HOPITAL SAINT LOUIS

UMRS_976

Amélioration de la couverture épidermique chez les patients AEC avec érosions cutanées sévères par PRIMA-1MET / APR-246

Daniel AberdamINSERM UMR S976, Paris

24 JUIN, 2020

FUNCTIONS DE LA PEAU

- PROTECTION CONTRE LES AGRESSIONS EXTÉRIEURES (chaleur, eau, UV, infections)

- MAINTIEN DE LA TEMPÉRATURE CORPORELLE ET DE LA TENEUR EN EAU DE L’ORGANISME

- RÔLE IMMUNOLOGIQUE (Adaptation et activation du système immunitaire)

- RÔLE SENSORIEL (nerfs sensitifs, thermorécepteurs,...)

- SYNTHÈSE DE LA VITAMINE D

Ichthyosiform dermatosesIchthyosis vulgarisX-linked ichthyosisLamellar ichthyosisCongenital ichthyosiformerythrodermaEpidermolytic hyperkeratosisHarlequin fetusPalmoplantar keratodermasDarier diseaseWaardenburg syndromeIncontinentia pigmenti

Neurofibromatosis type ½Tuberous sclerosisAtaxia-telangiectasiaHereditary hemorrhagictelangiectasiaEpidermolysis bullosaKindler syndromeAnhidrotic ectodermal dysplasiaHidrotic ectodermal dysplasiaPachyonychia congenitaXeroderma pigmentosumectodermal dysplasia syndromes

GENODERMATOSESSevere skin erosions

Dermis

Epidermis

Severe skin blistering

150 genodermatoses :

Pluripotent stem cells

Pluripotent Stem Cells and epithelial commitment

ectodermal progenitors

(K8/K18)

epidermal cells(K5/K14)

K10

collagen VII

Clinical trials for gene/cell therapy of:-Recessive dystrophic Epidermolysis Bullosa (Collagen VII):

Jakub Tolar (Minnesota Univ)

Joseph Penninger (Vienna Univ)

Angela Christiano (Columbia, NY)

-Junctional Epidermolysis Bullosa (laminin-5):Antony Oro (Stanford Univ)

Dermis

Epidermis

Dermal fibroblasts

Current Biol. 2003

ChristelleCoraux

BMP-4Ascobate

DF-ECMserum

P63-RELATED ECTODERMAL DYSPLASIA (EEC/AEC) SYNDROMESIncidence: 1: 1000.000 (autosomal, dominant)

ectodermal dysplasia

Cleft lip/palate

ectrodactyly

(Celli, Cell 1999)

AnkyloblepharonLimbal Stem Cell Deficiency

EECAEC

AUCUN TRAITEMENT, SAUF PALLIATIF

Pluripotentstem cells

epidermalCells

(K5+/K14+)

neuralCells

(sox1+ cells)

ectodermalProgenitor(K8+/K18+)

BMP-4

Cell Death Diff. 2006

BMP-4 blocks neural fate for epidermal commitment

p63

Plos One 2008Cell Death Diff. 2012

p63-/-p63 WT

iPS cells from Ectodermal Dysplasia patient cells

Hans van BokhovenJo Zhou

EEC/AEC-DF

IsabellePetit

EEC/AEC-iPSCOSKM

+/+

R204W/+

Oct4 TRA-1-80 AP

R304W/+

ED-DF ED-iPSC K18-ectodermalprogenitors

K14-epidermal cells

cell reprogramming

ControlR304WR204W

RubyShalom-Feuerstein

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

R304W R204W L518F R304W R204W L518F

Klf4 KrtDap GJB6 Pcad Dlx5

**

Relative gene expression (normalized to WT)

WT-iPSC control

L518F

% o

f pos

itive

cells

FACS analyses (K14+ epidermal cells)

**

0

5

10

15

20

25

30

35

40

WT R304W R204W L518F WT R304W R204W

K14

**

p53

apoptosis

p53

p63

p73

mut p53

X

Cancer

Superimposition of the DNA binding domains of p63 and p53

p53

apoptosis

p53

p63

p73

mut p53

Cancer

Superimposition of the DNA binding domains of p63 and p53

Klas WIMAN

p53-reactivating drugs:

PRIMA-1MET

MIRA-1STIMA-1CP-31398

NSC319726P53R3

PhilKan083CDB3

PK7088X

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

R304W R204W L518F R304W R204W L518F

Klf4 KrtDap

GJB6 Pcad

Dlx5

****

Relative gene expression (normalized to WT)

+ PRIMA-1MET

RubyShalom-Feuerstein

PRIMA-1MET

P53 Reactivation and Induction of Massive Apoptosis

% o

f pos

itiv

e ce

lls

FACS analyses (K14+ epidermal cells)

**

0

5

10

15

20

25

30

35

40

WT R304W R204W L518F WT R304W R204W L518F

K14

*

+ PRIMA-1MET

Shalom-Feuerstein, Petit 2013 PNAS

CULTURE PRIMAIRE DE BIOPSIES CUTANÉES DE PATIENTS AEC

Edith Aberdam

Primary culture of patient keratinocytes

Ca2+-induceddifferentiation

(day 10)K5/K14

K1/K10

TGaseInvolucrin

AEC patient (13 year old) (02-01-SC)

severe skin erosions with no heal

Pr. Smail Hadj-Rabia (Hopital Necker; Paris)

ED patient (13 year old)

AEC (02-01-SC)

Ca2+-induced differentiation (day 10 +/- PRIMA-1MET)

AEC cells, untreated

AEC cells, treated with PRIMA-1MET

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

K14 K1 ZNF750 Tgase Inv

qRT-PCR of target genes

NHK control cells* **

**

AEC (02-01-SC)

(x 20; 400 ms exposure)

AEC keratinocytes

no treatment

K1

Control NHK

TGase 1

ZNF750

Involucrin

+ PRIMA-1MET

Compassional care with topical application of PRIMA-1MET

p53

apoptosis

mut p53

APR-246 (PRIMA-1MET)

Autorisation par l’ADSM en application topique pour AECFormulation par pharmaciens Necker (Pr. Salvatore Cisternino)

Pr. Smail Hadj-Rabia (Hôpital Necker; Paris)

November 19, 2018

Epidermisation presque complete mais pas cornifiée

La douleur a diminué de 5 à 1

Ouverture significative des doigts

Right hand treated with PRIMA-1MET as cream

April 2, 2018

(patient AEC #1; 13 y old) (c.1727T>C; p.Ile576Thr)

Aberdam 2020 Cell Death & Disease

April 10, 2018

Nov. 19, 2018

untreated left hand (patient AEC #1)

Aberdam 2020 Cell Death & Disease

SuintementAbsence d’épidermeDouleur permanente

Impossibilité de greffe

Hôpital Necker (Paris) Pr. Smail Hadj-Rabia

AEC patient (15 year old) (29-10-BX)

M0

Disparition du suintementEpaississement de l’épiderme Gain de poids importantDiminution des douleurs aux soins quotidiens (5 à 1)Greffe autologue programmée

M4 M8

Aberdam 2020 Cell Death & Disease

Hôpital Necker (Paris) Pr. Smail Hadj-RabiaAEC patient (15 year old) (29-10-BX)

M0

M8

p63 aggregates

WT tetramer

p63 aggregates

monomer

dimer

tetramer

MÉCANISME D’ACTION ?

AEC70% conf AEC

100% conf

8 days0 day

AEC keratinocytes

no treatment

Control NHK

ZNF750

+ PRIMA-1MET

PRIMA-1MET stimule la différenciation épidermique

PRIMA-1MET pourrait soigner d’autres pathologies liées à des défauts de cicatrisation cutanée :

ulcères de jambes, diabète, épidermolyses, ...

EN COURS ET À FAIRE

1. BREVET DE REPOSITIONNEMENT (DÉPOSÉ)

2. MÉCANISME D’ACTION ET TEST SUR D’AUTRES PATHOLOGIES (EN COURS)

3. DÉSIGNATION COMME MÉDICAMENT ORPHELIN (ODD) (EN COURS)

4. PRÉPARATION D’ESSAIS CLINIQUES MULTI CENTRIQUES/TRANSNATIONAUX

AFDE (France), NFED (IL, USA), EDS (UK), ANDE (Italy). European Reference Network (ERN-SKIN)

5. FINANCEMENTS: - EJP-RD 2020 (en cours d’évaluation)

- EADV 2020 (en cours d’évaluation)- Université de Paris - RECHERCHE DE PARTENAIRE INDUSTRIEL

COLLABORATORS:

Smail HADJ-RABIA (Paris)

Eddy PICHINUK/Ruth ASHERY-PADAN (Tel Aviv)

Jo Huiqing ZHOU (Nijmegen)

Caterina MISSERO (Napoli) Société Française de Dermatologie

Edith ABERDAM

Isabelle PETIT

INSERM U976, HOPITAL ST-LOUIS, PARIS

RubySHALOM FEUERSTEIN

(TECHNION, Haifa)