Electrophorèse des Protéines Plasmatiques - afvpz.com · • élevage rationnel (volaille chair...

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1 LABOVET FORMATION 85500 Les Herbiers Tous droits de reproduction réservés Electrophorèse des Protéines Plasmatiques Equipement de Labovet Analyses au 1 er trimestre 2009 cf le PhD de Y Roman et la thèse vétérinaire de D Ordonneau LABOVET FORMATION 85500 Les Herbiers Tous droits de reproduction réservés Electrophorèse des protéines • Mise dans un champ électrique des protéines plasmatiques qui se séparent dans un gradient proportionnel à la charge et inversement proportionnel à l’encombrement stérique • Protéines – Albumine(s) – Globulines • mise en évidence de syndromes inflammatoires c1

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Electrophorèse des Protéines

Plasmatiques

Equipement de Labovet Analyses

au 1er trimestre 2009

cf le PhD de Y Roman et la thèse

vétérinaire de D Ordonneau

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Electrophorèse des protéines

• Mise dans un champ électrique des protéines plasmatiques qui se séparent dans un gradient proportionnel à la charge et inversement proportionnel àl’encombrement stérique

• Protéines– Albumine(s)– Globulines

• mise en évidence de syndromes inflammatoires

c1

Diapositive 2

c1 albumine la plus rapide et va le plus loin

affection hépatique = défaut de synthèseaffection rénale = fuite de protéinespic monoclonaux de lignées tumorales du systeme immunitairec.facon; 02/05/2007

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Positionnement de la réponse dans le temps

Temps de réponse de l’EpP pour détecter une inflammation après un traumatisme :

le rapport

Albumine

Globuline

diminue

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Méthodes

• Prélèvement sanguin sur anticoagulant = Lithium Héparine (tube vert)

• EpP réalisé sur plasma :

– moins d’hémolyse (Hb migre en β et gêne la lecture)

– évaluation des globulines et du pic de fibrinogène

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Electrophorèse des protéines sur sérum et sur plasma

pic de fibrinogène

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oie à tête barrée

paon

pigeon

perroquet

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Expression des résultats

• Quantité d’Albumine circulante (g/l ou %)

• Quantité et qualité des Globulines circulantes (g/l ou %)

• Qté albumine et qté globulines : normalement équivalents = rapport A/G ~ 1

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inflammatoire

Pathologie

inconnu

non inflammatoire

Arbre décisionnel inflammatoire

parasitaire et fongique

bactérien

viral inconnu

toxiquetraumatique

métabolique

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Présentation

Charles FACON, Toulouse 2002

1. Outarde Houbara, ECWP Missour Maroc

2. Labovet, Les Herbiers (85), Réseau Cristal

• 14 vétérinaires, plus de 50 collaborateurs

• élevage rationnel (volaille chair et ponte, lapin, porcs, ruminants lait et engrais)

• laboratoires (santé animale, agro-alimentaire)

• consultant auprès de la fauconnerie du Puy du Fou (JL Liegeois)

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Un réseau de compétences…

• organisation en commissions de vétérinaires spécialisés (volaille, laboratoire, …)

• mise en commun de moyens pour les laboratoires :

1. bactériologie de santé animale dans tous les cabinets vétérinaires (~25 sites)

2. bactériologie COFRAC et AA, sérologie, PCR dans des sites centralisés (3 sites)

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… qui permet

• un volume d’analyses important pour être performant (25 000 bactériologie salmonelle / an)

• un volume d’analyses important pour investir dans de nouveaux outils (PCR, EpP)

• une expertise dans l’interprétation des résultats

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l’AFVPZ, un véritable réseau de compétences

• les échanges techniques en réunion et par courriel

• les projets en commun

• la défense des intérêts de praticiens de PZ par une même voix (arrêt Riaucourt)

le fonctionnement en réseau de l’AFVPZ est gage de son succès

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Cas cliniques :

intérêt des électrophorèses des protéines plasmatiques

1. coccidiose en élevage

2. reproduction chez des canes Pékin en élevage

3. cas clinique métabolique en élevage

4. cas clinique viral en élevage

5. cas d’intoxination en élevage

6. cas clinique à la fauconnerie du Puy du Fou

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Développement d’une analyse: monitoring de la coccidiose

• Des critères objectifs d’autopsie sont développés en poulet et en dinde (scores lésionnels de 0 à 4)

• Ils n’existent pas dans les espèces mineures (pintade, canard, faisan, perdrix)

Question : l’EpP correspond t-elle aux scores objectifs utilisés classiquement en poulet et en dinde ? pourra t-onl’utiliser dans d’autres espèces ?

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E Acervulina(doc CEVA)

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E Tenella(doc CEVA)

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Développement d’une analyse coccidiose

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Développement d’une analyse coccidiose

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effet LESION

Développement d’une analyse coccidiose

LABOVET FORMATION 85500 Les Herbiers Tous droits de reproduction réservésLH3189

Fuite protéique àpartir de l’indice 3

Développement d’une analyse : coccidiose

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effet DOSE

Développement d’une analyse : coccidiose

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effet DOSE

Développement d’une analyse : coccidiose

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effet TEMPS

Développement d’une analyse : coccidiose

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Reproduction : interprétation des chutes

de ponte

Dans quel état inflammatoire sont les femelles responsables de la chute de ponte dans un lot ?

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42,3

50,0

57,3

48,0

femelles en ponte sans inflammation

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56,6

55,3

71,8

femelles en ponte avec inflammation

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Reproduction : interprétation des chutes

de ponte

Pour distinguer :

état inflammatoire = infection virale, infection bactérienne, infestation parasitaire, traumatisme

état non inflammatoire = trouble alimentaire ou métabolique, perturbation zootechnique (lumière)

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Cas clinique métabolique en élevage

13 MARS 2008 appel éleveur

MOTIF : canetons mulards de 15 jours quelques sujets se couchent sur le sol puis

après quelques heures repartent ; petite mortalité 6 hier, 4 aujourd'hui

ambiance un peu saturée en ammoniaque, pas de lésions spécifiques décrites

sinon bon état du lot

CONSEIL : a remis des radians, a ventilé un peu plus pour améliorer l'ambiance.

surveiller l’évolution sur 24-48 h

TRAITEMENT : Forcil voire rehydrax

autopsie le 13 mars 2008 LH1176 avec absence de lésion, défaut de coagulation et

bactérioscopie négative

hypothèse retenue : PMP sur un lot avec très bon démarrage >> Cholarainol avec

réponse thérapeutique mais rechute

autres hypothèses : troubles nutritionnel / botulisme / septicémie / virose

c2

Diapositive 28

c2

bisalbuminémie possiblec.facon; 19/04/2007

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Cas clinique

visite TG : animaux en PUPD, pas de symptômes de

botulisme

on hésite à mettre de l'amoxicilline

retour le 17 mars LH1208 congestion splénique et

hépatique, minéralisation normale, recherche bactério =

E Coli nég (sg intracardiaque)

visite CF : reprise des symptômes, paralysie pattes,

polydipsie, stimulation = reprise démarche normale,

mortalité ~ 20 sujets / j

retour à la normale avec le changement d’aliment

c3

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Cas clinique

On montre que les sujets ataxiques ne sont pas inflammatoiresla réalisation rapide aurait permis de se concentrer sur les troubles

métaboliques ou les intoxications et d’éliminer les hypothèses infectieuses

c4

Diapositive 29

c3

bisalbuminémie possiblec.facon; 19/04/2007

Diapositive 30

c4

bisalbuminémie possiblec.facon; 19/04/2007

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Pathologie virale

Volailles souffrant d’une virose pure, sans surinfection bactérienne

EpP très homogènes

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Intoxication : botulisme

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Buse Harris

4 buses de Harris de spectacle, mises en hivernage dans une même volière

1 mortalité > autopsie (systématique) puis 2 autres mortalités successives

Absence de symptômes / niveau sanitaire excellent / alimentation poussin frais ad libitum

1 seul oiseau rescapé

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Buse Harris

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Buse Harris

Autopsies :

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Buse Harris

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Buse Harris

bactériologies : des E Coli non typables

interprétation difficile : pathogénicité primaire (possible) ou surinfection secondaire ?

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Buse Harris

le profil d’EpP est modifié, plutôt erratique, par rapport à une buse de Harris physiologique

rem technicien : plasma patho lactescent

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Source d’artefacts

plasmas hémolysés ou lipémiques

D’après « Protein electrophoresis of psittacine plasma » C Cray et al. Vet Clin Path Vol.36/No.1/2007

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Buse Harris

Le 4e oiseau est isolé dans une quarantaine avec un régime alimentaire contrôlé. Un hépatoprotecteur est donné.

Buse en parfaite santé aujourd’hui

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Buse Harris

Ma conclusion :

un changement brutal de régime alimentaire (état appétit > ad libitum) + le regroupement d’oiseaux pour la période d’hivernage = entraîne une compétition entre les animaux et un syndrome de gavage

images d’autopsie = lésions septicémiques certes mais de foie gras également

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Buse Harris

L’EpP montre une possible inflammation ou est tronquée par la lipémie

L’isolement de colibacilles est la surinfection qui tue l’oiseau mais on a pu identifier les causes primaires

Plan d’action :

faire admettre l’étiologie aux fauconniers

contrôler la reprise d’aliment pendant la transition alimentaire

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Conclusion

• Une analyse simple et rapide

• Une analyse faiblement spécifique (une vaccination modifie A/G), qui se pose en amont des autres examens complémentaires

• Un frein à son développement est l’absence de référentiel, or le profil est une caractéristique d’espèce

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Proposition de fonctionnement dans le réseau AFVPZ

1. un résultat d’analyse appartient à l’acheteur du service

2. le laboratoire peut l’utiliser en respectant la confidentialité

analyse provenant d’un membre de l’AFVPZ

Labovetanalyses

Bdd AFVPZ / Labovetaide à

l’interprétation d’une autre

analyse AFVPZ

demande

réponse

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Utilisations

1. Pathologie : en cas d’infection aiguë ou chronique, suivi de l’état inflammatoire de l’oiseau en soins

2. Screening : recherche d’oiseaux morbides (cas de tuberculose aviaire)

3. PS achat : évaluation de l’état inflammatoire de l’oiseau en quarantaine, notamment pour les sujets de valeur ou quarantaine de sortie d’élevage

4. Référentiel : faire un T0 pour réaliser une cinétique et un monitoring en cas de pathologie

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Tarif

Une analyse disponible en 2009 à Labovetanalyses

Tarif pour 7 plasmas : 60€ HT, possible par 15 ou 30

Tarif à l’unité : 12€ HT�besoin de 1000 analyses pour amortir l’investissement, le prix diminuera ensuite