METODEKULTUR PUS

Pembimbing: dr. B. Rina A. Sidharta, SpPKPresentan: M. Endang Frida S

PPDS I PK FK UNS/RSDMSurakarta

Pendahuluan

Pus: - Cairan kental, biasanya

berwarna kuning dan berbau busuk

- Terbentuk dari:- Sel kulit yang mati- Netrofil yang mengalami

degradasi dan mati- bakteri

Kuman penyebab tersering Staphylococcus aureus

Infeksi yang menghasilkan pus Infeksi purulenBakteri penyebab infeksi bakteri piogenik

Pendahuluan...

Pus

Permukaan kulit (epidermis)

Pustula

Celah antar jaringan

Abses

Organ dalam

TulangOtakHati

Saluran cerna

Pendahuluan...

Kultur bakteri

Kultur bakteri (wikipedia):– Suatu metode untuk memperbanyak bakteri

dengan mengembangbiakkan dalam suatu media khusus dibawah pengawasan khusus

laboratorium– Suatu metode diagnostik– Untuk menentukan penyebab penyakit

Pendahuluan...

Kultur Pus

Suatu metode untuk memperbanyak bakteri dari pus dengan

mengembangbiakkan dalam suatu media khusus dalam kondisi laboratorium untuk

mengetahui kuman penyebab pus

Pendahuluan...

Metode Kultur Pus

• Pengambilan spesimen dan transport

Pra Analitik

Pengambilan Spesimen dan Transport Spesimen

Lakukan desinfektan pada kulit Alkohol 70% atau iodine 2% mengurangi kontaminasi flora normal di kulit

1

Pra Analitik......

Pengambilan sampel dengan menggunakan:•Syringe 0,5 – 5 mL•Swab 2 buah swab•Masukkan sampel ke botol steril atau media transport

2

Pra Analitik: Pengambilan Spesimen dan Transport Spesimen...

• Media transport (aerob dan anaerob)– BBL Port-A-Cul Tubes untuk swab– BBL Port-A-Cul Vials untuk spesimen cair

• Media transport :– Bakteri bertahan hidup– Bakteri tidak berkembang biak

Pra Analitik: Pengambilan Spesimen dan Transport Spesimen...

Pengiriman Sampel•Beri Label •Segera kirim ke laboratorium•Jika ditunda ( < 2jam) biarkan di suhu ruangan

3

Pra Analitik: Pengambilan Spesimen dan Transport Spesimen...

Sampel ditolak:

• Sampel kurang (pus) atau kering (swab)• Label tidak ada / tidak lengkap atau tidak

sesuai• Media transport tidak sesuai atau expired• Pengiriman sampel ditunda > 2 jam

Pra Analitik: Pengambilan Spesimen dan Transport Spesimen...

Pewarnaan Gram (awal)

• Sebelum kultur lakukan pemeriksaan mikroskopis dengan pewarnaan gram memudahkan pemilihan media yang tepat bagi bakteri yang akan ditanam

Analitik...

Pewarnaan gram

Perhatikan warna dan morfologi bakteri

Analitik: Pewarnaan Gram (awal)...

Pewarnaan Gram ....

Pewarnaan Gram ....

Hasil pewarnaanPewarnaan Gram ....

Identifikasi bakteri pada pus Pewarnaan gram

Bakteri (+):Gram negatifGram positif

Bakteri (-) atau

Bakteri gram (-)

KULTUR

Evaluasi ulang

Analitik: Pewarnaan Gram (awal)...

Kultur

• Pus mengandung bakteri yang banyak dan terdiri dari berbagai tipe organisme digunakan berbagai media kultur

Analitik...

Kuman utama penyebab pus(warren;2008):- Epidermis (superfisial) gram (+) cocci

(Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes)

- Dermis (tengah) gram (-) bacili (Pseudomonas aeruginosa)

- Hypodermis (dalam) anaerob (Clostridium)

Kuman penyebab pus dan pilihan media

Staphylococcus aureus

Streptococcus pyogenes

Pseudomonas aeruginosa Anaerob

Agar DarahAgar Manitol (MSA) Agar Darah

Agar MacConkeyAgar TSI (triple

sugar iron)Tioglikolat

Analitik...

Bakteri pus

Aerob Anaerob

AgarDarah

AgarMacConkey

Thioglikolat

Analitik...

Media Kultur Pus

Agar Darah Agar MacConkey Tioglikolat

-Media diferensial- mengandung 5% darah domba- Prinsip: reaksi hemolisis ( alpha, beta dan gamma) eksotoksin hemolisin dari Streptococci

-Media selektif dan diferensial- selektif gram negatif- diferensial fermentasi laktosa

-Media anaerob dan enrichment- kaya nutrisi

Analitik...

Metode Kultur

Siapkan media dan alatSterilisasi inokulator

(kawat loop)

Beri label

1 3

2

aerob

Analitik...

Ambil spesimen

Lakukan streak pertama

4

5

5a

Hasil streak pertama

Analitik: Metode kultur aerob

Lakukan streak kedua

Panaskan lagi inokulator dinginkan

7

6

Ulangi langkah

ke-6 dan 7

Inkubasi

8

9

Streak penuh

Analitik: Metode kultur aerob

http://inst.bact.wisc.edu

anaerob

Analitik: Metode kultur anaerob

Inkubasi secara

anaerob

Identifikasi Bakteri

Inkubasi

Identifikasi Bakteri

Morfologi Kultur

Pewarnaan Gram

Reaksi Kimia

Aerob/Anaerob

35⁰C24-48 jam

Pasca Analitik...

Reaksi Hemolisishttp://iws2.collin.edu

Hemolisis lengkapContoh: S. pyogenes,

Staphylococcus

Hemolisis partial (sebagian)Contoh:

S. pneumoniae, S. viridans

Tidak terjadi hemolisis

Contoh: E. faecalis

Pasca Analitik...

Fermentasi Laktosa

Agar MacConkey- Selektif gram

negatif (gram positif akan dihambat)

- Diferensial fermentasi laktosa

(+)

Contoh: E. coli, Klebsiella

(-)Contoh:

P. Aeruginosa, Proteus sp

http://en.wikipedia.org

Pasca Analitik...

Reaksi terhadap oksigen

http://iws2.collin.edu

1 = b anerob obligat2 = a aerob obligat3 = d anaerob aerotolerant4 = c anaerob fakultatif

Pasca Analitik...

Pewarnaan Gram

Pewarnaangram

Pasca Analitik...

Morfologi bakteriPasca Analitik...

Reaksi Kimia

• Ada berbagai macam reaksi kimia untuk identifikasi bakteri

• Lakukan sesuai hasil pewarnaan gram• Untuk pus dari kulit biasanya untuk

identifikasi– Staphylococcus aureus– Streptococcus pyogenes– Pseudomonas aeruginosa

Pasca Analitik...

Reaksi KimiaIdentifikasi bakteri

Identifikasi bakteri penyebab pus

Staphylococcus aureus

Streptococcus pyogenes

Pseudomonas aeruginosa

Anaerob (Clostridium)

Gram (+) cocci Gram (+) cocci Gram (-) bacili Gram (+) bacili

Aerob Aerob Aerob Spora (+)

Catalase (+) Catalase (-) Fastidious Anaerob

Fermentasi glukosa (+) Hemolisis β Oksidase (+)

Coagulase (+) Bacitracin sensitif Glukosa oksidase (+)

Pigmen hijau (+)

Pasca Analitik...

Pelaporan Hasil

• Mikroskopis:– Gram bakteri (sesuai hasil pewarnaan gram di

awal menerima sampel)• Kultur:

– Bakteri tumbuh:• Signifikan secara klinis (dengan pewarnaan gram dan

lokasi pengambilan sampel)• Tidak signifikan secara klinis (polimikrobial flora)

– Tidak ada bakteri yang tumbuh

Pasca Analitik...

Terima Kasih