Biologie du système de signalisation cellulaire induit par l’hormone folliculo-stimulante (FSH).
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Biologie du système de signalisation cellulaire induit par l’hormone folliculo-stimulante (FSH). UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux, Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly. Responsable Eric Reiter. INRIA Rocquencourt. Projet Contraintes, Responsable François Fages. Projet SOSSO2, Responsable Frédérique Clément. UMR 6204 CNRS/Université de Nantes. Responsable Véhary Sakanyan.
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Biologie du système de signalisation cellulaire induit par l’hormone folliculo-stimulante (FSH). UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux, Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly. Responsable Eric Reiter. INRIA Rocquencourt. - PowerPoint PPT Presentation
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Biologie du système de signalisation cellulaire induitpar l’hormone folliculo-stimulante (FSH).
UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux,Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly.
Responsable Eric Reiter.
INRIA Rocquencourt.
Projet Contraintes, Responsable François Fages.
Projet SOSSO2, Responsable Frédérique Clément.
UMR 6204 CNRS/Université de Nantes.
Responsable Véhary Sakanyan.
D’après http://www.imr-marseille.com/consultation_endocrinologique.htm#
Rôle physiologique de la FSH.
FSH
FSH
granulosa
Cellules de Sertoli
Versatilité des effets exercés par la FSH sur les cellules somatiques des gonades.
folliculeprimaire
folliculeà antrum
folliculepré-ovulatoire
folliculeprimordial
ATRESIE OVULATION
antrum
granulosa
ovocyte
proliférationdifférentiation
apoptose
prolifération différentiation
Vie foetale
birth
puberté
peritubular cells
spermatogoniaspermatocytesspermatidsspermatozoa
lumen
Sertoli cellsBasement
membrane
Mâle
Femelle
SPERMATOGENESE
De multiples voies de signalisation sont activées par la FSH via un RCPG.
ERK
p38
p70S6K
AMPc PKA/
PI3-K
HIF-1CREBNF1USF C/EBPNF-B Sp1facteurs detranscription
kinases
SF1
Akt
S6
Mâle
Femelle Gs
FSH
De multiples voies de signalisation sont activées par la FSH via un RCPG.
ERK
p38
p70S6K
AMPc PKA/
PI3-K
HIF-1CREBNF1USF C/EBPNF-B Sp1facteurs detranscription
kinases
SF1
Akt
S6
Mâle
Femelle Gs
FSH
AMPc
Réponses cellulaires
Gs
-arrestin
GRKP
PPP
Désensibilisation
R-FSH
Mécanisme de désensibilisation.
pERKp70S6K
Gs/AMPc
-arrestin
GRKP
PPP
R-FSH
Réponses cellulaires
DésensibilisationGRK2
pERKp70S6K
SignalisationGRK5/6
Signalisation dépendante des -arrestines.
Gs/AMPc SignalisationGRK5/6
pERKp70S6K
-arrestin
GRKP
PPP
R-FSH
Réponses cellulaires
DésensibilisationGRK2
Signalisation dépendante des -arrestines.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
100
120
Time (min)
Gs/PKA pERK
pERKp70S6K
Gs/AMPc SignalisationGRK5/6
pERKp70S6K
pERKp70S6K
-arrestin
GRKP
PPP
R-FSH
Réponses cellulaires
DésensibilisationGRK2
Signalisation dépendante des -arrestines.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
100
120
Time (min)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
100
120
Time (min)
Gs/PKA pERK -arrestines pERK
Gs/AMPc SignalisationGRK5/6
pERKp70S6K
pERKp70S6K
-arrestin
GRKP
PPP
R-FSH
Réponses cellulaires
DésensibilisationGRK2
Signalisation dépendante des -arrestines.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
100
120
Time (min)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
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Time (min)
Gs/PKA pERK -arrestines pERK
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 600
20
40
60
80
100
120
Time (Min)
Gs/PKA pERK
-arrestines pERK+
Objectif scientifique: mieux conceptualiser le réseau de signalisation induit par la FSH
Prolifération/Différenciation
Gs/PKA-arr ? ?
p70S6K
Erk? ? ?
Transduction
Cascades de signalisation
« Cross-talks »
Facteurs de transcription
Expression du génome
R-FSH
Rétro-contrôles
Comparaison mâle/femelleImpact sur la gamétogenèse
Codage spatio-temporel
« Check-points? »
Mise en place d’un réseau pluridisciplinaire.
2 équipes de biologistes: Mécanisme d’Action des Gonadotropines (MAG), UMR6175, Nouzilly.
Follicule Ovocyte et Développement, UMR6175, Nouzilly.
1 équipe de protéomique: Véhary Sakanyan, UMR6204 CNRS, Nantes.
2 équipes de modélisation: François Fages, projet Contraintes, INRIA Rocquencourt.
Frédérique Clément, projet SOSSO2, INRIA Rocquencourt.
ASC INRA(2 X 3ans)
Connaissances
Expériences
MesuresModèle
Mécanisme intracellulaires :interface Biocham
Intégration dans un modèlemulti-échelles de l’ovulation
Cinétiques de stimulation FSHinhibitions ciblées (agents pharmaco, siRNA)
Phosphorylation (puces à anticorps)AMPc,…
prolifération, marqueurs de différenciation,...
Modèles cellulaires : HEK293 R-FSH, cellules de Sertoli, granulosa primaires à différents stades
Projet AgroBI 2006-2008:
Outils disponibles: puces à anticorpsmesures des niveaux de phosphorylation à haut débit.
AktAkt1Akt2Akt3ATMBadBaxBcl-2EGFRERBb2ERK1ERK2FAKGSK-3aGSK-3bJNK ½MEK 1MEK 2NFkB p65P38a/SAPKP70S6KPI3K p85aPKB Kinase/PDK1Raf/c-RafSTAT 3
Actin-Tubulin-Tubulin-GAPDH
Rb1 S608Akt S473Akt T308ATM S1981Bad S112EGFR Y1173ERBb2 Y1248ERK1/2 T202/Y204FAK Y397GSK-3a S21GSK-3b S9JNK ½ T183/Y185MEK ½ S218/222NFkB p65 S536P38a/SAPK
T180/Y182PDK1 S241PKA STPTEN S380Raf S259Raf S338STAT 3 Y705
normalisation
Anti-protéines totales Anti-phospho-protéines
Plusieurs méthodes de révélation sont en phase d’évaluation et de mise au point. Objectif: 100 à 200 protéines différentes.
2 types de puces:
1
1,1
1,2
1,3
1,4
1,5
0 100 200 300 400 500
Time (Seconds)
cAM
P (
ICU
E2
C/Y
nR
atio
)
100 ng/mL
10 ng/mL
1 ng/mL
FSH
CFP
YFP
434 nm
528 nm
FRET
EPAC 1 AMPc
PDE
CFPYFP
434 nm528 nm
FRET
AMPc
Outils disponibles: senseurs fluorescents. Cinétiques de signalisation l’echelle d’une cellule.
Paramètres mesurables:
AMPcPKAPKCDAGPI3K,...
Transfection/micro-injection
calcium
Outils disponibles: “knock-down” cellulaires par siRNA
Transfection transitoire (HEK293)
Lentivirus
Micro-injectionCellules primaires
