4émé cqa

BIOLOGIE MOLECULAIRE ET GENIE GENETIQUEVHG : 90hCours : 60hTP/TD. : 30hCoeff. : 3Module : A1. BIOLOGIE MOLECULAIRE1. L’ADN- L’ADN. Protéine de l’information génétique- Structure et propriétés- Replication de l’ADN- Mutabilité et mécanismes de réparation de l’ADN2. L’ARNs- Description, structure et propriétés- La transcription- chez les procaryotes- chez les eucaryotes3. BIOSYNTHESE DES PROTEINES- La traduction- Le code génétique- Régulation4. REGULATION DE L’EXPRESSION GENETIQUE- Chez les procaryotes- Chez les eucaryotesI1. GENIE GENETIQUE1. Enzymes utilisées en Biologie moléculaire- Nomenclature- Mode d’action2. Mutagénèse : aspects appliqués- Mutagénèse classique- Mutagénèse dirigée3. Recombinaison in-vitro, clonage et manipulation génétique- Différentes sources possibles et préparation de l’ADN à cloner- Différents types de vecteurs et leur particularité- Stratégies de recombinaison de l’ADN à cloner avec l’ADN vecteur- Les cellules hôtes et les différents modes de transfert de l’ADN- Construction de banques- ADN génomique- ADN complémentaire (ADNc)- Sélection et criblage des clones recombinants- Méthodes d’analyse du gène purifié- hybridation- restriction et séquençage- Expression des gènes clonés- Applications, perspectives et limites du clonage

NUTRITION HUMAINEVHG : 75hCours : 45hTP/TD. : 30hCoeff. : 3Module : S11. INTRODUCTION : Rappel des notions de nutrition-alimentaire1. Historique et but de la nutrition2. Les catégories d’aliments destinés à la nutritionII. PHYSIOLOGIE DE LA DIGESTION1. La digestion (digestion dans la bouche : déglutition: digestion dans l’estomac, dansl’intestin grèle et dans le gros intestin)2. L’absorption digestive- absorption des différents nutriments : protéines, glucides, lipides, vitamines,eau, éléments minéraux- les facteurs influençant l’absorption (facteurs alimentaires, facteurs liés à l’âge,facteurs médicamentaux,...)III. BESOINS ENERGETIQUES1. Signification du besoin d’énergie et facteurs de variation2. Les différents besoins énergétiques (le métabolisme de base, la themogénèse, le travailmusculaire, l’ADS, les besoins énergétiques chez l’enfant et la femme enceinte)3. Evaluation des besoins énergétiques quotidiens4. Maladies liées à l’insuffisance ou à l’excès de l’apport énergétique5. méthodes de mesure de la dépense énergétiqueIV. LES BESOINS AZOTES1. Le pool protéique2. facteurs de la dépense azotée3. Le besoin azoté global- les besoins quantitatifs d’azote- les besoins qualitatifs d’azoteV. LES BESOINS VITAMINIQUES(nature chimique,rôle physiologique,carences et besoins)1. Les vitamines hydrosolubles2. Les vitamines liposolublesVI. LES BESOINS EN EAU1. Répartition de l’eau dans l’organisme et dans les aliments2. Pertes en eau (pertes fécales, pertes “ insensibles ”, pertes urinaires)3. Besoins et apports (eau de constitution, eau “ métabolique ”, eau de boisson)VII. LES BESOINS EN ELEMENTS MINERAUX(rôle, maladies provoquées par les carences, besoins et apports)1. Les macroéléments2. Les oligoélémentsTRAVAUX DIRIGES : Un certain nombre de parties liées à ce cours peuvent-être traités en travaux dirigés sous forme d’exercices d’application, de mise en œuvre

TECHNOLOGIE DES INDUSTRIES AGRO-ALIMENTAIRESVHG : 120hCours : 90hTP/TD. : 30hCoeff. : 4Module : AI. TECHNOLOGIE DES EAUX ET BOISSONS1. Les eaux minéraux et les eaux de table- définition et législation- caractèristiques physiques- caractéristiques chimiques- répartition géographique- conditionnement2. Les boissons gazeuses- définition et législation- les chaînes de fabrication des boissons gazeuses- caractéristiques des matières utilisées (l’eau, le CO2 , le sirop, les colorants,les aromatisants, les acides organiques)- la carbonatation et le contrôle de fabricationII. TECHNOLOGIE DU LAIT ET DES PRODUITS LAITIERS(procédés technologiques, produits et matériel mis en oeuvre, conditionnement, réglementation et contrôle de la qualité)1. Les laits de consommation- lait cru, lait pasteurisé, lait stérilisé, lait UHT- lait concentré, lait en poudre, lait reconstitué, lait gélifié2. Séparation et utilisation de la matière grasse- fabrication de la crême fraîche, les crêmes glacées, la MGLA, le beurre3. Séparation et utilisation des matières azotées- les fromages: différents types et techniques fromagères- les caséinates4. Elaboration des laits fermentés (le yaourt, le leben, le kéfir)III. TECHNOLOGIE DES VIANDES, POISSONS ET OEUFS1. La viande- les différents types de viande- les conditions d’abattage- l’entreposage (effet du froid, salaison et fumaison)- transformation de la viande (le boeuf en gelée ou “ corneed beef ”, les saucisses, le pâté,...)2. Les poissons- les principaux poissons alimentaires- conditions de conservation- technologie des conserves de poisson- obtention des huiles et des farines de poisson3. Les oeufs- production et qualités de l’oeuf- conservation et risques de contamination

- utilisation des oeufs dans les IAA (oeufs en poudre et ovoproduits)IV. TECHNOLOGIE DES CEREALES ET DES PRODUITS A BASE DE SUCRE1. Les céréales- les différentes céréales utilisées en alimentation humaine- modes d’obtention des farines et appréciation de la qualité- technologie et transformation des céréales- panification- biscuiterie, patisserie- pâtes alimentaires- produits infantiles et diététiques- conditionnement et qualité des produits2. Les produits à base de sucres- Extraction de sucres à partir de la betterave ou de la canne- production et préparation- technologie d’extraction et de cristallisation des sucres- les différents types de sucres et leur conditionnement- la fabrication et l’utilisation des sirops- les jus de fruits- les différents types de jus- technologies de fabrication- conditionnement et qualitésV. TECHNOLOGIE DES HUILES ET DES GRAISSES- Production et diversité des corps gras- Technologie d’obtention des principales huiles alimentaires(huiles d’olive, de tournesol, de soja, d’arachide, de colza,...)- préparation du grain, extraction- raffinage et sous produits de raffinage- Technologie d’obtention de matières grasses d’origine végétale et/ou animale(cas ds margarines)- conditionnement et qualitésVI. TECHNOLOGIE DES FRUITS ET LEGUMES- Production et classification des fruits et légumes- Entreposage des fruits- à l’état réfrigéré- sous atmosphère contrôlée- Traitements préliminaires avant l’utilisation industrielle- nettoyage, lavage, triage, pelage- blanchiment- Technologie et conservation industrielle des fruits et légumes- les conserves de fruits et de légumes (les conserves appertisées)- préparation des concentrés- préparation des poudres- préparation de confitures, gelées et marmelades- Conditionnement et qualitésCONDITIONNEMENT

MICROBIOLOGIE ALIMENTAIREVHG : 90hCours : 45hTP/TD. : 45hCoeff. : 3Module : AI. INTRODUCTION : Rappels sur la classification des micro-organismes- Les unités de la classification biologique- Notion de l’espèce bactérienne- Notion de clone, biotype- Les différents types de classificationII. LES GRANDS GROUPES MICROBIENS INTERESSANT LAMICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE1. Les ferments lactiques- Définition et métabolisme fermentaire- Propriétés générales et habitats- Classification et étude de quelques genres- genre : Strepotococcus- genre : Leuconostoc- genre : Lactobacillus- genre : Lactococcus- Rôle et importance pratique (acidification, activité protéolytique, production d’arômes,de viscosité, de gaz, de dextranes, dosages microbiologiques,...)2. Les entérobactéries- Caractères généraux du groupe- Classification et techniques d’identification- Etude de quelques genres- genre : Escherichia- genre : Klebsiella- genre : Salmonella- genre : Shigella- genre : Proteus3. Les bactéries sporulées (caractères généraux, siolement, identification)- Les bactéries sporulées aérobies: étude du genre Bacillus- Les bactéries sporulées anaérobies: étude du genre “ clostridium ”4. Les microcoques (classification, caractères généraux, siolement, identificationet étude du genre Staphylococcus)5. Autres bactéries (classification, caractères généraux, siolement, identification, intérêt)- Les bactéries saprophytes (genre: Pseudimonas et Acetobacter)- Les bifidobactéries- Les vibrions- Les actinobactéries- Les brucelles6. Les levures- Caractères généraux

- Classification- Rôles dans l’alimentation (utiles et nuisibles)7. Les moisissures- caractères généraux- Classification- Rôles dans l’alimentation (utiles et nuisibles)III. LES ALT2RATIONS MICROBIENNES DES ALIMENTS ETLES MOYENS DE LUTTE1. Les divers aspects de la bactériologie alimentaire2. Les facteurs influençant la flore d’altération des aliments- Les facteurs du milieu (pH,potentiel d’oxydo-réduction, Aw, température,état des nutriments en présence, effect des sels, effet du sucre,...)- Les facteurs induits par l’effet de traitements physiques et physico-chimiques3. Les moyens de lutte- Les moyens physiques- inhibition à basse température* effets de la réfrigération* effets de la congélation* problèmes posés par les germes psychrophiles- destruction thermique* effets des traitements de thermisation, blanchiment, pasteurisationet stérillisation sur les micro-organismes* problèmes posés par les germes sporulés- effets des pressions partielles en O2 ,N2 et CO2 sur la proliférationdes micro-organismes- effets de la bactofugation et de la filtration- effets des radiations- Les moyens chimiques et biologiques- acidification du milieu- addition du sel (cas des germes halotolérants)- addition d’antiseptiques- addition d’antibiotiques- autres moyensIV. CATEGORIES D’ALIMENTS ET ACTIVITES MICROBIENNES1. Les sucres et les produits riches en sucres2. Les céréales et ses dérivés3. Les légumes et les fruits frais4. Les laits et les produits laitiers5. Les viandes et les produits carnés

CONDITIONNEMENT ET CONSERVATIONDES PRODUITS ALIMENTAIRES

VHG : 60hCours : 45h

TP/TD. : 15hCoeff. : 3

Module : S1I. INTRODUCTION : Objectifs de la conservation des produits alimentaires

II. LES TECHNIQUES DE CONSERVATION1. Conservation par la chaleur

- la thermisation- la pasteurisation- la stérilisation- le blanchiment- l’appertisation

2. Conservation par le froid- la réfrigération- la congélation- la surgélation

3. Conservation par déshydratation- le séchage

- la tyophilisation- la fumaison

4. Conservation par acidification5. Conservation par addition de composés et/ou changement de la nature du milieu

- addition d’antioxydants- addition d’antibactériens

- addition d’inhibiteurs enzymatiques- addition de gélifiants et de sucres

6. Conservation par irradiationIII. LE CONDITIONNEMENT DES PRODUITS ALIMENTAIRES

1. Evolution des produits alimentaires et nécessité du conditionnement- aspects hygiéniques

- aspects commerciaux2. Les conditions d’emballage

- perméabilité- tenue au froid et à la chaleur (et diffusion dans le milieu)

- qualités organoleptiques- aspects toxicologiques

3. Les différents matériaux d’emballage des produits alimentaires(avantages et inconvénients)

- le verre- les matières plastiques

- les élastomères- les papiers et les crtons

- les métaux

TECHNIQUES DE CONTROLE MICROBIOLOGIQUEVHG : 60hCours : 30hTP/TD. : 30hCoeff. : 2Module : S2I. INTRODUCTION : Nécessité et objectifs du contrôle microbiologique1. Qualité hygiénique2. Qualité technologiqueII. POLITIQUE DE CONTROLE1. Les niveaux de contrôle2. La fréquence des contrôles3. Les paramètres à contrôler4. Les méthodes de contrôleIII. PRELEVEMENT, TRANSPORT ET PREPARATIONDES ECHANTILLONS1. Cas des aliments solides2. Cas des liquides alimentaires3. Echantillonnage en surface4. Techniques de dilutionIV. LES TECHNIQUES CLASSIQUES DE NUMERATION1. Numération microscopique2. Numération en milieu solide3. Numération en milieu liquideV. LES TECHNIQUES RECENTES DE DETECTION1. Evaluation du nombre de cellules ou de l’UFC.2. Emission d’un signal physico-chimique- modification physico-chimique du milieu (turbidimètrie,microcalorimétrie, pH, potentiel redox,...)- dosage de substances intracellulaires (enzymes,coenzymes,...)- marquage de cellules (méthodes radiométriques)VI. CARACTERISATION ET EVOLUTION DE L’ANALYSEMICROBIOLOGIQUE1. Critères caractérisant les performances d’une méthode de détection- sensibilite- détectabilité- temps minimum de détection2. Evolution dans le domaine de l’analyse microbiologique- pertinence et quantitativité des analyses- déplacement de l’analyse du laboratoire vers la chaîne de production- automatisationTRAVUX PRATIQUES : Cet enseignement doit être illustré par des travaux pratiques et des visites d’usines. Un contrôle microbiologique type est à réaliser sur les matières premières, sur les produits en cours de fabrication, sur l’atmosphère et l’eau utilisée dans les process et enfin sur les produits finis. Au niveau des unités de production, l’accent sera mis sur la dualité (temps d’incubation des

analyses / Commercialisation des produits) et la nécessité de recourir à des techniques de contrôle rapides et fiables

METHODES D’ANALYSE ET DE CONTROLEVHG : 120hCours : 80hTP/TD. : 40hCoeff. : 3Module : APréambule : Cet enseignement est destiné à approfondir certaines notions abordées dans le module de techniques d’analyse biologiques (3éme années). Il permet ainsi de donner aux futurs ingénieurs un maximum d’informations sur les méthodes utilisées pour l’analyse et le contrôle dans les IAA particulièrement l’utilisation de techniques dites “Lourdes” et des techniques récentes de haute performance. Pour celà, il est recommandé de mettre en relief le principe de fonctionnement, les domaines d’application et les types d’analyses qu’il est possible de réaliser avec tel ou tel type d’appareillage. La notion de protocole expérimental ou ensemble de manipulations doit aussi être abordée en liaison avec ce qui se fait pratiquement dans les laboratoires d’analyse. Cet enseignement peut-être illustré par des travaux pratiques, des visites de laboratoires ou par tout autre support didactique.• 1ére partie (MAC1) : Les méthodes d’analyse physiques et physico-chimiquesI. MESURES ET UNITES1. Unités du système international (unités de base, unités dérivées, constantes physiques)2. Unités utilisées conjointement au SI3. Mesures précises- causes d’erreurs- courbes de distributions normales et variations biologiques- chiffres significatifsII. MESURES ELECTROMETRIQUES DU pH ET LES TECHNIQUESELECTROCHIMIQUES1. Mesures du pH- acides et bases, concentration en ion hydrogène et pH- dissociation des acides et des bases- mesure du pH (indicateur, mesure exacte)- courbes de titration* acide fort et base forte* acide faible et base forte- solutions tampons et utilisation du pH mètre- utilisation du pH stat pour suivre une réaction enzymatique2. Les méthodes potentiométriques

3. Les méthodes ampérométriques4. Les méthodes polarographiques5. La coulométrie6. La conductimétrieIII. METHODES OPTIQUES ET SPECTROSCOPIQUES(Principe, appareillage et applications dans l’analyse alimentaire)1. Photométrie en milieu trouble- turbidimétrie- néphélémétrie2. La polarimétrie3. La réfractométrie4. La cytométrie en fluxIV. LES TECHNIQUES LOURDES(principe, domaines d’utilisation: intérêt dans l’analyse alimentaire)1. La résonnances magnétique nucléaire2. La diffraction des rayons X3. La microscopie électronique4. La spectrométrie de masse• 2éme Partie (MAC2) : Les méthodes d’analyse biochimiqueI. L’ANALYSE ENZYMATIQUE1. Détermination de la concentration de substrats2. Détermination de l’activité catalytique3. Exemples d’analyse enzymatique dans le domaine alimentaireII. LES TECHNIQUES D’ANALYSE IMMUNOCHIMIQUES1. La réaction antigène-anticorps2. L’obtention des anticorps (monoclonal, polyclonal)3. Les techniques de précipitation et d’agglutination4. Les techniques utilisants des Ag ou Ac marqués (immunofluoréscence)5. Application de l’analyse immunochimique dans le domaine des IAAIII. LES METHODES BIOCHIMIQUES DE SEPARATION ET DE DOSAGE1. Rappel des méthodes de fractionnement usuelles- la centrifugation et l’ultracentrifugation- la filtration et l’ultrafiltration- la dialyse, l’électrodialyse- la concentration, l’évaporation et la lyophilisation2. Les méthodes chromatographiques- Chromatographie liquide sous basse pression* le choix du gel (perméation, adsorption, échange d’ions, affinité,interactions hydrophobes,...)* les conditions de séparations chromatographiques* application à l’analyse qualitative et quantitative des produits alimentaires- chromatographie liquide sous haute pression* HPLC en phase réverse* HPLC d’échange d’ions(choix de la colonne, les conditions chromatographiques, cas de l’utilisation

dans l’analyse et le contrôle des produits alimentaires)- chromatographie en phase gazeuse (CPG)* principe* utilisation dans l’analyse et le contrôle des aliments3. Les méthodes électrophorétiques- les différents types d’électrophorèse classiques- les supports solides utilisés- les paramètres de migration électrophorétique- détermination du poids moléculaire- l’isoélectrofocalisation (IEF)- l’immunoélectrophorèse- l’électrophorèse bi(multi)dimensionnelle- l’électrophorèse capillaire (HPCE)- L’électrophorèse-chromatographie haute performance (HPEC)- applications de l’électrophorèse dans l’analyse et le contrôle des produits alimentaires* détection de fraudes et adultérations* analyse quantitativ

TOXICOLOGIE ANALYTIQUEVHG : 60hCours : 45hTP/TD. : 15hCoeff. : 2Module : S2I. INTRODUCTION : Définition, historique et domaines d’action de la toxicologieII. MECANISMES D’ACTION DES TOXIQUES- Phase d’exposition- Phase toxicocinétique- Phase toxicodynamique (biotoxification)- Synergie toxiqueIII. ETUDE TOXICOLOGIQUE- Toxicité aigue- Toxicité subaigue- Toxicité chronique- Mutagénicité et cancérogénicitéIV. L’ANALYSE DES RESIDUS TOXIQUES- Réaction entre la limite maximale des résidus et les risques- Résidus admis- L’analyse des résidus de pesticidesV. SUBSTANCES NATURELLES TOXIQUES DES ALIMENTS- Substances antinutritives- Substances toxiques- Les substances cancérogènes- Les substances à activité oestrogénique

- Les glucosides- Les taninsVI. ETUDE DE CERTAINS CAS DE TOXICITE(intérêt toxicologique et méthodes de détection qualitative et/ou quantitative)- Toxicité des métaux (le plomb, le mercure, le cadmium, l’arsenic, l’étain, le cuivre,le manganèse, le zinc,...)- Toxicité des champignons (mycotoxines)- Toxicité et pollution bactériennes : les toxi-infections alimentaires- Les nitrates, les nitrites et les nitrosamines- Les additifs- Toxicité des résidus de pesticides- Toxicité des hydrocarbures aromatiquesVII. LA GENOTOXICITE- Les risques pour la santé humaine- Mécanismes et expression de la génotoxicité- Détection des agents génotoxiquesVIII. TOXICITE ET SANTE PUBLIQUE- Médicaments vétérinaires et hygiène publique- Aliments et cancers- Les problèmes de règlementation (nationale et internationale

ANGLAIS SCIENTIFIQUEVHG : 60hCours : 30h

TP/TD. : 30hCoeff. : 2

Module : S2I. ETUDE DE TEXTES SCIENTIFIQUES REDIGES EN ANGLAIS

IL est recommandé de choisir des textes types répondant aux familles d’enseignement suivants :

1.Biologie Moléculaire et Génie Génétique2. Biochimie, nutrition et technologie alimentaire

3. Les techniques d’analyse et de contrôle4. Contrôle de la qualité et repression des fraudes

5. Législation alimentaireIII. TRADUCTION DE TEXTES SCIENTIFIQUES DU FRANCAIS A L’ANGLAIS

- Application à la rédaction d’un rapport d’expertise d’un produit alimentaire

http://forum.univbiskra.net montada cqa

http://www.yopdf.eu/tp-de-microbiologie-alimentaire-pdf.html

http://www.yopdf.eu/tp-de-microbiologie-alimentaire-pdf.html

http://forum.univbiskra.net/

(c) Copyright P.Y. Guillaume 2004

Merci à Isabelle Darinot et Véronique Serventon pour leur aide.

L'utilisation des photos et documents ne peut s'effectuer que dans un cadre pédagogique et non lucratif.

- Milieu Chapman

Le milieu de Chapman est un milieu sélectif, surtout utilisé en microbiologie médicale, permettant la croissance des germes halophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du genre Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, les Enterococcus, les Bacillus, et de rares bactéries à Gram négatif.

Aspect du milieu avant utilisation

Mode d’ensemencemen

t

Sélectivité / composition

Caractères recherchés

Résultats

L'ensemencement doit être massif, en stries serrées ou par inondation

Ce milieu contient un inhibiteur : fortes concentrations en chlorure de sodium (75 g.L-

1), ce qui permet un isolement sélectif de

On peut étudier la fermentation du mannitol par virage au jaune de l’indicateur coloré, le rouge de phénol,

Les colonies mannitol + sont entourées d’une auréole jaune.

Ne pas confondre la pigmentation des colonies et le virage de l’indicateur coloré.

Ainsi des colonies Aspect du milieu après utilisation

mailto:[email protected]

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/milieux.html#boites

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/milieux.html#tubes

Staphylococcus tolérant les fortes concentrations en NaCl

autour des colonies. pigmentées en jaunes et

mannitol + : forte suspicion de S. aureus

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CHAPMAN.htm

- Milieu Hektoen

La gélose Hektoen est un milieu d'isolement des Salmonelles et des Shigelles, bien que de nombreuses bactéries à Gram négatif puissent se développer sur ce milieu. L'identification d'entérobactéries pathogènes repose sur la non utilisation des glucides présents dans le milieu.



t



Résultats

L'ensemencement se fait par les techniques habituelles.

Deux indicateurs sont présents dans le milieu :

- le bleu de bromothymol (indicateur de pH)

- la fuschine acide (qui se colore en présence d'aldéhyde.

trois types de glucides : la salicine (qui est un hétéroside), le saccharose et le lactose.

La production d'H2S à partir de thiosulfate

Colonies saumon : Escherichia, Levinea, Citrobacter diversus, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Yersinia

Colonies saumon à centre noir : Citrobacter freundii, Proteus vulgaris,

Colonies bleu-vert à centre noir : Suspicion de Salmonella, à différencier de Proteus mirabilis

Colonies bleu-vert ou vertes : Suspicion de Shigella ou de Salmonella

Aspect du milieu après utilisation

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/HEKTOEN.htm

- Gélose SS

Gélose Salmonella-Shigella.

Milieu sélectif permettant l’isolement d'entérobactéries pathogènes.

Il est très utilisé pour la recherche de Salmonella dans les selles et les denrées alimentaires peu pour les Shigella car trop sélectif.


Mode d’ensemencement



Résultats

Isolement par la méthode des cadrans.

Incuber 18 à 24 h à 37°C.

Le milieu contient 3 inhibiteurs :

- sels biliaires,

- vert brillant

- forte concentration en citrate de sodium.

Ceux-ci empêchent la pousse de toutes bactéries Gram+, et rendent difficile la croissance des bactéries Gram-

autres que Salmonella et Shigella.

Le milieu contient du lactose pouvant être fermenté.

Le milieu contient du thiosulfate pouvant donner du H2S.

colonies rouges : lactose +

colonies incolores : lactose–

colonies à centre noir : H2S +


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/SS.htm

- Milieu EMB

Milieu Eosine Bleu de Méthylène.

Milieu d'isolement des bacilles Gram-.

Il est très utilisé pour l’isolement des coliformes.



t



Résultats


Ce milieu contient deux colorants, l’éosine et le bleu de méthylène qui inhibent la majeure partie de la flore Gram+ (sauf Streptocoques D). Bien que les Entérobactéries lactose - puissent s’y développer, la culture des Entérobactéries lactose + y est favorisée.

Le milieu contient un critère de différenciation, le lactose

colonies violettes : semi-bombées de 2 à 3mm de diamètre avec éclat métallique, centre sombre : E. coli très bombées muqueuses de diamètre 5 mm centra gris marron sans reflet Klebsiella

colonies grisâtres :- 1 à 2 mm de diamètre transparentes, grises ambrées : Salmonella, Shigella.

- 2 mm de diamètre, grisâtres avec une pellicule autour de la colonie : Proteus morganii

punctiformes et grisâtres : Enterococcus.


- Milieu Mac Conkey

Milieu sélectif pour l'isolement des bacilles Gram- Salmonella et Shigella ainsi que des bactéries coliformes dans les eaux, les produits alimentaires, les produits pharmaceutiques et biologiques .



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité /

composition

Caractères

recherchés

Résultats

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/EMB.htm


Incuber 18 à 24 h à 37 °C.

Ce milieu contient deux inhibiteurs de la flore Gram+ :

- les sels biliaires

- le cristal violet

le lactose dont l’utilisation est révélée par l’indicateur coloré du milieu, le rouge neutre.

colonies rouges entourées d’un hâlo opaque de la même couleur du à la précipitation des sels biliaires: lactose+

colonies jaunes ou incolores : lactose-

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MACCONKEY.htm

- Milieu CLED

Le milieu CLED (Cystine Lactose Electrolyte Déficient) est un milieu non sélectif, très utilisé dans l'étude des bactéries contenues dans l'urine. Etant un milieu non sélectif de nombreuses bactéries, tant Gram + que Gram -, pourront se développer.

L’absence d’électrolytes (pas de NaCl) limite le phénomène d’envahissement par les Proteus.



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité /

composition

Caractères

recherchés

Résultats

La lecture s'effectue après 18 à 24 heures d'incubation à 37°C.

Lactose lactose + apparaissent jaunes

lactose – apparaissent bleues vertes

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CLED.htm

- Milieu BCP

C’est un milieu utilisé pour la détection et l’isolement des entérobacteriacées dans l’eau, les produits alimentaires, l’urine et les selles

Ce milieu facilite la différenciation des colonies par le caractère lactose. Il inhibe l’envahissement de la surface de la boite par des nappes de Proteus car il ne contient pas d'électrolytes.

C’est un milieu non sélectif qui est utilisé pour l’isolement de nombreuses espèces n’appartenant pas aux entérobactéries.

C’est un milieu contenant une base nutritive ordinaire permettant la pousse des bactéries non exigeantes.

Il contient un critère de différenciation : la fermentation du lactose révélée par le virage en milieu acide de l’indicateur coloré de pH, le bromocrésol pourpre.

Il est déficient en électrolytes : absence d'ions minéraux.



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité /

composition


Résultats

Isolement

18 à 24 h à 37°C

- Non selectif

- Dépourvu en électrolyte

- Bromocrésol pourpre

- Espèces n’appartenant pas aux entérobactéries

- Fermentation du lactose

Colonies bleues : bactéries lactose –

Colonies jaunes : bactéries lactose +

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/BCP.htm

- Milieu Baird Parker

Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus

Ce milieu contient une base nutritive riche.

Il contient des accélérateurs de la croissance : le pyruvate de sodium et le glycocolle



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité /

composition


Résultats

Isolement

18 à 24 h à 37°C

Il contient 2 inhibiteurs :

le chlorure de lithium

le tellurite de potassium.

Contient 3 critères de différenciation :

réduction du tellurite

protéolyse des protéines du jaune d'œuf

hydrolyse par une lécithinase des lécithines du jaune d'œuf

en tellure noir

halo clair autour de la colonie

liseré blanc opaque autour de la colonie

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/BAIRD_PARKER.htm

- Milieu BEA

Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité /

composition

Caractères

recherchés

Résultats

Le milieu présenté en boite de Pétri est destiné à un isolement.

Le milieu présenté en tube est à beurrer avec une culture pure car il entre dans la galerie d’identification des coques gram + de culture facile.

C’est un milieu sélectif des streptocoques peu exigeants.

Il contient 2 inhibiteurs :

- la bile de bœuf

- l’azide de sodium

l’esculine révélée par le citrate de fer ammoniacal

Pousse de petites colonies sur le milieu Streptocoques D

Colonies entourées d'un halo noir : esculine +

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/BEA.htm

- Gélose au sang

C’est un milieu d’isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la lecture du caractère hémolytique.

C’est un milieu riche d’autant plus par la présence de sang.




t

Caractère

s recherché

s

Résultats

Isolement

18 à 24 h à 37°C

Hémolyse Hémolyse : zone claire d’hémolyse totale de diamètre 3-4 mm entourant les colonies.

Hémolyse : zone floue et granuleuse, verdâtre de 1 à 2 mm de diamètre

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/COLUMBIA_SANG.htm

- Milieu Slanetz

Milieu de dénombrement des entérocoques en microbiologie alimentaire. Son emploi est surtout réservé aux eaux, après filtration.



Mode d’ensemencem

ent

Sélectivité / compositio

n

Caractères

recherchés

Résultats

Isolement

Filtration

Il contient un inhibiteur des gram -, qui sélectionne les Streptocoques : l’azide de sodium.

le TTC qui lors de sa réduction donne une coloration des bactéries en rouge.

Les Entérocoques donnent des colonies de taille moyenne, roses ou rouges.

Les Bacillus peuvent pousser et donner le même aspect de colonies, mais de taille plus importante.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/SLANETZ.htm

- Milieu Cétrimide

La gélose au cétrimide est un milieu sélectif, qui permet l'isolement des Pseudomonas et notamment de P.aeruginosa. Ce milieu gélosé est relativement pauvre, et contient un antiseptique: le cétrimide (bromure de N-cétyl-N, N, N-triméthylammonium). Ce milieu, proche du milieu King A, favorise aussi la production de pigments par P.aeruginosa.



t


Caractères

recherchés

Résultats

Ensemencer la surface du milieu au moyen de l'anse.

Incuber durant 24 heures à 37°C, voire même de préférence à 42°C (l'incubation à 42°C permet un isolement spécifique de P.aeruginosa).

Sur ce milieu de très nombreuses bactéries sont inhibées de par la présence de l'antiseptique cétrimide(bromure de N-cétyl-N, N, N-triméthylammonium)., ainsi que par la présence de l'antibiotique acide nalidixique (inhibiteur de nombreuses bactéries à Gram négatif).

-pyoverdine

-pyocyanine

Milieu bleu : pyocyanine

Milieu jaune- vert : pyoverdine


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CETRIMIDE.htm

- Gélose Sabouraud

La gélose de Sabouraud constitue un milieu classique pour la culture, l'isolement et l'identification des levures et des moisissures saprophytes ou pathogènes.

Elle est recommandée essentiellement pour l'isolement des moisissures dans les prélèvements peu chargés en bactéries, les contrôles de stérilité des produits pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, la culture des moisissures en vue de réaliser leur identification.

Dans le cas de prélèvements fortement contaminés, il est préférable d'utiliser la gélose Sabouraud + chloramphé-nicol .


Mode d’ensemencementSélectivité / composition

- Transférer l'échantillon à analyser sur le milieu.

- Etaler l'inoculum en surface à l'aide d'un étaleur en verre stérile.

- Incuber à 20 - 25°C de 3 à 5 jours.

L'ajout de triphényltétrazolium à raison de 100 mg par litre en fait un milieu de différenciation pour les Candida.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/SABOURAUD.htm

- Gélose Sabouraud plus chloramphénicol




- Transférer l'échantillon à analyser sur le milieu.

- Etaler l'inoculum en surface à l'aide d'un étaleur en verre stérile.

- Incuber à 20-25°C de 3 à 5 jours.

Chloramphénicol Recherche des champignons


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/SABOURAUD_chloramphenicol.htm

- Gélose CIN

Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).



t



Résultats

Isolement. 2 inhibiteurs permet de sélectionner la culture des streptocoques du groupe D.:

- la bile de bœuf

l’azide de sodium

l’esculine révélée par le citrate de fer ammoniacal

Pousse de petites colonies sur le milieu Streptocoques D

Colonies entourées d'un halo noir : esculine +


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CIN.htm

- Gélose au lait


Mode d’ensemenceme

nt

Sélectivité /

composition


Résultats

Faire une strie centrale à la surface du milieu.

Incuber 24H à 7jours à la température désirée.

’hydrolyse de la caséine

L’hydrolyse de la caséine se traduit par l’apparition d’une zone claire autour de la culture.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/LAIT.htm

- Gélose à l’amidon



t


n

Caractères

recherchés

Résultats

Ensemencer par une strie à la surface du milieu.

Incuber un à huit jours à la température désirée.

l’hydrolyse de l’amidon.

Hydrolyse mise en évidence par l’ajout d’une solution iodée :

- une coloration bleu-rouge due à l’amidon, montre qu’il n’a pas été hydrolysé

- la disparition de cette coloration montre son hydrolyse.Aspect du milieu après

utilisation

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/AMIDON.htm

- Gélose à l’oeuf


Mode d’ensemenceme

nt

Sélectivité /

composition

Caractères

recherchés

Résultats

Faire une strie à la surface du milieu, ou éventuellement des touches.

Incuber pendant 24 h ou plus à 37°C.

La lécithinase

l'action de la lécithinase libère de la choline soluble et un diglycéride peu soluble qui précipite dans le milieu provoquant un hâlo autour de la culture


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/OEUF.htm

- Gélose Drigalski

Milieu sélectif permettant l’isolement des bactéries Gram- non exigeantes. Il est utilisé pour l’isolement des germes urinaires et pour la coproculture



t



Résultats


Contient deux inhibiteurs de la flore Gram+ :

- le désoxycholate de sodium

- le cristal violet

Fermentation du lactose

Les colonies de bactéries lactose + sont jaunes.

Celles de bactéries lactose – sont bleues.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/DRIGALSKI.htm

- Gélose TSN

Milieu de dénombrement des anaérobies sulfito-réducteurs (spores de Clostridium sulfito-réducteurs et Clostridium perfringens) dans les produits alimentaires.

Aspect du milieu avant

utilisation



t



Résultats

Isolement

L’incubation se fait en anaérobiose.

La température d’incubation permet de sélectionner les diférents types bactérien.

Réduction par le fer du sulfite de sodium

- les anaérobies sulfito-réducteurs : à 37°C

- Clostridium perfringens à 46°C

Colonies rouges colonies sulfito réductrices

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/TSN.htm

- Gélose TCBS



t



Résultats

Ensemencer à partir de la selle. Incuber 24 heures à 37°C.

La forte concentration en bile et en citrate, associée à un pH élevé (pH = 8,6) permet l'élimination de nombreuses bactéries

Recherche et l'isolement des vibrions pathogènes présents dans les prélèvements poly microbiens

- Colonies jaunes (Vibrions saccharose +)

- Colonies vertes (Vibrions saccharose -)

- Petites colonies jaunes

- Petites colonies vertes

Colonies à centre noir : colonies H2S +.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/TCBS.htm

- Gélose à l’ADN



t



Résultats

Percer la gélose de trous.

Inoculer avec quelques gouttes d'un bouillon creurcervelle ensemencé auparavant et bouilli 10 minutes.

Incuber 4 heures à 37 oC.

la DNase thermo résistante de Staphylococcus

halo rose signant la DNase autour des trous percés sur le fond bleu de la gélose


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/ADN_BLEUTOLUIDINE.htm

- Gélose lactosée au désoxycholate 0.1%

Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire (analyse des eaux et des aliments).



t


Caractères

recherchés

Résultats

- Isolement 2 inhibiteurs des bactéries Gram+

à faible concentration :

- le désoxycholate (sels biliaires)

- le citrate de sodium.

le lactose Colonies rouges bactéries lactose+ , coliformes

Colonies incolores bactéries lactose-


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/LACTOSE_DESOXYCHOLATE.htm

- Milieu Muller Hinton


Aspect du milieu après

utilisation


t


n


Résultats

selon le cas :

- isolement

- ensemencement en nappe avec inoculum

L’amidon neutralise les inhibiteurs apportés par la gélose

Sensibilité au antibiotiques et au composé O 129

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MUELLER_HINTON.htm

- Gélose nutritive ordinaire





Résultats

Ensemencement par isolement.

Ces milieux permettent la culture des bactéries peu exigeantes

- Certaines colonies peuvent avoir des couleurs caractéristique.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/BG_NUTRITIVE.htm

- Milieu Todd Hewit

Ce milieu glucosé tamponné convient bien à la culture des bactéries exigeantes supportant mal les variations de pH, il est bien adapté à la culture des Streptocoques.


utilisation



t



Résultats

Ensemencement par isolement.

système tampon (phosphates, bicarbonates) permet d’empêcher que l’acide formé par le métabolisme du glucose n’exerce une action nuisible sur les bactéries

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/TODD_HEWITT.htm

- Milieu TTC tergitol

Milieu de recherche et de dénombrement des coliformes. Il est surtout utilisé pour la colimétrie des eaux par la méthode de filtration.



t



Résultats

Filtration le Tergitol 7 permettant de sélectionner les coliformes et inhibe aussi l’envahissement par Proteus

- le TTC qui montre le pouvoir réducteur des bactéries

- le lactose dont l’utilisation est révélée par le virage du bleu de bromothymol

- colonie rose-rouge : réduction du TTC

- colonie jaune : absence de réduction du TTC

- halo bleu-vert : lactose –

- halo jaune : lactose +

E. coli et Enterobacter aerogenes donnent des colonies jaunes

Les autres coliformes donnent des colonies rouges.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/LACTOSE_TTC_TERGITOL7.htm

- Gélose au sang cuit

C’est un milieu d’isolement enrichi préconisé pour l’étude des Neisseria notamment le méningocoque. Il est aussi utilisé pour la culture de Haemophilus influenza.



t


n


Résultats

- Isolement L’amidon de maïs neutralise les substances toxiques libérées par les cultures.


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/SANG_CUIT.htm

- Gélose Mossel

Milieu utilisé en alimentaire pour l’isolement de Bacillus cereus.




Caractères

recherchés

Résultats

Etaler une goutte de produit à éudier et au rateau, avec des billes ou par inodation

Assuré par la polymyxine qui inhibe ou retarde la croissance d’autre espèces.

Croissance ou absence

croissance de colonie mannitol – lécthinase +

Si il y a croissance alors présence de la souche Bacillus cereus : colonie

- roses rouges (mannitol -)

- halo blanchâtre au centre de la colonie (lécithinase +)


http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MOSSEL.htm

- Milieu Hajna-Kligler

Le milieu de Hajna-Kligler est un milieu complexe, qui permet la recherche de plusieurs caractères biochimiques. Il est très utilisé dans l'identification des Enterobacteriaceae.

Aspect du milieu

avant utilisatio

n




Résultats

Ensemencer abondamment la surface par stries serrées ou par inondation, puis le culot par simple piqûre, à l'aide de la même pipette boutonnée. Il est important de ne pas oublier de dévisser partiellement la capsule afin de permettre les échanges gazeux.

Mettre à l'étuve 24h à 37°C.

Utilisation du glucose

Utilisation du lactose

Production H2S

Production de gaz

Recherche de la LDC

a) Bactérie de type fermentatif du glucose et lactose + : culot jaune et pente jaune.

b) Bactérie de type fermentatif du glucose et lactose - : culot jaune et pente rouge.

c) Bactérie de type oxydatif du glucose ou glucose - et lactose - : culot rouge et pente rouge.

d) Bactérie de type oxydatif du glucose et lactose + : culot rouge et pente jaune. Ces bactéries sont aérobies strictes : le culot ne doit pas présenter de culture et sera donc rouge. La pente peut présenter une culture et sera jaune si l'acidification est suffisante et rouge dans le cas contraire. Le milieu de Kligler n'est généralement pas utilisé pour de telles bactéries, qui sont souvent lactose -, et des expériences complémentaires sont faites pour préciser le résultat.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/HAJNA_KLIGLER.htm

- Milieu Lysine Fer

Ce milieu peut être utilisé en routine mais il est généralement utilisé pour l’identification des souche de Salmonella.

Aspect du milieu

avant utilisatio

n





Résultats

Pratiquer l’ensemencement la pente ave des stries et le culot par piqure centrale

La lysine désaminase (LDA)

La lysine décarboxylase (LDC)

La production d’H2S

Pente violette, culot jaune : bactérie LDA -, LDA -, H2S –

Pente violette, culot violet : bactérie LDA – LDC +, H2S - , K. pneumoniae, K. oxytoca, Enterobacter (sauf cloacae), Serratia, E. coli, S. typhi.

Pente violette, culot jaune : bactéries LDA -, LDC – H2S – ou + Escherichia, Shigella, E. cloacae, K. rhinoscleromatis, Citrobacter, S. parathyphi A, Yersinia, Levinea, E. coli (biotype LDC -)

Pente violette, culot violet avec noircissement : bactérie LDA – LDC +, H2S + , Salmonella H2S + y compris S. arizonae, Edwardsiella

Pente rouge vineux, culot jaune : bactéries LDA +, LDC – H2S – ou + Proteus Providencia

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/LYSINE_FER.htm

- Milieu citrate de Simmons

Ce milieu est un exemple de milieu synthétique, c'est à dire de milieu dont la composition, qui est complexe, est connue exactement tant qualitativement que quantitativement


utilisation



t



Résultats

La pente est ensemencée par une strie longitudinale, réalisée à l'anse, à partir d'une suspension de la culture solide en eau distillée stérile.

Il est important de ne pas apporter de substrats carbonés. Ainsi l'ensemencement à partir d'une souche pure fournie en bouillon nutritif ou en eau peptonée est impossible.

Ne pas visser le bouchon à fond, afin de permettre les échanges gazeux (en particulier élimination du dioxyde de carbone).

Mettre à l'étuve 24 heures à 37°C.

Utilisation du citrate comme seule source de carbone

- Virage de l'indicateur de pH au bleu : il y a eu alcalinisation du milieu et la souche est citrate de Simmons +.

- Pas de virage de l'indicateur de pH : il n'y a pas eu alcalinisation et le milieu ne présente pas de culture. La souche est citrate de Simmons -.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CITRATE_SIMMONS.htm

- Milieu phénylalanine

Milieu utilisé pour la recherche de la phénylalanine désaminase. Le phénylpyruvate donne une teinte verte en présence de fer III.


utilisation



t



Résultats

La pente par épuissement

La PDA : phénylalanine désaminase

Pente verte après ajout de perchlorure de fer : PDA +

Pente inchangée après ajout de perchlorure de fer : PDA -

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/PHENYLALANINE.htm

- Milieu Clark et Lubs

Ce milieu permet l’étude de la voie de fermentation du glucose.




t



Résultats

Ensemencer largement.

Incuber 24 h à t°C optimale.

* test VP :

- ajouter 10 gouttes d’alpha naphtol et le même volume de soude concentrée (ou de potasse).

- incliner le tube pour permettre une bonne oxygénation.

- attendre quelques min à 1 heure.

* test RM :

- ajouter 2 à 3 gouttes de rouge de méthyl,

- la lecture est immédiate.

soit de nombreux acides par la voie des fermentations acides mixtes qui sont mis en évidence par le test RM (au rouge de méthyl),

soit d’acétoïne produit par fermentation butanediolique qui est mise en évidence par le test VP (Voges-Proskauer)

Test VP :

- rouge : VP+

- jaune : VP-

Test RM

- rouge : RM+

- jaune : RM-

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Dossier%20test%20en%20microbiologie/Les%20tests%20en%20microbiologie.htm#RM

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Dossier%20test%20en%20microbiologie/Les%20tests%20en%20microbiologie.htm#VP

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Dossier%20test%20en%20microbiologie/Les%20tests%20en%20microbiologie.htm#RM

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Dossier%20test%20en%20microbiologie/Les%20tests%20en%20microbiologie.htm#VP

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/CLARK_LUBS.htm

- Milieu viande-foie

L'étude du type respiratoire d'une bactérie (c'est à dire ses rapports avec l'O 2) nécessite un milieu de culture riche contenant un gradient de pression partielle en di-oxygène.

Le principal milieu utilisé à cette fin est la gélose viande-foie (gélose VF).


utilisation



t



Résultats

- régénérée la gélose VF par ébullition au bain-marie bouillant pendant environ 30 minutes.

- ensemencer lorsque le milieu est encore liquide, vers 45°C. L'ensemencement se fait à la pipette Pasteur scellée (ou boutonnée) et chargée. On introduit la pipette Pasteur au fond du tube et on remonte en spirale.

Ne pas visser le bouchon à fond, sinon on empêche la formation du gradient de O2.

- refroidir à l’eau courante,

- on place ensuite le tube à l'étuve (à 37°C) pendant 24 heures.

Type aérobie strict : culture seulement en présence de di-oxygène.

Type aéro-anaérobie : culture en présence et en absence de di-xoygène. La technique utilisée ne permet pas de différencier entre les bactéries aéro-anaérobies facultatives et les bactéries anaérobies aéro-tolérantes. On conclut type aéro-anaérobie.

Type anaérobie strict : culture uniquement en l'absence de di-oxygène.

Type micro-aérophile : culture seulement dans une zone de pression faible en di-oxygène.

- Tube Yvan Hall



- Milieu Hugh et Leifson

De l'étude du métabolisme énergétique il découle que un glucide peut être catabolisé par voie respiratoire ou par voie fermentative. Le milieu de Hugh et Leifson permet de distinguer entre les deux processus.

La dégradation d'un glucide s'accompagne généralement d'une acidification du milieu :

- lors des respirations le glucide est oxydé en CO2, par le dioxygène (ou un autre oxydant minéral);

- Lors des fermentations le glucide est oxydé en acides, alcools, qui sont libérés dans le milieu qu'ils acidifient sensiblement. Toutes les voies fermentaires ne sont cependant pas également acidifiantes.

Aspect du milieu

avant utilisatio

n



t



Résultats

- Régénérer le milieu au bain-marie bouillant. Ramener à 45-50°C.

- Ajouter aseptiquement le glucide étudié (ici le glucose) pour obtenir une concentration finale de 1%.

- Agiter (l'agitation doit être douce pour éviter l'entrée d'air) et laisser le milieu se solidifier (en le passant sous l'eau froide par exemple).

- Ensemencer par piqûre centrale.

- Ne pas revisser à fond le bouchon.

- Mettre à l'étuve.

Le milieu de Hugh et Leifson contient un indicateur de pH, le bleu de bromothymol , qui prend une couleur jaune en milieu acide.

Ce milieu permet de déterminer la voie d'attaque des glucides, comme par exemple le glucose.

Mobilité

- les bactéries fermentatives

- les bactéries oxydatives (qui oxydent le glucide par respiration aérobie)

- les bactéries inactives ou inertes

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/HUGH_LEIFSON.htm

- Mannitol-mobilité

Ce milieu permet l’étude de la dégradation du mannitol qui est un produit de dégradation du mannose.


utilisation



t



Résultats

Ensemencer par piqûre centrale à l’aide d’un fil droit.

Incuber 24 h à T° optimale.

R : ce milieu est utilisable uniquement pour les bactéries fermentatives.

Mannitol

Mobilité

Nitrate réductase

- Caractère mannitol

- milieu jaune : Mannitol +

- milieu rouge : Mannitol –

- La mobilité : Les bactéries très mobiles peuvent se déplacer dans la gélose molle : étude de la mobilité.

- Nitrate réductase :

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MANNITOL_MOBILITE.htm

- Tubes Falkow


utilisation





Résultats

Pour les bactéries Gram– AAF à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceae et Vibrionaceae) : la lecture s'effectue après 4 jours à 37 ou 30 ou 22°C.

Pour les bactéries Gram – AS à métabolisme oxydatif (Pseudomonas, Flavobacterium, Xanthomonas, Alcaligenes, Moraxella, Acinetobacter) : la lecture s'effectue après 24 à 48 h à 30 °C.

- LDC : lysine décarboxylase

- ADC : arginine décarboxylase

- ODC : ornithine décarboxylase…

… selon l’acide aminé ajouté au milieu

Virage au jaune (acide) décarboxylase –

Virage au violet (basique) décarboxylase +

Animation Flash

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Falkow.swf

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MOLLER.htm

- Tubes Möller


utilisation





Résultats

Pour les bactéries Gram– AAF à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceae et Vibrionaceae) : la lecture s'effectue après 4 jours à 37 ou 30 ou 22°C.

Pour les bactéries Gram – AS à métabolisme oxydatif (Pseudomonas, Flavobacterium, Xanthomonas, Alcaligenes, Moraxella, Acinetobacter) : la lecture s'effectue après 24 à 48 h jours à 30 °C.

- LDC : lysine décarboxylase

- ADC : arginine décarboxylase

- ODC : ornithine décarboxylase…

… selon l’acide aminé ajouté au milieu

Virage au jaune (acide) décarboxylase –

Virage au violet (basique) décarboxylase +

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MOLLER.htm

- Milieu PCB




t



Résultats

- Milieu King A et King B

Les milieux de King (milieu King A et milieu King B permettent de différencier entre elles les différences espèces du genre Pseudomonas, par la mise en évidence de la production de pigments spécifiques.

L'élaboration des pigments est influencée par la composition du milieu, ce qui justifie l'utilisation de deux milieux différents : King A et King B.


utilisation



t



Résultats

- A partir d'une culture sur gélose (faire une suspension en eau distillée) ou dans un bouillon, ensemencer le milieu en faisant une strie à la surface de la gélose avec l'anse (ou en déposant une goutte de suspension).

- L'incubation est réalisée en aérobiose.

la production de pyocanine, due spécifiquement à Pseudomonas aeruginosa, est favorisée par la présence d'ions inorganiques. La recherche de la production de pyocyanine est effectuée sur milieu King A.

la production de pyoverdine, est favorisée par une teneur élevée en phosphate. La recherche de la production de pyoverdine est effectuée sur milieu King B.

- couleur bleue sur le milieu King A (présence de pyocyanine)

- couleur jaune-vert fluorescent sur le milieu King B (présence de pyoverdine) sous UV.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/KING.htm

- Bouillon cœur-cervelle

Milieu de mise en évidence de la respiration sur nitrates, par recherche de la nitrate réductase (NR).


utilisation



t



Résultats

Introduire quelques gouttes de culture liquide à la pipette Pasteur, ou une oese de culture solide, dans le bouillon

Homogénéiser.

Incuber 24 heures à 37°C.

Test nitrate-réductase

Voir NR

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/nitrate_c%9Curcervelle.htm

- Gélose PCA

La gélose glucosée à l'extrait de levure appelée par les Anglo-Saxons "Plate Count Agar" est utilisée en bactériologie alimentaire pour le dénombrement des bactéries aérobies dans le lait, les viandes, les produits à base de viande, les autres produits alimentaires, ainsi que pour l'analyse des produits pharmaceutiques, des produits cosmétiques et de leurs matières premières.


utilisation



t



Résultats

- Faire fondre le milieu (s'il est préparé à l'avance).

- Refroidir et maintenir à 48°C.

- Transférer 1 ml du produit à analyser et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes de Pétri stériles.

- Couler 10 à 15 ml de milieu.

- Homogénéiser parfaitement.

- Laisser solidifier sur une surface froide.

- Couler 4 ml de gélose blanche stérile

- Laisser solidifier à nouveau.

- Incuber:

Peu être additionné additionné de lait

La casèinase On tiendra compte des boîtes de Petri contenant un nombre de colonies compris entre 30 et 300

Les bactéries caséolytiques forment un halo plus clair autour de chaque colonie (protéolyse de la caséine du lait)

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/PCA.htm

- Gelose Esculine agar

L'esculine est un hétéroside (molécule composée d'un ose associée à une structure non osidique). L'hydrolyse de l'esculine, catalysée par une -glucosidase : l'esculinase, est un des critères usuels utilisé dans l'identification différerentielle au sein de nombreux genres bactériens, notamment les Pseudomonadaceae et les Streptococcaceae.


utilisation



t



Résultats

Piqûre centrale dans le culot, et incubée à 37°C.

Recherhce de l'esculinase

Milieu présente une forte coloration noire : hydrolyse de l’esculine : esculine +

Le milieu ne présente pas de coloration noire : esculine -

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/ESCULINE.htm

- Milieu Rappaport

Milieu sélectif d'enrichissement pour la recherche des Salmonelles.


utilisation


Mode d’ensemencement Sélectivité / composition


Incuber 24 h à t°C optimale.

Vert malachite, MgCl2 et pH acide => rendent le milieu très sélectif permettant un enrichissement en Salmonella à l'exception de Salmonella typhi et Salmonella paratyphi A-B et C.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/RAPPAPORT.htm

- Milieu synthétique avec xylose

Ces milieux permettent l’étude du métabolisme glucidique pour l’identification des différentes espèces de Bacillus.


utilisation



t



Résultats

Ensemencer la pente par des stries serrées à l’öse et le culot par piqûre centrale au fil droit.

Incuber 1 à 15 jours à la température désirée.

Observer tous les jours pendant une à deux semaines

Il ne contient pas de peptone cela permet d’évitter une possible alcalinisation du milieu par dégradation des peptones.

Le métabolisme des glucides qui se fait par la voie oxydative.et fermentative

L’attaque d’un glucide se traduit par un virage du BCP du violet au jaune.

Soit tout le tube ou surtout le culot : espèce fermentative.

Soit de la pente seulement : espèce oxydative.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/ETUDE_METABOLISME_GLUCIDIQUE.htm

- Milieu Hypersalée

Ce sont des milieux où les conditions de vie sont très difficiles par modification de pH, de pression osmotique ou par l’addition d’un agent inhibiteur.

Ces milieux sont utilisés dans la macro galerie d’identification des Streptococcus du groupe D.




t



Résultats

Quelques gouttes de suspension

Incubation : 24 à 48 h à 37°C.

Culture en milieu hypersalé

- tube clair : stérile négatif.

- tube trouble : positif.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MILIEUX_HOSTILES.htm

- Milieu Hyperbilié

Ce sont des milieux où les conditions de vie sont très difficiles par modification de pH, de pression osmotique ou par l’addition d’un agent inhibiteur.

Ces milieux sont utilisés dans la macro galerie d’identification des Streptococcus du groupe D.


utilisation



t



Résultats

Quelques gouttes de suspension

Incubation : 24 à 48 h à 37°C.

Culture en milieu hyperbilié

- tube clair : stérile négatif.

- tube trouble : positif.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/MILIEUX_HOSTILES.htm

- EPO plus saccharose

Les bactéries peu exigeantes et aérobies facultatives peuvent utiliser le glucide du milieu par fermentation. Cela se traduit par une grande quantité d’acide produit dans le milieu. La fermentation peut s’accompagner de gaz qui s’accumule dans la cloche.


utilisation



t



Résultats

Chasser tout le gaz de la cloche en retournant vivement le tube plusieurs fois.


Incuber à t°C optimale 24 h.

Utilisation du glucide du milieu par fermentation

Milieu jaune sans gaz : glucide + sans gaz

Milieu jaune avec gaz : glucide + avec gaz

Milieu rouge : glucide –

Attention aux résultats faussement positif et négatisfs. voir plus d’information.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/EPOrougeph%E9nolglucide.htm

- Bouillon lactosé au BCP


utilisation



t



Résultats

- Bouillon BLBVB

Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire (analyse des eaux et des aliments).


utilisation



t



Résultats

la bile

le vert brillant

sont inhibiteurs des bactéries Gram +

le lactose dont la fermentation est révélée par la présence de gaz

Trouble du milieu et gaz sous la cloche alors fermentation lactose alors coliforme.

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/BLBVB_CLOCHE.htm

- Gélose Lowenstein-Jensen

C’est un milieu d’enrichissement, sélectif qui permet le développement des mycobactéries


utilisation



t


Résultats

Un inhibiteur le vert malachite.

Dans des conditions optimales de croissance les mycobactéries se multiplient lentement, et l'on obtient des colonies après au minimum 7 jours, et jusqu'à 8 semaines pour Mycobacterium tuberculosis

Importance des bactéries psychrotrophesen hygiène des denrées alimentaires

Les bactéries psychrotrophes sont définies par leur aptitude à se développer

à des températures inférieures à +7°C. Agents de toxi-infections alimentaires

ou d'altération de la qualité marchande des denrées, elles constituent

un facteur limitant la conservation des produits réfrigérés. La maîtrise

de ce type de flore passe principalement par une amélioration des performances

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/Milieu_culture/LOWENSTEN_JENSEN.htm

des moyens frigorifiques, permettant de garantir une réfrigération

des denrées entre 0°C et +2°C, ainsi que par une validation de la durée de

vie des produits alimentaires sur la base d'études scientifiques adaptées

et j’ai voulu de vous partager ce que je viens de le réviser

sonia_nour

زائر

Révision de la microbiologie alimentaire: 4ème CQA :رد

في 1رد # » : Feb, 10, 2009, 02:48:11 » اقتباس

http://forum.univbiskra.net/index.php?action=post;quote=12185;topic=3673.0;num_replies=6;sesc=3f24a3b457c03c3cba393358e50f8e4c


http://forum.univbiskra.net/index.php?topic=3673.msg12185#msg12185

http://forum.univbiskra.net/index.php?action=helpadmin;help=see_member_ip

http://forum.univbiskra.net/index.php?action=reporttm;topic=3673.0;msg=12172

http://forum.univbiskra.net/index.php?topic=3673.msg12185#msg12185


http://forum.univbiskra.net/index.php?action=helpadmin;help=see_member_ip

http://forum.univbiskra.net/index.php?action=reporttm;topic=3673.0;msg=12172

Une question qui se pose:

Les bactéries qui n'avaient pas de catalase ni d'oxydase, étaient anaérobies

strictes. Je viens de voir que les streptocoques, lactobacillus ou entérocoques sont oxydase et catalase -

mais ne sont pas anaérobies strictes.

Par quelle voient elles respirent?

Réponse:

Mon prof de microbiologie alimentaire m'a dis que:

Tous simplement elles possédent une autre enzyme à moindre activité catalytqiue mais qui dégrade tous de mm l'eau oxygénée; c'est la pseudocatalase présente chez les bactéries lactiques Streptocoques et Lactobacilles.

et Mr.Pierre Davoust m'a ajoutté:

Certaines bactéries dites oxydases - en réalité ne possèdent pas de cytochrome oxydase. Cela ne les empêchent pas de posséder d'autres oxydases (pyruvate oxydase, etc.) et par conséquent d'accéder à d'autres formes de respiration (voie des pentoses, etc.). Elles peuvent aussi "respirer" des minéraux comme les nitrates... Ce que diverses bactéries font parfaitement dans les intestins, dans les sols ou les stations d'épuration (dénitratation ou dénitrification).

La question essentielle pour les Gram+ catalase- et oxydase - porte principalement sur leur classification et probablement moins sur le fait qu'elles soient anaérobies facultatives et aérotolérantes. Le fait de ne pas posséder de catalase pose question évidemment

http://v1.nedstatbasic.net/stats?ACjvKAnvdkGpGxuXpZV+/oj1RDJw

http://www.xiti.com/xiti.asp?s=96305

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