APPLICATION DES TECHNIQUES « IN SITU » (IMMUNO-HISTO-CHIMIE ET HIS) DANS LA PRISE EN CHARGE D’UNE TUMEUR DU SEIN

Dr Olivier RENAUDService d’anatomie-pathologiqueCHU POITIERS

Approche « théragnostique »

● Intérêt pronostique● Décision thérapeutique● Immuno-histo-chimie

Méthodes de détection :

● Immunohistochimie● Hybridation in situ

– FISH– CISH

● RT PCR et Elisa

Récepteurs hormonaux :

semi-quantitative– % de cellules– intensité du marquage

● récepteurs oestro et progestéroniques● marquage nucléaire

réc. œstrogène x 400

HER2 : définition

● Récepteur d'un facteur de croissance● Human Epidermal growth factor Receptor-2● Glyco-protéine transmembranaire HER2● Famille des erbB tyrosine kinase ● Proto-oncogène c-erbB2 ou HER2-neu code

pour le gène 185Her2● Chromosome 17q21

● Intervient dans la régulation de la croissance, de la division et de la différenciation cellulaire

● Surexpression induit le maintien de son activation et la persistance des signaux vers le noyau pouvant entraîner dans certains cas une transformation maligne

● Surexpression dans 20 à 30 % des cancers du sein

● Facteur de risque● Traitement par trastuzumab

(Herceptin)

•chaque récepteur HER existe sous forme de monomère en équilibre avec des dimères qui sont stabilisés par un ligand.

•HER2 peut former des complexes soit avec lui-même (homodimères HER2/HER2), soit avec d'autres membres de la famille HER (hétérodimères en général HER2/HER3).

3) une partie intracellulaire à activité tyrosine kinase qui active le signal de transduction du cytoplasme vers le noyau.

La protéine HER2 possède 3 domaines :

1) un site extracellulaire de fixation du ligand qui reçoit les signaux de l'extérieur

2) un petit segment lipophile transmembranaire qui transmet les informations à travers la membrane

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein

Les cellules normales possèdent 2 copies du gène HER2 et expriment un taux normalement bas de récepteur HER2 à leur surface.

La surexpression de HER2 peut se faire par plusieurs mécanismes

Application aux cancers du sein

Étude in vitro :

Transfection de gène sur culture cellulaire

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein

0 : Absence de marquage ou marquage membranaire < 10%

1+ : Marquage faible et partiel > 10% des cellules

2+ : Marquage membranaire faible ou modéré mais complet > 10% des cellules

3+ : Marquage membranaire fort et complet > 10% des cellules

Problème des scores 2+ :

● Nécessité de savoir s'il y a amplification génique ou pas

● Traitement uniquement des cas amplifiés● 2 gènes par cellule, amplification à partir de 6● Méthode FISH ou CISH● Possibilité de faire une recherche sur blocs paraffinés

même anciens (sauf fixation par le Bouin)● Détection du centromère 17 dans le même temps par

FISH

2+

HER2 : Méthodes actuelles

IHC

visualisation des cellules portant le signal

Approches morphologiques

FISH CISH

Approches sans contrôle morphologique

Taux circulant d’ECDPCR

FISH

• Coupe fixée (pas Bouin !)• Différents kits

– Pathvysion (2 sondes)– Dako (2 sondes)– Inform® (1 sonde)

• Microscope à fluorescence

• Signal avec le temps

Pré-traitement

Hybridation

Interprétation

Les amplifications

Augmentation du nombre de copies d’un gène sur le chromosome

ANEUPLOÏDIE

≠

Cas N°1 : Amplification HER2

Cas N°2 : Polysomie

Technique CISH

HER2 gene • Peut remplacer la FISH (concordante)

• Plateau technique plus simple

• Microscope optique• Conservation des lames• Kits commerciaux

• Zytovision-Clinisciences• Zymed (Invitrogen)

• Accord européen en octobre 2005

Exemples de CISH

Absence d’amplification

Amplification

Utiliser un contrôle positif à

chaque manip+++

>50% cellules tumorales (Zymed)

Repérage au x20 Lecture au x40

Corrélation/biologie moléculaire

● Sous-type luminal● Sous-type HER2+● Sous-type basal-like● Sous-type normal breast like

Perou CM, Sorlie T, Eisen MB et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 2000 ; 406 (6797) : 747-52

Sous-type luminal

● A et B● Réceptivité hormonale forte● CK8/18/19 et GATA● RE alpha – exprimé dans le sous-type B● A = monothérapie antihormonale● B = + chimio

Sous-type HER2+

● Associé à Ki 67 élevé● Traitement par Herceptin

Sous-type basal-like

● RE/RP/HER2 négatifs● Positivité de CK5/6 et EGFR● Souvent mutation de BRCA1● Englobe carcinomes médullaires et carcinomes

métaplasiques● Traitement = taxanes ?

Limites de cette classification

● Reste des tumeurs inclassables (basal-like CK5/6 et EGFR -)

● Médullaire : bon pronostic alors que basal-like● Sous-type luminal ne distingue pas les RP● (RP- : anti-aromatase)

Nouvelles recherches

● Cellules cancéreuses circulantes– sang– moëlle osseuse

● Urokinase type activateur du plasminogène (uPA) et son inhibiteur (PAI1)

Nouvelles méthodes

● Outils « omics »– génomique– protéomique

● Nanotechnologies

Conclusion :

● Méthodes d’intérêt pronostique et thérapeutique.● En pratique courante : Rec Horm et HER2 ● HER2

– surexpression facteur de mauvais pronostic– permet traitement par Herceptin– toxicité d'Herceptin et coût très élevé du traitement imposent

une méthode fiable de détection– devant un score 2+, nécessité de rechercher une

amplification génique (FISH ou CISH)– sont traités les scores 3+ et 2+ amplifiés