CAPILLARYS IMMUNOTYPING -...

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING Ref. 2100 2017/05

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CAPILLARYS IMMUNOTYPINGRef. 2100

2017/05

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

UTILISATIONLe kit CAPILLARYS IMMUNOTYPING permet la détection et la caractérisation en milieu basique (pH 9,9) des protéines monoclonales (immunotypage)dans l’urine et le sérum humains par électrophorèse capillaire dans le système automatique CAPILLARYS. Il doit être utilisé avec le kit CAPILLARYSPROTEIN(E) 6, SEBIA, permettant une séparation des protéines en six fractions majeures.Le système CAPILLARYS permet de réaliser toutes les séquences de l’électrophorèse jusqu’à l’obtention des profils protéiques pour l’analysequalitative. Chaque échantillon d’urine ou de sérum à analyser est mis en contact avec les antisérums des différentes spécificités, anti-chaînes lourdesgamma (Ig G), alpha (Ig A) et mu (Ig M) et anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées).Toutes les protéines, séparées dans des capillaires en silice fondue, sont détectées directement au niveau d’une cellule sur le capillaire parspectrophotométrie d’absorbance à 200 nm.Les profils électrophorétiques sont ensuite analysés visuellement pour détecter les anomalies et caractériser les protéines monoclonales mises enévidence.

À usage in vitro exclusivement.

NOTE : Dans cette notice d’utilisation, le nom “CAPILLARYS" est utilisé pour désigner les systèmes automatiques CAPILLARYS, CAPILLARYS 2 etCAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING, SEBIA.

PRINCIPE DU TESTL’électrophorèse des protéines de l’urine ou du sérum humains est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour rechercher lesmodifications du profil protéique. Parallèlement aux techniques d’électrophorèse sur différents supports, dont le gel d’agarose, la techniqued’électrophorèse capillaire a été développée car elle offre l’avantage d’une automatisation complète de l’analyse, de séparations rapides et d’unebonne résolution. Elle se définit comme une technique de séparation électrocinétique effectuée dans un tube de diamètre interne inférieur à 100 µmrempli d’un tampon composé d’électrolytes. Par de nombreux aspects, elle se présente comme un intermédiaire entre l’électrophorèse classique dezone sur support et la chromatographie liquide.Le système CAPILLARYS utilise le principe de l’électrophorèse capillaire en solution libre, qui représente la forme la plus courante de l’électrophorèsecapillaire. Il permet la séparation de molécules chargées en fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon de pH donné, et, selonle pH de l’électrolyte, d’un flux électro-osmotique plus ou moins important.Les immunoglobulines monoclonales, marqueurs des gammapathies, sont détectées lors de l’électrophorèse des protéines. En électrophorèsecapillaire, elles se présentent sous forme de pics anormaux situés essentiellement dans les zones bêta ou gamma globulines du profilélectrophorétique. Dans les techniques CAPILLARYS IMMUNOTYPING et CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE, l’immunotypage est effectué àl’aide d’antisérums monospécifiques et permet l’identification de ces pics monoclonaux dépistés par électrophorèse.Le système CAPILLARYS comprend 8 capillaires en parallèle. Sur ce système, l’échantillon à analyser est injecté, par aspiration à l'anode,simultanément dans six capillaires. Pour l’immunotypage, le profil protéique de référence (profil ELP) est obtenu par injection de l'échantillon enprésence de la solution ELP dans le capillaire N° 1. Les profils antisérums sont obtenus par injection du même échantillon en présence des antisérumsde différentes spécificités anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda, dans les cinq autres capillaires (N° 2 à 6).La séparation est ensuite réalisée en appliquant une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes de chaque capillaire et ladétection directe des protéines est effectuée à 200 nm côté cathode. Les capillaires sont lavés entre chaque analyse par une solution de lavage, puispar le tampon d’analyse.La superposition d’un des profils antisérum avec le profil ELP permet de visualiser la disparition et / ou la diminution d’un pic monoclonal sur le profilantisérum et d’en déduire une gammapathie.REMARQUE : Avec le tampon utilisé à pH basique, l’ordre de migration des protéines est le suivant, de la cathode à l'anode : gamma globulines, bêta–2 globulines, bêta-1 globulines, alpha-2 globulines, alpha-1 globulines et albumine. Chaque fraction contient un ou plusieurs constituants. Le complexeimmunoglobulines de l’échantillon (urine ou sérum) - immunoglobulines de l'antisérum spécifique apparaît en position très anodique (zone inter alpha-1/albumine ou plus anodique que l’albumine).

L’immunotypage se réalise en quatre étapes :1. Dilution du sérum ou de l’urine dialysée dans un diluant spécifique contenu dans le double puits de la barrette antisérums. La dilution est adaptée

à la concentration en immunoglobulines de l’échantillon.2. Mélange de l’échantillon dilué avec les différents antisérums. Le complexe antigène - anticorps se forme rapidement en milieu liquide sans étape

d'incubation, ni de sédimentation.3. Injection des échantillons traités par aspiration dans 6 capillaires (côté anodique) puis séparation électrophorétique des protéines en milieu alcalin

par application d'une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes des capillaires. La détection directe des protéines esteffectuée à 200 nm (côté cathodique).

4. Superposition du profil ELP et des profils antisérums (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) permettant la caractérisation de la protéine monoclonale.

L’analyse des sérums et des urines peut être réalisée avec la version 5.50 du logiciel PHORESIS et les versions suivantes.

RÉACTIFS FOURNIS DANS LE KIT CAPILLARYS IMMUNOTYPING

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

BARRETTES ANTISÉRUMSPréparationLes 60 barrettes antisérums sont prêtes à l’emploi et permettent de tester chacune un échantillon. Elles sont composées de 7 puits contenantrespectivement :- un milieu de base (solution ELP, jaune),- des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes gamma (rose),- des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes alpha (bleu foncé),- des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes mu (jaune vert),- des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes légères kappa libres et liées (vert clair),- des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes légères libres et liées lambda (bleu clair),- un diluant spécifique pour la dilution des sérums et des urines dialysées, contenant un marqueur permettant une superposition optimale des profils.Chaque réactif a une couleur spécifique. Les barrettes ont une forme caractéristique avec détrompeur afin de bien les positionner sur les portoirs dusystème CAPILLARYS.

NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français

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UtilisationBarrettes à usage unique pour l’immunotypage des protéines par électrophorèse dans le système automatique CAPILLARYS.À placer sur le portoir après avoir enlevé l’opercule de fermeture.IMPORTANT : Avant désoperculage de la barrette, vérifier l’absence de gouttes de réactifs sur le haut des 6 puits et, si des gouttes de réactifs sontobservées, rassembler les solutions au fond de chaque puits par un mouvement rapide de haut en bas.ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes antisérums contenant des échantillons biologiques.Conservation, stabilité et signes de détériorationLes barrettes antisérums doivent être conservées au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit.NE PAS CONGELER.NOTE : Durant le transport, les barrettes antisérums peuvent rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que celan’affecte la qualité du test.

ATTENTION : Ne pas utiliser d’eau déminéralisée du commerce, eau pour fer à repasser par exemple (risque de détérioration importantedes capillaires). Utiliser exclusivement de l’eau de qualité ultrapure, type eau pour préparation injectable.

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ANALYSE DES SÉRUMS : TECHNIQUE CAPILLARYS IMMUNOTYPING

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

1. KIT CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence 2003)Présentation, conservation, stabilité et signes de détériorationVoir la notice d’utilisation du kit.ATTENTION : Ne pas utiliser les barrettes de dilution contenues dans le kit CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 pour la technique CAPILLARYSIMMUNOTYPING.

2. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉEUtilisationPour le rinçage des capillaires de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA.Il est recommandé d’utiliser de l’eau distillée ou déminéralisée filtrée (sur filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soitune résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.Afin d’éviter les contaminations microbiennes, renouveler l’eau chaque jour. Pour un fonctionnement optimum, il est recommandé d’ajouter du CLEAN PROTECT (SEBIA, référence N° 2059 : 1 flacon de 5 mL) à l’eau distilléeou déminéralisée (voir la notice d’utilisation du CLEAN PROTECT) ou d’utiliser directement la solution CAPIprotect* prête à l’emploi (SEBIA,référence N° 2061 : 2 bidons de 5 L d’eau distillée avec CLEAN PROTECT).IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.* NOTE : La solution CAPIprotect peut aussi être utilisée pour diluer la solution de lavage concentrée. Dans ce cas, la solution de lavage diluée peutalors présenter une coloration transitoire jaune plus ou moins prononcée sans que cela n’affecte les performances du test.

3. CAPICLEAN PrésentationLe flacon de solution enzymatique concentrée CAPICLEAN (SEBIA, référence N° 2058 : 1 flacon de 25 mL) contient : enzymes protéolytiques,surfactants et composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.UtilisationPour le nettoyage de l'aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA, au cours du cycle de nettoyageCAPICLEAN.IMPORTANT : - Quand moins de 500 analyses sont réalisées par semaine, réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN au minimum une fois par semaine.- Quand moins de 500 analyses sont réalisées par jour et plus de 500 analyses sont réalisées par semaine, réaliser un cycle de nettoyage avec

CAPICLEAN toutes les 500 analyses.- Quand plus de 500 analyses sont réalisées par jour, réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN une fois par jour.Voir la notice d’utilisation de CAPICLEAN, SEBIA.IMPORTANT : Après le nettoyage de l’aiguille de prélèvement, ne pas réutiliser la barrette de dilution.Conservation, stabilité et signes de détériorationCAPICLEAN doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon. NE PASCONGELER.Un précipité ou des particules agrégées en suspension (floculat) peuvent être observés dans le flacon de CAPICLEAN sans que cela n’affecte sonutilisation.Ne pas remettre en suspension ce précipité ou ces particules. Il est recommandé de ne prélever que le surnageant.

4. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)PréparationPréparer une solution d’hypochlorite de sodium (eau de Javel) à 2 - 3 % de chlore à partir d’une dose concentrée de 250 mL à 9,6 % de chlore diluéeà 1 litre (volume final) dans de l’eau froide distillée ou déminéralisée.UtilisationPour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA (entretien hebdomadaire afind’éliminer toute protéine adsorbée sur l’aiguille).Voir la notice d’utilisation de CAPILLARYS, SEBIA.• Utiliser le portoir spécifique de maintenance (N° 100).• Placer sur ce portoir, en position 1, un tube à hémolyse contenant 2 mL de solution d’hypochlorite de sodium préparée précédemment.• Introduire le portoir N° 100 de maintenance dans le système CAPILLARYS.• Dans le menu de la fenêtre "MAINTENANCE" apparaissant à l’écran, sélectionner "Lancer le nettoyage aiguille (solution d’hypochlorite de sodium)",

puis valider.Conservation, stabilité et signes de détériorationLa solution d’hypochlorite de sodium diluée peut être conservée 3 mois à température ambiante dans un récipient en plastique fermé hermétiquement,à l’abri des rayonnements solaires et de toute source de chaleur ou d’ignition et à l’écart des acides et de l’ammoniaque.

5. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAPPréparationChaque flacon de solution de lavage concentrée (SEBIA, référence N° 2052 : 2 flacons de 75 mL) doit être complété à 750 mL avec de l’eau distilléeou déminéralisée.Après dilution, la solution de lavage contient une solution basique pH ≈ 12.

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UtilisationPour le lavage des capillaires de CAPILLARYS. Réactif additionnel nécessaire dans le cas de séries inférieures à 40 analyses.IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de solution de lavage, il est recommandé de rincer abondamment à l’eau distillée ou déminéralisée le coldu flacon, le connecteur et le tuyau afin d’éviter l’accumulation de sels.Conservation, stabilité et signes de détériorationLes solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviterl’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon.La solution diluée est stable pendant 3 mois.Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.

6. BÊTA-MERCAPTOÉTHANOL (BME ou 2-MERCAPTOÉTHANOL) (non fourni par SEBIA)

7. DILUANT DTT (IF / IT)PrésentationLe flacon de Diluant DTT (IF / IT) (SEBIA, référence N° 4589 : 1 flacon de 13 mL) contient : tampon phosphate pH 7,4 ± 0,5 et des composants sansdanger aux concentrations utilisées nécessaires pour des performances optimales.UtilisationLe Diluant DTT (IF / IT) est destiné à la reconstitution d’un flacon de Dithiothréitol (DTT) pour la préparation d’une solution réductrice de DTT 0,5 Mqui permet de dépolymériser les protéines monoclonales.Cette solution réductrice de Dithiothréitol peut être utilisée en remplacement d’une solution de ß-mercaptoéthanol.Voir la notice d’utilisation du Diluant DTT (IF / IT), SEBIA.Conservation, stabilité et signes de détériorationVoir la notice d’utilisation du Diluant DTT (IF / IT), SEBIA.

NOTES :Les tests réalisés lors de la validation des réactifs montrent que, pour les différentes solutions et avec l’utilisation d’un matériel adapté au volume àreconstituer, une variation du volume final de ± 5 % n’affecte en rien la qualité de l’analyse.L’eau distillée ou déminéralisée, utilisée pour la reconstitution des solutions, doit être exempte de colonies bactériennes et de moisissures (utiliser unfiltre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES

1. Système d’électrophorèse capillaire CAPILLARYS SEBIA : CAPILLARYS référence N° 1220, CAPILLARYS 2 référence N° 1222 ouCAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING référence N° 1227.

2. Portoirs, fournis avec le système CAPILLARYS.3. Bidons plastiques fournis avec le système CAPILLARYS : flacon pour le rinçage des capillaires (à remplir avec de l’eau déminéralisée ou distillée),

flacon de solution de lavage et flacon de vidange.

ÉCHANTILLONS À ANALYSER

Prélèvement et conservation des échantillonsL’analyse se fait sur sérums frais. Les sérums doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques.Les échantillons peuvent être conservés au maximum 10 jours au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).Pour des conservations prolongées, congeler rapidement les échantillons à - 18 / - 30 °C (au maximum dans les 8 heures après le prélèvement). Lessérums congelés sont stables 3 mois.Les protéines des échantillons conservés entre 2 et 8 °C ou entre 15 et 30 °C, se dégradent, en particulier le complément C3 pour lequel la cinétiquede dégradation est très rapide à 15 – 30 °C et est nettement visible au-delà de 3 jours.Un sérum conservé entre 2 et 8 °C ou entre 15 et 30 °C présente une fraction bêta-2 qui diminue progressivement et peut apparaître déformée (avecapparition de petits pics supplémentaires du côté gamma et / ou bêta-1 suite à la dégradation du complément C3) et une fraction alpha-2 dont la formepeut être légèrement modifiée.Au-delà de 10 jours entre 2 et 8 °C ou 3 jours entre 15 et 30 °C, la fraction bêta-1 se déforme en s’élargissant, et la fraction bêta-2 diminue fortement.Selon les échantillons, lors de leur conservation au-delà de 10 jours entre 2 et 8 °C ou 3 jours entre 15 et 30 °C, la superposition automatique desfractions par le logiciel de traitement des données peut potentiellement être perturbée.NOTE : Chaque laboratoire doit s’assurer que les échantillons sont transportés dans les conditions optimales pour leur intégrité (1).

(1) ISO 15189 : Laboratoires de biologie médicale - Exigences concernant la qualité et la compétence.Préparation des échantillonsUtiliser directement les échantillons de sérum non dilués.Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou uncryogel) deviennent visqueux ou troubles. Après remise à l’état liquide, ces sérums peuvent être analysés directement.De même, les sérums contenant une immunoglobuline polymérisée peuvent être utilisés directement, sans traitement préalable.Il est recommandé d’observer l’aspect du sérum avant l’analyse (cas d’hémolyse, de présence de cryoglobulines ou de turbidité).Échantillons à éviter• Ne pas utiliser des échantillons de sérum anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, les fractions bêta seraient fortement modifiées.• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène migre en position béta-2 (pic épaulé en béta-2).

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NOTE : Les tubes de prélèvement des échantillons biologiques sont décrits dans la documentation disponible sur la phase pré-analytique de biologiemédicale (données fournies par les fabricants de tubes, guides et recommandations sur le prélèvement biologique…). En l’absence d’indication dansla notice d’utilisation sur le type de tube à utiliser, se référer à cette documentation et pour les dimensions de tube à utiliser, se référer au documentSEBIA "Caractéristiques des tubes à utiliser selon l’instrument". La phase pré-analytique doit être réalisée selon l’état de l’art, les différentesrecommandations, dont celles fournies par les fabricants de tubes, et la réglementation applicable.

TECHNIQUELe système CAPILLARYS est un instrument multiparamétrique automatique qui assure l’analyse des protéines sériques sur 6 capillaires en parallèledans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING selon les étapes suivantes :• lecture des codes-barres des tubes primaires et du portoir ;• dilution des échantillons à partir des tubes primaires ;• mise en contact des sérums avec la solution ELP et avec les antisérums des différentes spécificités ;• lavage des capillaires ;• injection des échantillons dilués ;• séparation et détection directe des protéines sur les capillaires.

Les étapes manuelles sont les suivantes :• mise en place des tubes primaires sur les portoirs ;• mise en place d’une barrette antisérums désoperculée sur chaque portoir ;• introduction dans le système CAPILLARYS ;• récupération des portoirs après analyse.

Une analyse électrophorétique préalable effectuée sur le système CAPILLARYS avec le kit CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 aura permis de sélectionnerles échantillons dont le profil protéique présente un pic anormal par examen visuel.

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE CAPILLARYS.

I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE1. Sélectionner les échantillons dont le profil protéique obtenu par la technique CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 a permis de détecter un pic anormal

après analyse qualitative.2. Mettre CAPILLARYS et l’ordinateur de contrôle sous tension.3. Démarrer le logiciel, l’automate est alors automatiquement initialisé. Après 10 minutes environ, le système CAPILLARYS est prêt pour

l’utilisation.4. Pour analyser l’échantillon, quand une protéine monoclonale est suspectée dans la zone gamma, sélectionner le mode de dilution selon la

concentration en immunoglobulines de la zone gamma. La dilution sera alors automatiquement appliquée à l’échantillon.• " HYPERGAMMA " si la concentration en immunoglobulines est supérieure à 20 g/L (cas d'hypergammaglobulinémie),• " HYPOGAMMA " si la concentration en immunoglobulines est inférieure à 8 g/L (cas d'hypogammaglobulinémie),• " STANDARD " dans tous les autres cas (mode de dilution sélectionné par défaut).

5. Pour l’analyse des sérums, utiliser le kit CAPILLARYS IMMUNOTYPING avec le programme d’analyses "IMMUNOTYPING 6" et le tampond’analyse CAPILLARYS PROTEIN(E) 6. Pour sélectionner le programme d’analyses "IMMUNOTYPING 6" et mettre en place le flacon detampon CAPILLARYS PROTEIN(E) 6, lire attentivement le manuel d’instructions de CAPILLARYS.REMARQUE : Le passage de la technique CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 à la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING (et réciproquement)ne nécessite pas de changement de flacon de tampon.

6. Placer 1 seul tube primaire en position 1 sur chaque portoir, en prenant bien soin de placer le code-barres du tube en face de la fenêtre delecture. Dans le cas où l’échantillon placé sur le portoir ne ferait pas partie des sérums préalablement sélectionnés, le mode de dilution" STANDARD " sera appliqué.

7. Pour chaque échantillon à analyser, prendre une barrette antisérums neuve, enlever son opercule et la placer sur le même portoir que le tubeprimaire (en cas d’absence de barrette, le portoir est éjecté).NOTE : Les barrettes ont une forme caractéristique avec détrompeur afin de bien les positionner sur les portoirs du système CAPILLARYS.

8. Introduire le (ou les) portoir(s) avec tube primaire et barrette antisérums dans le système CAPILLARYS par l’orifice d’entrée situé au milieude l’appareil. Treize portoirs peuvent être introduits successivement et de nouveaux portoirs pourront être introduits en continu au fur et àmesure des analyses.

9. Retirer du plateau de sortie, situé à gauche de l’appareil, les portoirs dont le contenu du tube a déjà été analysé.10. Retirer avec précaution la barrette antisérums usagée et la jeter.

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes antisérums contenant des échantillons biologiques.

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES1. Lecture des codes-barres de chaque tube primaire d’échantillon et du portoir correspondant.2. Dilution du sérum dans le diluant contenu dans le double puits de la barrette, puis répartition de l’échantillon dilué dans les 6 autres puits (solution

ELP, anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda) avec rinçage de l’aiguille de prélèvement entre chaque dilution. Le mode de dilutionpréalablement sélectionné pour cet échantillon sera automatiquement appliqué. Si celui-ci n’a pas été défini, le mode de dilution " STANDARD "sera appliqué.

3. Lavage des capillaires.4. Injection des échantillons dilués dans les capillaires.5. Migration à voltage constant en température régulée par effet Peltier, pendant environ 4 minutes.6. Lecture à 200 nm et apparition simultanée des profils protéiques sur l’écran de l’ordinateur.NOTE : Ces étapes sont effectuées les unes après les autres pour le premier portoir introduit : les profils correspondant au premier échantillon analysésont obtenus après 10 minutes. Pour le portoir suivant, les phases 1 et 2 (lecture des codes-barres et dilution du sérum) se font en temps masqué,pendant la phase 5 du portoir précédent.

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II. TRAITEMENT DES DONNÉESDès la fin de l’analyse, chaque profil antisérums (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) est superposé au profil ELP. En cas de réaction entre la protéinemonoclonale et l'antisérum spécifique, le pic correspondant disparaît du profil électrophorétique de l’antisérum.L’analyse du sérum dilué dans le diluant contenu dans la barrette antisérums, est réalisée lors de l’immunotypage et permet d’obtenir le profil protéiquede l’échantillon natif (profil « Ref »). Cette courbe supplémentaire permet de vérifier la concordance entre l’analyse des protéines et l’immunotypage.Ces comparaisons permettent d'identifier et de caractériser le ou les composants monoclonaux.IMPORTANT : Le profil protéique natif (profil « Ref ») n’est ni superposé, ni superposable à un profil antisérums de l’immunotypage.

III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSEUne procédure d’extinction doit être lancée par l’opérateur en fin de session de travail afin de conserver les capillaires dans des conditions optimales.

IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFSL’automate CAPILLARYS permet une gestion automatique des réactifs. IMPORTANT : Il est nécessaire de suivre la procédure prévue pour le changement des flacons (risques de dépressurisation des flacons et perturbationdes analyses) et de respecter le code couleur flacon – connecteur lors de chaque remplacement de flacon.L’apparition de la fenêtre de gestion des réactifs indique qu’il est nécessaire de changer un ou plusieurs réactifs :• mise en place d’un nouveau flacon de tampon d’analyse et / ou,• remplissage du flacon de lavage avec la solution de lavage reconstituée et / ou,• remplissage du flacon de rinçage par de l’eau déminéralisée ou distillée filtrée et / ou,• vidange du flacon de vidange.

ATTENTION : Ne pas utiliser d’eau déminéralisée du commerce, eau pour fer à repasser par exemple (risque de détérioration importantedes capillaires). Utiliser exclusivement de l’eau de qualité ultrapure, type eau pour préparation injectable.

IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE CAPILLARYS.

CONTRÔLE QUALITÉIl est recommandé de réaliser l’analyse d’un sérum de contrôle (tel que le Contrôle IT / IF SEBIA, référence N° 4788) lors de chaque changement delot d’un des réactifs.NOTE : Si nécessaire, le Sérum de Contrôle Normal SEBIA, référence N° 4785, ou le Sérum de Contrôle Hypergamma SEBIA, référence N° 4787,peuvent être utilisés comme contrôle négatif.

RÉSULTATS

Aide à l’analyse des profils électrophorétiques

1. Profil de référence (profil ELP)• Tout d’abord, il est recommandé d’examiner attentivement le profil de référence (profil ELP) pour détecter toute anomalie.• Lorsqu’une anomalie est détectée sur le profil ELP, repérer la position de migration du(des) pic(s) sur la courbe – zone alpha-2, bêta,

bêta-gamma ou gamma. À l’aide du profil ELP, chercher spécifiquement les zones anormales par comparaison de ce profil ELP avec chaqueprofil antisérum – G, A, M, kappa et lambda.

• Les pics anormaux peuvent se présenter sous forme de composants monoclonaux, biclonaux, triclonaux ou oligoclonaux, de chaînes lourdes,de chaînes légères, etc…

2. Examiner chaque profil antisérum en le comparant au profil de référence superposé (profil ELP). Chercher la disparition ou la diminution d’un pic anormal.• Ig G : Les Ig G représentent la classe majoritaire d’immunoglobulines rencontrées dans le sérum et une élimination normale du fond polyclonal

est communément observée. Cette diminution normale du fond polyclonal ne doit pas être confondue avec un composant monoclonal. Une Ig Gmonoclonale est détectée par la disparition d’un pic par comparaison avec le profil ELP.

• Ig A : Normalement, les Ig A sont en concentration relativement faible par rapport aux Ig G. Chercher une légère diminution dans la zonebêta-gamma. Le profil ELP devrait refléter la présence d’Ig A dans les échantillons normaux.

• Ig M : Le profil est similaire à celui obtenu avec l’antisérum anti-Ig A à l’exception de la concentration qui est normalement inférieure. Leséchantillons normaux présenteront une très faible diminution sans modification de la symétrie de la fraction. Le profil ELP devrait refléter laprésence d’Ig M dans les échantillons normaux.

• Kappa : Elles sont normalement présentes dans un rapport de 2 kappa pour 1 lambda. Observer normalement une diminution de 2/3 de lafraction gamma. Une élimination polyclonale apparaît sous la forme d’une réduction de la fraction sans aucune modification de sa symétrie. Uncomposant monoclonal kappa est détecté par l’élimination d’un pic avec un changement de symétrie de la fraction, par comparaison avec leprofil ELP.

• Lambda : Du fait d’un rapport de 2 kappa pour 1 lambda, le profil lambda d’échantillons normaux devrait présenter une réduction d’un 1/3 de lafraction gamma. Un composant monoclonal lambda est détecté par l’élimination d’un pic avec un changement de symétrie de la fraction, parcomparaison avec le profil ELP.

L’identification d’un composant monoclonal est obtenue par l’observation de l’absence ou de la disparition d’un pic anormal sur les profils antisérumscorrespondants. Par exemple, l’élimination d’un pic anormal sur le profil Ig G et le profil kappa pourrait indiquer la présence d’un composantmonoclonal Ig G, kappa.

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Interprétation pour l’analyse de sérumsAbsence de protéine monoclonale• La disparition des immunoglobulines polyclonales sur les profils antisérums (avec diminution des fractions gamma et bêta), sans disparition d'autres

pics protéiques, est observée pour l'analyse d'un sérum normal ou présentant une hypergammaglobulinémie.Présence d’une protéine monoclonale• Une gammapathie (présence d’une immunoglobuline monoclonale) est caractérisée par la disparition d’un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes

(gamma, alpha ou mu) et avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence doit être située au mêmeniveau de migration que la bande détectée sur le profil ELP.

• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda) sans disparition de ce pic avec l’un des anti-chaînes lourdes peutsignifier :a) la présence d’une gammapathie à Ig D ou Ig E qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL IF, SEBIA, avec les anti-chaîneslourdes delta ou epsilon,b) la présence d’une chaîne légère libre qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL BENCE JONES ou HYDRAGEL IF, SEBIA,avec les antisérums spécifiques anti-chaînes légères libres kappa ou lambda.

• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes sans disparition de ce dernier avec les anti-chaînes légères est rare. Il conviendra deconfirmer la présence d’une maladie des chaînes lourdes gamma, alpha ou mu.

Présence de plusieurs protéines monoclonales• La même interprétation s’applique en présence de plusieurs protéines monoclonales. Ces cas plus rares correspondent à la prolifération de

plusieurs clones de cellules B. Une gammapathie biclonale sera détectée par la présence de deux chaînes lourdes (identiques ou différentes) et dedeux chaînes légères (identiques ou différentes), c’est-à-dire par la disparition des 2 pics avec l’un des anti-chaînes lourdes (identiques oudifférents) et avec l’un des anti-chaînes légères (identiques ou différents).

• La disparition de plusieurs pics avec l’un des anti-chaînes lourdes et avec l’un des anti-chaînes légères est caractéristique d’une polymérisation desimmunoglobulines. Il conviendra d’effectuer un traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol et de renouveler l'immunotypage pour confirmer la présence d’une seuleanomalie. Dans ce cas, préparer une solution réductrice en ajoutant 1 % de bêta-mercaptoéthanol dans le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587,1 flacon de 5 mL). Le système CAPILLARYS en attente de portoir, prétraiter l’échantillon par cette solution en ajoutant 100 µL de solution réductriceà 300 µL de sérum pur. Agiter au vortex et laisser en contact 15 minutes maximum puis suivre la technique.IMPORTANT : Après traitement réducteur au beta-mercaptoéthanol, l’échantillon doit être analysé immédiatement ; il ne doit alors pas y avoir deportoir en attente d’analyse dans le système CAPILLARYS. Après traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol, la transformation de ce profil bi- ou tri-clonal en profil monoclonal permet de conclure à laprésence d’un seul clône. Il est à noter que le traitement du sérum au ß-mercaptoéthanol entraîne par ailleurs une dégradation du complément C3(visualisation de fortes déformations de la zone bêta) et l’apparition possible d’un large pic entre les fractions alpha-1 et albumine.

• La disparition de plusieurs pics multiples avec l’un ou plusieurs anti-chaînes lourdes et avec les deux anti-chaînes légères est caractéristique d’unprofil oligoclonal.

Cas particuliers :• Cas de disparition incomplète d’un pic monoclonal sur les profils antisérums :

Refaire l’analyse avec une dilution plus importante du sérum. Sélectionner le mode de dilution "STANDARD" à la place du mode "HYPOGAMMA"et "HYPERGAMMA" à la place de "STANDARD".

• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) en concentration très importante (en mode de dilution "HYPERGAMMA") :Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums apparaît sous la forme d’un pic large et important entre les fractions albumine et alpha-1 ; ladisparition du (ou des) pic(s) monoclonal (-aux) peut ne pas être complète sur les profils antisérums.

• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) polymérisée(s) :Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums peut apparaître sous la forme d’un pic large et important entre les fractions albumine et bêta-1.

• Cas de protéines monoclonales migrant hors de la zone gamma (alpha-2, bêta-1 ou bêta-2)En cas de forte protéine monoclonale migrant hors de la zone gamma (alpha-2, bêta-1 ou bêta-2), sélectionner le mode de dilution adapté à laconcentration totale en immunoglobulines sur le profil électrophorétique (zone gamma + protéines monoclonales suspectées en alpha-2 ou bêta).

• Cas des biclonales :Les biclonales peuvent être dues à des immuncomplexes ou des gammapathies biclonales ou, cas extrêmement rare, à des réactions croisées(cf § Interférences et limites).

• Cas de disparition d’Ig M sur les profils antisérums Kappa et Lambda :En cas de soustraction complète d’un pic avec les antisérums anti-Ig M, anti-chaînes légères Kappa et Lambda, il est recommandé d’effectuer untraitement réducteur de l’échantillon au bêta-mercaptoéthanol (voir le paragraphe précédent) et de répéter l’immunotypage.

• En cas de réactions multiples simultanées avec les antisérums anti-chaînes lourdes G, A, et M, il est recommandé de refaire l’analyse del’échantillon de sérum en sélectionnant le mode de dilution "OPTIMISÉE".

NOTE : Le traitement de l’échantillon au ß-mercaptoéthanol peut être remplacé par un traitement au Dithiothréitol reconstitué dans le Diluant DTT(IF / IT), SEBIA, référence N° 4589. Voir le paragraphe "RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS" et la notice d’utilisation du Diluant DTT (IF / IT)pour des informations complémentaires.

Interférences et limitesDe nombreux travaux ont montré que la réaction antigène - anticorps en phase liquide se fait différemment de la réaction sur gel. Les techniquesd’immunotypage en électrophorèse capillaire se déroulant totalement en milieu liquide, il peut arriver que certains antisérums donnent des réactionscroisées avec certaines protéines monoclonales présentes dans l’échantillon.Il n’y a aucun risque de faux négatifs c'est-à-dire de ne pas révéler une gammapathie.Cette réaction croisée, extrêmement peu fréquente, peut se présenter comme un diagnostic de gammapathie biclonale alors qu’il n’y a en fait qu’unegammapathie monoclonale. En tout état de cause, la littérature indique qu’il n’y a pas de différence de traitement entre une gammapathie monoclonaleet une gammapathie biclonale (Kyle et al, 1981).En cas de doute, il est recommandé de confirmer ce résultat par les techniques d’immunofixation HYDRAGEL.De légers décalages entre le profil ELP et les profils antisérums superposés (notamment dans la zone bêta-1) peuvent être observés. Ils ne doiventpas être confondus avec la disparition d’un pic monoclonal sur un ou plusieurs profils antisérums.Utiliser uniquement les antisérums spécifiques à la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING.Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie nepeut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales.Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER.

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

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Quand une protéine monoclonale est détectée par les techniques d’analyse des protéines sur CAPILLARYS (technique CAPILLARYS PROTEIN(E) 6)et non caractérisée par la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING, il est recommandé de renouveler l’immunotypage en traitant, au préalable,l’échantillon au beta-mercaptoéthanol (voir le paragraphe précédent) et si un doute persiste, de confirmer le résultat obtenu par une techniqued’immunofixation sur gel d’agarose.Comme toute technique d’électrophorèse, de faibles protéines monoclonales migrant conjointement avec des protéines normales du sérum peuventêtre difficiles à détecter. Lorsque de faibles protéines monoclonales sont suspectées, des analyses complémentaires à l’aide des kits d’immunofixationHYDRAGEL, SEBIA, peuvent alors être nécessaires (Keren, 1998).

Assistance techniqueContacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux.Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives au nettoyage et à l’élimination des déchets, aux règlesd’étiquetage et de sécurité appliquées par SEBIA, à l’emballage de transport pour les échantillons biologiques et à la décontamination des appareilssont disponibles dans l’espace Clients du site internet SEBIA : www.sebia.com.

PERFORMANCES

Reproductibilité intra-essaiCinq échantillons de sérums pathologiques à gammapathie monoclonale et un sérum normal ont été analysés dans la technique CAPILLARYSIMMUNOTYPING en mode de dilution standard, avec 2 lots différents de barrettes antisérums ; chaque barrette contenant le même réactif dans tousles puits selon l'échantillon (solution ELP, anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda).Tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 2 lots de barrettes testés et les profils obtenus sont caractéristiques pour chacundes échantillons.Dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING, l'immunotypage ne détecte qu’un seul composant monoclonal pour les 5 échantillonspathologiques et aucun pic pour le sérum normal.

Reproductibilité inter-essais et inter-lotsNeuf échantillons de sérums pathologiques à gammapathie monoclonale, présentant des concentrations en immunoglobulines (Ig) différentes, ont étéanalysés dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING, en mode de dilution "HYPOGAMMA" pour 3 sérums dont la concentration en Ig était < à8 g/L, en mode de dilution "STANDARD" pour 3 sérums dont la concentration en Ig était comprise entre 8 et 20 g/L, et en mode de dilution"HYPERGAMMA" pour 3 sérums dont la concentration en Ig était > à 20 g/L. Cette analyse a été répétée 4 fois avec 3 lots différents de barrettesantisérums.Tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 3 lots de barrettes testés et les profils obtenus sont caractéristiques pour chacundes échantillons analysés. Dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING, l'immunotypage met en évidence les pics monoclonaux attendus pourchacun des échantillons.

Exactitude135 échantillons de sérum (119 échantillons pathologiques différents et 16 sérums normaux) ont été analysés en parallèle dans la techniqueCAPILLARYS IMMUNOTYPING et dans la technique d'immunofixation sur gel d'agarose HYDRAGEL 9 IF, SEBIA. Les résultats obtenus ont montréune corrélation de 95 % entre les deux techniques :• Pour les 16 sérums normaux : corrélation parfaite,• Pour les 119 sérums pathologiques :

- 112 sérums ont montré une corrélation parfaite,- 4 sérums présentant une protéine monoclonale en très faible quantité sur un fond polyclonal important ont montré une corrélation partielle,- 3 sérums avec un profil oligoclonal à bandes multiples ont aussi montré une corrélation partielle.

Dans tous les cas, le diagnostic clinique obtenu montre une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse pour tous les échantillons analysésavec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à la technique de référence, calculées selon la méthode recommandée(Wendling, 1986).

SensibilitéTrois sérums à gammapathie monoclonale ont été dilués en série dans un sérum normal et analysés dans la technique CAPILLARYSIMMUNOTYPING.

Les résultats sont résumés ci-dessous. | BANDE MONOCLONALE | || ÉCHANTILLON N° | TYPE | CONC. (g/L) | LIMITE DE DÉTECTION (g/L) || | | | || | Alpha | | 0,25 || 1 |Ig A, K Kappa | 5,0 | 0,25 || | Gamma | | 0,25 || 2 |Ig G, L Lambda | 2,0 | 0,25 || | Mu | | 0,25 || 3 |Ig M, K Kappa | 3,9 | 0,25 |Le seuil de détection d’un pic monoclonal est donc de l'ordre de 0,25 g/L.

NOTE : Selon la position du pic monoclonal et le fond polyclonal de la zone des gamma et bêta globulines, le seuil de détection d’un pic monoclonalpeut varier.

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ANALYSE DES URINES : TECHNIQUE CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINERÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

1. KIT CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence 2003)Présentation, conservation, stabilité et signes de détériorationVoir la notice d’utilisation du kit.ATTENTION : Ne pas utiliser les barrettes de dilution contenues dans le kit CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 pour la technique CAPILLARYSIMMUNOTYPING URINE.

2. KIT CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, référence 2013)Présentation, conservation, stabilité et signes de détériorationVoir la notice d’utilisation du kit.UtilisationPour la préparation des échantillons d’urines pour analyse des protéines urinaires humaines par électrophorèse capillaire dans le systèmeautomatique CAPILLARYS.

3. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉEUtilisationPour le rinçage des capillaires de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA.Il est recommandé d’utiliser de l’eau distillée ou déminéralisée filtrée (sur filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soitune résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.Afin d’éviter les contaminations microbiennes, renouveler l’eau chaque jour. Pour un fonctionnement optimum, il est recommandé d’ajouter du CLEAN PROTECT (SEBIA, référence N° 2059 : 1 flacon de 5 mL) à l’eau distilléeou déminéralisée (voir la notice d’utilisation du CLEAN PROTECT) ou d’utiliser directement la solution CAPIprotect* prête à l’emploi (SEBIA,référence N° 2061 : 2 bidons de 5 L d’eau distillée avec CLEAN PROTECT).IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.* NOTE : La solution CAPIprotect peut aussi être utilisée pour diluer la solution de lavage concentrée. Dans ce cas, la solution de lavage diluée peutalors présenter une coloration transitoire jaune plus ou moins prononcée sans que cela n’affecte les performances du test.

4. CAPICLEANPrésentationLe flacon de solution enzymatique concentrée CAPICLEAN (SEBIA, référence N° 2058 : 1 flacon de 25 mL) contient : enzymes protéolytiques,surfactants et composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.UtilisationPour le nettoyage de l'aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA, au cours du cycle de nettoyageCAPICLEAN.IMPORTANT : - Quand moins de 500 analyses sont réalisées par semaine, réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN au minimum une fois par semaine.- Quand moins de 500 analyses sont réalisées par jour et plus de 500 analyses sont réalisées par semaine, réaliser un cycle de nettoyage avec

CAPICLEAN toutes les 500 analyses.- Quand plus de 500 analyses sont réalisées par jour, réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN une fois par jour.Voir la notice d’utilisation de CAPICLEAN, SEBIA.IMPORTANT : Après le nettoyage de l’aiguille de prélèvement, ne pas réutiliser la barrette de dilution.Conservation, stabilité et signes de détériorationCAPICLEAN doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon. NE PASCONGELER.Un précipité ou des particules agrégées en suspension (floculat) peuvent être observés dans le flacon de CAPICLEAN sans que cela n’affecte sonutilisation.Ne pas remettre en suspension ce précipité ou ces particules. Il est recommandé de ne prélever que le surnageant.

5. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)PréparationPréparer une solution d’hypochlorite de sodium (eau de Javel) à 2 - 3 % de chlore à partir d’une dose concentrée de 250 mL à 9,6 % de chlore diluéeà 1 litre (volume final) dans de l’eau froide distillée ou déminéralisée.UtilisationPour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, CAPILLARYS, SEBIA (entretien hebdomadaire afind’éliminer toute protéine adsorbée sur l’aiguille).Voir la notice d’utilisation de CAPILLARYS, SEBIA.• Utiliser le portoir spécifique de maintenance (N° 100).• Placer sur ce portoir, en position 1, un tube à hémolyse contenant 2 mL de solution d’hypochlorite de sodium préparée précédemment.• Introduire le portoir N° 100 de maintenance dans le système CAPILLARYS.• Dans le menu de la fenêtre "MAINTENANCE" apparaissant à l’écran, sélectionner "Lancer le nettoyage aiguille (solution d’hypochlorite de sodium)",

puis valider.Conservation, stabilité et signes de détériorationLa solution d’hypochlorite de sodium diluée peut être conservée 3 mois à température ambiante dans un récipient en plastique fermé hermétiquement,à l’abri des rayonnements solaires et de toute source de chaleur ou d’ignition et à l’écart des acides et de l’ammoniaque.

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6. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAPPréparationChaque flacon de solution de lavage concentrée (SEBIA, référence N° 2052 : 2 flacons de 75 mL) doit être complété à 750 mL avec de l’eau distilléeou déminéralisée.Après dilution, la solution de lavage contient une solution basique pH ≈ 12.UtilisationPour le lavage des capillaires de CAPILLARYS. Réactif additionnel nécessaire dans le cas de séries inférieures à 40 analyses.IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de solution de lavage, il est recommandé de rincer abondamment à l’eau distillée ou déminéralisée le coldu flacon, le connecteur et le tuyau afin d’éviter l’accumulation de sels.Conservation, stabilité et signes de détériorationLes solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviterl’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon.La solution diluée est stable pendant 3 mois.Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.

NOTES :Les tests réalisés lors de la validation des réactifs montrent que, pour les différentes solutions et avec l’utilisation d’un matériel adapté au volume àreconstituer, une variation du volume final de ± 5 % n’affecte en rien la qualité de l’analyse.L’eau distillée ou déminéralisée, utilisée pour la reconstitution des solutions, doit être exempte de colonies bactériennes et de moisissures (utiliser unfiltre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES

1. Système d’électrophorèse capillaire CAPILLARYS SEBIA : CAPILLARYS référence N° 1220, CAPILLARYS 2 référence N° 1222 ouCAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING référence N° 1227.

2. Portoirs, fournis avec le système CAPILLARYS.3. Bidons plastiques fournis avec le système CAPILLARYS : flacon pour le rinçage des capillaires (à remplir avec de l’eau déminéralisée ou distillée),

flacon de solution de lavage et flacon de vidange.4. Tubes à hémolyse de 75 mm de hauteur et 13 mm de diamètre.

ÉCHANTILLONS À ANALYSER

Prélèvement et conservation des échantillonsL’analyse se fait de préférence sur urines fraîches de 24 heures. Les urines doivent être prélevées selon la procédure utilisée pour tout test delaboratoire d’analyses cliniques.Les échantillons d’urine peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).Pour des conservations prolongées, il est recommandé de congeler les échantillons à - 70 / - 80 °C ; les échantillons congelés sont stables auminimum 1 mois.IMPORTANT : Ne pas congeler les échantillons à – 20 °C.Les échantillons dégradés ou décongelés peuvent présenter des fractions déformées avec apparition de petits pics supplémentaires suite à ladégradation de protéines.NOTE : Ne pas conserver les échantillons d’urine à température ambiante.Préparation des échantillonsPréparer au préalable les échantillons d’urine selon le protocole de préparation (dialyse et concentration) indiqué dans la notice d’utilisation du kitCAPILLARYS / MINICAP URINE (voir le paragraphe " Réactifs nécessaires non fournis ").Utiliser directement ces échantillons d’urines préparées.IMPORTANT : La technique d’analyse des urines par électrophorèse capillaire nécessite la dialyse et la concentration des échantillons sur systèmesde dialyse SEBIA (tubes de 20 mL). Utiliser un tube par échantillon. L’échantillon dialysé et concentré ainsi obtenu peut être ensuite analysé dans lestechniques CAPILLARYS URINE et CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE.Les échantillons doivent être analysés au plus tard le jour suivant leur préparation. Afin de limiter l’adsorption des protéines urinaires sur la membranedu dispositif de dialyse et concentration (système de dialyse SEBIA), il est recommandé de ne pas conserver l’échantillon dans le système de dialyseaprès centrifugation, mais dans un microtube placé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Échantillons à éviter• Ne pas utiliser des échantillons d’urine anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, les fractions seraient fortement modifiées, suite à une

dégradation des protéines urinaires.• Il est recommandé d’observer l’aspect de l’urine après la première centrifugation (cas d’hémolyse ou de turbidité).• Ne pas utiliser d’échantillon conservé dans un dispositif de dialyse et concentration, certaines protéines pouvant s’adsorber sur la membrane.

NOTE : Les tubes de prélèvement et les paramètres de centrifugation des échantillons biologiques sont décrits dans la documentation disponible surla phase pré-analytique de biologie médicale (données fournies par les fabricants de tubes, guides et recommandations sur le prélèvementbiologique…). En l’absence d’indication dans la notice d’utilisation sur le type de tube à utiliser ou sur la centrifugation, se référer à cettedocumentation et pour les dimensions de tube à utiliser, se référer au document SEBIA "Caractéristiques des tubes à utiliser selon l’instrument". Laphase pré-analytique doit être réalisée selon l’état de l’art, les différentes recommandations, dont celles fournies par les fabricants de tubes, et laréglementation applicable.

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TECHNIQUELe système CAPILLARYS est un instrument multiparamétrique automatique qui assure l’analyse des protéines urinaires sur 6 capillaires en parallèledans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE selon les étapes suivantes :• lecture des codes-barres du portoir et de l’échantillon d’urine à analyser ;• dilution des échantillons ;• mise en contact des urines avec la solution ELP et avec les antisérums des différentes spécificités ;• lavage des capillaires ;• injection des échantillons dilués ;• séparation et détection directe des protéines sur les capillaires.

Les étapes manuelles sont les suivantes :• mise en place des microtubes (sans bouchons) contenant les échantillons à analyser sur des tubes à hémolyse servant de support sur les portoirs ;

chaque tube étant identifié par le code-barres spécifique d’identification correspondant à l’échantillon à analyser ;• mise en place d’une barrette antisérums désoperculée sur chaque portoir ;• introduction dans le système CAPILLARYS ;• récupération des portoirs après analyse.

Une analyse électrophorétique préalable effectuée sur le système CAPILLARYS avec le kit CAPILLARYS / MINICAP URINE aura permis desélectionner les échantillons dont le profil protéique présente un pic anormal par examen visuel.

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE CAPILLARYS.

I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE1. Sélectionner les échantillons dont le profil protéique obtenu par la technique CAPILLARYS URINE a permis de détecter un pic anormal après

analyse qualitative.2. Mettre CAPILLARYS et l’ordinateur de contrôle sous tension.3. Démarrer le logiciel, l’automate est alors automatiquement initialisé. Après 10 minutes environ, le système CAPILLARYS est prêt pour

l’utilisation.4. Pour chaque échantillon, sur le profil protéique obtenu avec le programme d’analyse " URINE ", déterminer la valeur du " Ratio urine " du pic

anormal à caractériser (voir le paragraphe " Traitement des données " de la notice du kit CAPILLARYS / MINICAP URINE). Le "Ratio urine"est défini par le rapport de la surface du pic anormal sur la surface totale des protéines du Sérum de Contrôle Normal.

5. Sélectionner le mode de dilution à appliquer automatiquement selon la valeur du " Ratio urine " : • " HYPOGAMMA " si la valeur du " Ratio urine " est inférieure à 0,55,• " STANDARD " si la valeur du " Ratio urine " est comprise entre 0,55 et 1,55,• " HYPERGAMMA " si la valeur du " Ratio urine " est supérieure à 1,55.NOTE : Lorsque le " Ratio urine " se situe à ± 10 % d’une valeur seuil (0,55 ou 1,55), il est recommandé de sélectionner le mode de dilutionen fonction du pic protéique anormal à caractériser dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE :- pour améliorer la sensibilité de détection d’un pic de faible intensité, moins diluer l’échantillon, c'est-à-dire sélectionner le mode de dilution

" HYPOGAMMA " à la place de " STANDARD " et " STANDARD " à la place de " HYPERGAMMA ",- pour améliorer l’immunotypage d’un pic de forte intensité, augmenter la dilution de l’échantillon, c'est-à-dire sélectionner le mode de dilution

" STANDARD " à la place du mode " HYPOGAMMA " et " HYPERGAMMA " à la place de " STANDARD ".6. Pour l’analyse des urines, utiliser le kit CAPILLARYS IMMUNOTYPING avec le programme d’analyses "IMMUNOTYPING URINE" et le

tampon d’analyse CAPILLARYS PROTEIN(E) 6. Pour sélectionner le programme d’analyses "IMMUNOTYPING URINE" et mettre en place leflacon de tampon CAPILLARYS PROTEIN(E) 6, lire attentivement le manuel d’instructions de CAPILLARYS.REMARQUE : Le passage de la technique CAPILLARYS URINE à la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE (et réciproquement)ne nécessite pas de changement de flacon de tampon.

7. Placer 1 tube à hémolyse vide (qui servira de support) en position 1 sur chaque portoir, puis 1 microtube contenant l’échantillon dialysé, enprenant bien soin de couper le bouchon du microtube.

8. Conserver le bouchon de chaque microtube pour la conservation ultérieure de l’échantillon, si nécessaire.IMPORTANT : Il est recommandé d’identifier les tubes à hémolyse servant de support aux microtubes contenant les échantillons à analyser,avec les étiquettes code-barres d’identification correspondant à ces derniers.

9. Placer le code-barres du tube en face de la fenêtre de lecture.Dans le cas où l’échantillon placé sur le portoir ne ferait pas partie des urines préalablement sélectionnées, le mode de dilution" HYPOGAMMA " sera appliqué.

10. Pour chaque échantillon à analyser, prendre une barrette antisérums neuve, enlever son opercule et la placer sur le même portoir que le tubeà hémolyse et le microtube avec échantillon (en cas d’absence de barrette, le portoir est éjecté).NOTE : Les barrettes ont une forme caractéristique avec détrompeur afin de bien les positionner sur les portoirs du système CAPILLARYS.

11. Introduire le (ou les) portoir(s) dans le système CAPILLARYS par l’orifice d’entrée situé au milieu de l’appareil. Treize portoirs peuvent êtreintroduits successivement et de nouveaux portoirs pourront être introduits en continu au fur et à mesure des analyses.

12. Retirer du plateau de sortie, situé à gauche de l’appareil, les portoirs dont le contenu du microtube a déjà été analysé.13. Retirer avec précaution la barrette antisérums usagée et la jeter.

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes antisérums contenant des échantillons biologiques.

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES1. Lecture des codes-barres du portoir et de l’échantillon d’urine à analyser correspondant.2. Dilution de l’urine dialysée dans le diluant contenu dans le double puits de la barrette, puis répartition de l’échantillon dilué dans les 6 autres puits

(solution ELP, anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda) avec rinçage de l’aiguille de prélèvement entre chaque dilution. Le modede dilution préalablement sélectionné pour cet échantillon sera automatiquement appliqué. Si celui-ci n’a pas été défini, le mode de dilution" HYPOGAMMA " sera appliqué.

3. Lavage des capillaires.4. Injection des échantillons dilués dans les capillaires.5. Migration à voltage constant en température régulée par effet Peltier, pendant environ 4 minutes.6. Lecture à 200 nm et apparition simultanée des profils protéiques sur l’écran de l’ordinateur.

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NOTE : Ces étapes sont effectuées les unes après les autres pour le premier portoir introduit : les profils correspondant au premier échantillon analysésont obtenus après 10 minutes. Pour le portoir suivant, les phases 1 et 2 (lecture des codes-barres et dilution de l’urine dialysée) se font en tempsmasqué, pendant la phase 5 du portoir précédent.

II. TRAITEMENT DES DONNÉESDès la fin de l’analyse, chaque profil antisérums (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) est superposé au profil ELP. En cas de réaction entre la protéinemonoclonale et l'antisérum spécifique, le pic correspondant disparaît du profil électrophorétique de l’antisérum. Ces comparaisons permettentd'identifier et de caractériser le ou les composants monoclonaux.Pour l’analyse des urines, les positions des différentes zones protéiques (Albumine, Alpha 1, Alpha 2, Bêta et Gamma) sont repérées à l’écran et surle compte-rendu résultats.

III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSEUne procédure d’extinction doit être lancée par l’opérateur en fin de session de travail afin de conserver les capillaires dans des conditions optimales.

IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFSL’automate CAPILLARYS permet une gestion automatique des réactifs. IMPORTANT : Il est nécessaire de suivre la procédure prévue pour le changement des flacons (risques de dépressurisation des flacons et perturbationdes analyses) et de respecter le code couleur flacon – connecteur lors de chaque remplacement de flacon.L’apparition de la fenêtre de gestion des réactifs indique qu’il est nécessaire de changer un ou plusieurs réactifs :• mise en place d’un nouveau flacon de tampon d’analyse et / ou,• remplissage du flacon de lavage avec la solution de lavage reconstituée et / ou,• remplissage du flacon de rinçage par de l’eau déminéralisée ou distillée filtrée et / ou,• vidange du flacon de vidange.

ATTENTION : Ne pas utiliser d’eau déminéralisée du commerce, eau pour fer à repasser par exemple (risque de détérioration importantedes capillaires). Utiliser exclusivement de l’eau de qualité ultrapure, type eau pour préparation injectable.

IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE CAPILLARYS.

RÉSULTATSInterprétation pour l’analyse des urinesAbsence de protéine monoclonale• La disparition des immunoglobulines polyclonales sur les profils antisérums (avec diminution des fractions gamma et bêta), sans disparition d'autres

pics protéiques, est observée pour l'analyse d'une urine normale ou présentant une protéinurie glomérulaire avec passage d’immunoglobulinespolyclonales.

Présence d’une protéine monoclonale• La présence d’une immunoglobuline monoclonale complète est caractérisée par la disparition d’un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes (gamma,

alpha ou mu) et avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence doit être située au même niveaude migration que la bande détectée sur le profil ELP.

• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda) sans disparition de ce pic avec l’un des anti-chaînes lourdes peutsignifier la présence d’une chaîne légère libre qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL BENCE JONES ou HYDRAGEL IF,SEBIA, avec les antisérums spécifiques anti-chaînes légères libres kappa ou lambda.

• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes sans disparition de ce dernier avec les anti-chaînes légères est rare. Il conviendra deconfirmer la présence d’une chaîne lourde gamma, alpha ou mu.

Présence de plusieurs protéines monoclonales• La disparition de plusieurs pics avec l’un des anti-chaînes légères peut être observée lors d’une polymérisation des chaînes légères libres.

Cas particuliers :• En cas de disparition incomplète d’un pic monoclonal sur les profils antisérums, refaire l’analyse avec une dilution plus importante de l’urine.

Sélectionner le mode de dilution " STANDARD " à la place du mode " HYPOGAMMA " et " HYPERGAMMA " à la place de " STANDARD ".• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) en concentration très importante (en mode de dilution "HYPERGAMMA") :

Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums apparaît sous la forme d’un pic large et important dans les zones albumine et alpha-1 ; ladisparition du (ou des) pic(s) monoclonal (-aux) peut ne pas être complète sur les profils antisérums.

• La disparition de 2 pics avec l'un des antisérums anti-chaînes légères, et d'un seul pic avec l'un des anti-chaînes lourdes, est due à la présenced’une immunoglobuline complète associée à une chaîne légère libre.

• Il est recommandé de sélectionner le mode de dilution en fonction de l’intensité du pic protéique anormal à caractériser, afin d’améliorer la sensibilitéde détection d’un pic de faible intensité ou l’immunotypage d’un pic de forte intensité (voir le paragraphe " Préparation de l’analyseélectrophorétique ").

Interférences et limitesVoir ÉCHANTILLONS À ANALYSER.Analyser uniquement des échantillons préparés à l’aide de dispositifs de dialyse et concentration, tels que les systèmes de dialyse SEBIA ou toutsystème de performances équivalentes, homologué pour les tests de biologie clinique.Une dialyse insuffisante de l’échantillon peut provoquer l’apparition de pics résiduels non protéiques (médicaments ou sels, par exemple). Dans le casoù la présence d’un interférent est suspectée, il est recommandé de réaliser une dialyse supplémentaire de l’échantillon.L’hémoglobine migre à la position de la transferrine quand elle est présente dans l’urine. Il est alors recommandé d’observer l’aspect de l’urine aprèsla première centrifugation (présence de globules rouges dans l’urine et / ou cas d’échantillon hémolysé).

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

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De nombreux travaux ont montré que la réaction antigène - anticorps en phase liquide se fait différemment de la réaction sur gel. Les techniquesd’immunotypage en électrophorèse capillaire se déroulant totalement en milieu liquide, il peut arriver que certains antisérums donnent des réactionscroisées avec certaines protéines monoclonales présentes dans l’échantillon.Il n’y a aucun risque de faux négatifs c'est-à-dire de ne pas révéler une gammapathie.Cette réaction croisée, extrêmement peu fréquente, peut se présenter comme un diagnostic de gammapathie biclonale alors qu’il n’y a en fait qu’unegammapathie monoclonale. En tout état de cause, la littérature indique qu’il n’y a pas de différence de traitement entre une gammapathie monoclonaleet une gammapathie biclonale (Kyle et al, 1981).En cas de doute, il est recommandé de confirmer ce résultat par les techniques d’immunofixation HYDRAGEL BENCE JONES.De légers décalages entre le profil ELP et les profils antisérums superposés (notamment dans la zone bêta-1) peuvent être observés. Ils ne doiventpas être confondus avec la disparition d’un pic monoclonal sur un ou plusieurs profils antisérums.Utiliser uniquement les antisérums spécifiques à la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE.Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie nepeut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales.

Assistance techniqueContacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux.Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives au nettoyage et à l’élimination des déchets, aux règlesd’étiquetage et de sécurité appliquées par SEBIA, à l’emballage de transport pour les échantillons biologiques et à la décontamination des appareilssont disponibles dans l’espace Clients du site internet SEBIA : www.sebia.com.

PERFORMANCES

Reproductibilité intra-essaiCinq échantillons pathologiques à gammapathie monoclonale ou biclonale et un échantillon normal ont été analysés dans la technique CAPILLARYSIMMUNOTYPING URINE en mode de dilution "HYPOGAMMA", avec 2 lots différents de réactifs de barrettes antisérums ; chaque barrette contenantle même réactif dans tous les puits selon l'échantillon analysé (solution ELP, antisérums anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa ou anti-Lambda).Tous les échantillons analysés ont donné les mêmes résultats pour les 2 lots de réactifs de barrettes testés et les profils obtenus sont caractéristiquespour chacun des échantillons.Dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE, l'immunotypage détecte les composants monoclonaux pour les 5 échantillonspathologiques à gammapathie monoclonale ou biclonale et ne détecte aucun pic pour l'échantillon normal.

Reproductibilité inter-essais et inter-lotsSept échantillons pathologiques à gammapathie monoclonale ou biclonale et un échantillon normal, présentant des concentrations protéiquesdifférentes, ont été analysés dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE, en mode de dilution "HYPOGAMMA" pour 4 échantillons dontle ratio urine était < à 0,55, en mode de dilution "STANDARD" pour 2 échantillons dont le ratio urine était compris entre 0,55 et 1,55, et en mode dedilution "HYPERGAMMA" pour 2 échantillons dont le ratio urine était > à 1,55. Cette analyse a été répétée 4 fois avec 3 lots différents de barrettesantisérums.Tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 3 lots de barrettes testés et les profils obtenus sont caractéristiques pour chacundes échantillons analysés. Dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE, l'immunotypage met en évidence les pics monoclonauxattendus pour chacun des 7 échantillons pathologiques.L'analyse de l'échantillon normal a permis de mettre en évidence un fond polyclonal sans présence de pic anormal.

ExactitudeTrente trois (33) échantillons d’urine pathologiques différents (à paraprotéines ou à chaînes légères libres Kappa ou Lambda), 22 échantillons à profilpolyclonal et 6 échantillons normaux ont été analysés en parallèle dans la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE et dans la techniqued’immunofixation sur gel d’agarose HYDRAGEL 9 BENCE JONES, SEBIA (technique de référence), pour la recherche de paraprotéines et de chaîneslégères libres.Les résultats obtenus ont montré une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 100 %par rapport à la technique de référence, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986) :Pour les 6 échantillons d’urine normaux : corrélation parfaite.Pour les 22 échantillons d’urine à profil polyclonal : corrélation parfaite.Pour les 33 échantillons pathologiques : corrélation parfaite.En effet, la présence de paraprotéines ou de chaînes légères libres a été mise en évidence sur tous les échantillons pathologiques dans les deuxsystèmes d’analyse.

SensibilitéLa sensibilité (ou limite de détection minimale) de la technique CAPILLARYS IMMUNOTYPING URINE pour les chaînes légères libres Kappa etLambda, obtenue par dilution en série d'échantillons d'urine à protéines de Bence Jones, est de l'ordre de 25 mg/L pour les échantillons analysésavec les antisérums anti-Kappa et anti-Lambda du kit CAPILLARYS IMMUNOTYPING.

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

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BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESSérum Normal / Normal serum

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Figure 1

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESSérum Hypergamma / Hypergamma serum

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Immun complexeImmune complex

Immun complexeImmune complex

Immun complexeImmune complex

Figure 2

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESProtéine monoclonale 0,5 g/L / Monoclonal component 0.5 g/L

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

Figure 3

Interpretation : Ig G, Lambda

- 367 -

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESIg G, Kappa - mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

Figure 4

Interpretation : Ig G, Kappa

- 368 -

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESProfil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

Figure 5

Interpretation : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESProfil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

Figure 6

Interpretation : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda

- 370 -

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLESProfil oligoclonal / Oligoclonal pattern

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Figure 7

- 371 -

CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES D'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF URINE SAMPLESProteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2 Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Figure 8

Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Kappa (à confirmer) Kappa free light chain suspected (to confirm)

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES D'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF URINE SAMPLESProteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2 Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2 Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2 Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Figure 9

Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer) Lambda free light chain suspected (to confirm)

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CAPILLARYS IMMUNOTYPING - 2017/05

SCHÉMAS / FIGURES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES D'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF URINE SAMPLESProfil biclonal / Biclonal pattern – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program

Paraprotéine éliminée / Decreased paraproteinParaprotéine non affectée / Not affected paraprotein

ELP Ig G

Ig A Ig M

K L

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2 Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Albumin(e) Alpha 1 Beta GammaAlpha 2

Figure 10

Interpretation : Ig G, Lambda + suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer) Ig G, Lambda + Lambda free light chain suspected (to confirm)

Benelux SCS / Comm. VJan Olieslagerslaan 41 1800 VilvoordeBelgique / BelgiëTél. : 32 (0)2 702 64 64 Fax : 32 (0)2 702 64 60 e-mail : [email protected]

BrasilEdifício Baker Office Tower Rua Barão do Triunfo, 73, conjunto 51 CEP 04602-000Bairro Brooklin Paulista, São Paulo - SP BrasilTel. : 55 11 3849 0148 Fax : 55 11 3841 9816 e-mail : [email protected]

GmbHMünsterfeldallee, 636041 FuldaDeutschlandTel. : 49 (0)661 3 30 81 Fax : 49 (0)661 3 18 81 e-mail : [email protected]

Hispania S.A.C/Sicilia, n° 39408025 BarcelonaEspañaTel. : 34 93 208 15 52 Fax : 34 93 458 55 86 e-mail : [email protected]

Inc.400-1705 Corporate DriveNorcross, GA 30093U.S.A.Tel. : 1 770 446 - 3707 Fax : 1 770 446 - 8511 e-mail : [email protected]

Italia S.r.l.Via Antonio Meucci, 15/a 50012 Bagno a Ripoli (FI)ItaliaTel. : 39 055 24851 Fax : 39 055 0982083e-mail : [email protected]

UK LtdRiver Court, Meadows Business ParkStation Approach, BlackwaterCamberley, Surrey, GU17 9ABUnited KingdomTel. : 44 (0)1276 600636 Fax : 44 (0)1276 38827 e-mail : [email protected]

Shanghai Representative OfficeCross Tower, Room 2306-07318 Fuzhou RoadShanghai 200001China Tel. : 00 86 (21) 6350 1655Fax : 00 86 (21) 6361 2011e-mail : [email protected]

Parc Technologique Léonard de VinciCP 8010 Lisses - 91008 EVRY Cedex - FranceTél. : 33 (0)1 69 89 80 80 - e-mail : [email protected]