim et al 2002)

Figure 4 Sites de cheacutelation des meacutetaux de transition par les flavonoiumldes

(Pietta 2000)

II132Neutralisation des radicaux libres

Les composeacutes pheacutenoliques sont des pieacutegeurs efficaces de radicaux libres en les

reacuteduisant par transfert direct drsquoun eacutelectron sur leur derniegravere couche eacutelectronique (Sokol-

Letowsha et al 2007 Ghedira 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

17

Les composeacutes pheacutenoliques en particulier les flavonoiumldes sont susceptibles de

reacuteagir avec la plupart des radicaux libres radicaux hydroxyles (OHbull) anion super-

oxydes (O2oline) et radicaux peacuteroxylipidiques (Pietta 2000) Leur activiteacute anti-radicalaire

neacutecessite

bull La structure 3prime4prime -dihydroxy du cycle B qui est essentielle agrave lrsquoactiviteacute des

flavonoiumldes posseacutedant un heacuteteacuterocycle satureacute

bull La double liaison 2-3 conjugueacutee avec la fonction 4-oxo qui est responsable de

la deacutelocalisation drsquoeacutelectrons stabilisant le radical aroxyl

bull Les hydroxyles en positions 3 et 5 qui permettent une activiteacute antiradicalaire

maximale (figure 5) (Wang et al 2004 Soobrattee2005 Valko et al 2006

Sokol-Letowska et al 2007)

Figure 5 Les groupements fonctionnels des flavonoiumldes intervenant dans leur activiteacute

anti-radicalaire (Soobrattee 2005)

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

18

Les flavonoiumldes preacuteviennent la peroxydation lipidique en reacuteagissant avec les

radicaux libres qui sont susceptibles drsquoarracher un proton sur le groupement CH2 situeacute

entre deux doubles liaisons des acides gras polyinsatureacutes (Harborne et Williams 2000) et

protegravegent ainsi les membranes cellulaires (Havsteen 2002)

II133Inhibition drsquoenzymes

Les composeacutes pheacutenoliques affectent lrsquoactiviteacute de nombreux systegravemes

enzymatiques Les flavonoiumldes ont la capaciteacute drsquoinhiber les reacuteactions enzymatiques

impliqueacutees dans le stress oxydant Il a eacuteteacute deacutemontreacute que certains flavonoiumldes comme

lrsquoapigenine la querceacutetine et la myriceacutetine inhibent fortement la xanthine oxydase qui

catalyse la reacuteaction de transformation de lrsquohypoxanthine en acide urique (Da Salivaa et

al 2004)

II14Proprieacuteteacutes antioxydantes des tannins

Les tannins peuvent agir comme antioxydants Cependant la capaciteacute anti-

radicalaire des dimegraveres et trimegraveres de procyanidines est augmenteacutee avec la galloylation et

dans une moindre mesure avec la longueur de chaine mais eacutegalement influenceacutee par la

position des substituants galloyl (Cheynier 2005 Gramza et Kolczak 2005)

Les tannins agissent comme donneurs de protons face aux radicaux libres

lipidiques produits lors de la peroxydation Des radicaux tanniques plus stables sont alors

formeacutes ce qui a pour conseacutequence de stopper la reacuteaction en chaine de lrsquoauto-oxydation

lipidique Ce sont de tregraves bons capteurs de radicaux libres (Shahidi 1997 Bossokpi

2003)

II2Les huiles essentielles

II21Deacutefinition

Communeacutement appeleacutes essences sont des extraits veacutegeacutetaux volatiles et odorants

obtenus par un proceacutedeacute simple de distillation elles sont utiliseacutees dans lrsquoindustrie

alimentaire pharmaceutique et cosmeacutetique Les huiles essentielles sont des meacutelanges

complexes et eacuteminemment variables de constituants qui appartiennent de faccedilon quasi

exclusive agrave deux groupes caracteacuteriseacutes par origines bioeacutenergeacutetiques distinctes le groupe

des Terpegravenoiumldes drsquoune part et le groupe des composeacutes aromatiques deacuteriveacutes du

pheacutenylpropane beaucoup moins freacutequents drsquoautre part Elles peuvent eacutegalement

Chapitre 1 Synthegravese bibliographique

19

renfermer divers produits issus de processus deacutegradatifs mettant en jeu des constituants

non volatils (Bruneton 1999)

Les fonctions possibles des huiles essentielles sont multiples (protection contre les

preacutedateurs de la plante attraction des insectes pollinisateurs inhibition de la germination

et de la croissance inhibition de la multiplication des bacteacuteries et des champignons)

(Richter 1993)

II22Proprieacuteteacutes antioxydantes des huiles essentielles

La reconnaissance des huiles essentielles comme antioxydants naturels est

maintenant bien acquise et elle est pour une part agrave lrsquoorigine du regain drsquointeacuterecirct qui est

porteacute agrave ces moleacutecules dans le domaine de la nutrition et de la pharmacologie (Avlessi et

al 2004 Helem et al 2004 Gardeli et al 2007 Girotti 2006 Erkan et al 2008)

Grace agrave leur diversiteacute structurale les huiles essentielles sont impliqueacutees dans cette

activiteacute via plusieurs meacutecanismes agissant agrave diffeacuterents nivaux des reacuteactions radicalaires

par la cheacutelation des meacutetaux lrsquoeffet scavenger lrsquoinhibition des enzymes geacuteneacuteratrices des

radicaux libres et lrsquoinduction de la synthegravese des enzymes antioxydants (Ipek et al 2005

Vukovic-Gacic et al 2006)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

20

I Mateacuteriels et meacutethodes

I1 Preacuteparation du mateacuteriel veacutegeacutetal

I11 Matiegravere veacutegeacutetale

La plante laquo Matricaria pubescens raquo eacuteteacute reacutecolteacute dans la reacutegion de Hassi Massaoud

wilaya de Ouargla durant le mois drsquoavril 2012 Apregraves la reacutecolte lrsquoeacutechantillon a eacuteteacute seacutecheacute

agrave tempeacuterature ambiante dans un endroit aeacutereacute agrave lrsquoombre pour mieux conserver les

moleacutecules sensibles agrave la chaleur

I12 Broyage et tamisage

Une fois que notre plante est bien seacutecheacutee elle est broyeacutee agrave lrsquoaide drsquoun broyeur

eacutelectrique puis tamiseacutee agrave lrsquoaide drsquoun tamiseur de 250 microm La poudre reacutecupeacutereacutee a eacuteteacute

conserveacutee dans un reacutecipient en verre agrave lrsquoobscuriteacute et agrave une tempeacuterature ambiante pour

utilisation ulteacuterieure

I2Preacuteparation des extraits

La preacutesente eacutetude consiste agrave optimiser quelques paramegravetres drsquoextraction des

composeacutes pheacutenoliques totaux agrave savoir la dureacutee et le solvant drsquoextraction

I21 Effet de la dureacutee drsquoextraction

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de

Matricaria pubescens les extraits sont preacutepareacutes en utilisant comme solvant lrsquoeau

distilleacutee apregraves 30minutes 1heure 2heures 4heures et 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoextraction

Une prise drsquoessai de la poudre (0 3g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction agrave

lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique Apregraves lrsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges

sont filtreacutes Les extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I22Effet du solvant drsquoextraction

Les composeacutes pheacutenoliques totaux de Matricaria pubescens sont extraits en utilisant

quatre solvants de polariteacutes diffeacuterentes eau aceacutetone (50 et 100) meacutethanol (50 et

100) et eacutethanol (50 et 100)

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

21

Une prise drsquoessai de la poudre (03g) est mise en contact avec 40ml de solvant

drsquoextraction Le meacutelange est soumis agrave une agitation agrave lrsquoaide drsquoun agitateur magneacutetique

Apregraves quatre heures drsquoagitation agrave lrsquoabri de la lumiegravere les meacutelanges sont filtreacutes Les

extraits obtenus sont conserveacutes agrave 4degC

I3Dosage des composeacutes pheacutenoliques

I31Dosage des polypheacutenols totaux

I311Principe

Le principe de cette meacutethode est baseacute sur la reacuteduction en milieu alcalin de lrsquoacide

phosphotungustique (H3PW12O40) et phosphomolybdique (H3PMoO12O40) du reacuteactif du

Folin- Ciocalteu en un meacutelange drsquooxydes bleus de tugstegravene (W8O23) et de molybdegravene

(Mo8O28) lors de lrsquooxydation des polypheacutenols La couleur bleue obtenue est

proportionnelle au taux de composeacutes pheacutenoliques contenus dans lrsquoextrait (Ribeacutereau-

Gayon et al 1982)

I312Mode opeacuteratoire

La teneur en composeacutes pheacutenoliques est estimeacutee selon la meacutethode de Goli et al

(2005) Deux cent microlitres drsquoextrait de Matricaria pubescens sont meacutelangeacutes avec 1ml

du reacuteactif de FolinndashCiocalteu Apregraves 3mn 0 8 ml de la solution de carbonate de sodium

(7 5) sont ajouteacutes Apregraves 1h drsquoincubation lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 740nm La

concentration en composeacutes pheacutenoliques des extraits exprimeacutee en gramme par 100 g de

matiegravere segraveche est deacutetermineacutee en se reacutefeacuterant agrave la courbe drsquoeacutetalonnage reacutealiseacutee avec de

lrsquoacide gallique (annexe)

I32Dosage des flavonoiumldes

I321 Principe

Les flavonoiumldes sont des composeacutes pheacutenoliques polyhydroxyleacutes qui forment des

complexes jaunacirctres par cheacutelation des meacutetaux (Fer et Aluminium) (Ribereau-Gayon

1968)

I322Mode opeacuteratoire

La teneur en flavonoiumldes des extraits de la matricaire est deacutetermineacutee par la

meacutethode de Bahorun et al (2004) Une partie aliquote de chaque extrait a eacuteteacute ajouteacute agrave un

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

22

volume eacutegal de chlorure drsquoaluminium (2) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 410nm apregraves 15mn

Les reacutesultats sont exprimeacutes en gramme eacutequivalent querceacutetine par 100 g de matiegravere segraveche

agrave partir de la courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

I33Dosage des tannins

I331Principe

Le dosage des tannins condenseacutes est baseacute sur la condensation des composeacutes

polypheacutenoliques avec la vanilline en milieu acide Il est speacutecifique des flavanes -3-ols

(Price et al 1978) celle des tannins hydrolysable est baseacutee sur une reacuteaction avec le

chlorure ferrique (Mole et Waterman 1987)

I332Mode opeacuteratoire

Dosage des tannins condenseacutes

Cette meacutethode de deacutetermination du taux des tannins condenseacutes a eacuteteacute proposeacutee par

Swain et Hillis (1959) 2 ml du reacuteactif de la vanilline (1g de vanilline dissoudre dans 70

dacide sulfurique) sont meacutelangeacutes avec 1 ml drsquoextrait Apregraves incubation agrave 50deg C

pendant 20 mn labsorbance a eacuteteacute mesureacutee agrave 500 nm Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent cateacutechine par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

Dosage des tannins hydrolysables

Le taux des tannins hydrolysables est deacutetermineacute par la meacutethode de Mole et Waterman

(1987) qui est baseacutee sur la reacuteaction avec le chlorure ferrique 1 ml de lrsquoextrait est

meacutelangeacute avec 35 ml de la solution de Fe cl3 (162 g est dissous dans 001M de HCl)

Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave 660 nm apregraves15 secondes Les reacutesultats sont exprimeacutes en

gramme eacutequivalent acide gallique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir de la courbe

drsquoeacutetalonnage (annexe)

II Deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydante

II1Pouvoir reacuteducteur

II11Principe

Le pouvoir reacuteducteur est lrsquoaptitude des antioxydants preacutesents dans lrsquoextrait agrave

reacuteduire le fer ferrique (Fe3+) du complexe ferricyanure en fer ferreux (Fe2+) La forme

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

23

reacuteduite donne une couleur verte qui est proportionnelle au pouvoir reacuteducteur de lrsquoextrait

(Chung et al 2006)

II12Mode opeacuteratoire

Le pouvoir reacuteducteur est estimeacute par la meacutethode drsquoArabshahi-Delouee et urooj

(2007) 1ml drsquoextrait est ajouteacute agrave 25ml de tampon phosphate (02 M pH 66) et 2 5ml

de ferricyanure de potassium (1) Apregraves incubation agrave 50degc pendant 20mn 25ml

drsquoacide trichloraceacutetique (10) sont ajouteacutes au meacutelange apregraves une centrifugation pendant

10 min 25 ml de surnageant sont ajouteacutes au meacutelange de 25ml drsquoeau distilleacutee et 05ml

du chlorure ferrique (10)Lrsquoabsorbance est mesureacutee agrave 700 nm Les reacutesultats sont

exprimeacutes en gramme eacutequivalent acide ascorbique par 100g de matiegravere segraveche agrave partir

drsquoune courbe drsquoeacutetalonnage (annexe)

II2Pouvoir antiradicalaire

II21principe

Le DPPH (22-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre stable ou accepteur

drsquohydrogegravene de couleur violet intense (Cavar et al 2009) Ce radical perd sa coloration

native quand il se lie avec des substances antioxydants qui lui transfegraverent des eacutelectrons

ou des protons La forme reacuteduite du DPPH confegravere agrave la solution une couleur jaune

(Gadow et al 1997) Le virage vers cette coloration et lrsquointensiteacute de la deacutecoloration

deacutecoule de la nature de la concentration et de la puissance des principes actifs preacutesents

(kroyer 2003 Es Safi et al 2007)

II22 Mode opeacuteratoire

Lrsquoeffet scavenger du DPPH est determineacute par la meacutethode de Kroyer et Hegedus

(2001) 300microl drsquoextrait sont ajouteacutes agrave 2700microl de DPPH (60microM) Lrsquoabsorbance a eacuteteacute lue agrave

517nm apregraves 1heure drsquoincubation agrave lrsquoobscuriteacute (Kroyer et Hegedus 2001) Le

pourcentage de lrsquoactiviteacute scavenger du radical DPPH est exprimeacute par la formule

suivante

AbT absorbance de teacutemoin (300μl meacutethanol+ 2700 microl DPPH)

AbE absorbance de lrsquoeacutechantillon (300μl extrait+2700microl DPPH)

scavenger de radical DPPH= (AbT -AbE AbT) x 100

Chapitre 2 Mateacuteriels et meacutethodes

24

III Etude statistique

Toutes les donneacutees repreacutesentent la moyenne de trois essais Lrsquoanalyse statistique

des reacutesultats est effectueacutee avec lrsquoapplication ANOVA (STATISTICA 55) et la

comparaison des donneacutees est prise agrave la probabiliteacute Plt005

Reacutesultats et discussions

24

I Reacutesultats et discussions

I1 Les composeacutes pheacutenoliques

Les conditions drsquoextraction (type de solvant taille des particules eacutetat du mateacuteriel

veacutegeacutetal temps) peuvent influencer significativement le taux et la nature des composeacutes

extraits (Goli et al 2004 Nack et Shahidi 2006 Spigno et De Faveri 2007)

Dans le preacutesent travail il a eacuteteacute proceacutedeacute agrave lrsquooptimisation de la dureacutee et du solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques des extraits de Matricaria pubescens ainsi qursquoagrave la

deacutetermination de lrsquoactiviteacute antioxydantes des extraits obtenus Aucun travail similaire sur

lrsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques et lrsquoeacutevaluation de lrsquoactiviteacute antioxydante nrsquoest

rapporteacute dans la bibliographie

Pour eacutetudier lrsquoeffet de la dureacutee drsquoextraction lrsquoeau distilleacutee agrave eacuteteacute utiliseacutee comme

solvant les extraits sont preacutepareacutes apregraves 30minutes 1heure 2heures 3heures 4heures et

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave une tempeacuterature ambiante

Lrsquoanalyse statistique des extraits obtenus apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction

indique que la teneur en composeacutes pheacutenoliques la plus eacuteleveacutee (236 g 100g) est obtenue

apregraves 4h drsquoextraction suivie par les teneurs moyennes (229 et 225 g100g) obtenues

respectivement apregraves 2 heures et 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation alors que les

teneurs les plus faible (185 et 176 g100g) sont obtenues apregraves 1h et 30 min

drsquoextraction respectivement (figure 6)

Djellas (2010) a trouveacute que la meilleur teneur en composeacutes pheacutenoliques totaux

drsquoInula viscosa est obtenue apreacutes16h drsquoincubation avec une valeur de 238 g EAG100g

Berbache et Touati (2008) ont montreacute que la teneur la plus eacuteleveacutee en composeacutes

pheacutenoliques (025 g EAGg) extraits agrave partir des feuilles drsquoAtriplex halimus est obtenue

apregraves 1h drsquoextraction

Turkmen et al (2007) indiquent qursquoen augmentant le temps drsquoextraction de 2h agrave

8h la teneur en polypheacutenols des extraits du theacute noir augmente de maniegravere significative

Druzynska et al (2007) ont deacutemontreacute une augmentation du rendement des

composeacutes pheacutenoliques totaux dans les extraits du theacute vert avec la prolongation du temps

drsquoextraction

Reacutesultats et discussions

25

Drsquoautres travaux sur les feuilles de Azadirachta indica ont trouveacute que la

prolongation du temps drsquoextraction ameacuteliore le rendement en polypheacutenols totaux pour

diffeacuterents solvants (Chirinos et al 2007 Druzynska et al 2007 Silva et al 2007)

Malgreacute le deacuteveloppement et la mise en œuvre de nombreuses nouvelles techniques

drsquoextraction Lrsquoextraction classique par solvant demeure dominante et la plus utiliseacutee

(Druzynska et al 2007)

Une bonne meacutethode doit permettre lrsquoextraction complegravete des composeacutes drsquointeacuterecirct

et doit eacuteviter leurs modifications chimiques Le rendement drsquoextraction deacutepend non

seulement de la meacutethode drsquoextraction mais aussi de la nature du solvant (Turkmen et al

2005 Hayouni et al 2007 Atmani et al 2009) Lrsquoeau les meacutelanges aqueux drsquoeacutethanol

du meacutethanol et drsquoaceacutetone sont utiliseacutes geacuteneacuteralement pour extraire les composeacutes

pheacutenoliques (Turkmen et al 2005 Hayouni et al 2007)

Pour eacutetudier lrsquoeffet du solvant sur lrsquoextraction des polypheacutenols des extraits de

Matricaria pubescens sept solvants agrave diffeacuterentes concentrations ont eacuteteacute utiliseacutes lrsquoeau

lrsquoaceacutetone 50 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 50 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et

lrsquoeacutethanol 100

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques des extraits de la matricaire

montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant utiliseacute (figure 7) La teneur la plus

eacuteleveacutee (259 g100g) est obtenue avec le meacutethanol 50 suivie par lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeau

le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoaceacutetone 50 qui ont des teneurs moyennes en

composeacutes pheacutenoliques eacutegales agrave 249 243 208 113 et 096 g100g respectivement

Alors que la teneur la plus faible (063 g100g) est celle de lrsquoextrait preacutepareacute par lrsquoaceacutetone

100

Drsquoapregraves ces reacutesultats il est agrave noter que les teneurs obtenues avec les solvants purs

sont faibles par rapport agrave celles obtenues avec les solvants dilueacutes qui pourrait srsquoexpliquer

par la faible solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques de la matricaire dans les solvants purs

Figure 6 Effet de la dureacutee

des extraits

Figure 7 Effet du solvant drsquo

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

26

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

es extraits aqueux de Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur la teneur en composeacutes pheacutenoliques

extraits de Matricaria pubescens

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

b

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b

cc

1h 2h 4h

Reacutesultats et discussions

composeacutes pheacutenoliques

composeacutes pheacutenoliques des

portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

f

c

2h+1N

Reacutesultats et discussions

27

Des teneurs en composeacutes pheacutenoliques allant de 194 agrave 374 g100g de MS de

certaines plantes de la famille des Asteacuteraceacutees (Arctium lappa Artemisia annua Artemisia

argyi et Artemisia capillaris) ont eacuteteacute rapporteacute par Yizhong et al (2003) en utilisant le

meacutethanol comme solvant drsquoextraction

Dans la preacutesente eacutetude lrsquoanalyse statistique montre que le meilleur solvant

drsquoextraction des composeacutes pheacutenoliques de Matricaria pubescens est le meacutethanol agrave 50

(vv) Des reacutesultats similaires ont eacuteteacute obtenus par Ksouri et al (2008) lors drsquoune eacutetude

sur les halophytes tunisiens ils ont constateacute que la teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue avec le

meacutethanol avec une valeur de 015 g EAG100g de MS

Tawaha et al (2007) ont utiliseacutes lrsquoeau et le meacutethanol comme solvant drsquoextraction

de certaines plantes de la famille Lamiaceacutee

Les extraits de la matricaire agrave lrsquoaceacutetone 100 ont une faible teneur en composeacutes

pheacutenoliques cette teneur peut ecirctre expliqueacutee par la preacutesence de composeacutes pheacutenoliques de

faible solubiliteacute dans lrsquoaceacutetone 100 par rapport aux autres solvants utiliseacutes De plus les

glucides ne sont pas solubles dans lrsquoaceacutetone 100 ainsi les composeacutes pheacutenoliques

glycosyleacutes ne peuvent pas ecirctre extraits (Kouri et al 2007)

Les acides pheacutenoliques tregraves polaires (acides benzoiumlques et cinnamiques) ne

peuvent pas ecirctre extraits complegravetement avec des solvants organiques purs les meacutelanges

alcool-eau sont recommandeacutes et les substances moins polaires (deacuteriveacutes drsquoacides

pheacutenoliques) ne sont pas isoleacutees quantitativement en utilisant lrsquoeau pure comme solvant

drsquoextraction (Cazes 2005)

Lrsquoeau pure comme solvant drsquoextraction megravene agrave un extrait ayant une teneur eacuteleveacutee

en impureteacutes (acides organiques glucides proteacuteines solubles) qui peuvent interfeacuterer dans

le dosage des composeacutes pheacutenoliques (Chirinos et al 2007)

Lrsquoutilisation de lrsquoeau en combinaison avec des solvants organiques contribue agrave la

creacuteation drsquoun milieu modeacutereacutement polaire qui assure lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques (Lapornic et al 2005 Liyana-Pathirana et Shahidi 2005)

Les teneurs et la composition en polypheacutenols diffegraverent drsquoun auteur agrave un autre Cela

est probablement du agrave diffeacuterents facteurs comme la complexiteacute de ces composeacutes la

varieacuteteacute des plantes (diffeacuterentes familles) le type et la concentration du solvant la

diffeacuterence de la peacuteriode et la reacutegion de reacutecolte De plus la meacutethode drsquoextraction et du

dosage influence les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

Reacutesultats et discussions

28

La solubiliteacute des composeacutes pheacutenoliques est influenceacutee par le type de solvant utiliseacute

et le degreacute de leurs polymeacuterisation (Tazao 2004 Naczk et Shahidi 2004) Cependant

ces derniers sont le plus souvent combineacutes agrave drsquoautres substances (proteacuteines

polysaccharides terpegravenes chlorophylle lipides composeacutes inorganiques hellip) (Monpon et

al 1996)

I2Les flavonoiumldes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

(figure 8) La teneur la plus eacuteleveacutee (044 g100g) est obtenue apregraves 2heures alors que la

plus faible teneur (033 g100g) est obtenue apregraves 1heure drsquoextraction Les extraits

obtenus apregraves 30minutes 4heures et 2heures plus une nuit drsquoextraction preacutesentent des

teneurs comprises entre (034 et 036 g100g)

De nombreux chercheurs rapportent la possibiliteacute drsquooxydation des composeacutes

pheacutenoliques pendant les extractions agrave long terme qui peuvent mener aux faibles teneurs

(Naczk et Shahidi 2004 Druzynska et al 2007)

Les teneurs en flavonoiumldes des extraits varient selon le solvant drsquoextraction drsquoune

maniegravere significatives (plt005) (figure 9) Le meacutethanol 100 preacutesente le meilleur solvant

avec une teneur de 111g100g suivi par lrsquoaceacutetone 100 lrsquoeacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100

le meacutethanol 50 et lrsquo aceacutetone 50 qui ont donneacute des teneurs moyennes de 092 088

082 080 et 055 g100g respectivement la plus faible teneur (034 g100g) est obtenue

avec lrsquoeau

Selon Ait ouali et Boukhanouf (2011) la meilleur teneur en flavonoiumldes extraits agrave

partir drsquoune plante de genre Rubus a eacuteteacute observeacutee lors de lrsquoutilisation du meacutethanol agrave

100 elle a eacuteteacute estimeacutee agrave 00027 mg eacutequivalent querceacutetine g de MS

Un rapport de 70 de meacutethanol est utiliseacute geacuteneacuteralement dans lrsquoextraction des

flavonoiumldes (cateacutechines ou eacutepicateacutechines) les acides-pheacutenols et leurs deacuteriveacutes et plusieurs

autres sous groupes des flavonoiumldes (Al-farsi et Lee 2007 Tabart et al 2007)

Figure 8 Effet de la dureacutee

Figure 9 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

29

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en flavonoiumldes

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

flavonoiumldes des extraits

flavonoiumldes des extraits de

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

bc

2h+1N

de

Reacutesultats et discussions

30

Des teneurs en flavonoiumldes extraites agrave partir drsquoune plante du genre Micromeria

varient de 122 agrave 245 mg EQg de MS lrsquoextrait aceacutetonique a permet la meilleure

extraction par rapport agrave drsquoautres solvants

La solubiliteacute des flavonoiumldes deacutepend du nombre du type et de la position de la

liaison des glucides avec les flavonoiumldes (Lapronik et al 2005)

I3Les tannins

I31Les tannins condenseacutes

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

condenseacutes des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction (figure 10)

Lrsquoextrait preacutepareacute apregraves 2heures drsquoextraction preacutesente la teneur en tannins

condenseacutes la plus eacuteleveacutee (378 g100g) les extraits obtenus apregraves 4heures 2heures plus

une nuit drsquoincubation et 1heure drsquoextraction ont des teneurs eacutegales agrave 358 346 et

321g100g respectivement la plus faible teneur (293 g100g) est obtenue apregraves 30

minutes drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

condenseacutes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 11) Lrsquoextrait au

meacutethanol 100 preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee (170 g100g) suivi par lrsquoeacutethanol 100

(122 g100g) et le meacutethanol 50 (117 g100g) Les teneurs les plus faibles sont

obtenues avec lrsquoeau (035g100g) et lrsquoeacutethanol 50 (031 g100g) Les tannins condenseacutes

des extraits aceacutetoniques (100 et 50) ne sont pas deacutetecteacutes

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins condenseacutes agrave partir de

la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant meacutethanol 100 gt eacutethanol 100 gt meacutethanol 50

gt eau gt eacutethanol 50

Les teneurs en tannins condenseacutes non deacutetecteacutes dans les extraits aceacutetoniques

(100 50) pourrait ecirctre expliqueacutees par la possibiliteacute drsquointeraction de ces composeacutes

avec drsquoautres substances de nature non pheacutenoliques ayant peut ecirctre entraineacutees par

laceacutetone pendant la maceacuteration Ca pourrait ecirctre ducirc eacutegalement agrave la preacutesence drsquoimpureteacutes

qui peuvent interfeacuterer dans le dosage

Suite agrave une extraction par lrsquoaceacutetone 50 meacutethanol 100 eacutethanol 100 eacutethanol

50 meacutethanol 50 lrsquoeau et aceacutetone Wei et al (2010) ont rapporteacute que le teneur la plus

Reacutesultats et discussions

31

eacuteleveacutee en tannins condenseacutes des feuilles de Machilus pauhoi (1358 g100g MS) est

constateacutee dans lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50 tandis que la plus faible (2203 mg100g MS) est

obtenues avec lrsquoaceacutetone pur

Ait ouali et Boukhanouf (2010) ont trouveacute que la meilleur teneur en tannins

condenseacutes obtenue agrave partir de Rubus ulmifolius a eacuteteacute constateacutee lors de lrsquoutilisation du

meacutethanol agrave 100 comme solvant drsquoextraction avec une valeur de 000028 mg eacutequivalent

acide tanniqueg de MS

Bouzid et al (2010) lors drsquoune eacutetude sur l rsquoAubepine monogyne reacutevegravelent que

lrsquoextrait meacutethanolique est le plus riche en composeacutes pheacutenoliques en flavonoiumldes et en

tannins

Bourouf (2008) lors de leur eacutetude sur quelques herbes aromatiques agrave tempeacuterature

ambiante a trouveacute des valeurs en tannins condenseacutes qui varient de 0126 agrave 0657 g100g

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute des teneurs en proanthocyanidines

comprises entre (1et 8g100g MS)

Les reacutesultats montrent aussi que les extraits aceacutetoniques preacutesentent des teneurs

non deacutetecteacutes qui peuvent ecirctre du agrave Nature du solvant et la meacutethode du dosage

Ces reacutesultats peuvent ecirctre expliqueacutes par la possibiliteacute drsquooxydation des tannins condenseacutes

agrave long dureacutee Le poids moleacuteculaire eacuteleveacute des tannins condenseacutes de la matricaire les rend

solubles dans les solvants moins polaires

Figure 10 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 11 Effet du solvant drsquo

-Nd Non deacutetecteacutes

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

a

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Reacutesultats et discussions

32

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits aqueux de Matricaria pubescens

u solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins condenseacutes des

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

be d

1h 2h 4h

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Reacutesultats et discussions

tannins condenseacutes des

tannins condenseacutes des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

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2h+n

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Reacutesultats et discussions

33

I32Tannins hydrolysables

Les teneurs en tannins hydrolysables preacutesentent des diffeacuterences significatives

(plt005) selon la dureacutee drsquoextraction (figure 12)

Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation preacutesente la teneur

la plus eacuteleveacutee (047 g100g) les extraits obtenus apregraves 1heure 2heures et 4heures

preacutesentent des concentrations similaires sans diffeacuterence significative avec des valeurs

allant de 017 agrave 029 g100g tandis que la plus faible valeur (011 g100g) est trouveacutee

apregraves 30 minutes drsquoextraction

La teneur en tannins hydrolysables augmente consideacuterablement en augmentant la

dureacutee drsquoextraction de 30 minutes agrave 2 heures plus une nuit drsquoextraction drsquoune faccedilon

significative La prolongation du temps drsquoextraction pourrait permettre drsquoextraire plus de

composeacutes

Lrsquoeacutetude statistique montre que les solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 13) Lrsquoextrait agrave lrsquoaceacutetone 50

preacutesente la teneur la plus eacuteleveacutee en tannins hydrolysables (068 g100g) Les extraits

preacutepareacutes par lrsquoeacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 100 le meacutethanol 100 lrsquoeacutethanol 50 et lrsquoeau

preacutesentent des teneurs en tannins hydrolysables comprises entre 032 et 027g100g La

teneur la plus faible (023 g100g) est trouveacutee dans lrsquoextrait meacutethanolique (50)

Lrsquoefficaciteacute des solvants utiliseacutes pour lrsquoextraction des tannins hydrolysables agrave partir

de la matricaire preacutesente lrsquoordre suivant aceacutetone 50 gt eacutethanol 100 gt aceacutetone 100

gt meacutethanol 100 gt eacutethanol 50 gt lrsquoeau gt meacutethanol 50

Metrouh (2008) lors de son eacutetude sur Ceratonia siliqua agrave 25ordmC et en utilisant

lrsquoaceacutetone 30 lrsquoaceacutetone 50 et lrsquoaceacutetone 70 a trouveacute des teneurs en tannins

comprises entre 005 et 017 g100g

Chavan et al (2001) a signaleacute que laceacutetone aqueux (70) acidifieacute ou non eacutetait

plus efficace que laceacutetone absolue pour le reacutetablissement dune quantiteacute maximum

en tannins

Oszmianski et al (2005) apregraves leur eacutetude sur la racine de certaines plantes

appartiennent agrave la famille des rosaceacutees ils ont trouveacute 33 g drsquoacide eacutellagique 100g et

275 g drsquoacide gallique 100g

Figure 12 Effet de la dureacutee

extraits

Figure 13 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

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Reacutesultats et discussions

34

ffet de la dureacutee drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits aqueux de Matricaria pubescens

du solvant drsquoextraction sur la teneur en tannins hydrolysables

extraits de Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents

b

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Reacutesultats et discussions

tannins hydrolysables des

tannins hydrolysables des

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

e

2h+N

bc

Reacutesultats et discussions

35

Saad et al (2012) ont rapporteacute des teneurs allant de 504 agrave 470 g TACg MS) en

tannins hydrolysables de lrsquoeacutecorce de quatre varieacuteteacutes de grenade

On constate que la teneur en tannins hydrolysables augmente avec la dureacutee La

nature du solvant peut influencer sur la teneur en tannins hydrolysables

II Activiteacute antioxydante

II1 Pouvoir reacuteducteur

Le pouvoir reacuteducteur est la capaciteacute qursquoa un extrait agrave donner un eacutelectron et agrave

reacuteduire le fer De nombreux auteurs considegraverent la capaciteacute reacuteductrice drsquoun composeacute

comme indicateur significatif de son pouvoir antioxydant (Tepe et al 2005)

Les pouvoirs reacuteducteurs des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005) (figure 14) Lrsquoextrait obtenus apregraves

2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation agrave le pouvoir reacuteducteur le plus fort (081 g drsquoacide

ascorbique100g) les extraits obtenus apregraves 4 heures et 2 heures ont des pouvoirs

reacuteducteurs semblables eacutegales agrave 073 et 070g drsquoacide ascorbique100g respectivement

Les activiteacutes reacuteductrices les plus faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30

minutes (061 g drsquoacide ascorbique100g) et 1 heure drsquoextraction (064 g drsquoacide

ascorbique100g)

Le pouvoir reacuteducteur des extraits de la matricaire varie significativement selon le

solvant drsquoextraction (plt005) (figure 15) Le plus fort pouvoir reacuteducteur (127 drsquoacide

ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait meacutethanolique (50) tandis que le plus faible

(025 g drsquoacide ascorbique100g) est preacutesenteacute par lrsquoextrait aceacutetonique (100) Les

reacutesultats montrent que lrsquoactiviteacute des extraits aqueux est supeacuterieure agrave celle des extraits

purs

Lrsquoeau dissout plus favorablement les polypheacutenols polaires avec une activiteacute

antioxydante eacuteleveacutee car la polariteacute eacuteleveacutee signifie que plus de groupement hydroxyles sur

le cycle des polypheacutenols (Xie et Dixon 2005)

Figure 14 Effet de la dureacutee

Figure 15 Effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

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Reacutesultats et discussions

36

la dureacutee drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits

Matricaria pubescens

ffet du solvant drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

a b b

30mn 1h 2h 4h 2h+N

a

d e

g

c

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur le pouvoir reacuteducteur des extraits aqueux de

sur le pouvoir reacuteducteur des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

f

Reacutesultats et discussions

37

Les reacutesultats de dosage des composeacutes pheacutenoliqes et leurs classes individuelles des

extraits de Matricaria pubescens apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction (annexes)

reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le pouvoir reacuteducteur et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=080) et en tannins hydrolysables (r=095) Dans le

cas des tannins condenseacutes la correacutelation est moyenne (r=059) alors qursquoune une tregraves

faible correacutelation est obtenue avec les flavonoiumldes (r=0051) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et les tannins hydrolysables doseacutes dans la matricaire ont des

bonnes capaciteacutes reacuteductrices

Drsquoapregraves les reacutesultats de lrsquoanalyse statistique des extraits preacutepareacutes par diffeacuterents

solvant une bonne correacutelation existe entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=073) de faibles correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les tannins

condenseacutes (r=038) et les tannins hydrolysables (r=024) Tandis qursquoune correacutelation

neacutegligeable a eacuteteacute observeacutee avec les flavonoiumldes (r=0070) (annexes)

Les capaciteacutes reacuteductrices des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

(flavonoiumldes tannins hydrolysables et tannins condenseacutes) pourrait ecirctre expliqueacutees par la

nature etou la quantiteacute de ses composes dans les diffeacuterents extraits de la matricaire Les

interactions de ces composeacutes entres eux et avec drsquoautre substances de nature non

pheacutenolique pourraient modifient le pouvoir antioxydant

II 2 Pouvoir antiradicalaire

Lrsquoefficaciteacute drsquoun antioxydant peut ecirctre deacutefinie comme sa capaciteacute agrave fixer des Radicaux

libres donc agrave arrecircter la propagation de la reacuteaction en chaine Afin drsquoeacutevaluer cette

efficaciteacute la meacutethode au dipheacutenyl-picryl hydrazyl est utiliseacutee Le degreacute de deacutecoloration

indique le potentiel pieacutegeur des antioxydants preacutesents dans les extraits (Molyneux

2004)

Lrsquoeacutetude statistique reacutevegravele que lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune nuit

drsquoincubation preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (8519) alors que la plus

faible activiteacute (8385) est obtenue apregraves 30 minutes drsquoextraction (figure 18)

Lrsquoanalyse statistique montre que les solvants utiliseacutes preacutesentent des diffeacuterences

Significative (plt005) (figure 19) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute

antiradicalaire la plus eacuteleveacutee (9346) tandis que lrsquoactiviteacute la plus faible (8388 ) est

Reacutesultats et discussions

38

obtenue avec lrsquoaceacutetone 100 Les activiteacutes antiradicalaires des extraits obtenus avec le

meacutethanol 100 lrsquoaceacutetone 50 le meacutethanol 50 lrsquoeacutethanol 100 et lrsquoeau sont

preacutesenteacutees par des pourcentages drsquoinhibitions eacutegales agrave 9090 8998 8981 8858 et

8469 respectivement

Des reacutesultats similaires sont indiqueacutes par Ksouri et al (2007) et Mohsen et al

(2009) sur des eacutetudes reacutealiseacutees sur le maiumls et lrsquoorigan respectivement les extraits

eacutethanoliques sont tregraves efficaces pour le pieacutegeage des radicaux DPPH gracircce agrave leur teneur

eacuteleveacutee en acides pheacutenoliques et flavonoiumldes glycosides (Ksouri et al 2007)

Ces reacutesultats sont aussi similaires agrave ceux de Lapornik et al (2005) qui ont montreacute

que lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus eacuteleveacutee est celle des extraits drsquoeacutethanol 70 Ceci peur

srsquoexpliqueacutee par le fait que lrsquoethanol est efficace dans la deacutegradation des parois et graines

cellulaires qui ont un caractegravere non polaire et entraine la libeacuteration des anthocyanines et

autres polypheacutenols agrave partir des cellules

Les faibles activiteacutes antiradicalaires obtenues avec lrsquoaceacutetone 100 pourraient ecirctre

expliqueacutees par le fait que ce solvant nrsquoest pas adeacutequat pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques de la matricaire Ceci signifie que la polariteacute du solvant affecte sa capaciteacute

agrave dissoudre certain groupe de composeacutes antioxydant et influence ainsi lrsquoestimation de

lrsquoactiviteacute antioxydante

Figure 16 Effet de la dureacutee

Figure 17 effet du solvant

-Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes so

a

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

30mn

Po

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alai

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)

b

0

10

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100

Po

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iran

tira

dic

alai

re(

)

Reacutesultats et discussions

39

de la dureacutee drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens

effet du solvant drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

Matricaria pubescens

Les reacutesultats qui portent des lettres diffeacuterentes sont significativement diffeacuterents (altbltc)

b b bc

30mn 1h 2h 4h

ad e d

Reacutesultats et discussions

drsquoextraction sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits aqueux

sur lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de

nt significativement diffeacuterents (altbltc)

c

2h+N

cf

Reacutesultats et discussions

40

Les eacutetudes meneacutees par Gulccedilin et al (2003) et Tepe et al (2005) indiquent que le

solvant drsquoextraction a une influence sur lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits

La variation dans lrsquoactiviteacute antioxydante pourrait ecirctre due agrave la quantiteacute et ou agrave la

nature des substances antioxydantes preacutesentes dans les extraits de la matricaire

Pour les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction une bonne

correacutelation lineacuteaire est obtenue entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en

composeacutes pheacutenoliques (r=070) et en tannins hydrolysables (r=083) une moyenne

correacutelation est obtenue avec les tannins condenseacutes (r=059) Une correacutelation neacutegligeable

est trouveacutee avec les flavonoiumldes (r=0003) (annexes) Ceci indique que les composeacutes

pheacutenoliques et les tannins hydrolysables de ces extraits ont une bonne capaciteacute de reacuteduire

les oxydants dans le cas des tannins condenseacutes la capaciteacute est moyenne

En outre les reacutesultats de dosage des antioxydants de la matricaire extraits en

utilisant plusieurs solvants drsquoextraction reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune faible correacutelation

lineacuteaire entre le pouvoir antiradicalaire et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques (r=041)

flavonoiumldes (r=039) et en tannins condenseacutes (r=033) cependant une tregraves faible

correacutelation avec les tannins hydrolysables (r=010) (annexes) Ceci indique que les

composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de ces extraits ont une faible capaciteacute

de pieacuteger les radicaux libres

La glycosylation des flavonoiumldes reacuteduit leur activiteacute anti-oxydante (Rice-Evans et

al 1996) Selon Cai et al (2004) il existe une relation entre le pouvoir anti-oxydant et la

structure des composeacutes pheacutenoliques (nombre et position des groupements hydroxyles sur

le noyau aromatique de la moleacutecule glycosylation et preacutesence drsquoautres groupements

donneurs de protons)

Kaumlhkoumlnen et al (1999) nrsquoont constateacute aucune correacutelation entre la teneur en

polypheacutenols et lrsquoactiviteacute antioxydante des plantes Selon ces auteurs la teneur en

polypheacutenols ne preacutedit pas lrsquoactiviteacute antioxydante du fait que diffeacuterents composeacutes

pheacutenoliques reacutepondent diffeacuteremment au dosage par la meacutethode de Folin-Ciocalteu et que

lrsquoactiviteacute antioxydante drsquoun composeacute pheacutenolique deacutepend de sa structure

Il est difficile drsquoexpliquer la relation existant entre les antioxydants et lrsquoactiviteacute

antioxydante drsquoun veacutegeacutetal en se basant sur la seule analyse quantitative du fait qursquoil

Reacutesultats et discussions

41

existe une relation non seulement avec le taux drsquoantioxydants mais aussi de lrsquointeraction

entre eux et avec drsquoautres constituants (Yoo et al 2008)

Puisque la composition chimique et les structures des composeacutes actifs de lrsquoextrait

sont des facteurs important modulant lrsquoefficaciteacute des antioxydants naturels lrsquoactiviteacute

antioxydante ne doit pas ecirctre expliqueacutee seulement en se basant sur leurs teneurs en

composeacutes pheacutenoliques drsquoougrave il est important de caracteacuteriser ces composeacutes (Soufi 2008)

Les deux activiteacutes antioxydantes de la matricaire (pouvoir reacuteducteur et activiteacute

antiradicalaire) (annexes) mesureacutees dans les extraits preacutepareacutes apregraves diffeacuterentes dureacutees

drsquoextraction preacutesentent une bonne correacutelation lineacuteaire avec un coefficient de correacutelation

de 078Celles mesureacutees dans les extraits obtenus en utilisant plusieurs solvants reacutevegravelent

lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation avec un coefficient de correacutelation de r=068

(annexes) Ceci indique que les composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles de la

matricaire ont une bonne capaciteacute de reacuteduire les oxydants et de pieacuteger les radicaux libres

Conclusion

42

Conclusion

La preacutesente eacutetude est consacreacutee aux dosages de quelques antioxydants

(polypheacutenols totaux flavonoiumldes tannins condenseacutes et hydrolysables) drsquoune plante

meacutedicinale de la flore du Sahara algeacuterienne laquo Matricaria pubescensraquo apregraves leur

extraction en utilisant plusieurs solvants et diffeacuterentes dureacutees ainsi qursquoagrave la determination

de lrsquoactiviteacute antioxydante des extraits obtenus

Les teneurs en composeacutes pheacutenoliques totaux de la matricaire diffegraverent selon la

dureacutee drsquoextraction La concentration la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 4h drsquoextraction

alors que la teneur la plus faible est obtenue apregraves 30 min drsquoextraction

Lrsquoeacutetude statistique montre que les teneurs en flavonoiumldes obtenues dans les extraits

preacutepareacutes apregraves des dureacutees diffeacuterentes preacutesentent des diffeacuterences significatives (plt005)

La teneur la plus eacuteleveacutee est obtenue apregraves 2heures tandis que la plus faible teneur est

obtenue apregraves 1heure drsquoextraction

Des diffeacuterences significatives ont eacuteteacute reacuteveacuteleacutees entre les concentrations en tannins

des extraits obtenus selon la dureacutee drsquoextraction La teneur la plus eacuteleveacutee en tannins

condenseacutes est obtenue apregraves 2heures drsquoextraction cependant celle des tannins

hydrolysables est constateacutee apregraves 2heures suivies drsquoune nuit drsquoincubation Les plus

faibles teneurs de tannins condenseacutes de tannins hydrolysables sont obtenues apregraves 30

minutes drsquoextraction

Les reacutesultats du dosage des composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

des extraits de la matricaire montrent des diffeacuterences significatives selon le solvant

utiliseacute Le meacutethanol 50 est le solvant le plus efficace pour lrsquoextraction des composeacutes

pheacutenoliques totaux le meacutethanol 100 pour les flavonoiumldes et les tannins condenseacutes

concernant les tannins hydrolysables lrsquoaceacutetone 50 est le plus efficace

Les pouvoirs antioxydants des extraits preacutepareacutes agrave diffeacuterents temps drsquoextraction

preacutesentent des diffeacuterences significatives Lrsquoextrait obtenu apregraves 2heures suivies drsquoune

nuit drsquoincubation preacutesente le pouvoir antioxydant le plus fort Les activiteacutes les plus

faibles sont preacutesenteacutees par les extraits preacutepareacutes apregraves 30 minutes

Les activiteacutes antioxydantes des extraits de la matricaire varient significativement

selon le solvant drsquoextraction Le plus fort pouvoir reacuteducteur est preacutesenteacute par lrsquoextrait

Conclusion

43

meacutethanolique (50) Lrsquoextrait agrave lrsquoeacutethanol 50 preacutesente lrsquoactiviteacute antiradicalaire la plus

eacuteleveacutee Lrsquoactiviteacute la plus faible est obtenue avec lrsquoaceacutetone 100

Les reacutesultats obtenus reacutevegravelent lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation lineacuteaire entre le

pouvoir antioxydant des extraits de la matricaire apregraves diffeacuterentes dureacutees drsquoextraction et

les teneurs en composeacutes pheacutenoliques et en tannins hydrolysables Dans le cas des tannins

condenseacutes la correacutelation est moyenne alors qursquoune une tregraves faible correacutelation est obtenue

avec les flavonoiumldes

Une bonne correacutelation est constateacutee entre le pouvoir reacuteducteur des extraits

preacutepareacutes par diffeacuterents solvant et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques de faibles

correacutelations sont reacuteveacuteleacutees avec les flavonoiumldes les tannins condenseacutes et les tannins

hydrolysables Une faible correacutelation est constateacutee entre le pouvoir antiradicalaire et les

teneurs en composeacutes pheacutenoliques et leurs classes individuelles

Les reacutesultats montrent eacutegalement lrsquoexistence drsquoune bonne correacutelation entre le

pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits de la matricaire

Dans le but de compleacuteter ce travail il serait inteacuteressant drsquo

bull Inclure drsquoautre paramegravetre pour lrsquooptimisation de lrsquoextraction des antioxydants

drsquoautres varieacuteteacutes drsquoautres reacutegions

bull Etudier les possibles activiteacutes biologiques de ces extraits afin de mettre en

eacutevidence drsquoeacuteventuelles activiteacutes anti-inflammatoire antimicrobienne et

cytotoxique

bull Isoler et doser les fractions responsables de ces activiteacutes

bull Cependant il est neacutecessaire aujourdrsquohui drsquoune mise en profit de cette plante En

drsquoautre terme lrsquoeacutevaluation de leurs moleacutecules actives drsquoune maniegravere scientifique

en utilisant pour cela des meacutethodes adeacutequates

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Glossaire

La plupart de deacutefinitions des termes on eacuteteacute prise agrave partir du dictionnaire Le petit

Larousse et Larousse encyclopeacutedie des plantes meacutedicinales

Glossaire botanique

Akegravene fruit sec au peacutericarpe non soudeacute agrave la graine

Bipennatiseacutequeacutee Feuille dabord pennatiseacutequeacutee et dont les segments secondaires sont

eacutegalement pennatiseacutequeacute

Capitule Inflorescence agrave fleurs sessiles ou subesessiles et serreacutees en tecircte sur un

reacuteceptacle

Ecaille Chacune des lames qui protegravegent certains organes veacutegeacutetaux

Hermaphrodite (grec Hermaphrodite nom mythique) se dit drsquoune fleur portant

androceacutee et gyneacuteceacutee fonctionnels crsquoest-agrave-dire bisexueacutee

Ligule Petite lame saillante de certaines feuilles

Oblongue plus long que large

Obtuse qui manque de finesse borneacute

Pappus Touffe de poils au sommet drsquoun akegravene ou drsquoun fruit (syn aigrette)

Pubescente Garni de poils fins mous courts et peu serreacutes

Scarieuse terme qualifiant un organe veacutegeacutetal translucide membraneux et sec

Glossaire meacutedicale

Dermatose maladie de la peau

Dysmeacutenorrheacutee regravegles douloureuses

Deacutecoction action de faire bouillir des plantes dans un liquide

Neacutevralgie douleur vive sur le trajet drsquoun nerf

Otite inflammation de lrsquooreille

Rhumatisme inflammation des articulations

Sciatique affection tregraves douloureuse du nerf sciatique

Annexes

Preacuteparation des solutions

Tampon phosphate

-Dissoudre 272 g de KH2PO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Dissoudre 716 g de Na2HPO4 dans 100 ml drsquoeau distilleacutee

-Neutraliser la solution basique par la solution acide jusqursquoagrave pH 66

Courbes drsquoeacutetalonnage

Figure 1 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des

polypheacutenols totaux

y = 7773xRsup2 = 0997

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 005 01 015 02 025

abso

rban

ceagrave

740

nm

concentration en mgml

Annexes

Figure 2 Courbe drsquoeacutetalonnage de la querceacutetine pour le dosage des flavonoiumldes

Figure 3 Courbe drsquoeacutetalonnage de la cateacutechine pour le dosage des tannins

condenseacutes

y = 2753xRsup2 = 0996

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

1

0 0005 001 0015 002 0025 003 0035

abor

banc

eagrave

410

nm

concentration en mgml

y = 1679xRsup2 = 0994

0

02

04

06

08

1

12

0 001 002 003 004 005 006 007

Ab

sorb

ance

agrave5

00

nm

Concentraction en mgml

Annexes

Figure 4 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide gallique pour le dosage des tannins

hydrolysables

Figure 5 Courbe drsquoeacutetalonnage de lrsquoacide ascorbique pour lrsquoeacutevaluation du pouvoir

reacuteducteur

y = 5245xRsup2 = 0988

0

01

02

03

04

05

06

0 002 004 006 008 01 012

Ab

sorb

ance

agrave6

60

nm

Concentration en mgml

y = 1532xRsup2 = 0998

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

0 02 04 06 08 1 12

Abs

orba

nce

agrave70

0nm

Concentration en mgml

Annexes

Courbes de correacutelation

a b

c d

Figure 6 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes pheacutenoliques

(a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des extraits de

Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 080

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 0051

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g

MS

)Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 059

0

01

02

03

04

05

06

07

08

09

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r= 095

0

02

04

06

08

0 02 04 06 08 1 12 14

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 7 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et tannins hydrolysables

(dprime) des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 073

0

05

1

15

2

25

3

0 02 04 06 08 1 12 14

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r =0070

0

02

04

06

08

1

12

0 02 04 06 08 1 12 14

Fla

von

oid

es(g

10

0g)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r = 038

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 05 1 15

Tan

ins

con

den

seacutes

(g1

00

gM

S

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

r=024

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 02 04 06 08 1 12 14

tan

ins

hyd

roly

sab

les

(g1

00

gM

S)

Pouvoir reacuteducteur (g100g)

Annexes

a b

c d

Figure 8 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et la teneur en composeacutes

pheacutenoliques (a) flavonoiumldes (b) tannins condenseacutes (c) et tannins hydrolysables (d) des

extraits de Matricaria pubescens en fonction de la dureacutee drsquoextraction

r = 070

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

pouvoir antiradicalaire ()

r = 0037

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 059

836

838

84

842

844

846

848

85

852

854

0 2 4 6

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 083

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

aprime bprime

cprime dprime

Figure 9 Correacutelation entre lrsquoactiviteacute antiradicalaire et les teneurs en composeacutes

pheacutenoliques (aprime) flavonoiumldes (bprime) tannins condenseacutes (cprime) et en tannins hydrolysables (dprime)

des extraits de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r = 041

0

05

1

15

2

25

3

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Co

mp

oseacute

sp

heacuten

oli

qu

es(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r=039

0

02

04

06

08

1

12

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100F

lavo

no

ides

(g1

00

gM

S)

Pouvoir antiradicalaire ()

r = 033

0

02

04

06

08

1

12

14

16

18

2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sco

nd

enseacute

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

r= 010

0

01

02

03

04

05

06

07

08

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Tan

nin

sh

ydro

lysa

ble

s(g

10

0g

MS

)

Pouvoir antiradicalaire ()

Annexes

Figure 10 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du temps drsquoextraction

Figure 11 Correacutelation entre le pouvoir reacuteducteur et lrsquoactiviteacute antiradicalaire des extraits

de Matricaria pubescens en fonction du solvant drsquoextraction

r= 078

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

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du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

r =068

0

02

04

06

08

1

12

14

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Po

uvo

irreacute

du

cteu

r(g

10

0g)

activiteacute antiradicalaire ()

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