1. Mesure du chlore résiduel libre2. Procédure d´échantillonnage3. Conditionnement des échantillons4. Analyse bactériologique kit

Delagua

Méthodologie Analyse bactériologique

1. Mesure du chlore résiduel libre

Rincez le pool tester trois fois avec l´eau à analyser avant son utilisation

Remplissez les deux compartiments avec l’eau à analyser

Ajoutez un comprimé de DPD1 dans le compartiment de la mesure du chlore

Ajoutez un comprimé de rouge phénol dans le compartiment de la mesure du PH

3

Le PH doit être compris entre 6.4 et 8.5

Si la concentration en chlore résiduel libre est <0.2mg/L, procédez à un échantillonnage stérile pour analyse bactériologique

1. Mesure du chlore résiduel libre

Remettre les bouchons et fermer hermétiquement Dissoudre les comprimés en retrournant le

comparateur plusieurs fois. Ne pas secouer le comparateur

Lire la mesure du chlore résiduel libre et du PH en comparant les couleurs des solutions avec les couleurs des témoins à la lumière du jour

2. Procédure d´échantillonnage

A Echantillonnage pour borne fontaine

Utilisez un récipient/sac stérile Se laver les mains avec du savon, enlevez les possible tuyaux

connectés au robinet et Nettoyez le robinet avec du savon Laissez couler le robinet pdt 30s Désinfectez le robinet avec de l´alcool en enflammant un coton Laissez couler le robinet pdt 30s Rincez le sac plusieurs fois avec l´eau à analyser Remplissez le sac jusqu’au trait des 100ml. Ne laissez aucun

volume d´air au-dessus de l´échantillon. Étiquetez le sac stérile et enregistrez l´échantillonnage dans un

carnet/relevé Prélevez deux échantillons de la même borne pour comparer les

résultats des analyses bactériologiques (Idéalement trois).

B Echantillonnage pour bidon de 20L

Utilisez un récipient/sac stérile Se laver les mains avec du savon Rincez le sac plusieurs fois avec l´eau à analyser Ne pas mettre en contact le sac stérile et le

bidon Remplissez le sac jusqu’au trait des 100ml. Ne

laissez aucun volume d´air au-dessus de l´échantillon.

Étiquetez le sac stérile et enregistrez l´échantillonnage dans un carnet/relevé

Prélevez deux échantillons du même bidon pour comparer les résultats des analyses bactériologiques (Idéalement trois).

2. Procédure d´échantillonnage

C Echantillonnage pour réservoirs / puits / eau stagnante / cours d’eau

Utilisez un récipient/sac stérile Se laver les mains avec du savon Plongez le sac à une profondeur min de 30cm et relevez

en maintenant l´ouverture vers le haut Gardez les mains éloigné de l´ouverture du sac stérile

afin d´éviter toute contamination Si la source n´est pas accessible, utilisez le câble et le

récipient d´échantillonnage fournit dans le kit Delagua. Si la source est un cours d´eau, l´échantillon doit être

pris où il ya du courant et à contre courant Remplissez le sac jusqu’au trait des 100ml. Ne laissez

aucun volume d´air au-dessus de l´échantillon. Étiquetez le sac stérile et enregistrez l´échantillonnage

dans un carnet/relevé Prélevez deux échantillons de la même source pour

comparer les résultats des analyses bactériologiques (Idéalement trois).

2. Procédure d´échantillonnage

3. Conditionnement des échantillons

Les échantillons doivent être conservés dans une glacière à 4°c

Les échantillons doivent être analysés dans les 6h suivant leur prise

Ne pas oublier de prendre en compte le temps d´acheminement des échantillons au laboratoire et de préparation à l´incubation

A. Stérilisez l´ensemble de filtration

4. Analyse bactériologique

1. Verser environ 20 gouttes de méthanol dans le flacon de filtration1

2

3

2. Enflammer le méthanol en prenant soin d´incliner le flacon vers le haut afin de ne pas se bruler

3. Attendre que le méthanol se consume puis vissez l´ensemble de filtration en position 2. Attendre au minimum 15min avant son utilisation

B. Préparation de la boite de pétri

4. Analyse bactériologique

4

5

6

Stérilisez les boites de pétri en les plongeant dans l´eau bouillante pendant 10min ou utilisez un chalumeau et assemblez les boites encore chaudes ou utilisez un chiffon propre imbibé de méthanol.

5. Déposez un tampon absorbant à l´aide du distributeur dans les boites de pétri. Ne pas toucher le tampon avec les doigts

6. Versez le milieu de culture sur le tampon jusqu´à humidification totale de ce dernier

4. Analyse bactériologique

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8

9

C. Filtration de la membrane

7. Enflammez l´extrémité de la pince à épiler

8. Laissez refroidir la pince à épiler en l´accrochant au kit. L´extrémité de la pince ne doit pas rentrer en contact avec le kit afin de rester stérile

9. Dévissez le collier plastique et l´entonnoir de filtration. Les déposez sur la base de filtration. Ces objets ne doivent pas être déposés sur une surface non stérile

4. Analyse bactériologique

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10. Retirez la membrane de filtration de son sachet à l´aide de la pince à épiler stérile

11. Déposez la membrane sur le support de filtration

12. Celez fermement l'ensemble de filtration.

C. Filtration de la membrane

4. Analyse bactériologique

13

13. Versez le contenu de l´échantillon dans l´entonnoir de filtration

14. Connectez la pompe à vide à l'appareil de filtration. Pompez jusqu´à ce que l'entonnoir ne contienne plus d´eau

C. Filtration de la membrane

14

4. Analyse bactériologique

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15. Retirez la membrane du support de filtration

16. Déposez la membrane dans la boite de pétri sur le tampon absorbant

C. Filtration de la membrane

15

4. Analyse bactériologique

N°10

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17. Fermez la boite de pétri et référencez la boite à laide d'un marker

18. Disposez les 16 boites de pétri (couvercle en haut) dans l'incubateur même celles non utilisées. Incubez les échantillons entre 16 et 18 h. Vérifiez que la batterie fonctionne!

4. Analyse bactériologique

2. Comptez toutes les colonies jaunes qui ont une diamètre entre 1 et 3mm.

3. Souvent 2 colonies ou plus s’unissent. Examiner la forme de la colonie. Il est normalement facile de distinguer combien de colonies se sont unis. Compter chacune des sous colonies.

D. Compte des colonies

1. Il est important que les colonies soient comptées dans les 15min qui on suivi le retrait des boites de pétri de l’incubateur

4. Ne pas comptez les colonies transparentes, roses/rouges, bleues/grises

4. Analyse bactériologique

D. Compte des colonies

5. Convertissez le compte en nombre de colonies par 100 ml

Volume filtré Nombre de CF/100ml*

100 ml Nombre de colonies x 1

50 ml Nombre de colonies x 2

10 ml Nombre de colonies x 10

1 ml Nombre de colonies x 100

* CF: Coliformes fécaux

6. Les consommables contaminés par le milieu de culture doivent être stérilisés avant d’être jeter ou incinérer