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SECTION 4 : PARTIE

GENETIQUEMICROBIENNE

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En relation avec le module de Biologie molculaire et gnie gntique .

INTITULE DUPROR!""E

#O""ENT!IRE$ #OUR$ TP

#OUR$ TR!%!U& PR!TI'UE$

Mutations. Mise en vidence du caractre mutagnedune substance laide dune souchemicrobienne (par exemple test dAmes,

SOS chromotest !.

"#$%#&

decettesemaine

'ntiue des levures. On ralisera une manipulation demutagense alatoire, par exemplela slection de mutants auxotrophesche) Saccharomyces cerevisiaesuivie dune complmentation*onctionnelle.

+tude de la gntiue des levures

pourra *aire lobet de - sances aumoins.

"er#$ et

dernier#$anne

'ntiue des bactries#rans*erts gntiues

#rans*ormation,conugaison,transduction.

On ralisera une manipulation deconugaison. #$ avec oel denda

" "#$ avant

lesvacances

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#(!PITRE ) * "UT!TION

/ 0evoir le cours et #& de bio de biologie molculaire 1

module 1 biologie molculaire et gnie gntiue, section 1 .2.mutations et rparation A&3

/ #$ Mise en vidence du caractre mutagne dune substance laide sune souche microbienne 1 SOS 4hromotest

et #& test de Ames faire pour

/ Voir site internet doc intressants consulter

http://mas.stephanie.free.fr mot de pass : HACCP

http://mas.stephanie.free.fr/http://mas.stephanie.free.fr/

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#(!PITRE + * ENETI'UE

DE$ LE%URE$/ 0evoir le cours et #& de bio biologie molculaire 1

module 1 biologie molculaire et gnie gntiue, section 1 .2.mutations et rparation A&3

/ 0evoir #$ 35 sur les levures avec le test de complmentation*onctionnel

/ #& test de complmentation *onctionnel des levures 6 &S 35-

/ #$ 35- 1 Manipulation de mutagense alatoire 1 action des ra7ons89 sur la souche S.cerevisiae ade- :

/ Voir site internet doc intressants consulter

http://mas.stephanie.free.fr mot de pass : HACCP

http://mas.stephanie.free.fr/http://mas.stephanie.free.fr/http://mas.stephanie.free.fr/

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#(!PITRE , *

ENETI'UE DE$ B!#TERIE$

ETTR!N$-ERT$ ENETI'UE$

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&ans la nature, il existe deux mo7ens pour les microorganismes detrans*rer le patrimoine gntiue 1 question 1 du TD

/ le tran/ert vertical de g0neui se *ait entre un ; parent < et sadescendance.

/ le tran/ert 1ori2ontal de g0neui a lieu entre deux organismes

distincts.

Tran/ert vertical de g0ne Tran/ert 1ori2ontal de g0ne

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mutation

varia3ilit du gnome 3actrien

tran/ert 1ori2ontau4

de g0ne

volution

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le mutation *

Si la rparation chouemutation vnements rare, ta3le, 1rditaire

apparition de mutant

= cellules di**rentes du t7pe sauvage par un ou plusieurs caractres permettant leurslection. ex 1 marueur dauxotrophie ou rsistance un antibiotiue

$ta3ilit caract0re 1rditaire

$I "!INTIEN

Intgrit gnome 3actrienagreion516ique

et c1imique

!ltration !DN

$6t0me en26matique de r5aration

rparation par 1> excision>res7nthse,

> recombinaison> SOS

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le tran/ert de g0ne *

51nom0ne rare c1e2 le 3actrie

?l existe 1, grand mcanimedchanges d@A&3 entre bactries donatrices et bactries rceptrices

cellule donatrice

gnome de la celluledonatrice = e4ognote

cellule rce5trice

gnome de la cellulerceptrice = endognote

Tran/ert matriel

gntique

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+es di**rents trans*ert hori)ontaux de gnes+es di**rents trans*ert hori)ontaux de gnes

con7ugaion

tran/ormation

tranduction

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La con7ugaion

trans*ert gntiueunidirectionnel

dun*ragment dA&3c1romoomique ou 5lamidique

par contact direct entre deux bactries e4uellement di//rencie1

une donatrice =m8leet une rceptrice =/emelle

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La tran/ormation

trans*ert gntiue au cours duuelun *ragment dA&33icatnaire,li3re,nu, enolution

est ca5t par une3actrie rce5triceavant d@tre ventuellementintgr au c1romoome

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La tranduction

trans*ert gntiue dun/ragment d9!DNc1romoomique ou e4trac1romoomique

d9une 3actrie : une autree**ectupar des3actrio51ageditstranducteur

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cellulecellulerceptricerceptrice

Devenir e l!ADNDevenir e l!ADNe"#$n#te %n& l%e"#$n#te %n& l%

'%ctrie& rceptrice ((('%ctrie& rceptrice ((() p#&&i'ilit&) p#&&i'ilit&

e u3tituer : une 2one

1omologue du c1romoome de la

3actrie5ar recom3inaion et

9intgrer au c1romoome

ne 5a 9intgrer

et oit *

>se r5liquer de /a;on autonome1 cas des 5lamide

>ne pas se rpliuer et tre dilu dans le clone de cellule = tran/ert a3orti/

>tre dtruit par la bactrie rceptrice = 51nom0ne de retriction de l91

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cellulecellule

rceptricerceptrice

M%i& %ttenti#n***M%i& %ttenti#n***

+es bactriesne retent 5a indi//rente :

l9entre d=un !DN tranger

"ie en >uvre

de mcanime de 5rotection

Retriction ? "odi/ication

16drol6e de l9!DN trangernon mt16l 5ar le

endonuclae

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). L! #ON@U!I$ON

,. L! TR!N$-OR"!TION

+. L! TR!N$DU#TION

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). L! #ON@U!I$ON

trans*ert gntiueunidirectionnel

dun*ragment dA&3c1romoomique ou 5lamidiquepar contact direct entre deux bactries e4uellement di//rencie1

une donatrice =m8leet une rceptrice =/emelle

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).). "ie en vidence et caractritique de

la con7ugaion

).).). La con7ugaion im5lique un tran/ert de

g0ne et un 51nom0ne de recom3inaion

).).+. La con7ugaion e4ige un contact 516ique

direct entre le ouc1e

).).,. La con7ugaion im5lique une di//rencee4uelle entre le ouc1e

m nen une exp r ence

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. m nen une exp r encesur 1

) uc1e& 0ut%nte& p#l23%u"#tr#p1e& !E.coli+)

ouc1e !ouc1e !

thronine>leucine >

ouc1e Bouc1e B

biotine>mthionine >

thiamine >

!ucune

5oue

!ucune

5oue

Enemencement ur milieu minimum an T1rA leuA 3ioA "et et T1iEnemencement ur milieu minimum an T1rA leuA 3ioA "et et T1i

) colonie 5our )C3actrie enemence 5a du a une mutation 5ontane

Il 6 a eu un tran/ert de matriel gntique entre le deu4 ouc1e et

recom3inaion entre le g0ne 5arentau4

Bern%r D% i& tili l!e prience

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Bern%r D%vi& a utilis 1 l!e"prience utu'e en U

Enemencement ur milieu minimumEnemencement ur milieu minimum

an T1rA leuA 3ioA "et et T1ian T1rA leuA 3ioA "et et T1i

!ucune 3actrie 5rototro51e

un tube en 8 spar la base par unemem3rane en verre 5oreue(B.-Cm!

em5c1e un contact direct entre le

ouc1e

laie 5aer l=!DN li3reA le 51age ou

le u3tance olu3le !DNF

+es souches A et D sont places chacunedans une branche du tube, puis le milieu

est aspir et re*oul plusieurs *ois

?l 7 a doncnceit d=un contact directentre le ouc1e ! et B 5our qu9il 6 et

tran/ert du matriel gntique

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Au microco5e lectronique, on observe le phnomne 1

il 7 a contact direct entre le deu4

3actrie,

un 5ont c6to5lamiqueest tablit entre le 3actrie

con7ugante

grEce au 5ili e4uel

agitation vigoureusement

ouc1e !ouc1e ! ouc1e Bouc1e B

!ucune 3actrie 5rototro51e

L9agitation rom5t le contact

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donatrice de g0ne= bactries m8le

rce5trice de

g0ne= bactries /emelle

3actrie donatrice de g0neG -H

possdent un *acteur de *ertilitou /acteur -

3actrie rce5tricede g0neG-?

car dpourvues de *acteur F

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).+. Le /acteur -

+e *acteur F = gros 5lamide con7ugati/(G2 HBB pb! ui contrIle 1

>sa propre rplication,>son nombre de copies,>la rpartition des copies dans les cellules *illes>son trans*ert

+es nombreux gnes gouvernant le trans*ert sont

situs dansl@o5ron tra*

>), g0ne codent la6nt10e de 5ili e4uel=c83le d=amarrage(->J pilis par F6!

>+ g0ne codent des5rotine d9e4cluion deur/aceui empchent l@attachement des pilisexuels et donc l@appariement de deux bactriesF6.

> g0ne permettent la 6nt10e etle tran/ertde l=!DN.

>, g0ne sont desg0ne rgulateur

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).,. La con7ugaion entre 3actrie -H et -?

8nion F6%F> grEce

aux 5ili e4uel

Tran/ert de l9!DN

: 5artir de l9originede tran/ert ori TF

et elon le mod0le

du cercle roulant

4ration dun 5ontc6to5lamique

$ermettant letran/ert de l9!DN

Le /acteur -

5erite dan la

3actrie

donatrice qui

rete -H

La 3actrie

rce5trice :

acqui une

co5ie du /acteur

- elle devient -H

-acteur -

li3re dan

celluledonatrice

On isole trs peu de recombinants B>K

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).J. Le ouc1e (/r et la con7ugaion entre

3actrie (/r et 3actrie -?

).J.). Le ouc1e (/r et tran/ert d9!DN

c1romoomique

).J.+. La c1ronologie du tran/ert de g0ne

c1romoomique * con7ugaion interrom5ue

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5#r0%ti#n 6une '%ctrie 78r

+es bactries L*r drivent de bactries F6, le /acteur- n=et 5lu autonome,

il est intgr au c1romoome 3actrien,on parle d5iome.

(/r pour (aute /ruence de recombinaisoncar elles sont capables de tran/rer demarqueur c1romoomique

avec une /rquence ) /oi 5lu im5ortante.

+e *acteur F et le chromosome de scherichiacolicontiennent destran5oonet des quenced=inertioncapables de recombinaison.

+@intgration du *acteur F dans le chromosome peut

se *aire di//rent endroitet dan di//renteorientation.

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c#n9u$%in interr#0pue

En +,;. Elie %c#'tudient la c1ronologiedu tran/ert de g0ne c1romoomique, lors d@un croiement (/r 4 -?A 5arla tec1nique de con7ugaion interrom5ue.

E45rience *

&ilution des chantillons

pour viter de nouveaux contacts

talement sur milieu .. 6 tre5tom6cinepour tuer les bactries L*r (mEles!

et an certain /acteur decroiance

absence de pousse des F> non

recombines

A$it%ti#n'r?ve

etinten&e

)C3actrie

(/r

$tr $

)K

3actrie -?

$tr R etau4otro51e

sparation les bactriesparentales et interruption du

trans*ert de matriel gntiue

B bactries *emellespour bactrie mEle

prl?ve e&

c1%ntill#n&@ interv%llee te0p&r$ulier

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Le rultat o3tenu ont le uivant *

%'li&&e0ent e l% c%rt#$r%p1ie $ntiue

3ombre de bactries F> a7ant reNu unmarueur donn en *onction du temps de

contact avec une souche L*r

On constate ue 1>plus le temps de contact est long, plus le nombre de gnes trans*rs est important

>+e trans*ert des gnes de la souche L*r vers la bactrie donatrice se *ait dans unordre 5rci

?l commence partir dun point dorigine (ori#! = origine de tran/ert

et s@e**ectue de manire orienteet 5rogreive.

cou5ure au niveau de

l9origine de tran/ert

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4omme le *acteur Fpeut s@intgrer

di**rents endroits duchromosome, l@ordredes gnes trans*rs

peut varier d@unesouche L*r une autre

Sens du trans*ert

Sens du trans*ert

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/% c#n9u$%in entre '%ctrie 78r et'%ctrie 53

#rans*ert linaire dun

des brins dA&3 enpartant de lorigine de

trans*ert

0plication de lA&3monocatnaire trans*r

selon le modle ducercle roulant

Incor5oration de g0ne

5ar croing over (recombinaison

homologue entre deuxmolcules d@A&3! dan le

c1romoome de la

3actrie rce5trice

sans interruption duretran/ert )+ minute

Tr0 rareA interru5tion

/rquente

On obtient BBB *ois plus de recombinants mais peu de bactrie F> deviennent mEle

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).. La e4duction et le /acteur -9

e"ci&i#n n#r0%le #u%n#r0%le u 8%cteur

5

?ntgration *acteur F dans chromosome =

vnement rveri3le, le /acteur - 5eutretrouver on ind5endance.

- possibilits lors de lexcision 1>excision correcte>e4ciion incorrecte Gle /acteur - em5orte

avec lui une /raction du c1romoome+e *acteur F possde alors toute l=in/ormationgntique nceaire : la con7ugaionet enplus, il porte un ou quelque marqueurc1romoomique.

8n *acteur F ainsi modi*i est appel /acteure4uel de u3titution1 -=.+ors d@une conugaison F@ x F> le *acteur F@ esttranmi : 1aute /rquence la bactrierceptrice ui acuiert avec le plasmide un ouuelues gnes chromosomiues.

On parle de e4duction.

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+. L! TR!N$DU#TION

trans*ert gntiue dun/ragment d9!DN c1romoomique oue4trac1romoomique d9une 3actrie : une autre

e**ectupar des3actrio51ageditstranducteur

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rappels

$hagestemprs

$hagesvirulents

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+.). "ie en vidence de la tranduction

+.+. #aractritique de la tranduction

+.+.). La tranduction gnralie

+.+.+. La tranduction 5cialie ou retreinte

+,+ : /eer'er$ et iner a utilis 1

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+,+ : /eer'er$ et iner a utilis 1l!e"prience u tu'e en U

Avec e& uc1e& e S%l0#nell% t2p1i0uriu0

Enemencement ur milieu minimumEnemencement ur milieu minimum

an T1r et (ian T1r et (i

3actrie 5rototro51e H/rquence )?

un tube en 8 spar la base par unemem3rane en verre 5oreue(B.-Cm!

em5c1e un contact direct entre le

ouc1e

laie 5aer le 51age et l=!DN li3re

qui et dtruit 5ar DNae

+es souches A et D sont places chacunedans une branche du tube, puis le milieu

est aspir et re*oul plusieurs *ois

4e nest pas une mutation, ni de laconugaison, ni de la trans*ormation car&3ase nempche pas le phnomne

il sagit dun bactriophage ici le $--

ouc1e !ouc1e !

his >

ouc1e Bouc1e B

#rp >

H DNae

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Selon les bactriophages, la transduction est un phnomne 1

n@importe uel gnebactrien est susceptible

d@tre trans*r unebactrie rceptrice

le trans*ert ne concerne ueuelues gnes bactriensdont la nature est variable

selon le bactriophage

gnrali $5ciali

retreintAlocali

+a transduction rsulte duneerreur d9enca5idation1

+ors de lassemblage des virions un *ragment de gnome bactrien estencapsid la place de lA&3 viral.

+e phage devient tranducteur, il est libr lors de la l7se de la bactrieet pourra inect de lA&3 bactrien dans une autre bactrie.

! l9aide du document ci contre et de

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! l aide du document ci?contre et de

vo connaiance ur le 51age

r5ondre au4 quetion uivante

-A quel type de phage correspond la

transduction gnralise ? justifier ?

un phage virulent,car il rpliue son gnome dans labactrie et provoue la l7se en *in dec7cle, librant les nouveaux virions =

c7cle l7tiue

-A quel type de phage correspond la

transduction spcialise ? justifier ?

8n phage tempr,car il intgre son gnome dans legnome de la bactrie sous *orme deprophage cette dernire devient l7sogne= c7cle l7sogniuelA&3 viral estrpliu en mme temps ue lechromosome bactrien.

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+.+.). La tranduction gnralie

lle est assure par les phages

virulents,ui au cours du c7cle l7tiueencapsident par erreur et de *aNonalatoire des *ragments dA&3 dela bactrie.

taille *ragment 1 -P de lA&3bactrien.

ex de phages transducteurs 1 virus A&3 #2 et$ che) .coliet virus A&3 $-- che)

Salmonella#7phimurium

51age com5oite=5articule tranductrice

?l se *orme alors un 51age com5oiteappel 5articule tranductriceuipeut in*ecter une nouvelle bactrie et lui transmettre un *ragment de lA&3de la bactrie prcdemment l7se une /rquence /ai3le M)F

+a transduction gnralise peut tre complteou abortiveselon les cas.

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lle impliue un expression stable des marueurs trans*rs.

+A&3 introduit peut sintgrer dans une rgion homologue du chromosomepar recombinaison homologue

et donner une cellule tranduiteau gnot7pe modi*i et stable transmit

toutes sa descendance.

+.+.).). La tranduction gnralie com5l0te

51age com5oite=5articule tranductrice

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lA&3 inect ne sintgre pas dansle chromosome, ce ui est *ruent.

+es gnes passent de la cellule mre seule des -

cellules *illes.?l n7 a pas gnralisation du caractre trans*r lensemble des descendants.

+.+.).). La tranduction gnralie a3ortive

+a transduction abortive se traduit par lapparition de colonies de taille

minimeet de *ormes irrguliressur milieu minimum.

+es marueurstrans*rs sexprimenttransitoirement

usu ce ue lA&3 soitdilu au cours desdivisions bactriennessuccessives.

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+es deux bactries donatriceet rceptrice doivent appartenir la mmeespceen raison de la spci*icit din*ection du phage.

+a uantit dA&3 bactrien encapsid dpend principalement de la taillede la capside1

> le phage $-- de Salmonella#7phimurium contient habituellement de lordrede P du gnome bactrien,

>le phage $ de .colicontient de - -.H P du gnome bactrien.

+e plus souvent la transduction ne concerne uun seul gne

+.+.).). #aractritique et a55lication de la

tranduction gnralie

&ans une population de phages capables de**ectuer une transductiongnralise, il n7 a ue trs peu de particules transductrices.

x 1 dans une population de phage $ de .coli seulement B.P des particulesvont encapsider de lA&3 chromosomiue, les autres particules sont virulents etvont dclencher le c7cle l7tiue.

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4es points runis *ont ue la *ruence dobtention de cellulestransduites pour un caractre donn est trs *aible

+a transduction gnralise reste toute*ois trs utilise pour raliser desanal7ses gntiues, puisue 1

>n9im5orte quel g0ne 5eut tre tran/r

>la /rquencede tran/ert et /ai3le1 B>K

>elle a un caract0re 5artiel1 >- P du gnome bactrien

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lle est assure par les phages temprsui sinsrent

touours au mme endroit sur le chromosome bactrien.

t ui au cours du passage dun c7cle l7sogniue unc7cle l7tiue, peuvent se dtacher du chromosomebactrien 1

> soit sous la *orme originale et redonner un phagecomplet,

> soit sous une *orme incomplteoQ une partie de lA&3phagiue reste attache au chromosome bactrien et encontre partie uelues gnes bactriens sont encapsids.

+a transduction spcialise se limite aux gnes uidlimitent lA&3 phagiue insr dans le chromosomebactrienet se sont touours ces mme gnes ui sonttransmis de nouvelles bactries transduites.

+.+.+. La tranduction 5cialie ou retreinte

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Le ca le 5lu connu de la tranduction localie et

5rovoqu 5ar le 51age lam3da de E.coli.

?l possde un site d@attachement correspondant un site

d@intgration situ entre les locus gal (ncessaire lutilisationdu galactose!et le locus bio (assure la s7nthse de la biotine!.

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+@intgration de l@A&3 du phage dans le chromosome bactrien se *ait

grEce len)7me intgrase du phage ui reconnaRt les sitesdattachements$$ phagiue et DD bactrien ui ont ueluesnuclotides en commun.

+.+.+.). Intgration du 51age lam3da

INTER!$E

augmentation de la taille du gnome dans cette rgion

+ + + + L9e4ciion du 51age lam3da

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+excision se produit lors de linduction du c7cle l7tiue du phage , elle estassure par len)7me excisionase. lle peut tre 1

+.+.+.+. L9e4ciion du 51age lam3da

normale

reconstitution du

phage complet

anormale

*ormation d@un A&3phagiue

d*ectueuxcontenant le locusgal ou le locus bio

du gnomebactrien

les phages d galou d3ioont perdula proprit dtre rpliu mais

conservent leur pouvoir in*estant.

#a o le locu gal et e4ci

+ + + + L9i t ti d l9!DN d 1 d/ ti/

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+A&3 de phages d*ecti*s pourra tre intgr dans une 3actriel6og0nede t7pe gal >selon le schma suivant 1

+.+.+.+. L9intgration de l9!DN du 51age d/ecti/

6t0me inta3le 1 le phage sintgre lasuite du gne gal : bactrien. +a bactrierceptrice possde alors son gne gal :etun gne gal 6 apport par le phage, uipeut sexprimer, la bactrie passe alors degal : gal 6 .

6t0me ta3le 1 la recombinaison lieu entre les rgions gal bactrien etphagiue, le gne gal : bactrien estlimin par le gne gal6apport par lephage, la bactrie devient gal 6.

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,. L! TR!N$-OR"!TION

trans*ert gntiue au cours duuelun *ragment dA&33icatnaire,li3re,nu et enolution est ca5tpar une3actrie rce5trice com5tenteavant d@tre ventuellementintgr au c1romoome

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,.). "ie en vidence de la tran/ormation

et 5rinci5e tran/ormant

,.).). "ie en vidence de la tran/ormation

,.).+. Nature du 5rinci5e tran/ormant

,.+. #ondition nceaire : la

tran/ormation

,.,. Le ta5e de la tran/ormation

,) G i 1 l 8 l

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En +,). Grit1 travaillesur le tr%n&8ert e l%virulence e l% '%ctrie p%t1#$?ne

Streptococcus pneumoniae

in7ection de 5neumocoque

de ouc1e $virulenteca5uleet qui /orment de

colonie d9a5ect lie

dite $moot1

"ort 5ar

5neumonie de

ouri

in7ection de 5neumocoque

de ouc1e Rnon virulented5ourvue de ca5uleet

qui /orment de colonie

d9a5ect rugueuedite

Roug1

$urvie de ouri

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in7ection de

5neumocoque de

ouc1e $tu 5ar lac1aleur

$urvie de

ouri

in7ection de

5neumocoque de

ouc1e $tu 5ar la

c1aleur et de ouc1e R

vivantenon virulented5ourvue de ca5ule

"ort 5ar

5neumoniede ouri

ri//it1 donna le nom de tran/ormation : ce c1angement de

3actrie non virulente en 3actrie virulente 5at1og0ne.

Pa d9in/ectionA

!3ence de

5neumocoque

In/ectionA

5rence de5neumocoque $

vivant

P%r l% &uite Aver2 ientiF% le c#n&titu%nt

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P%r l% &uite.Aver2 ientiF% le c#n&titu%ntre&p#n&%'le e l% tr%n&8#r0%ti#n et l!%ppel%

principe tr%n&8#r0%nt H

. prparation dextraits de pneumocoues virulents et destruction slective de1lA&3, lA03 ou les protines laide den)7mes appropries.

-. mlange des pneumocoues 0 non virulents avec les extraits traits etobservation

P%r l% &uite. Aver2 ientiF% le c#n&titu%nt

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P%r l% &uite.Aver2 ientiF% le c#n&titu%ntre&p#n&%'le e l% tr%n&8#r0%ti#n et l!%ppel%

principe tr%n&8#r0%nt H

Seul lA&3 est capable de changer les cellules 0 en cellules S

4et e**et est perdu lorsue lextrait est pralablement trait la

dsox7ribonuclase.+A&3 est donc le porteur de lin*ormation gntiue reuise pour la trans*ormationou conversion du caractre 0 en S.

Le 5rinci5e tran/ormant et contitu d9!DN

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,.+. #ondition nceaire : la tran/ormation

la trans*ormation dpend 1> dune part des bactries et de leur aptitude tre

rceptrices pour lA&3 1 notion de comptence

> dautre part de lA&3 trans*ormant et de ses proprits

,.+.). dvelo55ement de la com5tence de la

cellule rce5trice

,.+.+. Le 5ro5rit de l9!DN tran/ormant

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,.+.). dvelo55ement de la com5tence de la

cellule rce5trice

+A&3 ne peut pntrer ue dans des cellules dites com5tente.

+acuisition de la comptence se produit une /rquence /ai3ledelordre de )?,soit ) cellule ur ).

#om5tence naturelle #om5tence arti/icielle

, + ) ) L t t ll

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,.+.).). La com5tence naturelle

Bactrie naturellement

com5tente

!acillus su"tilis,

streptococcus spp,Haemophilus influen#ae,$eisseriaspp

lles ont la capacit de capturer lA&3 libre prsent dans lenvironnement

Le condition gnrale de la com5tence ont le uivante1

> une *orte densit de cellules

> un passage dun milieu relativement riche en milieu plus pauvre

> absence dinhibiteurs de la croissance et de produits ui blouentlapport de source dnergie

#1aque e50ce e tran/orme elon de 5rocd 5articulier1

ex1 le pneumocoue exige de lalbumine et un pL de ,K

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La com5tence 51nom0ne tranitoire et d5endant de /acteur

de com5tence ou de tran/ormaome1

+tat de comptence 1

> apparaRt transitoirement durant ) : , minute1 5ic de com5tence

> che) les ram H, dpend de la production dune substanceou dun /acteur decom5tence1 pol7peptide trs instable ui stimule la production duncom5le4e 5rotiquencessaire la trans*ormation la sur*ace de la cellule.

> che) les ram ?, est associs la prsence de petites viculemem3ranaire, appeles tran/ormaome, ui *ont saillie l@extrieur de la

cellule.

, + ) + L t ti/i i ll

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,.+.).+. La com5tence arti/icielle

Bactrie P!$ naturellementcom5tente

!RTI-I#IELLE"ENT #O"PETENTE$

c1lorure de

calcium

c1oc t1ermiquelectro5oration

TR!N$-OR"!TION !RTI-I#IELLE G TR!N$-E#TION

5endant

51ae e45o

de

croiance

tran/ormation 5ar !DN

circulaire et de 5etite taille

, + + L it d l9!DN t / t

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,.+.+. Le 5ro5rit de l9!DN tran/ormant

> ?l doit tre 3icatnaire1 double brin

> Sa taille et a concentration 7ouent un rJ mg%m+,puis, au del, on passe un seuil de saturation.

+es cellules nincorporent donc uun nombre limit de particules trans*ormantes.

, , Le ta5e de la tran/ormation

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,.,. Le ta5e de la tran/ormation

,.,.). L9Intraction et la

/i4ation de l9!DN : la

ur/ace de la 3actrie

,.,.+. La 5ntration de

l9!DN dan la 3actrie

,.,.,. La 51ae d9cli5e et

l9intgration 5ar

recom3inaion

, , ) L9Interaction et la /i4ation de l9!DN : la

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,.,.). L Interaction et la /i4ation de l !DN : la

ur/ace de la 3actrie

+A&3 double brin exogne estlibr dans le milieu aprs l7se decellules bactriennes

CelluleCellule#n%trice#n%trice

?l se *ixe gnralement de *aNonalatoire la sur*ace de la bactrie

rceptrice.

3importe uelle *raction dugnome peut tre trans*r

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4he) les 3actrie : ram 5oiti/,

la capture de lA&3 exogne est assure

par des 5ol65e5tide capables de lierl@A&3

et ui *ont parti dun com5le4e 5rotiqueprsent la sur*ace de la cellule.

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4he) les 3actrie : ram ngati/

+@A&3 trans*ormant est captur par les vicule mem3ranaireou tran/ormaome, aprs reconnaissance de suences

spci*iues de B pb.

exemple1 la suence AA'#'4''#4A pour Laemophilusin*luen)ae.

&ans ce cas seul des A&3 spci*iues peuvent tre trans*ormants

, , + La 5ntration de l9!DN dan la 3actrie

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,.,.+. La 5ntration de l9!DN dan la 3actrie

&s sa pntration che) les 'ram 6 ou uste aprs sont transport dans

lespace priplasmiue che) les 'ram >,lA&3 bicatnaire est pro*ondment modi*i par une endonuclae.

8n brin est dgrad par lendonuclase, lautre brin pntre dans lec7toplasme ou /orme monocatnaire.

il rentre au maximum HPdu gnome dans unebactrie

n gnral, un seulcaractre est trans*r

, , , La 51ae d9cli5e et l9intgration 5ar

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,.,.,. La 51ae d cli5e et l intgration 5ar

recom3inaion

P1ae d9cli5e= recherche dune )one dintgration au chromosome,

> si il la trouve 1 lA&3 exogne estintgr par recombinaison

lendognoteaprs cration dune)one en htroduplex.

> si il ne la trouve pas 1 lA&3 estdtruit ou bien diluau cours desdivisions cellulaires ultrieures 1

tran/ormation avorte

+a trans*ormation peut alors setraduire par la modi*ication d@uncaractre de la bactrie

rceptrice.

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,.J. Le caractritique de la

tran/ormation

,.J.). P1nom0ne 5ontane dan la nature

,.J.+. P1nom0ne naturel retreint au4 cellule

naturellement tran/orma3le

51nom0ne rare, /rquence)?,: )?

) 3actrie tran/ormante 5our ),: )3actrie cultive

$eu de bactries sont trans*ormables de *aNon spontane 1

Haemophilus, les $esseria, les streptocoues, les !acillus.

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,.J.,. P1nom0ne retreint au4 cellule de

mme e50ce ou d9e50ce voiine

,.J.J. P1nom0ne qui concerne di//rentcaract0re

+A&3 trans*ormant et lA&3 de la bactrie rceptrice doivent tresimilaires et la trans*ormation nest possible uentre bactries dunemme espce ou despces voisines.

> *orme capsule devenant non capsule et rciprouement

> rsistance et sensibilit un antibiotiue> exigence et ; indpendance < vis vis dun mtabolite

> caractres morphologiues, de mobilit etc .