(coprologie veterinaire PCL GMV2 11 12 [Mode de ... · l’OPG (car très fréquent) et de la...

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1 1 Coprologie Vétérinaire PCL DMI – 2012-2013 GMV2 Yannick Caron [email protected] 2 Aperçu général PCL coprologie: un exposé théorique techniques d’analyses coprologiques (séminaire et vidéo) les différents oeufs d’endoparasites identifiables dans les matières fécales un poly un tp Mac Master / Enrichissement Lames d’enrichissement 3 Sensibiliser à coprologie Intérêt: Décision traitement vs protocoles vermifugation Mise en évidence résistance vs succès thérapeutique Pas cher Faisable au cabinet (centrifugeuse, microscope) Sensibilité (faux négatifs) Familiariser avec techniques (routine: MM/E, …) Identification des (endo)parasites (oeufs, larves) Objectifs

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1

Coprologie Vétérinaire

PCL DMI – 2012-2013

GMV2

Yannick Caron [email protected]

2

Aperçu général

PCL coprologie:

� un exposé théorique� techniques d’analyses coprologiques (séminaire et vidéo)� les différents œufs d’endoparasites identifiables dans les

matières fécales

� un poly� un tp

� Mac Master / Enrichissement� Lames d’enrichissement

3

� Sensibiliser à coprologie� Intérêt:

� Décision traitement vs protocoles vermifugation

� Mise en évidence résistance vs succès thérapeutique� Pas cher� Faisable au cabinet (centrifugeuse, microscope)

� Sensibilité (faux négatifs)

� Familiariser avec techniques (routine: MM/E, …)

� Identification des (endo)parasites (œufs, larves)

Objectifs

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Préliminaires

� Agents de zoonose (Giardia sp. , Toxoplasma sp., …)

� Porter des gants et un tablier� Plans de travail propres et ordonnés� Solutions corrosives (NaCl, ZnCl2)

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Les règles de base -1

� Travailler dans les mêmes conditions (comparaison)

� Un échantillon = individuel ou 5 à 10% des individus d’un même lot

� Quantité suffisante (2x4g à 20 gr)� Etre systématique� Examen macroscopique toujours� Un examen négatif n’a pas valeur d’exclusion:

� Sensibilité (Fasciola sp.)� Répéter prélèvementsss

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� Conservations échantillons MF:� récipient hermétique (déshydratation)� A + 4°C

� Si examen quantitatif : jusqu’à deux semaines� Si examen qualitatif: un mois voir plus (exceptions …)

� Si pas de frigo :� dans du formol à 4% (quantitatif impossible)

� PAS de congélation !

Les règles de base -2

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Microscope� Diaphragme fermé (augmente contraste)� Grossissement X100 (objectif 10x) sauf pour

Giardia sp. et Cryptosporidium sp. qui se fait au grossissement X400 (objectif 40x)

� Description œuf:� Taille � Couleur � Forme � Contenant:

� Épaisseur paroi, ornementation, bouchon polaire, …

� Contenu (selon fraîcheur …) :� Blastomères, morula, embryon, larve, vide

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� Trichostrongle (TST) (Ruminant) ou Strongle (ST) (Non ruminant)� Taille : standard (70-90 µm) (=TS)

� Forme: ellipsoïde

� Couleur : translucide, incolore

� Sans ornementation

� Contenu: blastomère/morula/larve

� Contenant: paroi simple

et lisse

Œuf standard

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Les techniques

� Examen macroscopique� Après élimination du liquide (diarrhée)� A l’œil� Nématode (adulte, larve)� Cestode (segment)� … + microscope (Taenia sp. =/= Dipylidium sp.)

� Examen microscopique� Qualitatif� Quantitatif (OPG)

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� Examen microscopique: � Qualitatif:

� Examen direct (protozoaire)� Méthode d’enrichissement par flottaison� Méthode d’enrichissement par sédimentation� Méthode d’enrichissement par sédimentation/flottais on (=E)� Méthode de Baermann � Coproculture � Coloration de Ziehl-Neelsen modifié � Coloration au lugol � Méthode de Telemann et Rivas

� Quantitatif:� Mac Master (=MM)

Les techniques

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Les techniques

� Examen microscopique: � Qualitatif:

� Examen direct (protozoaire)

� Frottis pointe aiguille MF ds une goutte eau� microscope X 400→ kystes et trophozoïtes Giardia sp.

� Méthode d’enrichissement par flottaison� Utilisation d’une solution dense (ZnCl2, NaCl, …)� Les oeufs (légers) flottent … (d oeufs<sol°)� Par épuisement …

� Méthode d’enrichissement par sédimentation� Dissolution MF ds liquide� Repos ou centrifugation (sédimentation)� N fois (lavage)

� Méthode d’enrichissement par sédimentation/flottais on (=E)� = “Enrichissement” cf poly et vidéo (d ZnCl2-NaCl = 1,5)

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� Examen microscopique: � Qualitatif:

� Méthode de Baermann � Cf poly� Mise en évidence L1 de Dictyocaulus viviparus, …

� Coproculture � Cf poly� Permet différencier TST, ST

� Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée� Cf poly� Mise en évidence ookyste Cryptosporidium parvum

� Coloration au lugol � Giardia sp.

� Méthode de Telemann et Rivas (graisse)

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Les techniques

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� Examen microscopique: � Quantitatif:

� Mac Master (=MM)� Cf Poly� NaCl d=1.2� Surtout pour les oeufs légers (= coccidies, TST, Trichuris

sp., Capillaria sp., …)� Pas pour les oeufs lourds (= Fasciola sp., Nematodirus sp.,

Triodontophorus sp., …)� Inutile chez les carnivores (examen direct)

Les techniques

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Avantages Inconvénients

Examen direct

- Rapide- Très peu coûteux- Pas de déformation des éléments parasitaires

- mauvaise sensibilité (+/-)

Flottaison

- Très bonne sensibilité (++++)- Facile- Rapide- Faible coût

- Déformation des éléments parasitaires- Pas de mise en évidence des oeufs lourds pour des solutions de densité < 1,3- Peu adaptée à la recherche de larves

Sédimentation - Facile- Faible coût- Recherche des oeufs lourds possible

- Longue- Sensibilité moyenne (++)

Baermann- Adaptée à la recherche des larves

- bonne sensibilité (+++)

- Ne s'applique qu'à la recherche des larves- Longue- Travailler obligatoirement avec un prélèvement frais

Telemann-Rivas- Adaptée à des prélèvements gras- Bon préalable à la coloration de Ziehl-Neelsen

- Longue- Fastidieuse- Nécessite une centrifugeuse

Colorations- Adaptées à la mise en évidence de Giardia sp.(bonne sensibilité) et de Cryptosporidium sp.(sensibilité faible)

- Nécessite des réactifs spéciaux

Coproculture - Diagnose des strongles digestifs par espèce

- Longue- Diagnose délicate- Travailler obligatoirement à partir d'un prélèvement sans agent de conservation (sauf réfrigération)

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Les résultats

� L’examen macroscopique permet d’observer :� Des segments ovigères de cestodes :

� (Echinococcus multilocularis )� (Echinococcus granulosus)� Dipylidium caninum� Taenia sp.� Mesocestoides

� Des adultes� Toxocara sp.� Toxascaris leonina

� Ancylostoma sp.� Trichuris sp.� Trichonema sp.

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Les résultats

� L’examen microscopique permet d’observer:� Les trophozoïtes, kystes et ookystes de

protozoaires� Les œufs et larves d’helminthes

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L’interprétation

Les faux positifs:� Pseudoparasitisme: éléments présents dans les

matières fécales suite à ingestion passive: � les œufs d’acariens

� Faux-parasitisme par prédation: formes parasitaires dues à ingestion d'une proie ou d'un cadavre� Capillaria sp. chez le sanglier

� Faux-parasitisme par coprophagie: ingestion de MF d’animaux de la même sp ou non

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Les faux négatifs:� Plus fréquents� Interprétation plus difficile:

� Destruction par la dessication � Elimination irrégulière de la forme de dissémination

� Ds la période prépatente� Stérilisation passagère par traitement (benzimidazole)

L’interprétation

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Doit tenir compte de l’sp et de l’OPG:� Pour ST, TST, coccidies

� La coprologie a du sens si on tient compte de l’OPG (car très fréquent) et de la clinique� 250/300 ST OPG pour CV� 500/1000 TST pour BV, …

� Pour les autres helminthes et protozoaires� Présence suffisante

� Giardia sp., � Fasciola sp., …

L’interprétation

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2222

L’identification

Les protozoaires:� Les flagellés

� Giardia duodenalis

� Mise en évidence par examen direct (+ lugol), Telemann (prélèvement gras)

� Zoonose� On recherche deux formes

- Kyste- Trophozoïte

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L’identification

Les protozoaires:� Les flagellés

� Giardia duodenalis

� On recherche deux formes- Kyste

- MF non fraîche- 12 µm- ovale, x2 paroi, 4 noyaux, structure spiralée

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L’identification

Les protozoaires:� Les flagellés

� Giardia duodenalis

� On recherche deux formes par examen direct- Trophozoïte

- MF fraîche et diarrhéique- 15 µm- mobile, piriforme, axostyle, 2 noyaux, 4 flagelles, 2 corps médians réfringents, et une ventouse ventrale

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Les protozoaires:� Les flagellés

� Giardia duodenalis

� On recherche deux formes par examen direct� Emission irrégulière:

- Faire trois examens à 48 h d’intervalle

L’identification

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Les protozoaires:� Les Emeriidés

� Eimeria sp. et Isospora sp.

� Mise en évidence par MM/E� Ookystes

� Sphériques à ellipsoïdaux

� 20 – 40 µm (- de la ½ de la TS)� Un bouchon polaire chez certaines sp

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L’identification

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L’identification

Les protozoaires:� Les Emeriidés

� Eimeria sp. et Isospora sp.

� Présence d’ookyste MF ≠ Coccidiose� Symptômes svt ds période prépatente (sans

ookystes)� Sp non pathogène � OPG très grd = pas forcément malade

� Copro positive svt qd animal en phase de guérison

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L’identification

Les protozoaires:� Les Emeriidés

� Cryptosporidium parvum

� Mise en évidence par coloration de Zielh Neelsen� Zoonose � Frottis MF

� Prélever Ax sains et diarrhéiques car seul présence kyste pas significative

� Coloration met en évidence acido-résistance de la paroi du kyste (rouge sur fond vert)

� Double paroi� 7 µm

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Les protozoaires:• Les Sarcocystidés

� Sarcocystis sp.; Neospora caninum; Toxoplasma gondii

� Mise en évidence par MM� Zoonose (Sarcocystis sp., Toxoplasma gondii )� Mise en évidence difficile

� 10-20 µm

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode avec bourse caudale:

� Famille des Trichostrongylidés (TST)� TD (Cooperia sp., Haemonchus sp., Ostertagia sp., Nematodirus sp.,

Trichostongylus sp., Hyostrongylus sp.)

� Respi (Dictyocaulus sp., Angiostrongylus sp.)

� Famille des Strongylidés (ST du TD)� Ankylostome (Ancylostoma sp., Uncinaria sp., Bunostomum sp.)

� Strongle (Trichonema sp., Strongylus sp., Triodontophorus sp., Chabertia sp, Oesophagostomum sp.)

� Famille des Métastrongylidés (Metastrongylus sp., Muellerius sp.)

L’identification

{

{

Ruminant

Non ruminant

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� TST/ST digestif

� Mise en évidence par MM et/ou E� Adulte macroscopiquement ?� Diagnostic jusque genre impossible à partir

des oeufs� Intérêt coproculture !

� Hypobiose ! (= faux négatif)

L’identification

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Œuf standard

� TST (Ruminant) ou ST (Non Ruminant)� Taille : standard (70-90 µm) (=TS)

� Forme: ellipsoïde

� Couleur : translucide, incolore

� Sans ornementation

� Contenu: blastomère/morula/larve

� Contant: paroi simple

et lisse

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Chez un cheval ? ST !Chez un bovin ? TST !

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� Trois exceptions: � Grand (2x TS) TST =

� Nematodirus sp. (150-200 µm), ellipsoïde, bombé, paroi x2

� Grand (2x TS) ST = � Triodontophorus sp. (130-140 µm), ellipsoïde, paroi fine

� Paroi « poussièreuse »

� Metastrongylus sp. (PC)

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Cas des Bovins (143)

Niveaux des coproscopies quantitatives (oeufs par gramme)

Faible Moyen Elevé Très élevé

Nematodirus 1-25 25-75 75-200 Plus de 200

Ostertagia 1-15 15-50 50-500 Plus de 500

Autres trichostrongles digestifs

15-50 50-500 500-2500 Plus de 2500

Interprétation quantitative de l’OPG par rapport danger infestation:

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� TST/MétaST/ STrespi

� Mise en évidence L1 par la méthode de Baermann� Dictyocaulus sp. (TST)

� PAS d’œuf ds MF !

� Larve durant E ≠ Dictyocaulus sp.� 300 - 400 µm

� Tête arrondie, pas de bouton céphalique� Œsophage simple non rhabditiforme� Cellules intestinales avec granulation

� Extr caudale = pointe mousse� Muellerius sp. (MétaST)

L’identification

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http://www.poultryhub.org/health/disease/types-of-disease/parasitic-worms-or-helminths/

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� TST/MétaST/ STrespi

� Syngamus sp.� Trachée oiseaux

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Trichuridés (TST)

Trichuris sp. Capillaria sp.

Citron Rectangle

70-90 µm 50-60 µm

2 bouchons polaires saillants 2 bouchons polaires aplatis

Côtés bombés Côtés aplatis

Rouge brique Bleu-gris

Jamais chez OX ni CV Tous les mammif (surtt OV), très fréquent OX

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par flottaison� Famille des Trichuridés (TST)

� Trichinella sp.

� PAS d’œuf, larvipare� 80-100 µm long (6 µm diamètre)

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Ascaridés

� Plus ou moins ronds

� 70-90 µm (=TS)� Paroi épaisse, irrégulière, alvéolée

� Contenu coloré (sombre), une cellule

L’identification

Toxocara canis (CN) cati (CT)Toxocara vitulorum (Veau)Toxascaris leonina (Félin)Parascaris equorum (CV)Ascaris suum (PC)Heterakis sp. (OX)Ascaridia sp. (OX)

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Ascaridés

� Toxocara canis et T. mystax (=T. cati)

� Œuf brun foncé� Paroi finement alvéolée

� Toxascaris leonina (svt avec T. mystax)� Idem mais plus clair et translucide� Coque fine et lisse

� Toxocara vitulorum� Animaux au pis

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Ascaridés

� Parascaris equorum

� Brun foncé, rond � Coque épaisse, alvéolée

� Ascaris suum� Très irrégulier� Paroi très alvéolée

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Ascaridés

� Heterakis sp. (volaille PAS pigeon)

� Rectangulaire� Coque épaisse

� Contenu foncé� Ascaridia sp. (volaille et pigeon)

� Ellipsoïdal

� Coque fine� Plus clair aux pôles

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM et E� Famille des Rhabditidés

� Strongyloides sp.

� Petit strongle : 40-60 µm� Coque mince

L’identification

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Les nématodes:� Les Némathelminthes

� Nématode sans bourse caudale:

� Mise en évidence par MM, E, macroscopiquement (crachat = scotch test plus sensible que copro)

� Famille des Oxyuridés� Oxyuris equi

� 70-90 µm (=TS)

� Ovale, paroi épaisse et lisse� 1 bouchon polaire

� Légèrement asymétrique

L’identification

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L’identification

� Les Plathelminthes� Trématodes

• Mise en évidence à l’E

� Fasciola hepatica� Ponte irrégulière

� Grande taille 2xTS� Jaune paille� Ballon de rugby dégonflé (biconcave)

� (Operculé) � Paramphistomum daubneyi (=Calicophoron daubneyi)

� Prolifique� Idem Fasciola sp. mais translucide (verdâtre)

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� Les Plathelminthes� Cestodes

� Mise en évidence par E et macroscopiquement mais attention TRES PEU SPECIFIQUE� Taenia sp.

� Rond

� 30-60 µm

� Coque lisse et épaisse� Contient embryon hexacanthe

L’identification

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� Les Plathelminthes� Cestodes

� Mise en évidence par MM, E et macroscopiquement

� Dipylidium caninum� Segment ovigère de 3-4 mm

� Capsule ovigère de 200 µm� Contenant 10 à 20 oeufs

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L’identification

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� Les Plathelminthes� Cestodes

� Mise en évidence par MM, E

� Anoplocephala perfoliata (CV)� 50-80 µm� Fer à cheval� Coque mince lisse, plusieurs couches� Contient embryon hexacanthe + pyriform appartus (PI)

� Moniezia sp. (BV)� 55-90 µm� Quadrangulaire� Coque épaisse, lisse� Contient embryon hexacanthe + PI

L’identification

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Clinique de parasitologie 2ème doctorat 109

Protozoaires Trématodes Cestodes Nématodes

Chien et chat

Isospora sp.

Giardia sp.

Taenia sp.

Dipylidiumcaninum

Toxocara sp.,toxascaris sp.

Trichuris sp.Ankylostoma sp.(rég. Chaudes)Uncinaria sp. ( rég. Temp.)

Ruminants Eimeria sp.

Cryptosporiumparvum

Fasciola hepatica

Paramphistomumdaubneyi

Moniezia sp.

Taenia sp.

Trichostrongylidés

Trichuris sp.Capillaria sp.

Strongyloïdes sp.Dictyocaulus sp.

Equidés Eimeria leuckarti Fasciola hepatica Anoplocephalaperfoliata

Grands et petits strongles

Parascaris equorumOxyuris equi

(Capillaria sp.)(Strongyloïdes westeri)

Porc Isospora suis (Fasciolahepatica)

Taenia sp. Ascaris suum

Strongyloïdes mansomiTrichuris suis, Metastrongylus sp.

Oesophagostum sp.

Oiseaux Eimeria sp.

Giardia sp.

( Raillietina)

( Davainea)

Heterakis sp./ Ascaridia sp.

Syngamus sp.Capillaria sp.

Tableau récapitulatif des œufs d’endoparasites les plus fréquemment rencontrés